Do Sis Letal Media Accident e of I Dico

1 1
DETERMINACIN DE LA DOSIS LETAL MEDIA (DL

50
) DE CINCO ESPECIES
DEL GNERO MICRURUS EN ESTADO DE CAUTIVERIO EN NILO
CUNDINAMARCA (COLOMBIA)

SINDY MONJE BELMONTE

UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA
FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS
PROGRAMA DE BIOLOGIA CON ENFASIS EN BIORECURSOS
FLORENCIA CAQUET
2.007

2 2

DETERMINACIN DE LA DOSIS LETAL MEDIA (DL
50
) DE CINCO ESPECIES
DEL GNERO MICRURUS EN ESTADO DE CAUTIVERIO EN NILO
CUNDINAMARCA (COLOMBIA)

SINDY MONJE BELMONTE

Trabajo de grado presentado como Requisito
parcial para optar al Ttulo de
Bilogo con nfasis en Biorecursos

DIRECTORA
Marta Gmez Cabal
Biloga MSC Biologa Vegetal
Directora de Investigacin y
Desarrollo Laboratorios Probiol

ASESORA
Claudia Martnez Crdenas
Biloga, Bacteriloga, Microbiloga, Esp.Epidemiologa
Directora de Aseguramiento de Calidad
Laboratorios Probiol S.A.

UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA
FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS
PROGRAMA DE BIOLOGIA CON ENFASIS EN BIORECURSOS
FLORENCIA - CAQUETA
2.007
3 3

NOTA DE ADVERTENCIA
Artculo 18 del Acuerdo N
o

026 de Diciembre de 2.001: El director y los
jurados del trabajo de grado no son responsables de las ideas y
conclusiones expuestas en el trabajo, ellas son exclusividad de su autor

4 4
Nota de aceptacin

______________________________
______________________________
______________________________
______________________________
______________________________
______________________________

______________________________
Presidente del Jurado

______________________________
Jurado

______________________________
Jurado

Florencia, Mayo de 2007
5 5

DEDICATORIA

Dedico en especial este trabajo a la memoria de mi Abuela Nazarea Quimbay de
Belmonte, a mis Padres Stella Belmonte de Monje, Felix Eney Monje Pena; mi
Hermano Osman Monje Belmonte, las personas que ms amo, porque sin su
apoyo espiritual constante no habra alcanzado mis logros.

A Juan Manuel Suarez Tezna, la persona con la que he compartido este corto
tiempo mi corazn y me ha brindado su amor incondicional en buenos y malos
momentos.

A los doctores Marta Gmez Cabal, Clemencia Gmez Cabal, Alberto Gmez
Cabal, Claudia Martnez Crdenas, Jairo Maldonado y Hctor Charry por su
amistad desinteresada y su asesora en el rea de la Biologa y Toxinologa de las
serpientes presentes en Colombia.

A todo el equipo de trabajo del Laboratorios Probiol S.A., en especial a Blanca
Grajales, Marisol Giraldo, Nelson Daz, y Sonia Lancheros, por brindarme una
estada clida y servicio.

A mis profesores de la Universidad de la Amazonia y mis mejores compaeros de
carrera y amigos, por incentivar mi espritu de investigacin y acompaarme
durante todo el transcurso de la misma.

6 6

AGRADECIMIENTOS

A Marta Gmez Cabal, directora de esta investigacin, quien siempre estuvo
presente y atenta al progreso de mi trabajo para guiarme en mi aprendizaje
como una gran maestra y mostrarme las maravillas de la Biologa.

A Claudia Martnez Crdenas, asesora de esta investigacin, quien me
acompa en la fase final de muestreo y en el anlisis estadsitico de las
pruebas de seroneutralizacin.

A Clemencia Gmez, Alberto Gmez Cabal y Maria Clara Gmez Cabal, por su
amistad incondicional y hospitalidad.

A Jairo Maldonado, por su invaluable apoyo en la fase de campo realizada en
el Serpentario del Parque Recreacional y Zoolgico Piscilago, su enseanza en
el rea de Biologa, Manipulacin y Taxonoma de las serpientes del gnero
Micrurus lo cual permiti que se llevara a cabo parte de el proyecto.

A Hctor Charry, por sus asesoras en el desarrollo del proyecto, en el rea de
Biologa y Toxinologa experimental de las serpientes del gnero Micrurus.

A Fernando Ortz y Gloria Elena Estrada, jurados de esta investigacin, por sus
correcciones y sugerencias en el desarrollo y presentacin final de la
investigacin.

7 7

TABLA DE CONTENIDO

Pg.

RESUMEN.............................................................................................................17
ABSTRACT...........................................................................................................18
1. INTRODUCCIN...............................................................................................19
2. PROBLEMA ......................................................................................................21
3. JUSTIFICACIN ...............................................................................................23
4. OBJETIVOS ......................................................................................................24
4.1 OBJETIVO GENERAL:.................................................................................24
4.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS: .......................................................................24
5. REVISION DE LITERATURA............................................................................25
5.1 Clasificacin Taxonmica.............................................................................25
5.2 Caractersticas generales de la especie Micrurus sp. ..................................25
5.2.1 Morfologa y Fisiologa general .................................................................26
5.2.2 Hbitat y comportamientos ....................................................................26
5.2.3 Tipo de alimentacin y reproduccin .....................................................27
5.3 Distribucin Geogrfica de las Micrurus en estudio .....................................27
5.3.1 Micrurus surinamensis surinamensis, (Cuvier, 1.817) ..........................27
5.3.2 Micrurus mipartitus, (Dumril, Bibron y Dumril, 1.854)........................28
5.3.3 Micrurus isozonus, Cope, 1.860 ...........................................................28
5.3.4 Micrurus dumerilii, (Griffin, 1.916) ..........................................................29
5.3.5 Micrurus medemi, (Roze, 1.967)............................................................29
5.4 Venenos Ofdicos .........................................................................................30
5.4.1 Venenos micrricos ...............................................................................30
5.4.2 Dosis Letal Media de los venenos Elapdicos en Colombia...................31
5.5 Accidente Ofdico por corales en Colombia..................................................32
5.5.1 Clasificacin del Accidente Ofdico........................................................33
5.6 Seroterapia en Accidentes ofdicos por Micrurus .........................................33
5.6.1 Dosis Efectiva Media del Suero Antielapdico Probiol frente a los
venenos Micrricos.........................................................................................34
5.6.2 Produccin de Suero Antiofdico Antielapdico en Colombia .................36
6. METODOLOGIA................................................................................................39
6.1 Fase de Campo............................................................................................39
6.1.1 rea de Estudio .....................................................................................39
6.1.2 Obtencin de los Venenos Micrricos....................................................40
6.1.3 Extraccin de Veneno............................................................................40
6.1.5. Preparacin de las Muestras de los Venenos Micrricos .....................41
6.2 Fase Experimental .......................................................................................41
6.2.1 Animales Experimentales ......................................................................41
6.2.2 Ensayos Preliminares ............................................................................42
8 8
6.2.3 Dosis Letal Media DL
50
(OMS, 1981) ....................................................42
6.2.3.1 Validez de la Prueba ......................................................................43
6.2.4 Dosis Efectiva Media DE
50
.....................................................................44
6.2.4.1 Validez de la Prueba .......................................................................46
6.3. Condiciones Experimentales.......................................................................46
6.3.1 Condiciones de Mantenimiento..............................................................46
6.3.2 Grupo Control Positivo...........................................................................46
6.3.3 Grupo Control Negativo .........................................................................47
7. RESULTADOS..................................................................................................48
7.1 Aspectos Biolgicos .....................................................................................48
7.1.1 Micrurus surinamensis surinamensis, Cuvier (1.817) ............................48
7.1.2 Micrurus mipartitus, Dumril y Bibrn (1.854).......................................49
7.1.3 Micrurus isozonus , Cope (1.860) ..........................................................51
7.1.4 Micrurus dumerilii , Griffin (1.916) .........................................................52
7.1.5 Micrurus medemi, Roze (1.967).............................................................53
7.2 Dosis Letal Media (DL
50
)..............................................................................55
7.2.1 DL
50
para Micrurus surinamensis surinamensis.....................................55
7.2.2 DL
50
para Micrurus mipartitus ................................................................58
7.2.3 DL
50
para Micrurus isozonus..................................................................61
7.2.4 DL
50
para Micrurus dumerilii ..................................................................64
7.2.5 DL
50
para Micrurus medemi ...................................................................67
7.3 Dosis efectiva Media (DE
50
) .........................................................................70
7.3.1 DE
50
para el Veneno de Micrurus surinamensis neutralizado por un Lote
Piloto de Suero Anticoral AC-OO5..................................................................70
7.3.2 DE
50
para el Veneno de Micrurus mipartitus neutralizado por un Lote
7.3.3. DE
50
para el Veneno de Micrurus isozonus neutralizado por un el Lote
7.3.4. DE
50
para el Veneno de Micrurus dumerilii neutralizado por un el Lote
7.3.5 DE
50
para el Veneno de Micrurus medemi neutralizado por un el Lote
8. ANALISIS DE RESULTADOS...........................................................................76
8.1 Aspectos Biolgicos .....................................................................................76
8.1.1 Micrurus surinamensis surinamensis.....................................................76
8.1.2 Micrurus mipartitus.................................................................................76
8.1.3 Micrurus isozonus..................................................................................77
8.1.4 Micrurus dumerilii...................................................................................78
8.1.5 Micrurus medemi ...................................................................................79
50
) ..............................................................................79
8.2.1 (DL
50
) para Micrurus surinamensis surinamensis ..................................79
8.2.2 (DL
50
) para Micrurus mipartitus..............................................................80
8.2.3 (DL
50
) para Micrurus isozonus ...............................................................80
8.2.4 (DL
50
) para Micrurus dumerilii ................................................................80
8.2.5 (DL
50
) para Micrurus medemi.................................................................81
9 9
8.3 Dosis Efectiva Media (DE
50
) ........................................................................81
8.3.1 DE
50
del Suero Antiofidico Anticoral Polivalente Liofilizado frente al
veneno de la especie Micrurus surinamensis .................................................81
8.3.2 DE
50
veneno de la especie Micrurus mipartitus.......................................................82
8.3.3 DE
50
veneno de la especie Micrurus isozonus. .......................................................82
8.3.4 DE
50
veneno de la especie Micrurus dumerilii. ........................................................82
8.3.5 DE
50
veneno de la especie Micrurus medemi. ........................................................82
9. CONCLUSIONES..............................................................................................83
10. RECOMENDACIONES....................................................................................85
BIBLIOGRAFIA.....................................................................................................86
ANEXOS................................................................................................................93

10 10

LISTA DE CUADROS

Pg.
Cuadro 1. Dosis Letal Media DL50 Comparativas de los venenos Micrricos
de algunas especies de la Amazonia ColombianaCuadro 2. Dosis Efectiva
Media (Otero, 1.994)

Cuadro 2. Dosis Efectiva Media (Otero, 1.994)

Cuadro 3. Dosis Efectiva Media de los venenos micrricos (Charry, 2.006)

Cuadro 4. Dosificacin con veneno Micrrico

Cuadro 5. Casos Atendidos conSuero Anticoral Figura 2. rea de Estudio
(Nilo Cundinamarca) Mapa Areo

Cuadro 6. Distribucion de los Venenos en Tubos Plsticos de Colores

Cuadro 7.Caractersticas morfomtricas de los ejemplares de la especie M.
surinamensis

Cuadro 8. Cantidad de veneno obtenida durante el tiempo de estudio en
miligramos para la especie M. s.surinamensis

Cuadro 9. Caractersticas morfomtricas de los ejemplares de la especie
Micrurus mipartitus

miligramos para la especie M. mipartitus

M.isozonus

miligramos para la especie M.isozonus

M. dumerilii

miligramos para la especie M.dumerilii.

32
34
35
36
38
41
49
49
50
50
52
52
53
53
11 11
M. mipartitus

miligramos para la especie M. medemi

Cuadro 17. Ensayos preliminares para la determinacin de la Dosis letal
Media para el Veneno Micrurus surinamensis

Cuadro 18. Pruebas finales para la determinacin de la dosis letal media
para el Veneno Micrurus surinamensis

Cuadro 19. Ensayos preliminares para la determinacin de la dosis letal
media para el Veneno Micrurus mipartitus

para el Veneno Micrurus mipartitus

media para el Veneno Micrurus isozonus

para el Veneno Micrurus isozonus

media para el veneno Micrurus dumerilii

para el veneno Micrurus dumerilii

media para el veneno Micrurus medemi

para el veneno Micrurus medemi

Cuadro 27. Determinacin de la DE
50
del Suero Antimoral frente al veneno
Micrurus surinamensis

Cuadro 28. Determinacin de la dosis efectiva media (DE
50
) para el veneno
Micrurus mipartitus probando la efectividad del el suero antiofidico anticoral
polivalente liofilizado Lote piloto AC-005 producido por Laboratorios Probiol
S.A. (Tcnica utilizada por el Instituto Clodomiro Picado)

54
55
55
56
58
59
61
62
64
65
67
68
70
71
12 12
50
) para el Veneno
Micrurus isozonus frente al suero antiofidico anticoral polivalente liofilizado
Lote piloto AC-005 de producido por Laboratorios Probiol S.A. (Tcnica
utilizada por el Instituto Clodomiro Picado)

50
) para el veneno
Micrurus dumerilii frente al suero antiofidico anticoral polivalente liofilizado
Lote piloto AC-005 producido por Laboratorios Probiol S.A. (Tcnica

50
) para el veneno
Micrurus medemi frente al Suero Antiofidico Anticoral Polivalente Liofilizado
Lote piloto AC-005 producido por Laboratorios Probiol S.A. (Tcnica

Cuadro 32. Efectividad del Suero Antiofdico Antimoral Lote Piloto: AC 005
frente a cinco Lotes de veneno del gnero Micrurus sp.

72
73
74
75

13 13

LISTA DE FIGURAS
Pg.

Figura 1. Anlisis de la Produccin de Suero Anticoral

Figura 2. rea de Estudio (Nilo Cundinamarca) Mapa Areo

Figura 3. Mtodo de Extraccin del veneno Micrrico

Figura 4. Dosis Letal Media (DL
50
)

Figura 5. Dosis Efectiva Media (DE
50
)

Figura 6. Micrurus surinamensis surinamensis, Cuvier (1.817)

Figura 7.Micrurus mipartitus, Dumril y Bibrn (1.854)

Figura 8. Micrurus isozonus, Cope (1.860)

Figura 9. Micrurus dumerilii, Griffin (1.9169)

Figura 10. Micrurus medemi, Roze 81.967)

37
39
40
43
45
48
50
51
53
54

14 14

LISTA DE GRFICAS

Pg.

Grfica 1. Curva de la dosis letal media del veneno Micrurus surinamensis
en estado de cautiverio en Nilo - Cundinamarca

Grfica 2. Curva de la dosis letal media del veneno Micrurus mipartitus en
estado de cautiverio en Nilo - Cundinamarca

Grfica 3. Curva de la dosis letal media del veneno Micrurus isozonus en

Grfica 4. Curva de la dosis letal media del veneno Micrurus dumerilii en

Grfica 5. Curva de la dosis letal media del veneno Micrurus medemi en

Grfica 6. Curva de la dosis efectiva medio (DE
50
)

para el veneno Micrurus
surinamensis frente al suero antiofidico anticoral polivalente liofilizado Lote
piloto AC-005 producido por Laboratorios Probiol S.A. (Tcnica utilizada
por el Instituto Clodomiro Picado)

Grfica 7. Curva de la dosis efectiva media (DE
50
)

para el veneno Micrurus
mipartitus frente al suero antiofidico anticoral polivalente liofilizado Lote
piloto AC-005 producido por Laboratorios Probiol S.A.

50
) para el veneno Micrurus
isozonus frente al suero antiofidico anticoral polivalente Liofilizado Lote
piloto AC-005 producido por Laboratorios Probiol S.A.

50
dumerilii frente al Suero antiofidico Anticoral Polivalente Liofilizado Lote
piloto AC-005 de Laboratorios Probiol S.A.

50
)

para el veneno
Micrurus medemi frente al Suero Antiofidico Anticoral Polivalente
Liofilizado Lote piloto AC-005 de Laboratorios Probiol S.A.

57
60
63
66
69
70
71
72
73
74

15 15

LISTA DE TABLAS

Pg.

Tabla 1. Clasificacin Taxonmica de las Micrurus en estudio

Tabla 2. Denticin de la familia Elapidae, (Soerensen, 1.990)

Tabla 3. Dosis Letal Media de venenos de serpientes Colombianas

Tabla 4. Clasificacin Taxonmica Micrurus surinamensis

Tabla 5. Clasificacin Taxonmica Micrurus mipartitus

Tabla 6. Clasificacin Taxonmica Micrurus isozonus

Tabla 7. Clasificacin Taxonmica Micrurus dumerilii

Tabla 8. Clasificacin Taxonmica Micrurus medemi

25
26
30
48
49
51
52
54

16 16

LISTA DE ANEXOS

Pg.

ANEXO A. FICHA DE ASPECTOS BIOLOGICOS DE LAS ESPECIES EN
ESTUDIO

ANEXO B. UTILIZACIN DE ANIMALES DE LABORATORIO EN LA
EXPERIMENTACIN BIOLGICA

ANEXO C. CARACTERISTICAS GENERALES DE LOS BIOMODELOS

ANEXO D. FORMATO PRUEBA DOSIS LETAL MEDIA

ANEXO E. FORMATO PRUEBA DOSIS EFECTIVA (DE
50
)

ANEXO F. MATERIALES

ANEXO G ANLISIS ESTADSTICOS PARA DETERMINAR LA DL
50
Y
DE
50

94
107
118
119
121
122
124

17 17

RESUMEN

Se calcul la dosis letal media (DL
50
) del veneno de las serpientes anteriormente
mencionadas en estado de cautiverio en Nilo Cundinamarca (Colombia),
inoculando ratones albinos de la especie Mus musculus por va intraperitoneal de
17 19 gramos. Se evaluaron dosis ascendentes de veneno desde 100 hasta 600
g/ por ratn, sometindoles a un periodo de observacin 24 48 horas post-
inoculacin. La (DL
50
) obtenida para las especies de Micrurus sp. de forma
ascendente de mayor a menor toxicidad: Micrurus mipartitus de 5.53 g/ratn <
Micrurus dumerilii de 8.83 g/ratn < Micrurus surinamensis de 13.50 g/ratn <
Micrurus isozonus de 28.92 g/ratn < Micrurus medemi de 47.1 g/ratn.

Posteriormente se evalu la efectividad de un Lote Piloto: AC-005 de suero
antiofdico antielapdico liofilizado producido por Laboratorios Probiol S.A. de
Colombia frente a la toxicidad de cinco lotes de venenos utilizados, demostrando
que el suero anticoral es polivalente y neutraliza de la misma forma los diferentes
venenos en estudio sin importar la especie, estando en una relacin de 0.3 mg/ml.
La (DE
50
) del suero valorado en relacin con los venenenos de la especie Micrurus
surinamensis es de 1.021 mg/ml, Micrurus mipartitus es de 0.8 mg/ml, Micrurus
isozonus es de 1.28 mg/ml, Micrurus dumerilii es de 1.16 mg/ml y Micrurus
medemi es de 1.55 mg/ml., utilizando ratones albinos de la especie Mus musculus
con pesos de 20 -22 gramos, inoculndolos por va intraperitoneal.

Se determin que existe intima relacin entre la dosis de veneno, la dosis efectiva
de suero antiofdico y su efecto, siendo notable la sensibilidad de los animales y la
reproducibilidad de los experimentos, para las pruebas de letalidad y potencia.

18 18

ABSTRACT

There was calculated the lethal average dose (DL
50
) of the poison of the serpents
previously mentioned in condition of captivity in Nilo - Cundinamarca (Colombia),
inoculating albino mouse of the species Mus musculus for route intraperitoneal with
17 - 19 grams. Ascending doses of poison were evaluated from 100 - 600 g/by
mouse, submitting to a period of observation 24 - 48 hours post-inoculation. The
(DL
50
) obtained for the species of Micrurus sp. of ascending form of bigger than
minor toxicity: Micrurus mipartitus of 5.53 g/mouse <Micrurus dumerilii of 8.83
g/mouse <Micrurus surinamensis of 13.50 g/mouse <Micrurus isozonus of 28.92
g/mouse <Micrurus medemi of 47.1 g/mouse.

Later there was evaluated the efficiency of a Pilot Lot: AC-005 of whey antiofdico
antielapdico lyophilized produced by Laboratories Probiol S.A. of Colombia
opposite to the toxicity of five lots of used poisons, demonstrating that the whey
anticoral is polyvalent and neutralizes of the same form the different poisons in
study without importing the species, being in a relation of 0.3 mg/ml. The (DE
50
) of
the whey valued for relation with the venenenos of the species Micrurus
surinamensis is of 1.021 mg/ml, Micrurus mipartitus is of 0.8 mg/ml, Micrurus
isozonus is of 1.28 mg/ml, Micrurus dumerilii is of 1.16 mg/ml and Micrurus
medemi is of 1.55 mg/ml., using albino mouse of the species Mus musculus with
weight of 20-22 grams, inoculating them for route intrperitoneal.

One determined that intimate relation exists between the dose of poison, the
effective dose of whey antiofdico and his effect, being notable the sensibility of the
animals and the reproducibilidad of the experiments, for the tests of lethal and
promoting.

19 19

1. INTRODUCCIN

Colombia debido a sus propiedades geogrficas, es uno de los diez pases con
mayor diversidad de vertebrados, con 2.890 especies de las cuales 520 son
reptiles. Representan el 6% del total de las especies del mundo, que lo posicionan
en el tercer lugar del planeta, con 97 especies de reptiles endmicas y 20
especies de reptiles en peligro de extincin, datos reportados por la Asociacin
Colombiana de Parques Zoolgicos, Acuarios en el 2.003 y el Fondo para la
Accin Ambiental, quienes afirman que as como Colombia posee una gran
biodiversidad, tambin presenta una enorme vulnerabilidad en sus 99
ecosistemas.

Dentro de la clase Reptilia (reptiles), orden Squamata (escamosos), suborden
Serpentes (serpientes), se distribuyen en 9 familias las serpientes en Colombia, de
las cuales solo tres familias son venenosas: Viperidae (Vboras); Elapidae (Rabo
de aj, Corales) y Colubridae (Cazadoras, culebras comunes) pero solo las dos
primeras son de gran importancia mdica debido a la toxicidad de sus venenos;
una de ellas es la familia Elapidae (serpientes corales o de anillos).

Taxonmicamente se han propuesto varias teoras para clasificar las corales, pero
debido a que la taxonoma es una ciencia inexacta, que se encuentra en
constantes reevaluaciones y cambios, el nmero de especies para Colombia vara
segn el autor. Para Colombia la familia Elapidae, con el gnero Micrurus (Wagler,
1.824), Roze seala 13 especies en 1.966; Peters registra 14 en 1.986; 20
especies segn Campbell y Lamar en 1.989; Juan Jose Silva en 1.994 reporta
para la Amazonia Colombiana 10 taxones del gnero Micrurus, subfamilia
Elapinae, entre especies y subespecies vlidas; Orlando Chaparro en el 2.000
afirma que el pas representa uno de los centros de dispersin ms importantes
del grupo con ms de 28 especies del gnero Micrurus y una del gnero
Leptomicrurus (Schmidt,1.937), distribuidas en todo el territorio colombiano, desde
el nivel del mar hasta los 2.400 m.s.n.m.; Daniel Pineda en el 2.002 public en el
libro Accidentes por animales venenosos que la familia Elapidae tiene dos
gneros para Colombia, Micrurus, conformado por 22 especies y Pelamis con una
sola especie; 28 especies en el 2.006 por Jairo Maldonado distribuidas en 3
gneros Pelamis, Leptomicrurus y Micrurus; y considerando que algunos
herpetlogos como Hctor Charry en el 2.006 incluyen el gnero Leptomicrurus
como parte del gnero Micrurus, subfamilia Elapinae, con 22 especies. Esta
extraordinaria diversidad hace que Colombia ocupe el tercer puesto en nmero de
especies de coral despus de Mxico y Brasil.

20 20
Los venenos de las serpientes corales de la familia Elapidae, tienen accin
predominantemente neurotxica y algunos cardiotxicos. La mayora de estos
venenos tienen actividad de bloqueo postsinptico y en minora una actividad de
bloqueo presinptico, producto de la accin de fosfolipasas A2 que afectan esta
terminal (Charry, 2.006). La actividad de las neurotoxinas actan bloqueando la
transmisin del impulso nervioso sobre los diferentes rganos, lo cual juega un
papel importante en la accin letal de los venenos de estas serpientes, que han
sido estudiados no slo con el objetivo de mejorar la calidad y eficacia de los
antivenenos (sueros monovalentes y polivalentes) en el diagnstico y tratamiento
de las mordeduras, sino tambin en estudios comparativos de los componentes de
esos venenos, sus reacciones inmunolgicas, evolutivas haciendo una gran
contribucin cientfica a la biologa y estimulando el inters cientfico en
posteriores estudios (Chaparro, 2.000).

En el estudio toxinolgico desde el punto de vista farmacolgico, la dosis letal
media de los venenos micrricos (serpientes coral) y la dosis efectiva media de los
antivenenos frente a los venenos, es primordial en el estudio de la neutralizacin
del poder txico de los mismos por un suero antiofdico antielapdico especfico o
polivalente dependiendo de el mtodo que se utilice. Uno de los mtodos para
analizar la toxicidad de un veneno es la dosis letal media (DL
50
), definindose
como aquella sustancia txica (veneno elapdico) expresada en miligramos por
kilogramos de peso corporal (animales inoculados de la especie Mus musculus)
capaz de matar el 50% de los animales inoculados, en un periodo de tiempo
determinado, que usualmente es de 24 a 48 horas postinoculacin (Martnez,
2.004).

Por lo anterior y considerando que para Colombia existen datos deficientes de la
biologa y toxinologa experimental de los venenos de las serpientes Micrurus sp.,
el objetivo de este proyecto de investigacin fue determinar la dosis letal media
(DL
50
) de cinco especies de corales a saber: Micrurus surinamensis surinamensis,
(Cuvier, 1.817); Micrurus mipartitus, (Dumril Bibron y Dumril, 1.854); Micrurus
isozonus, (Cope, 1.860); Micrurus dumerilii, (Griffin, 1.916) y Micrurus medemi,
(Roze, 1.967); en estado de cautiverio en el Parque Recreacional y Zoolgico
Piscilago ubicado en el Municipio de Nilo, Departamento de Cundinamarca,
Colombia.

Con la determinacin de la dosis letal media de las cinco especies de corales en
estudio, se realiz posteriormente la prueba de seroneutralizacin para determinar
la dosis efectiva media (DL
50
), es decir la capacidad o potencia neutralizante
efectiva media del Suero Antiofdico AntiElapdico (Lote Piloto Nmero AC 005)
fabricado por Laboratorios Probiol S.A. para neutralizar un Pool de venenos de las
cinco especies de Micrurus sp en estudio.

21 21

2. PROBLEMA

Las serpientes son reptiles que han sido culturalmente el grupo de vertebrados
que ms rechazo causa a las personas. A su alrededor existen mitos y leyendas
perpetuadas por la humanidad, como la creencia de que las serpientes corales
(Micrurus) muerden por la cola. Estas son fantasas que se construyen en
respuesta al desconocimiento acerca de su verdadera naturaleza, sin rescatar el
importante papel que juegan en los ecosistemas, regulando poblaciones de
insectos, mamferos, aves, anfibios y hasta reptiles incluyendo serpientes (Galvis,
2.005).

Taxonmicamente se han propuesto varias teoras para clasificar las corales, pero
debido a que la taxonoma es una ciencia inexacta, que se encuentra en
constantes reevaluaciones y cambios, el nmero de especies para Colombia vara
segn el autor.

En la serie de libros rojos de especies amenazadas de Colombia no se estn
teniendo en cuenta las serpientes y se presenta solo una de las especies
Eunectes marinus comnmente conocida como anaconda con datos deficientes,
corroborando el gran desconocimiento de la biologa de los ofidios.

Otras amenazas que ponen en riesgo la perpetuidad de las serpientes es el
deterioro del hbitat, la persecucin y muerte indiscriminada por el hombre a
causa del miedo irracional que hace que dificulten los estudios de estos taxones.
Es claro que no podrn sobrevivir sin nuestra ayuda, y su extincin es la prdida
de un eslabn en la cadena trfica que puede llevar a un desequilibrio ecolgico.

Las corales causan el 2.9% (Martnez, 2.006) del total de los accidentes ofdicos
en Colombia y debido a la falta de informacin epidemiolgica confiable, segn el
Ministerio de Proteccin Social, en Colombia se producen 4.000 accidentes al ao
por mordedura de serpiente, 40 son por corales, donde las principales vctimas
son los nios.

A pesar de que la incidencia de mordedura de serpientes de coral sea baja,
considerando el gran nmero de especies y su gran distribucin en Colombia,
cuando ocurre, se considera grave, ya que el accidente ofdico por Micrurus se
maneja clnicamente como una intoxicacin y los principales efectos del veneno de
estas serpientes son la parlisis flcida en la vctima, por lo cual ocasiona un paro
cardiorrespiratorio y finalmente la muerte, sino es tratado clnicamente en las
primeras horas con un Suero Antiofdico Anticoral (Gmez, 2.006)

22 22
El estudio toxinolgico de los venenos de las serpientes presentes en Colombia,
especialmente de la familia Elapidae (corales), se desconoce total o parcialmente,
ya que solo se han determinado las dosis letales medias para las Micrurus
presentes en la Amazonia Colombiana y no existe reporte de las dosis letales de
las Micrurus del centro del pas como la especie Micrurus mipartitus, de
importancia mdica, causante de una gran cantidad de accidentes en la regin
Andina del pas.

23 23

3. JUSTIFICACIN

Este trabajo es importante para hacer un aporte de tipo cientfico a la biologa y
toxinologa de las serpientes corales (Micrurus), haciendo especial nfasis en la
importancia de su conservacin y la caracterizacin de los venenos de cinco
especies a saber: Micrurus surinamensis surinamensis, (Cuvier, 1.817); Micrurus
mipartitus, (Dumril Bibron y Dumril, 1.854); Micrurus isozonus, (Cope, 1.860);
Micrurus dumerilii, (Griffin, 1.916) y Micrurus medemi, (Roze, 1.967), presentes en
Colombia. Teniendo en cuenta que es el tercer pas con mayor especies de coral
de Latinoamrica, despus de Brasil y Mxico; actualmente estn reportadas 29
especies de serpientes del gnero Micrurus (corales, rabo de aj, rabo de candela)
segn Campbell y Lamar (2.004) con una amplia distribucin geogrfica en el
territorio nacional.

En el presente estudio se determin la dosis letal media (DL
50
), que se utilizaron
para encontrar los umbrales de toxicidad, para cada uno de los cinco venenos en
estudio. As mismo la verificacin de que el suero antiofdico anticoral polivalente
liofilizado producido por Laboratorios Probiol S.A. posee una adecuada capacidad
de neutralizacin frente a cada uno de los venenos de las especies Micrurus sp.
mencionadas anteriormente como objeto de estudio.

En el desarrollo de los sueros antiofdicos, es muy importante establecer las dosis
letales medias de las diferentes especies de serpientes, para luego conocer la
eficiencia de los sueros antiofdicos. Por eso la Organizacin Mundial de la Salud
(OMS) recomienda que es necesario establecer en cada pas sus propios
parmetros para la produccin y regulacin de los antivenenos, aceptando que es
necesario un procedimiento donde se compruebe el estado letal de cada lote de
veneno utilizado (DL
50
) y posteriormente se confirme la potencia neutralizante de
cada lote de antivenenos con la dosis efectiva media (DE
50
). (UPS, 2.000).

La dosis letal media de los venenos ofdicos y la dosis efectiva media, prueba de
potencia, prueba de seroneutralizacin o titulacin de un suero antiofdico, estn
definidas por la OMS como uno de los principales procedimientos que se tienen en
cuenta al momento de evaluar la calidad de los antivenenos, gracias a que con
estas pruebas se determina la cantidad de veneno en mililitros capaz de matar al
50% de la poblacin inoculada, indispensable a su vez para determinar la cantidad
de veneno en miligramos que son neutralizados por un mililitro de suero. Esta
razn convierte a la dosis efectiva media en la herramienta mdica ms prctica
para la dosificacin ms acertada del antiveneno (BP, 1.973).

24 24

4. OBJETIVOS

4.1 OBJETIVO GENERAL:

Determinar la dosis letal media (DL
50
) de cinco especies de la familia Elapidae,
gnero Micrurus sp., mantenidas en cautiverio en el Parque Recreacional y
Zoolgico de Piscilago en el Municipio de Nilo, Departamento de Cundinamarca
(Colombia).

4.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS:

Identificar algunos aspectos biolgicos del manejo de las cinco especies de
Micrurus sp. en estado de cautiverio, como la identificacin taxonmica,
categora de amenaza (UICN, Apndice Cites), sexo, edad aproximada,
condiciones fsicas, morfometra (longitud total, longitu cola), distribucin
geogrfica, hbitat, comportamiento de la especie en cautiverio,
manipulacin y transporte.

Determinacin de la Dosis Letal Media (DL
50
) de los venenos de las cinco
especies de Micrurus sp. presentes en Colombia:

1. Micrurus surinamensis surinamensis, Cuvier, 1.817
2. Micrurus mipartitus, Dumril, Bibrn y Dumril, 1.854
3. Micrurus isozonus, Cope, 1.860
4. Micrurus dumerilii, Griffin, 1.916
5. Micrurus medemi, Roze, 1.967

Identificar las diferencias que presentan los resultados de la dosis letal
media (DL
50
) de los venenos de las cinco especies de Micrurus sp.
anteriormente nombradas.

Realizar una prueba de efectividad del suero antiofdico antielapdico
polivalente liofilizado (Lote pioto: AC 005) fabricado por Laboratorios
Probiol S.A. frente a cada uno de los venenos de las cinco especies de
Micrurus sp. en estudio.

25 25

5. REVISION DE LITERATURA

5.1 Clasificacin Taxonmica

Tabla 1. Clasificacin Taxonmica de las Micrurus en estudio

CLASIFICACIN
Reino: Animalia
Phylum: Cordata
Subphylum: Vertebrata
Clase: Reptilia
Orden: Squamata (escamosos)
Suborden: Ofidios, Serpentes
Familia: Elapidae
Subfamilia: Micrurinae
Gnero: Micrurus
Especie: Micrurus surinamensis surinamensis, Cuvier, 1.817
Micrurus mipartitus, Dumril, Bibron y Dumril, 1.854
Micrurus isozonus, Cope, 1.860
Micrurus dumerilii, Griffin, 1.916
Micrurus medemi, Roze, 1.967

5.2 Caractersticas generales de la especie Micrurus sp.

Las serpientes del gnero Micrurus son reptiles que carecen de extremidades; en
trminos generales son de tamao mediano y pequeo, la mayora de las
especies muestra proporciones con tendencia a ser muy delgadas; su cuerpo est
cubierto por escamas lisas (Charry, 2.006); son conocidas popularmente con el
nombre de corales, serpientes de anillos, rabo de aj, rabo de candela, cabeza de
chocho, entre otros nombres vulgares dependiendo de la ubicacin geogrfica.

Se caracterizan en general por su diseo (cuerpo adornado con anillos que lo
circundan completamente, que se disponen segn la especie en tradas o pares) y
su patrn de coloracin (rojo, negro, blanco, amarillo) a excepcin de algunas
especies (M.scutiventris y M.karlschmidti), includas para algunos autores en el
gnero Leptomicrurus (Schmidt, 1.937), que tienen el dorso de color negro
uniforme, sin anillos visibles; en la cabeza presentan un anillo completo de color
amarillo o blanco y en la cola dos o tres anillos pequeos de color rojo (Silva,
1.994).

26 26
5.2.1 Morfologa y Fisiologa general

Desde el punto de vista taxonmico es quizs el aparato venenfero la
caracterstica ms importante para diferenciar un ofidio del gnero Micrurus de
cualquier serpiente de la familia Colubridae, Anilidae, con las cuales presentan
similitudes que corresponde a formas diferentes de mimetismo (Silva, 1.994).

El aparato venenfero de los Micrurus, al igual que el de todos los dems
tanatofidios, est compuesto por un par de glndulas situadas a cada lado de la
cabeza, en la regin temporal, por detrs y debajo de los ojos. Tiene adems un
par de pequeas glndulas accesorias, localizadas por delante de las glndulas
principales y el conducto excretor de veneno, adems de un par de dientes
inyectores cortos no mayores a 3mm. de largo, ligeramente incursados, situados
en la parte inferior del maxilar superior y en el extremo anterior de ste. Estos
ltimos estn surcados por un canal central para la conduccin del veneno
cubierto por una membrana mucosa. Constituye una caracterstica importante de
las corales verdaderas el tener el diente inyector siempre erctil y con poca
movilidad anteroposterior (Silva, 1.994).

El tipo de denticin para las serpientes corales es llamado Proteroglifa (Tabla 2),
segn Meja (1.987) el maxilar superior es alargado (belfas); la cabeza suele ser
pequea, con cuello no diferenciado, ojos muy pequeos y puntiformes.

Tabla 2. Denticin de la familia Elapidae, (Soerensen, 1.990)

FAMILIA DENTINCIN EPISTEMOLOGA

Elapidae Proteroglifa protero = anterior; gliph = surco

5.2.2 Hbitat y comportamientos

Habitan en zonas de clima medio y clido, algunas especies viven en estrecha
cercana con los seres humanos, como las que prefieren los jardines o cultivos
como el caf y cacao. Muchas especies llevan vida semisubterrnea, hbitos
nocturnos y crepusculares, prefieren permanecer ocultas bajo la hojarasca,
piedras o troncos, son serpientes de carcter manso, tmidas. Cuando se sienten
en peligro, algunas levantan la cola y la enrollan para dar la impresin de que se
trata de la cabeza (Otero, 1.994). Cuando muerden lo hacen con mucha fuerza y
con frecuencia se quedan firmemente aferradas a la piel por un largo perodo de
tiempo (Charry, 2.006), debido a que su boca es pequea y sus colmillos son
cortos con baja o nula movilidad anteroposterior.

27 27
5.2.3 Tipo de alimentacin y reproduccin

El 90% de las especies de Micrurus sp. se alimentan de otras serpientes, son
ofidifagas. Adems comen anfibios, peces y otros reptiles (Pineda, 2.002).

La reproduccin es interna; los machos han desarrollado rganos copuladores
bifurcados a partir de la pared de la cloaca llamados hemipenes, a travs del
surco, a lo largo de cada uno de los hemipenes es transportado el esperma hacia
el aparato reproductor de la hembra (Young, 1.980). Slo uno de los dos
hemipenes entra en la cloaca de la hembra, nunca ambos a la vez. Se reproducen
por medio de huevos (Ovpara).

5.3 Distribucin Geogrfica de las Micrurus en estudio

Las Micrurus son las representantes de la familia Elapidae de Amrica, en donde
tienen una amplia distribucin geogrfica. Se les encuentra desde la regin
nororiental de los Estados Unidos, pasando por Mxico, Amrica Central y Sur
Amrica, hasta la Argentina. En Colombia se distribuyen desde el nivel del mar
hasta los 2.000 metros de altitud (Silva, 1.994). Las corales ocupan varios tipos de
ambientes disponibles, desde los terrestres (hojarasca, races de los rboles),
subterrneos y ambientes acuticos.

5.3.1 Micrurus surinamensis surinamensis, (Cuvier, 1.817)

Se encuentra en la Amazona y Orinoqua colombiana; presentando una alta
ocurrencia poblacional en las regiones limtrofes de Brasil y Per con Colombia.
Las poblaciones de esta especie presentan mayor densidad en las reas de
trapecio amaznico colombiano y en pases vecinos como Brasil, Ecuador, Per y
Bolivia. Se aprecia una disminucin de la incidencia poblacional hacia el norte y el
centro de la Amazonia colombiana, en los territorios de Guaviare, Guaina,
Vaups y Orinoqua. Micrurus s. surinamensis, M. l. lemniscatus y M. spixii
obscurus son las tres formas codominantes del gnero Micrurus en la regin
amaznica. (Silva, 1.994).

M. s. surinamensis alcanza un gran desarrollo corporal; los individuos hembras
adultos pueden tener hasta 1.400 mm de largo y el cuerpo robusto con un grosor
de 100 a 120 mm medido en la parte media del cuerpo. Los especmenes
hembras de mximo desarrollo tienen entre 450 a 600 gr. de peso; cabeza robusta
de 40 mm de largo y 40 mm de ancho, deprimida anteroposteriormente; boca
ancha, con hocico redondo, ojos pequeos, ligeramente sobresalientes y situados
por encima; pupilas cilndricas; internasales ms pequeas que las prefrontales;
frontal pequea ms delgada que ancha, lo cual constituye un elemento
caracterstico de esta especie. Su cuerpo consta de tres colores los cuales forman
anillos amarillos, negros y rojos. Cabeza caractersticamente roja, con las
escamas ceflicas bordeadas con lneas negras; las escamas supraceflicas y las
28 28
labiales (supra e infralabiales) enrojecidas, es tpico de esta especie, lo cual
constituye uno de los caracteres taxonmicos ms sobresalientes, fcil de
reconocer y til para la identificacin de esta especie. Tienen dimorfismo sexual,
las hembras poseen en forma constante un mayor desarrollo corporal que los
machos (Silva, 1.994).

5.3.2 Micrurus mipartitus, (Dumril, Bibron y Dumril, 1.854)

En Antioquia y Choc la especie es conocida popularmente como rabo de aj,
coral, cabeza de chocho o rabo de candela, posee anillos negros y blancos, o
negros y amarillos en el cuerpo; una banda roja encima de la cabeza y entre dos y
cuatro rojas en la cola; talla mxima 124 cm. (Otero, 1.994). Es Ovpara. Tiene
costumbres nocturnas y subterrneas, pero tambin se le encuentra oculta entre
grietas, troncos podridos y hojarasca. Se encuentra en todo el territorio nacional,
principalmente en zonas hmedas y selvticas. Se alimenta de lagartijas, ranas y
otras serpientes. Mide entre 50 a 90 centmetros de longitud, pero puede alcanzar
un poco ms de un metro. Algunos estudios sugieren que es la serpiente terrestre
ms venenosa del mundo. Por su comportamiento poco agresivo, los accidentes
son raros, aunque sin tratamiento casi siempre son mortales (Vsquez, 1.995).

El ojo es pequeo, puntiforme y la pupila vertical semielptica. Tiene anillos negros
separados por blancos o amarillos ms delgados, pero el segundo de la cabeza y
los tres o cinco ltimos, son rojos brillantes. Posee 15 hileras de escamas dorsales
y carece de escama loreal, en general son de vida nocturna y subterrnea, se
alimentan de caecilidos, lagartos y otras serpientes. Son ovparas, se hallan
distribudas en Centro Amrica y Norte de Suramrica. En Colombia es
probablemente la ms abundante en la cordillera de los andes encontrndose
ampliamente distribuida a una altura aproximada de 1.800 metros sobre el nivel
del mar. Es comn en zonas productoras de caf (ngel, 1.983).

5.3.3 Micrurus isozonus, Cope, 1.860

Segn Campbell y Lamar (2.004) esta especie mide en promedio 50 y 70 cm
aunque no son raros los ejemplares de un metro de longitud, existe un registro de
un ejemplar que midi 150 cm. Presenta una coloracin dorsal conformada por
triadas, series de tres anillos negros alternados con dos blancos y un anillo rojo
brillante que separa cada triada entre si. Normalmente los anillos rojos son ms
largos que los anillos individuales de las triadas. Posee entre 10 y 14 triadas en el
cuerpo adems de 1 2/3 en la cola. El hocico es blanco ynegro, este patrn
puede extenderse hasta la parte trasera de los ojos y al mismo nivel en el dordo
de la cabeza. Despus puede observarse una banda gris o blancuzca que tiene
manchas irregulares que atraviesa de lado a lado la cabeza transversalmente. En
otros ejemplares el hocico es gris con manchas negras y una banda esta
bordeada posteriormente por un anillo rojo ancho que puede incluir algunas
escamas en el frente y dorso de la cabeza, posterior a este se encuentra el anillo
29 29
negro de la primer triada. El vientre de la cabeza usualmente es rojo, blanco con
pigmento negro hacia las escamas que bordean la boca.

Es una especie que se encuentra en Colombia distribuda hasta los 1.400
m.s.n.m. en la regin de la Orinoqua y puede llegar a medir unos 70 centmetros.
El patrn de coloracin son anillos rojos, negros, y amarillos. Los anillos negros
en grupos de tres intercalados por dos anillos amarillos y los anillos negros
extremos tocando los anillos rojos. En estado de cautiverio se han logrado
conservar varios ejemplares de esta especie por ms de dos aos (Maldonado,
2.006). De su biologa se conoce muy poco.

5.3.4 Micrurus dumerilii, (Griffin, 1.916)
Esta especie algunos la clasifican como Micrurus carinicaudus antioquensis (Prez
et al, 1.993), la indican como sinnimo de M.dumerilii antioquensis. M. dumerilii ha
sido reportada para Colombia (en El Cedro, Ro Jurad, Choc) cerca de la
frontera con Panam segn Campbell y Lamar (1.989), sin embargo no se ha
registrado en territorio panameo.
Esta especie es endmica para Colombia, se encuentra en tierras del oeste del
pas, la zona Andina y la Sierra Nevada de Santa Martha hasta los 2.133
m.s.n.m.; se han reportado cinco subespecies en todo el territorio colombiano M.
d. antioquiensis, M. d. carinicaudus, M. d. colombianus, M. d. dumerilli, y M. d.
transandinus. El patrn de coloracin para las subespecies M. d .dumerilli y M. d.
colombianus tienen los anillos negros en grupos de tres. Se han logrado mantener
las subespecies M. d. antioquiensis y M. d. transandinus ms de un ao vivas con
la misma dieta que para la especie Micrurus medemi en estado de cautividad
(Maldonado, 2.006).

5.3.5 Micrurus medemi, (Roze, 1.967)

Es una especie endmica de Colombia. Esta serpiente ha llegado a medir 60
centmetros en estado de cautiverio. Tiene un patrn de coloracin diferente de
otras corales; a lo largo de su cuerpo posee anillos negros intercalados con anillos
amarillos, blancos o rojos (pero no todos al tiempo); habita en el bosque hmedo
tropical y seco entre 250 600 m.s.n.m. Se ha reportado una satisfactoria
reproduccin en cautiverio de especies provenientes de reas cercanas a Nilo
(Cundinamarca) como Villavicencio (Meta) en el Parque Recreacional y
Serpentario Piscilago, con una dieta que incluye cecilias, varias serpientes
pequeas y alimentacin artificial a base de mezclas de harinas y carne
(Maldonado, 2.006).

30 30
5.4 Venenos Ofdicos

El veneno de las serpientes es una mezcla de diferentes compuestos slidos de
los cuales 70 a 90% son polipptidos y protenas, 10 a 30% compuestos y
elementos de bajo peso molecular. Los compuestos del veneno han sido
clasificados segn Daniel Pineda en 2.002 en proteicos y no proteicos. La dosis
letal media de los venenos de serpientes colombianas se presenta en la Tabla 3.
(Pineda, 2.002).

Tabla 3. Dosis Letal Media de venenos de serpientes Colombianas

Especie DL
50
(mg/ratn)*(Sic)
Micrurus mipartitus 9, 0
Crotalus durissus terrificus 130, 0
Bothrops atrox 58, 0 69, 0
Botriechis shlegelii 206, 0
Botricpsis punctat 47, 0
* Inoculacin intraperitoneal de 5 ratones de 18 20 g/nivel. (Sic): [No es mg/ratn sino es
g/ratn], la medida de Dl
50
se da en microgramos por ratn o por peso de ratn.

5.4.1 Venenos micrricos

Los venenos de las corales son muy potentes, su accin es predominantemente
neurotxica, si bien algunos tambin cardiotxicos. Nunca debe subestimarse el
tamao de la serpiente, ni la ausencia inicial de sntomas generales y locales. La
mordedura es indolora de una pequea serpiente coral rabo de aj de 10 a 15 cm
de longitud y tan delgada como un cordn de zapato, es potencialmente mortal
para un hombre adulto. Estos venenos poseen neurotoxinas de bajo peso
molecular, que se unen frecuentemente a los receptores colinrgicos de la placa
neuromotora de las fibras musculares, actuando como un aislante que bloquea
el paso del impulso nervioso al msculo, lo que ocasiona una parlisis flcida que
puede conducir a disnea y paro respiratorio (Charry, 2.006).

El veneno de las corales induce efectos tpicamente neurotxicos, produciendo por
lo general un bloqueo postsinptico de los receptores colinrgicos de la placa
motora. Este veneno se esparce rpidamente por los tejidos y bloquea los
receptores de acetilcolina en los msculos, observndose entre los sntomas por
mordedura de coral una parlisis muscular (Galvis, 2.005); sin embargo, algunos
venenos micrricos poseen tambin actividad de bloqueo presinptico, producto
de la accin de fosfolipasas A
2
que afectan esta terminal. Es importante recordar
que los venenos de las corales no producen efectos hemorrgicos, coagulaciones,
ni daos locales a piel o tejidos (Charry, 2.006).

31 31

5.4.2 Dosis Letal Media de los venenos Elapdicos en Colombia

En Colombia existe una fuente de informacin deficiente acerca de la accin letal
de los venenos de las serpientes en general, especialmente las pertenecientes a
la familia Elapidae. Slo hay un reporte desde 1.994 publicado por el Mdico de la
Universidad Nacional de Colombia Juan Jos Silva Haad quien fue el primer
cientfico que public un artculo llamado Los micrurus de la Amazonia
Colombiana. Biologa y toxicologa experimental de sus venenos donde determin
la dosis letal media DL
50
para el veneno de 15 tanatofdios pertenecientes al
gnero Micrurus que viven en la regin amaznica.

En este experimento se investig la produccin mxima y media de veneno en las
diferentes especies de Micrurus. Las diferentes cantidades obtenidas se
relacionaron con los tamaos de los Micrurus comnmente observados en la
Amazona. Los datos obtenidos acerca de los tamaos y de la produccin de
veneno de cada grupo muestra, fueron sometidos a clculos y anlisis
estadsticos para determinar los diferentes valores de los intervalos de clase.

En los ensayos de investigacin Silva (1.994) empleo ratones blancos machos y
hembras no preadas, de 25 a 35 gramos, utilizando grupos de seis ratones con
pesos iguales para cada dosis letal de ensayo y por cada va orgnica de
inoculacin experimentada. Se hizo uso de palomas domsticas (Columbia livia),
con pesos de 200 a 300 gramos; cobayos machos (Cavia cobaya) con pesos de
200 a 300 gramos y primates de la especie Aotus nancymai con pesos de 600 a
800 gramos.

La dosis letal media, est definida en farmacologa y se utiliza para obtener la
dosis media capaz de matar el 50% de la poblacin inoculada por el veneno en
este caso ofdico de especies del gnero Micrurus; esta dosis letal media (DL
50
) se
expres en microgramos por gramo de peso corporal, para los animales cuyo peso
era menos a un kilogramo y en miligramos por kilo de peso corporal para aquellos
cuyo peso era mayor de un kilogramo. Los estudios de venenos de las diferentes
especies de Micrurus, permitieron demostrar que la especie M.s.surinamensis es
el mayor productor de veneno entre todas las especies de coral que viven en la
regin Amaznica.

Los resultados obtenidos indicaron que las palomas, los primates y los cobayos
son los animales ms susceptibles al veneno de M. s. surinamensis, administrado
bien sea por la va Intramuscular (I.M.) o Intraperitoneal (I.P). La sensibilidad de
estas tres especies al veneno micrrico es similar, como se aprecia en el Cuadro
1. El ratn blanco de acuerdo con los resultados observados, exhibe
comparativamente con los cobayos, palomas y micos, la mayor resistencia a los
venenos de M. l. lemniscatus, M. spixii obscurus y M. s. surinamensis.

32 32
Cuadro 1. Dosis Letal Media DL50 Comparativas de los venenos Micrricos de
algunas especies de la Amazonia Colombiana

Especie
Dosis Letal 50
DL
50

Va de Administracin Animal Empleado
1.41 g/gr peso I.P
Mus musculus
M.hemprichii ortoni
3.4 g/gr I.M
Mus musculus
0.44 g/gr I.P
Mus musculus
M.lemniscatus l.
0.50 g/gr I.M
Mus musculus
2.2 g/gr I.P
Mus musculus
M.spixii obscurus
4.25 g/gr I.M
Mus musculus
0.41 g/gr I.P
Mus musculus
0.55 g/gr I.M Mus musculus
0.18 g/gr I.M Aotus nancymai
M. s. surinamensis
0.068 g/gr I.V Aotus nancymai
0.2 g/gr I.M Cavia cobaya
M. s. surinamensis
0.065 g/gr I.V Cavia cobaya
0.18 g/gr I.M Columbia livia
M. s. surinamensis
0.068 g/gr I.V Columbia livia
*(Tomado del Artculo Los Micrurus de la Amazona Colombiana. Biologa y toxicologa
experimental de sus venenos Silva, 1.994.)

5.5 Accidente Ofdico por corales en Colombia

Los accidentes ofidicos por corales representan el 2.9% (Martnez, 2.006) de las
mordeduras por serpientes. Su diagnstico se puede realizar mediante la
identificacin de la serpiente, ya sea porque el paciente la describa o porque la
capture y la lleve al centro de salud para que sea identificada; si se desconoce el
agente agresor, se hace fundamental hacer un diagnstico clnico o cuadro clnico
en donde se tiene que tener en cuenta los siguientes aspectos:

a) las manifestaciones neurolgicas que son tpicas de este envenenamiento y
b) las manifestaciones hemorrgicas que estn completamente ausentes en este
tipo de accidentes. El diagnstico diferencial de un accidente ofdico por
serpientes de la familia Elapidae y Viperidae es fundamental ya que ambos
tratamientos deben realizarse con un suero antiofdico especfico diferente, por lo
tanto es importante descartar otro tipo de envenenamiento por serpientes (Pineda,
2.002).

Las manifestaciones clnicas del envenenamiento por serpientes de coral en el
accidentado es exclusivamente neurolgico, en los casos moderados y graves, el
paciente puede presentar un compromiso con los msculos de las extremidades
que le puede dificultar el mantenerse de pie y de los msculos respiratorios que lo
llevan a presentar disnea; los efectos locales son escasos con dolor leve, mnimo
33 33
y transitorio (Pineda, 2.002); el edema es escaso solamente alrededor de la
mordedura, no hay hemorragias en la piel, excepto a travs de los orificios dejados
por los colmillos. No se presentan ampollas, ni necrosis y despus de unos
minutos aparecen parestesias en el sitio de la mordedura, pero por el contrario la
mordedura es mortal en cuestin de horas dependiendo de la regin afectada
(Otero, 1.994).

El accidente ofdico por coral no es frecuente pero cuando ocurre se considera
grave (Gmez, 2.003), ya que el envenenamiento ocurre a nivel sistmico, lo cual
puede ser severo, siendo entonces una intoxicacin esencialmente neurotxica y
experimentalmente se demostr su efecto miotxico (Vital, et al, 1.983/84); el
veneno se difunde rpidamente por los tejidos y si el paciente Animal o Humano
no es atendido de inmediato con Suero Antiofdico AntiElapdico en el transcurso
de unas pocas horas ocasiona parlisis de todos los msculos del cuerpo
incluyendo los msculos respiratorios provocando que la vctima tenga dificultad al
respirar sin que el afectado pierda el conocimiento, generando paro cardiaco
respiratorio y finalmente la muerte (Gmez, 2.003).

5.5.1 Clasificacin del Accidente Ofdico

Este tipo de accidente ofdico se clasifica teniendo en cuenta fundamentalmente el
grado de compromiso de la funcin respiratoria; si no est comprometida,
hablamos de un accidente moderado; si hay compromiso de los msculos
respiratorios, hablamos de un accidente severo. Es importante tener en cuenta
que la clasificacin de este accidente puede cambiar con la evolucin y que un
paciente que ingres con un accidente moderado puede evolucionar hacia uno
severo. Se habla de un accidente leve cuando el paciente no presenta ningn tipo
de alteracin motora, clasificacin que puede variar segn la evolucin del estado
neurolgico, por tanto la vctima que ha entrado como un accidente leve,
permanezca en observacin, por lo menos de 6 horas antes de darle de alta, ya
que as como existe la probabilidad de que sea una mordedura seca o sin
inoculacin de veneno, podra ocurrir lo contrario (Pineda, 2.002).

5.6 Seroterapia en Accidentes ofdicos por Micrurus

En el accidente elapdico (corales), en las regiones de Antioquia y Choc, se
tienen dos especies importantes: Micrurus mipartitus y Micrurus dumerilii. Para la
primera se produce en Costa Rica un antiveneno especfico anticoral gargantilla o
rabo de aj. La evaluacin de este antiveneno y su comparacin con el suero
anticoral producido por Probiol (Bogot), con veneno de otras especies de la
Amazona, realizado por el Doctor Rafael Otero Patio. Cuadro 2.

34 34
Cuadro 2. Dosis Efectiva Media (Otero, 1.994)

DE
50
Neutralizante del efecto letal del veneno de Micrurus mipartitus
(4 DE
50
= 36 g)
Suero anti M.mipartitus Instituto
Clodomiro Picado ICP (Costa Rica)
0.5 mg veneno/ml antiveneno
Suero Anticoral (Laboratorios Probiol)
(Colombia)
0.13 mg veneno/ml antiveneno
*Tomado del Artculo Seroterapia y Tratamiento del Accidente Ofdico en Antioquia y Choc por el
Doctor Rafael Otero Patio.

Para M.dumerilii no se produce antiveneno especfico en ninguno de los pases de
Amrica Latina. Sin embargo, este veneno antignicamente es muy parecido al de
M.nigrocinctus, especie que se encuentra en el Urab Antioqueo, Choc y
Centroamrica; en Costa Rica, el (ICP) Instituto Clodomiro Picado produce un
antiveneno especfico anti-M.nigrocinctus. La evalucacin experimental contra el
efecto letal (4DL
50
= 30 g veneno de M.dumerilii antiquensis), segn reportes del
Doctor Rafael Otero fue:

DE
50
= 0.8 mg veneno/ml antiveneno (anticoral ICP)

El antiveneno habra que aplicarlo antes que el paciente tenga parlisis, es decir
en las primeras 2 horas; sin embargo el 50% de los pacientes llegan al hospital en
insuficiencia respiratoria y por lo tanto, el antiveneno no logra revertir los sntomas
paralticos y estos persisten durante 3 a 6 das. En consecuencia, el soporte
ventilatorio adecuado se constituye en la parte importante del tratamiento (Otero,
1.994).

5.6.1 Dosis Efectiva Media del Suero Antielapdico Probiol frente a los
venenos Micrricos

El suero antiofdico antielapdico liofilizado producido por Laboratorios Probiol S.A.
posee una adecuada potencia neutralizante contra los venenos de serpientes de
las especies Micrurus mipartitus, Micrurus s.surinamensis, Micrurus dumerilii,
Micrurus spyches medemi y Micrurus spixii (Charry, 2.006).

La dosis efectiva media (DE
50
) del suero antiofdico antielapdico de Laboratorios
Probiol S.A. frente al veneno de cada una de las especies de serpientes Micrurus
sp. mencionadas anteriormente, segn pruebas y experimentos realizados por el
Doctor Hctor Charry en el Centro de Investigacin y Asesora Ofidiolgica
OPHIDIA en Manizales, se muestran en el Cuadro 3.

35 35
Cuadro 3. Dosis Efectiva Media de los venenos micrricos (Charry, 2.006)

Especie Dosis Efectiva Media
(DE
50
)
Micrurus mipartitus 1,37*
Micrurus s. surinamensis 1,12*
Micrurus dumerilii 1,25*
Micrurus spyches medemi 1,37*
Micrurus spixii 2.37*
Micrurus s.p.p. Mezcla Homognea 1,20*
*DE
50
expresada en miligramos de veneno neutralizados por cada 10 ml de antiveneno

La demostrada capacidad neutralizante (DE
50
) del suero antiofdico anticoral de
Laboratorios Probiol S.A. frente a los venenos micrricos, guarda una coherente
relacin proporcin con la cantidad promedio de veneno inoculada en la mordida
de la mayora de las especies de corales estudiadas y que est entre los 5 a 25
mg de veneno, esto significa que una dosis inicial de entre 5 y 10 frascos viales de
10 ml del antiveneno permiten tratar adecuadamente un accidente micrrico
promedio, siempre y cuando su aplicacin sea precoz y por la va de
administracin ms adecuada (intravenosa)(Charry, 2.006).

No existe ningn mtodo para la dosificacin de antivenenos que pueda ser
recomendado internacionalmente. Las variaciones existentes en cuanto a
composicin y accin de los venenos es tan grande que difcilmente pueden
concebirse una prueba nica general. Cada pas o regin debe establecer sus
propios parmetros para la dosificacin de sus sueros.

La Organizacin Mundial de la Salud ha considerado que mtodos ms sencillos,
como la simple demostracin del nmero de miligramos que una unidad de
volumen de antiveneno neutraliza, es tan precisa y ms econmica que cualquier
otro mtodo ms elaborado. Se concluy, adems, que para el clnico la cantidad
de miligramos de veneno que una dosis de antiveneno neutraliza, es ms fcil de
comprender y relacionar con el tratamiento a seguir.

Por facilidad de mantenimiento y costo, el ratn blanco es el animal
preferiblemente para la dosificacin de potencia. La ruta de inoculacin es
importante y debe utilizarse aquella que muestre un resultado ms acorde con la
realidad; tericamente, es la intramuscular o subcutnea. Sin embrago, su uso no
es prctico en el ratn blanco, ya que este es muy resistente a los venenos por
esta va.

El veneno que recibe cada ratn en la prueba no debe ser inferior a 3DL
50
. El
veneno de referencia debe ser una mezcla de venenos individuales
representantes de las diferentes zonas geogrficas de la regin, desecado por
36 36
liofilizacin, escrupulosamente dosificado y conservado en fro y en la oscuridad.
Segn la OMS, se aconseja incluir paralelamente con el suero a probar una
antitoxina previamente dosificada como suero de referencia. Adems, conviene
repetir la DL
50
cada vez que un nuevo lote de antiveneno va a ser dosificado.

El mtodo que sugiere la OMS consiste en la mezcla de una cantidad fija de
veneno en presencia de cantidades variables del antiveneno, las que se ajustan a
un volumen igual, se incuban 30 minutos a 37 C y se inoculan por va
intraperitoneal en grupos de cinco ratones por mezcla, de forma que cada uno
reciba una dosis no inferior a 3Dl
50
.

El ttulo de neutralizacin en microgramos de veneno neutralizado por mililitro se
calcula con base en la menor cantidad de antiveneno que protege al menos cuatro
de los cinco animales.

Ejemplo de protocolos utilizados en la determinacin de potencia:

Cuadro 4. Dosificacin con veneno Micrrico

Experimento
No.
Ml de
Veneno
(1mg/ml)
Ml de
Solucin
Salina
Ml de
Antiveneno
Relacin g
Veneno/1 ml
de Antiveneno
No. de
Ratones
Cantidad a
Inocular
1 0,3 1,2 3,0 100 5 0,75
2 0,3 2,7 1,5 200 5 0,75
3 0,3 3,2 1,0 300 5 0,75
4 0,3 3,45 0,75 400 5 0,75
5 0,3 3.60 0,6 500 5 0,75
6 0,3 4.2 - Control 5 0,75
*Dosis Prueba por Ratn 50 g (Observacin por 72 horas) por el Instituto Clodomiro Picado en
Costa Rica.

5.6.2 Produccin de Suero Antiofdico Antielapdico en Colombia

Hace 40 aos el nico productor de suero antiofdico para la familia Viperidae fue
el Instituto Nacional de Salud, es importante aclarar que el Instituto durante todos
esos aos slo produjo Suero para las mordeduras de serpientes de esta familia
conocida con los siguientes nombres vulgares: talla x, veinticuatro, patoco,
patoquilla, cascabel, verrugoso y nunca produjo suero para las mordeduras de
serpientes de la familia Elapidae, es decir las corales (rabo de aj, coral, coralilla)
(Gmez, 2.006).

Pero a partir de los 80, se cont con un productor de carcter privado en el pas
llamado Laboratorios Probiol. Este laboratorio fundado en 1956 por el Doctor
Cesar Gmez Villegas, inici la produccin y comercializacin de sueros
antiofdicos en 1.988 y adems de producir el suero antiofdico para las
mordeduras de la familia Viperidae incursion en el suero para la mordedura de
37 37
corales convirtindose en el nico productor de suero antimoral en el pas
(Gmez, 2.006).

Colombia hasta el ao 1.997 cont con dos productores nacionales de sueros
antiofdicos; entre los dos suplan las necesidades en cuanto a accidentes ofidicos
por mordedura de serpientes de la familia Viperidae y Elapidae, abasteciendo las
necesidades no solo de Colombia como productor sino tambin como exportador
de este importante biolgico en pases vecinos como Panam, Ecuador y Per,
aportando al desarrollo cientfico, econmico y social (Monje, 2.006).

El Laboratorio Probiol realiz un anlisis estadstico de la Produccin de suero
anticoral desde 1.988 hasta el 2.006 en Colombia que se presenta a continuacin
en la Figura 1 en donde se muestra que desde el ao 1.998 no hay produccin de
este biolgico vital en el pas. En cuanto a las especies que causan el accidente
ofidico elapdico, los datos que se muestran en el Cuadro 5 son los casos
atendidos con suero antielapdico producido por Laboratorios Probiol. se
presentan como una informacin, debido a su bajo nmero, no pueden ser
analizados estadsticamente.

Figura 1. Anlisis de la Produccin de Suero Anticoral

ANLISIS DE LA PRODUCCIN DE SUERO ANTIOFDICO
PARA LA FAMILIA ELAPIDAE EN COLOMBIA
1988 - 2006
0
1.000
2.000
3.000
4.000
5.000
6.000
7.000
8.000
9.000
10.000
1
9
8
8
1
9
8
9
1
9
9
0
1
9
9
1
1
9
9
2
1
9
9
3
1
9
9
4
1
9
9
5
1
9
9
6
1
9
9
7
1
9
9
8
1
9
9
9
2
0
0
0
2
0
0
1
2
0
0
2
2
0
0
3
2
0
0
4
2
0
0
5
2
0
0
6
AOS
C
A
N
T
I
D
A
D

D
E

F
R
A
S
C
O
S
PRODUCCIN LABORATORIOS PROBIOL
COMPORTAMIENTO DE LA PRODUCCIN
1992 - 2006

*(Tomado del Archivo de Laboratorios Probiol S.A 50 aos de Historia por Clemencia Gmez
Cabal, 2.006)

38 38

Cuadro 5. Casos Atendidos conSuero Anticoral

Nombre

Edad
aos
Lugar y
Fecha del
Accidente

Institucin

Fecha
Diagnstico

Andrea Lobo de la Hoz

2

Santa Marta
(Magdalena)

Clnica
Marcaribe

23 VII 2003
1. Accidente ofdico por
coral en mano

Brayan Alexis
Arciniegas
7

Bucaramanga
(Santander)

Clnica Materno Infantil

28 VII 2003
1. Accidente Ofdico por
coral en el pie
Juan Carlos Otalvaro 27

Cartago
(Valle del Cauca)

Hospital
Universitario
del Valle Evaristo Garca
23 VII 1994
1. Neurotoxicidad por
mordedura de
coral.
2. Intoxicacin por
hidrocarburos
Steven Romn Prez 2
Mesitas del
Colegio
(Cundinamarca)
Hospital de
Kennedy
(Bogot D.C.)
23 VIII 1.994
1. Mordedura por coral
M.mipartitus en el dedo
de la mano izquierda
Nerlsy Janet Panado 22
Villavicencio
(Meta)
Hospital Departamental
de Villavicencio
22 VI 1.992
1. Mordedura en el cuello
por la especie
M.psyches
Efran Jimnez Bueno 40
Caicedonia
(Valle del Cauca)
Hospital
Universitario
San Juan de Dios (Armenia)
2 II 1.992
1. Mordedura por ofidio
tipo coral en arco interno
del pie izquierdo
*(Tomado del Archivo de Laboratorios Probiol S.A. 50 aos de Historia por Clemencia Gmez
Cabal, 2.006).

Actualmente el pas cuenta con la produccin de suero antiofdico polivalente para
vipridos producido por el Laboratorio Probiol S.A., pero no para coral. Aunque es
doloroso decirlo, las razones de haber terminado la produccin de suero anticoral
en el pas se debi al cierre que tuvo el Laboratorio en el ao 1.997 por parte del
INVIMA por no cumplir con las Buenas Prcticas de Manufactura. La razn del
cierre fue real, sin embargo como ocurri en muchos de los cierres de
Laboratorios (especialmente nacionales) que hizo el INVIMA, no se evalu ni el
impacto social, ni el econmico, no se buscaron alternativas para evitar el
desabastecimiento de algunos biolgicos y medicamentos, como fue el caso del
suero contra las mordeduras de serpientes del gnero Micrurus (Corales). Por ello,
desde el ao 1.997 el pas no cont con suero antiofdico anticoral. Sin embargo,
el Laboratorio Probiol siempre mantiene un stock y en ms de una oportunidad ha
suministrado en calidad de donacin el suero antiofidico antielapdico a vctimas
de mordeduras de corales, salvndoles la vida (Gmez, 2.006).

La situacin actual se puede comparar con el ao 1.987, retomando el escrito que
hizo el Dr. Cesar Gmez Villegas al Ministerio de Salud, el 27 de Julio del mismo
ao, para solicitar el Registro Sanitario del suero anticoral: En la actualidad y a
causa de que este antiveneno no se consigue en el pas, es frecuente escuchar
por radio y televisin el llamado angustioso y muchas veces intil en busca de este
medicamento indispensable para salvar vidas humanas.

39 39

6. METODOLOGIA

6.1 Fase de Campo

6.1.1 rea de Estudio

La Fase de Campo se realiz en el Parque Recreacional y Zoolgico Piscilago
ubicado en el Municipio de Nilo, Departamento de Cundinamarca (Colombia), a los
41250.24 de latitud Norte y 744051.25 de latitud Oeste aproximadamente, en
el Kilmetro 105 va Bogot Girardot, privilegiadamente sentado sobre el clido
Valle de Sumapaz, kilmetro 5 va Melgar Girardot y a 70 kilmetros de Ibagu.
Con una extensin de 83 hectreas y una temperatura promedio entre 27 y 30
(grados centgrados).

Figura 2. rea de Estudio (Nilo Cundinamarca) Mapa Areo

40 40
6.1.2 Obtencin de los Venenos Micrricos

Los venenos se obtuvieron de las serpientes del genero Micrurus sp. las especies:
Micrurus surinamensis (4 ejemplares); Micrurus mipartitus (1 ejemplar); Micrurus
isozonus (2 ejemplares); Micrurus dumerilii (2 ejemplares) y Micrurus medemi (4
ejemplares) en estado de cautiverio que forman parte del inventario oficial del
serpentario del Parque Recreacional y Zoolgico de Piscilago en Nilo
(Cundinamarca).

Cada quince das se recolectaron muestras de veneno de cada uno de los
ejemplares, para un total de 20 muestreos a lo largo de diez meses.

Al iniciar el estudio se tomaron algunos datos morfomtricos como longitud total,
longitud cola y algunos aspectos biolgicos como la identificacin taxonmica,
categora de amenaza (UICN, apndice CITES), sexo, edad aproximada,
condiciones fsicas, distribucin geogrfica, hbitat, comportamiento del individuo
en cautiverio, manipulacin y transporte de cada uno de los ejemplares de las
cinco especies de Micrurus sp. Anexo A.

6.1.3 Extraccin de Veneno

Las serpientes del gnero Micrurus son de tamao pequeo por tanto no se
recomienda el mtodo de inmovilizacin con gancho, ya que se perdera veneno o
se expondra seriamente al manipulador de la serpiente a ser mordido. Para este
experimento se utilizaron frascos para toma de muestra nuevos y limpios, con la
superficie cubierta por un guante desechable asimilando un tambor, lo que induce
a la serpiente a morder e inocular el veneno. Figura 3.

Figura 3. Mtodo de Extraccin del veneno Micrrico

41 41

6.1.4. Conservacin y Transporte de los Venenos

Las muestras de los venenos una vez obtenidos, fueron conservados en tubos
plsticos individuales por especie, cerradas y debidamente etiquetadas con un
rtulo que contena: fecha de recoleccin de la muestra, el nmero de lote del
veneno y la especie de la cual se extrajo el veneno. Las muestras de los venenos
fueron mantenidas a una temperatura de 2C con hielo seco en una nevera de
icopor, mientras fueron transportadas a las instalaciones del laboratorio.

6.1.5. Preparacin de las Muestras de los Venenos Micrricos

Una vez ingresadas las muestras de veneno al laboratorio, fueron secadas en una
estufa a 37 centgrados por 48 horas, posteriormente se pesaron, se etiquetaron
nuevamente con la cantidad de miligramos de veneno que contiene cada tubo
plstico. A cada especie se le asign un color. Cuadro 6. Se mantuvieron a
temperatura ambiente en la oscuridad hasta el momento de preparar la solucin
de trabajo.

Cuadro 6. Distribucion de los Venenos en Tubos Plsticos de Colores

Especie Color del Tubo Plstico
Micrurus surinamensis surinamensis, Rojo
Micrurus mipartitus, Amarillo
Micrurus isozonus Azul
Micrurus dumerilii Verde
Micrurus medemi Blanco

6.2 Fase Experimental

6.2.1 Animales Experimentales

Dentro del proyecto de investigacin Determinacin de la Dosis Letal Media
(DL
50
) de cinco especies del gnero Micrurus en estado de cautiverio en Nilo-
Cundinamarca (Colombia) que tuvo asiento en el Laboratorio Probiol S.A, se
estableci como prioridad la utilizacin y el manejo tico de animales de
laboratorio en esta experimentacin biolgica. Anexo B.

Se utilizaron como biomodelos ratones de la especie Mus musculus con pesos
que oscilaron entre 17 y 22 gramos sin importar el sexo adquiridos en el bioterio
de la Universidad Nacional en la Facultad de Veterinaria. Los biomodelos
utilizados no tuvieron ningn tipo de privacin en las condiciones ambientales
experimentales; los principales factores ambientales que puedan afectar a los
42 42
animales sern constantes, ya que los cambios en el ambiente experimental
producirn cambios en el modelo animal, lo que conlleva al aumento de la
variabilidad de los resultados, de lo contrario las pruebas se invalidan. Se tuvo en
cuenta el cuadro de caracteristicas generales para los biomodelos utilizados.
Anexo C.

6.2.2 Ensayos Preliminares

Se prepar una solucin madre de veneno Micrrico para cada especie en una
concentracin (1:1) mg/ml en solucin de Cloruro de Sodio al 0.9%. Se realizaron
seis diluciones siguiendo una progresin geomtrica sin espaciamiento constante
(d). Cada dosis fue ensayada en lotes de 5 animales inoculando 0,5 ml por la va
intraperitoneal.

La prueba a la que se llamo Prueba gruesa se repitio varias veces hasta
encontrar una dosis de trabajo. Anexo D.

Para la determinacin estadistica de la DL
50
( ensayos preliminares) se utilizo la
prueba de probits la cual no requiere de un espaciamiento constante (d) entre los
niveles de dosis. Se utiliz el programa Simfit 5.0 para realizar los clculos
automticamente. Anexo E.

6.2.3 Dosis Letal Media DL
50
(OMS, 1981)

La dosis letal media (DL
50
) se determin mediante el mtodo de Spearman &
Karber, es un mtodo aproximado, no paramtrico, propuesto por la OMS en
1981, inyectando por la va intraperitoneal (I.P) un volumen de 0,5 ml de diluciones
seriadas de veneno cercanas a la dilucin de trabajo encontrada en los ensayos
preliminares. Se utilizaron ratones albinos de la especie Mus musculus, con pesos
entre 17 y 19 gramos. Se emplearon cinco ratones por dosis para un total de seis
dosis a ensayar. Los animales fueron mantenidos en observacin durante un
periodo de 48 horas. Los animales del grupo control se inyectaron con solucin
salina isotnica. Anexo D.

Las dosis letales se repitieron cinco veces con cada veneno, para obtener una
muestra estadsticamente significativa. Figura 4.

43 43

Figura 4. Dosis Letal Media (DL
50
)

6.2.3.1 Validez de la Prueba
Los ratones debian tener durante toda la prueba las condiciones
experimentales constantes de temperatura y alimentacin. Si las condiciones no
son constantes la prueba se invalidaba.

Si en el grupo control negativo se producia una o ms muertes, la prueba se
invalidaba.

Se tomo una bala del veneno Micrurus sp. de la especie a
evaluar y se diluy en Solucin Salina al 0.9%, con una
concentracin (1:1) g/ml.
Se determinaron seis diluciones de veneno cercanas a la
dosis de trabajo hallada en los ensayos preliminares,
utilizando un espaciamiento constante entre cada dilucin
(d).
Se midi la cantidad necesaria de veneno para inocular 10 ratones en cada dilucin y se
sigui el siguiente protocolo:
Dilucin
l
1
10
2
20
3
30
4
40
5
50
6
60
24 Horas 0/5 1/5 2/5 3/5 4/5 5/5
48 Horas 0/5 1/5 2/5 3/5 4/5 5/5
Se completo hasta un volumen final de 5 mililitros con solucin
salina estril 0.9% cada dilucin
Se tomaron cinco ratones de 17 - 19 gramos por cada dilucin
y se inyectaron con 0.5 mililitros de la solucin.
Se observaron los ratones inoculados a las 24 y 48 horas y
se registr el nmero de muertes para cada dosis. Los
resultados se anotaron en un nmero fraccionario, donde el
numerador es el nmero de ratones muertos y el
denominador es el nmero de ratones inoculados por dilucin
44 44
Si el grupo control positivo sobrevivian uno o ms ratones, la prueba se
invalidaba.

Si en los resultados de la prueban existian dos diluciones que separaban la
menor dilucin en la cual mueren el 100% de los ratones de la mayor dilucin en
donde mueren el 0% de los ratones la prueba se invalidaba.

6.2.4 Dosis Efectiva Media DE
50

En la determinacin de la dosis efectiva media (DE
50
). Figura 5. se utiliz la
tcnica utilizada por el Instituto Clodomiro Picado de Costarica, que consiste en
una mezcla de una cantidad fija de veneno en presencia de cantidades variables
de antiveneno, las que se ajustan a un volumen igual, se incuban por espacio de
30 minutos a 37C y se inocula por va intraperitoneal en grupos de cinco ratones
por mezcla, de modo que cada uno reciba una dosis no inferior a 3DL50. Anexo F.

El clculo de la dosis letal media (Dl
50
) se realiz con el programa Simfit 5.6
edicin 7, al cual se ingresan las distintas dosis y los niveles de respuesta, en este
caso sobrevivencia, para cada una. El programa realiza la regresin lineal dada
por la relacin probit-log de la dosis segn el mtodo grfico numrico modificado
para computadores de Lichfield y Wilcoxon, que entrega la DE
50
y el intervalo de
confianza al 95% (Tallarida y Murray, 1987; Jurado, 1989). La determinacin de
diferencias significativas entre las DL
50
se realiz mediante W Shapiro Wilks de
tendencia.

45 45

Figura 5. Dosis Efectiva Media (DE
50
)

Se tomo una bala del veneno Micrurus sp. de la especie a
evaluar y se diluy en Solucin Salina al 0.9%, con una
concentracin (1:1) g/ml.
Se reconstituy el Lote Piloto: AC-005 de Suero Antiofidico
Anticoral Polivalente Liofilizado producido por Laboratorios
Probiol S.A. con 10 ml de agua destilada.
Se sigui el siguiente protocolo utilizado por el Instituto Clodomiro Picado de Costarica:

Experimento
No.
mL
veneno
(1mg/ml)

mL
Solucin
Salina
mL
Antiveneno
Relacin g
Veneno/1ml
Antiveneno

24
Horas

48
Horas
1 0.3 1.2 3.0 100 5/5 5/5
2 0.3 2.7 1.5 200 4/5 4/5
3 0.3 3.2 1.0 300 3/5 3/5
4 0.3 3.45 0.75 400 2/5 2/5
5 0.3 3.60 0.6 500 1/5 1/5
CONTROL
(+)
0.3 4.2 ---- Control 0/5 0/5
Se incub la solucin final durante 30 minutos a 37
Centgrados
Se tomaron cinco ratones de 20 22 gramos por cada
dilucin y se inyectaron con 0.75 mililitros de la solucin final.
Se observaron los ratones inoculados a las 24 y 48 horas y
se registr el nmero de sobrevivientes para cada dosis. Los
resultados se anotaron en nmero fraccionario, donde el
numerador es el nmero de ratones que sobreviven y el
denominador es el nmero de ratones inoculados por
dilucin.
46 46
Se utiliz el Mtodo de transformacin en Probits para la dosis efectiva media,
usando el programa Simfit 5.6 edicin 7. Este Mtodo est aceptado por la
Organizacin Mundial de la Salud.

6.2.4.1 Validez de la Prueba

Un mililitro de suero antiofidico anticoral liofilizado producido por Laboratorios
Probiol (DE
100
) debe titular como mnimo 0.1 miligramos de veneno Micrurus sp.

Si el Lote Piloto AC 005 a probar no neutraliza, se desecha el suero
antiofidico del lote correspondiente debido a la baja potencia del producto.

Los ratones deben tener durante toda la prueba las condiciones
experimentales constantes de temperatura y alimentacin. Si las condiciones no
son constantes la prueba se invalidaba.

Si en el grupo control positivo sobreviven uno o ms ratones, la prueba se
invalida.

6.3. Condiciones Experimentales

Durante las pruebas de letalidad y Potencia se tuvo en cuenta las condiciones de
mantenimiento y los grupos control positivo y negativo.

6.3.1 Condiciones de Mantenimiento

Durante las pruebas de letalidad y potencia en el tiempo de observacin y
postinoculacin 24 48 horas, los ratones fueron mantenidos en cajas de acero
inoxidable de las mismas que se utilizan en el bioterio de la Universidad Nacional.
Los ratones se mantuvieron en el transcurso del tratamiento de la dosis letal media
y la dosis efectiva media en condiciones experimentales constantes de peso,
temperatura y alimentacin. Si las condiciones no eran constantes la prueba se
invalidaba.

6.3.2 Grupo Control Positivo

Dosis letal media (DL
50
) para cada lote de veneno de las cinco especies de
Micrurus sp. se inocularon 5 ratones con 0.75 ml de la dosis madre concentrada
(1:1) del veneno. Si en el grupo control positivo sobrevivan uno o ms ratones, la
prueba se invalidaba.

Dosis efectiva media (DE
50
) para cada lote de veneno de las cinco especies
de Micrurus sp. se hizo una dilucin de la dosis madre concentrada (1:1) de
47 47
veneno y se inyect 0.75 ml a 5 ratones. Si en el grupo control positivo sobrevivan
uno o ms ratones se invalidaba la prueba.

6.3.3 Grupo Control Negativo

Dosis letal media (DL
50
) para cada lote de veneno de las cinco especies de
Micrurus sp. se inocularon 5 ratones con 0.75 ml de solucin salina estril al 0.9%.
Si en el grupo control negativo se produca una o ms muertes, la prueba se
invalidaba.

Dosis efectiva media (DE
50
) para el lote piloto de suero antiofidico anticoral
AC -:005: se prepar una dilucin madre (1:1) de suero antiofidico y solucin
salina estril al 0.9% y se inyectaron 5 ratones con 0.75 ml de esta solucin. Si en
el grupo control negativo se produca una o ms muertes, la prueba se invalidaba.

48 48

7. RESULTADOS

7.1 Aspectos Biolgicos

Durante el tiempo de estudio se realiz un registro inicial de los Aspectos
Biolgicos de 13 individuos de la familia Elapidae, gnero Micrurus, los cuales se
determinaron taxonmicamente con claves y reportes de Cuvier (1.817), Dumril y
Bribn (1.854), Cope (1.860), Griffin (1.916), Roze (1.967), Silva (1.994), Campbell
y Lamar (1.989 - 2.004), adems se cont con la colaboracin y asesora del
Bilogo Herpetlogo Jairo Maldonado.

7.1.1 Micrurus surinamensis surinamensis, Cuvier (1.817)

Tabla 4. Clasificacin Taxonmica Micrurus surinamensis

Figura 6. Micrurus surinamensis surinamensis, Cuvier (1.817)

TAXONOMIA
Reino
Phylum
Sub. phylum
Clase
Orden
Suborden
Familia
Subfamilia
Genero
Especie
Nombre comn
Animalia
Chordata
Vertebrata
Reptilia
Squamata
Serpentes
Elapidae
Micrurinae.
Micrurus
Micrurus surinamensis surinamensis. Figura 6.
Coral
49 49

Cuadro 7.Caractersticas morfomtricas de los ejemplares de la especie M.
surinamensis

Identificacin del
individuo
Edad Sexo
Longitud total
(cm)
Longitud cola (cm)
Mss-001 Adulto Hembra 89,5 8,0
Mss-003 Juvenil Macho 64,5 8,5

miligramos para la especie M. s.surinamensis

7.1.2 Micrurus mipartitus, Dumril y Bibrn (1.854)

Tabla 5. Clasificacin Taxonmica Micrurus mipartitus

Especie
Promedio por muestreo para
los cuatro ejemplares
( mg )
Cantidad en miligramos (mg)
Total
Micrurus surinamensis 0,8 16
TAXONOMIA
Reino
Phylum
Sub phylum
Clase
Orden
Suborden
Familia
Subfamilia
Genero
Especie
Nombre comn
Animalia
Chordata
Vertebrata
Reptilia
Squamata
Serpentes
Elapidae
Micrurinae.
Micrurus
Micrurus mipartitus. Figura 7.
Rabo de candela, rabo de aj, cabeza de chocho.
50 50
Figura 7.Micrurus mipartitus, Dumril y Bibrn (1.854)

Cuadro 9. Caractersticas morfomtricas de los ejemplares de la especie Micrurus
mipartitus

Identificacin del
individuo
Edad Sexo
Longitud total
(cm)
Longitud cola (cm)
Mmp-001 Adulto Macho 90,0 9,5

miligramos para la especie M. mipartitus

Especie
Promedio por
muestreo para
ejemplar
( mg )
Cantidad en miligramos
(mg) Total
Micrurus mipartitus 0,1 2,5
51 51
7.1.3 Micrurus isozonus , Cope (1.860)

Tabla 6. Clasificacin Taxonmica Micrurus isozonus

Figura 8. Micrurus isozonus, Cope (1.860)

TAXONOMIA
Reino
Phylum
Sub phylum
Clase
Orden
Suborden
Familia
Subfamilia
Genero
Especie
Nombre comn
Animalia
Chordata
Vertebrata
Reptilia
Squamata
Serpentes
Elapidae
Micrurinae.
Micrurus
Micrurus isozonus. Figura 8.
Coral
52 52
M.isozonus

Identificacin del
individuo
Edad Sexo
Longitud total
(cm)
Longitud cola (cm)
Mis-001 Juvenil Macho 53,0 3,0
Mis-002 Adulto Macho 90,0 4,5

miligramos para la especie M.isozonus

7.1.4 Micrurus dumerilii , Griffin (1.916)

Tabla 7. Clasificacin Taxonmica Micrurus dumerilii

Especie
los dos ejemplares
( mg )
Total
Micrurus isozonus 0,2 6,0
TAXONOMIA
Reino
Phylum
Sub phylum
Clase
Orden
Suborden
Familia
Subfamilia
Genero
Especie
Nombre comn
Animalia
Chordata
Vertebrata
Reptilia
Squamata
Serpentes
Elapidae
Micrurinae.
Micrurus
Micrurus dumerilii. Figura 9.
Coral
53 53
Figura 9. Micrurus dumerilii, Griffin (1.9169)

Cuadro 13. Caractersticas morfomtricas de los ejemplares de la especie M.
dumerilii

Identificacin del
individuo
Edad Sexo
Longitud total
(cm)
Longitud cola (cm)
Mdm-001 Adulto Macho 40,0 7,0
Mdm-002 Adulto Hembra 59,0 5,5

miligramos para la especie M.dumerilii.

7.1.5 Micrurus medemi, Roze (1.967)

Especie
los dos ejemplares
( mg )
Total
Micrurus dumerilii 0,05 3
54 54
Tabla 8. Clasificacin Taxonmica Micrurus medemi

Figura 10. Micrurus medemi, Roze 81.967)

Cuadro 15. Caractersticas morfomtricas de los ejemplares de la especie M.
mipartitus

TAXONOMIA
Reino
Phylum
Sub phylum
Clase
Orden
Suborden
Familia
Subfamilia
Genero
Especie
Nombre comn
Animalia
Chordata
Vertebrata
Reptilia
Squamata
Serpentes
Elapidae
Micrurinae.
Micrurus
Micrurus medemi. Figura
Coral
Identificacin del
individuo
Edad Sexo
Longitud total
(cm)
Longitud cola (cm)
Mmd-001 Adulto Macho 67,0 9,5
Mmd-003 Adulto Hembra 59,0 5,5
55 55
miligramos para la especie M. medemi

50
)
Para determinar la dosis letal media se realizaron varios ensayos preliminares los
cuales sirvieron para establecer una dosis letal media de trabajo, para cada uno
de los venenos de las especies estudiadas. Luego de determinar la dosis letal de
trabajo, se elaboraron varias pruebas finales y de ellas se realiz un muestreo al
azar de cinco pruebas las cuales sirvieron para dar soporte estadstico a la
determinacin de la dosis letal media (DL
50
) de los ejemplares estudiados del
genero Micrurus sp.
7.2.1 DL
50
para Micrurus surinamensis surinamensis
Cuadro 17. Ensayos preliminares para la determinacin de la Dosis letal Media para
el Veneno Micrurus surinamensis

Ensayo
(Dl
50
)
(mg) Veneno/
Peso ratn (g)
Intervalo de Confianza del 95%
1 15.4 13.4 - 17.4
2 10.6 8.2 - 13.1
3 12.3 9.6 - 15
4 19.4 11.1 - 27.6
5

10.3

8.1 - 12.9
Promedio: (Dosis letal 50 de trabajo) 12.3
Media : 13.6
Desviacin estndar : 3.8
Limite de confianza 95% inferior 8.8
Limite de confianza 95% superior 18.3
Especie
los cuatro ejemplares
( mg )
Total
Micrurus medemi 0,1 4
56 56

Cuadro 18. Pruebas finales para la determinacin de la dosis letal media para el
Veneno Micrurus surinamensis

Ensayo
(Dl
50
)
(mg) Veneno/
Peso ratn (g)
Intervalo de confianza del 95%
1 13,762 13,13- 14.420
2 13,365 12.818-13,935
3 13,867 13,263- 14,561
4 13,365 12,818-13.935
5
13,496

12,957-14,957
Promedio:
13.50

Media : 13.56
Valor mnimo
13.337
Valor mximo
13.90
Estadstico W Shapiro Wilks 0,886
Probabilidad P < 0,34
Mtodo estadstico Spearman Karber (OMS 1981)
57 57

Grfica 1. Curva de la dosis letal media del veneno Micrurus surinamensis en estado
de cautiverio en Nilo - Cundinamarca

La DL
50
del veneno Micrurus surinamensis es de 13,56 g /peso de ratn de 17 y
19 g

58 58
7.2.2 DL
50
para Micrurus mipartitus

Cuadro 19. Ensayos preliminares para la determinacin de la dosis letal media para el
Veneno Micrurus mipartitus

Ensayo
(Dl
50
)
(mg) Veneno/
Peso ratn (g)
1 7.06 5.02 - 9.10
2 5.77 3.1 - 8.4
3 3.7 2.6 - 4.8
4 7.42 5.33 - 9.52
5 4.16 2.8 5.51
Promedio: 5,77
Media : 5,62
Desviacin estndar : 1,67
Limite de confianza 95% inferior 3,54
Limite de confianza 95% superior 7,69

59 59

Cuadro 20. Pruebas finales para la determinacin de la dosis letal media para el Veneno
Micrurus mipartitus

Ensayo
(Dl
50
)
(mg) Veneno/
Peso ratn (g)
1 5,53 5,50 - 5,98
2 5,32 5,28 - 5,81
3 5,62 5,28 - 5,81
4 5,53 5.39 - 5,91
5
5,53

5,28 - 5,81
Promedio:
5,53

Media : 5,51
Valor mnimo
5,32
Valor mximo
5,64
Estadstico W Shapiro Wilks 0,832
Probabilidad P < 0,144
60 60

Grfica 2. Curva de la dosis letal media del veneno Micrurus mipartitus en estado de
cautiverio en Nilo - Cundinamarca

La DL
50
del veneno Micrurus Mipartitus es de 5,53 g /peso de ratn de 17 y 19
gramos.

61 61

7.2.3 DL
50
para Micrurus isozonus

Veneno Micrurus isozonus

Ensayo
(Dl
50
)
(mg) Veneno/
Peso ratn (g)
1 29.4 19.1-37.6
2 28.2 23.1-39.2
3 23.1 14.1-32
4 26.4 20.2-32.6
5

35.4

33.4-47.5
Promedio: 28.2
Media : 28.5

62 62

Cuadro 22. Pruebas finales para la determinacin de la dosis letal media para el Veneno
Micrurus isozonus

Ensayo
(Dl
50
)
(mg) Veneno/
Peso ratn (g)
1 28,91 27,83 - 30,04
2 29,20 28,10 - 30,33
3 28,63 27,49 - 29,82
4 28,91 27,83 - 30,04
5 28,91 27,83 - 30,04
Promedio:
28,92

Media : 28,92
Valor mnimo
26,4
Valor mximo
29,20
Estadstico W Shapiro Wilks 0.835
Probabilidad P < 0.3254
63 63
Grfica 3. Curva de la dosis letal media del veneno Micrurus isozonus en estado de

La DL
50
del veneno Micrurus Isozonus es de 28,92 g /peso de ratn de 17 y 19 g

64 64
7.2.4 DL
50
para Micrurus dumerilii

veneno Micrurus dumerilii

Ensayo
(Dl
50
)
(mg) Veneno/
Peso ratn (g)
1 9,16 7,73-10,87
2 8,84 7,39-10,57
3 8,52 7,25-10,02
4 9,50 8,01-11,27
5

8,84

7,58-10,58
Promedio: 8,84
Media : 8,97

65 65
Cuadro 24. Pruebas finales para la determinacin de la dosis letal media para el veneno
Micrurus dumerilii

Ensayo
(Dl
50
)
(mg) Veneno/
Peso ratn (g)
1 9,18 8,77 9,61
2 9,01 8,62 9,40
3 8,83 8,48 9,20
4 9,01 8,62 9,40
5 8,83 8,48 9,20
Promedio:
8,83

Media : 8,99
Valor mnimo
8,83
Valor mximo
9,18
66 66
Grfica 4. Curva de la dosis letal media del veneno Micrurus dumerilii en estado de

La DL
50
del veneno Micrurus dumerilii es de 8,83 g /peso de ratn de 17 y 19 g

67 67
7.2.5 DL
50
para Micrurus medemi

veneno Micrurus medemi

Ensayo
(Dl
50
)
(mg) Veneno/
Peso ratn (g)
1 41.6 39.6-49.6
2 47.1 40.1-50.1
3 43.61 35.0-52.2
4 49.3 36.9-56.6
5
48.4

38.4-53.5
Promedio: 47,1
Media : 46
Limite de confianza 95% superior 50

68 68
Cuadro 26. Pruebas finales para la determinacin de la dosis letal media para el veneno
Micrurus medemi

Ensayo
(Dl
50
)
(mg) Veneno/
Peso ratn (g)
1 46,56 44,94-48,24
2 47.48 45,26-49,80
3 47,02 44,92-49,21
4 47,02 44,92-49,21
5 46,56 44,94-48,24
Promedio:
47,2

Media : 46,93
Valor mnimo
46.56
Valor mximo
47.48
69 69
Grfica 5. Curva de la dosis letal media del veneno Micrurus medemi en estado de

La DL
50
del veneno Micrurus Medemi es de 47,2 g /peso de ratn de 17 y 19 g

70 70
7.3 Dosis efectiva Media (DE
50
)
En la determinacin de la dosis efectiva media (DE
50
) se implement la tcnica
utilizada por el Instituto Clodomiro Picado de Costarica segn la metodologa
explicada anteriormente 6.2.5. Se realiz una prueba retando el suero antiofidico
Anticoral polivalente liofilizado Lote Piloto AC - 005 producido por Laboratorios
Probiol S.A. frente a cada uno de los venenos de las especies en estudio.
7.3.1 DE
50
para el Veneno de Micrurus surinamensis neutralizado por un Lote
Piloto de Suero Anticoral AC-OO5
Cuadro 27. Determinacin de la DE
50
del Suero Antimoral frente al veneno
Micrurus surinamensis

Especie (DE
50
)
Desviacin
Estndar
Limite de
Confianza
95%
Probabilidad
(p)
Micrurus surinamensis 1.021 0,1395 0.577- 1,46

0.0053

Grfica 6. Curva de la dosis efectiva medio (DE
50
)

para el veneno Micrurus surinamensis
frente al suero antiofidico anticoral polivalente liofilizado Lote piloto AC-005 producido
por Laboratorios Probiol S.A. (Tcnica utilizada por el Instituto Clodomiro Picado)

Concentracin [mg veneno / ml antiveneno]
71 71
7.3.2 DE
50
para el Veneno de Micrurus mipartitus neutralizado por un Lote
50
mipartitus probando la efectividad del el suero antiofidico anticoral polivalente liofilizado
Lote piloto AC-005 producido por Laboratorios Probiol S.A. (Tcnica utilizada por el
Instituto Clodomiro Picado)

Especie (DE
50)

Desviacin
Estndar
Limite de
confianza
95%
Probabilidad
(p)
Micrurus mipartitus 0,862 0,196 0,235-1,48

0.022

50
)

para el veneno Micrurus mipartitus
frente al suero antiofidico anticoral polivalente liofilizado Lote piloto AC-005 producido
por Laboratorios Probiol S.A.

72 72
7.3.3. DE
50
para el Veneno de Micrurus isozonus neutralizado por un el Lote

50
) para el Veneno Micrurus
isozonus frente al suero antiofidico anticoral polivalente liofilizado Lote piloto AC-005 de
producido por Laboratorios Probiol S.A. (Tcnica utilizada por el Instituto Clodomiro
Picado)

Especie (DE
50
)
Desviacin
Estndar
Limite de
confianza
95%
Probabilidad
(p)
Micrurus isozonus 1,28 0,2 0,64 - 1,92

0,0077

50
) para el veneno Micrurus isozonus frente
al suero antiofidico anticoral polivalente Liofilizado Lote piloto AC-005 producido por

Concentracin [mg veneno/ ml antiveneno]
73 73
7.3.4. DE
50
para el Veneno de Micrurus dumerilii neutralizado por un el Lote

50
dumerilii frente al suero antiofidico anticoral polivalente liofilizado Lote piloto AC-005
Picado)

Especie (DE
50
)
Desviacin
Estndar
Limite de
Confianza
95%
Probabilidad
(p)
Micrurus dumerilii 1,16 0,239 0,40-1,93

0,077

50
) para el veneno Micrurus dumerilii
frente al Suero antiofidico Anticoral Polivalente Liofilizado Lote piloto AC-005 de

74 74
7.3.5 DE
50
para el Veneno de Micrurus medemi neutralizado por un el Lote

50
medemi frente al Suero Antiofidico Anticoral Polivalente Liofilizado Lote piloto AC-005
Picado)

Especie (DE
50
)
Desviacin
Estndar
Limite de
Confianza
95%
Probabilidad
(p)
Micrurus medemi 1,55 0,222
0,845-
2,261

0,0060

50
)

para el veneno Micrurus medemi
frente al Suero Antiofidico Anticoral Polivalente Liofilizado Lote piloto AC-005 de

75 75
7.3.6 Relacin Efectividad del Suero Anticoral Probiol respecto a los
Venenos del gnero Micrurus sp. Utilizados

Cuadro 32. Efectividad del Suero Antiofdico Antimoral Lote Piloto: AC 005
frente a cinco Lotes de veneno del gnero Micrurus sp.

Especie
(DE
50
) del suero
Antiofidico anticoral
Lote Piloto: AC -005
(ml)
Cantidad de
Veneno utilizado
por Lote
(mg)
Relacin de
Efectividad
(mg/ml)
Micrurus surinamensis 1.02 0.30 0.29

Micrurus mipartitus
0.86 0.25 0.30

Micrurus isozonus
1.28 0.38 0.29

Micrurus dumerilii
1.16 0.34 0.30

Micrurus medemi
1.55 0.46 0.30

76 76

8. ANALISIS DE RESULTADOS

8.1 Aspectos Biolgicos

8.1.1 Micrurus surinamensis surinamensis

De los trece ejemplares estudiados del gnero micrurus, cuatro pertenecen a la
especie Micrurus surinamensis surinamensis tres Hembras y un Macho. Anexo A.
Esta especie presenta un gran desarrollo corporal aproximadamente de 90 cm,
Silva (1994) describe ejemplares hasta de 140 cm ademas, muestran un marcado
dimorfismo sexual en cuanto al tamao. las hembras tienen mayor longitud total y
menor longitud cola con respecto a las medidas observadas en el individuo macho
de la especie que se puede apreciar De acuerdo a lo planteado por Silva (1.994),
en donde existe un dimorfismo sexual diferenciado, en el Cuadro 7.

Los patrones de coloracin en estos individuos coinciden con los reportados por
Cuvier (1.817), Campbell y Lamar (1.989) y Silva (1.994), que consta de tres
colores aposemticos, los cuales forman anillos negros, amarillos y rojos. Los
anillos negros forman triadas bien definidas, que en un nmero de 6 a 9 se
extienden desde la parte posterior de la regin temporal hasta la cola como se
puede apreciar en la Figura 6.

Existen datos deficientes del comportamiento de esta especie en estado de
cautiverio. Segn Maldonado (2.006), se ha logrado mantener estos individuos
vivos en cautiverio de seis meses a un ao, proporcionandoles un hbitat e
implementando una dieta similar a la observada en su hbitat natural.

Mantener estas serpientes vivas en cautiverio en un periodo largo es una tarea
difcil para el investigador, ya que cuando entran en un nivel alto de Stres, pierden
el apetito y no se alimentan voluntariamente, para ello Maldonado (2.006) les
implement una dieta a base de harinas y carnes por medio de la alimentacin
inducida.

8.1.2 Micrurus mipartitus

En el presente estudio se trabaj con un ejemplar Macho en total de esta especie.
Anexo A. Segn Otero (1.994) esta especie puede alcanzar una talla mxima de
1,24 metros, esta especie tiene al igual que M.s.surinamensis, M.isozonus un
gran tamao corporal. Cuadro 9. Debido a que solo se tuvo en observacin un
individuo no se logr hacer una comparacin entre individuos de diferente sexo.

77 77
El patrn de coloracin del individuo observado coincide con el reportado por
Dumril y Bibron (1.854), ngel (1.983) y Otero (1.994), que consta de tres colores
aposemticos los cuales forman anillos blancos, negros y rojos; posee un anillo
rojo de mayor grosor encima de la cabeza y entre dos y cuatro anillos rojos en la
cola como se puede observar en la Figura 7.

Segn Maldonado (2.006) en esta especie existe un tipo de coloracin atpica
presente en Colombia en la que se remplazan los anillos blancos por anillos
amarillos, los cuales separan los anillos negros a lo largo de el cuerpo y poseen
una banda roja encima de la cabeza y entre dos o cuatro anillos rojos en la cola.

Existen datos deficientes acerca del comportamiento de esta especie en estado de
cautiverio. Maldonado (2.006) ha logrado mantener estos individuos vivos en
cautiverio de seis meses a un ao, proporcionandoles un hbitat e implementando
una dieta similar a la observada en su hbitat natural.

inducida.

8.1.3 Micrurus isozonus

En esta investigacin se trabaj con dos ejemplares Machos. Anexo A. Segn
Cope (1.860), Campbell y Lamar (1.989), Maldonado (2.006) esta especie es
endmica para Colombia. Debido a que el nmero de individuos es bajo y poseen
el mismo sexo, no se logr hacer una comparacin entre individuos Hembras y
Machos de la misma especie. Los individuos observados en cautiverio presentan
tamao corporal entre 53 90 y una longitud de la cola inferior a las medidas
observadas en otras especies del gnero Micrurus sp.Cuadro 11.

El patrn de coloracin de los individuos observados en esta especie es similar al
reportado por Silva (1.994) para la especie Micrurus spixii obscurus, formado
por anillos de colores negro, amarillo y rojo, los cuales se agrupan en triadas
amplias, bien definidas, que en nmero de 5 a 7 se extienden desde la nuca hasta
la cola del ofdio. Las triadas de anillos negros estn separadas una de la otra por
dos anillos amarillos en medio de dos anillos rojos.Figura 8.

Al comparar el patrn cromtico de estas dos especies M.isozonus y M.spixii
obscurus difieren en que los individuos de la especie M.spixii poseen abundante
pigmento melnico en las escamas dorso laterales del cuerpo del ofdio, por lo
cual adquiere una coloracin negra brillante, mientras que en los individuos de la
especie M.isozonus la presencia de melanina es inferior, solo se encuentran
bordeando las escamas, los colores amarillo y rojo son ntidos y brillantes, el
78 78
hocico es amarillo y negro con una banda rojo en la cabeza, el vientre de la
cabeza usualmente rojo y amarillo con pigmento negro hacia las escamas que
bordean la boca. De aceurdo con lo planteado por Campbell y Lamar (2.004) el
patrn de coloracin reportado para esta especie difiere con las especies
evaluadas en Piscilago en que se cambian los anillos blancos por anillos amarillos.

De su biologa, toxinologa y comportamiento en el medio ambiente natutal y
artificial se conoce muy poco; Maldonado (2.006) ha logrado mantener estos
individuos vivos en cautiverio alrededor de dos aos, proporcionandoles un hbitat
e implementando una dieta similar a la observada en su hbitat natural.

inducida.

8.1.4 Micrurus dumerilii

En esta investigacin se trabaj con dos ejemplares, una Hembra, un Macho.
Anexo A. Segn los reportes de Griffin (1.916), Maldonado (2.006), esta especie
es endmica para Colombia. Alcanza una talla mxima de 65 cm. posee un
tamao corporal pequeo con respecto a otras especies del gnero Micrurus como
M.s.surinamensis, M.mipartitus, M.isozonus. Los individuos observados presentan
un dimorfismo sexual pronunciado, la Hembra posee mayor longitud total y menor
longitud cola. Cuadro 13.

El patrn de coloracin de los individuos observados en esta especie coinciden
con los reportados por Griffin (1.916) el cual consta de tres colores aposemticos
los cuales forman aproximadamente 18 repeticiones de un anillo negro en medio
de dos anillos blancos que a su vez se encuentran en medio de dos anillos rojos.
La cabeza es negra con un anillo blanco encima. La cola posee de 5 a 6
repeticiones un anillo negro y uno blanco. Figura 9.

De su biologa, comportamiento en el medio ambiente natutal y artificial se conoce
muy poco; Maldonado (2.006) ha logrado mantener estos individuos vivos en
cautiverio alrededor de dos aos, proporcionandoles un hbitat e implementando
una dieta similar a la observada en su hbitat natural.

inducida.

79 79

8.1.5 Micrurus medemi

En el presente trabajo se estudiaron cuatro ejemplares en total, una Hembra que
se logr reproducir satisfactoriamente en cauiverio y tres Machos. Anexo A. De
acuerdo a lo planteado por Roze (1.967), Maldonado (2.006), esta es una especie
endmica de Colombia, que puede llegar a medir alrededor de 60 a 67 cm en
estado de cutiverio. Cuadro 15.

Estas serpientes tienen una coloracin atpica a otras corales ya que por lo
general las corales poseen tres colores, mientras que en esta especie posee dos
patrones cromticos de dos colores, anillos negros anchos y anillos amarillos
delgados o anillos negros anchos y anillos rojos delgados en repeticiones de 42
45. Figura 10.

Existen datos deficientes de la biologa y comportamiento de esta especie en
estado tanto en su hbitat natural como en cautiverio; Maldonado (2.006) ha
logrado mantener estos individuos vivos en cautiverio alrededor de dos aos,
proporcionandoles un hbitat e implementando una dieta similar a la observada en
su hbitat natural.

inducida.

50
)
Para este estudio se realizaron cinco pruebas finales a cada veneno para cada
especie en estudio. El nmero de pruebas realizadas siguiendo siempre la misma
metodologa garantiz que los parmetros que influan de forma directa en los
resultados estuvieran siempre bajo control y permiti normalizar el ensayo de
determinacin de la DL
50
del veneno de las Serpientes del genero Micrurus,
especies Micrurus surinamensis surinamensis, Micrurus mipartitus, Micrurus
isozonus, Micrurus dumerilii y Micrurus medemi ya que se demostr que en las
diferentes pruebas finales los lmites de los valores estimados de las respectivas
DL
50
para un intervalo de confianza de 95 %, se encontraban ampliamente dentro
dicho intervalo.
8.2.1 (DL
50
) para Micrurus surinamensis surinamensis

El cuadro 17 muestra en el promedio la dosis letal de 12,3 g/ratn para Micrurus
surinamensis, esta dosis fue utilizada para deteminar la dosis letal de las pruebas
80 80
finales, Los resultados obtenidos Cuadro 18, permiten definir la DL
50
del veneno
M.surinamensis utilizado como de 13,50 g que al ser inoculado
intraperitonealmente en ratones albinos de peso entre 17 y 19 gramos provoca la
muerte al 50% de los animales inoculados. Grfica 1.

Al comparar la DL
50
de 13,50 g/raton,

para el Veneno de la Micrurus surinamensis
utilizado, con la dosis letal reportada para la misma especie, por Silva (1994) de
10,25 g/peso del ratn, se observa una marcada diferencia que se puede explicar
por muchas razones: Primero: la zona geografica donde se realizo el estudio, Silva
trabajo en el amazonas, mientras que el presente estudio fue realizado en Nilo
Cundimarca; Segundo: Las serpientes utilizadas por Silva fueron serpientes en su
habitat natural mientras, el presente estudio son ejemplares en cautiverio
sometidas a alimentacion artificial y aun alto grado de stress. Estas razones
pueden con llevar variaciones en las dosis letales para esta especie.

8.2.2 (DL
50
) para Micrurus mipartitus

En los ensayos preliminares la dosis letal media promedio es de 5.77 g/ratn para
Micrurus mipartitus Cuadro 19, esta dosis fue utilizada para deteminar la dosis
letal de las pruebas finales. En las pruebas finales el veneno de la especie
Micrurus mipartitus utilizada present una DL
50
de 5,53 g/ratn, Grfica 2,
mostrndose altamente txico, comparado con los venenos de las otras especies
estudiadas y con la DL
50
para M.mipartitus reportada por Pineda(2002) de (9
g/ratn). Estas diferencias se deben como se explico anteriormente a que las
caracteristicas del veneno pueden variar significativamente de una region a otra y
de igual manera las condiciones del habitat en cautiverio o natural. Cuadro 20.

8.2.3 (DL
50
) para Micrurus isozonus

Se realiz un ensayo preliminar para determinar la dosis letal media inicial de
trabajo de 28.2 g/ratn. Cuadro 21. En el Cuadro 22 se observan los resultados
para la DL
50
obtenida para el veneno Micrurus isozonus que fue de 28,92 g/ por
ratn, equivalente a la cantidad de veneno de Micrurus isozonus que causo la
muerte del 50% de los animales en 48 horas. Grfica 3. No se encuentra ningn
reporte de dosis letal media en la literatura cientfica para esta especie en
Colombia lo que dificulta su comparacin.

En relacin con las otras especies estudiadas los resultados de la dosis letal
media es menor que las obtenidas para las especies M.surinamensis, M.mipartitus
y M.dumerilii.

8.2.4 (DL
50
) para Micrurus dumerilii

Cuadro 23. En los ensayos preliminares para la determinacin de la dosis letal
media inicial de estudio fue 8.84 g/ratn. Los resultados para el estudio de la
81 81
dosis letal media final observados en el Cuadro 24, de M.dumerilii utilizado se
pueden definir como 8.83 g de veneno que al ser inoculado a ratones albinos de
17 a 19 gramos ocasionan la muerte al 50% del total de la poblacion inoculada. No
se encuentra ningn reporte de dosis letal media en la literatura cientfica para
esta especie en Colombia lo que dificulta su comparacin.Grfica 4.

De acuerdo con Bolivar(2.006) la especie Micrurus dumerilii, presenta junto a la
Micrurus mipartitus la mayor accidentalidad por la familia Elapidae en Colombia.
Es importante recalcar que de acuerdo a los resultados obtenidos Micrurus
dumerilli presenta el veneno ms txico despues de M.mipartitus.

8.2.5 (DL
50
) para Micrurus medemi

En el Cuadro 25 se observa una dosis letal media inicial de trabajo de 47.1
g/ratn. Se calcul la dosis letal media para la especie Micrurus medemi de 47.2
g por peso de ratn. Cuadro 26. Se inocularon ratones albinos de la especie Mus
musculus va intraperitoneal con pesos de 17 a 19 gramos y se definio la dosis
letal media como la cantidad en microgramos de veneno capaz de matar al
cincuenta por ciento de la poblacin inoculada.Grfica 5.

Es importante recordar que esta especie es endemica para Colombia y hasta
ahora no se ha reportado la dosis letal media lo que dificulta su comparacin.

8.3 Dosis Efectiva Media (DE
50
)

Utilizando la metodologa del Instituto Clodomiro Picado de Costa Rica, la dosis
efectiva media de un suero antiofdico polivalente especfico en la evaluacin
experimental frente al efecto letal medio del veneno de las serpientes debe
neutralizar al menos tres dosis letales medias de veneno utilizado en la
experimentacin. El suero antiofdico anticoral lote piloto AC-005 neutraliza de la
misma forma los diferentes venenos de las especies Micrurus sp. estudiadas,
estando en una relacin de aproximadamente 0.3 mg/ml de efectividad del suero
antiofdico antielapdico producido por Laboratorios Probiol. Cuadro 32.

8.3.1 DE
50
veneno de la especie Micrurus surinamensis

La dosis efectiva media del suero anticoral producido por Laboratorios Probiol es
de 1,021 mg/ml capaz de salvar el 50% de la poblacin inoculada utilizando
ratones albinos de la especie Mus musculus con pesos entre 20 -22 gramos.
Grfica 6. Donde 1,021 ml de suero antiofidico anticoral polivalente liofilizado
producido por Laboratorios Probiol S.A. Lote AC-005 neutraliza 0.304 mg de
veneno Micrurus surinamensis con un limite de confianza del 95% entre 0.577-
1,46 y con una probabilidad de p = 0.0053.Cuadro 27.
82 82

8.3.2 DE
50
veneno de la especie Micrurus mipartitus.

En el Cuadro 28 se observa la dosis efectiva media del suero anticoral producido por
Laboratorios Probiol Lote AC-005 que es de 0.862 ml que neutraliza 0.25 mg de veneno
Micrurus mipartitus con un limite de confianza del 95% entre 0,235-1,48 y con una
probabilidad de p =0.022. Esta dosis efectiva media es capaz de salvar el 50% de la
poblacin inoculada utilizando ratones albinos de la especie Mus musculus con pesos entre
20 22 gramos. Figura 7.

8.3.3 DE
50
veneno de la especie Micrurus isozonus.

La (DE
50
) es de 1,28 ml de suero antiofidico anticoral polivalente liofilizado
producido por Laboratorios Probiol Lote AC-005 que neutraliza 0.384 mg de
veneno Micrurus isozonus con un limite de confianza del 95% entre 0,64 - 1,92 y
con una probabilidad de p = 0.0077.Cuadro 29. Esta dosis es capaz de salvar el
50% de la poblacin inoculada utilizando ratones de la especie Mus musculus con
pesos de 20 22 gramos. Figura 8.

8.3.4 DE
50
veneno de la especie Micrurus dumerilii.

En el Cuadro 30 se observa la (DE50) es de 1,16 mg/ml. Donde 1,16 ml de suero
antiofidico anticoral polivalente liofilizado producido por Laboratorios Probiol S.A.
Lote AC-005 neutraliza 0.348 mg de veneno Micrurus dumerilii en donde sobrevive
el 50% de la poblacin inoculada utilizando ratones albinos de la especie Mus
musculus. Figura 9. Con un limite de confianza del 95% entre 0,40-1,93 y con una
probabilidad de p = 0.077.

8.3.5 DE
50
veneno de la especie Micrurus medemi.

La (DE
50
) es de 1,55 mg/ml en donde sobrevive el 50% de la poblacin inoculada
con el veneno de la especie Micrurus medemi como se observa en la Grfica 10.
Donde 1,55 ml de Suero Antiofdico Anticoral Polivalente Liofilizado de Probiol S.A.
Lote AC-005 neutraliza 0.465 mg de veneno Micrurus medemi con un limite de
confianza del 95% entre 0,845-2,261 y con una probabilidad de p = 0.0060.
Cuadro 31.

83 83

9. CONCLUSIONES

En la literatura cientfica se evidencia una deficiente informacin acerca de la
categora de amenaza, vulnerabilidad, extincin, estudios poblacionales,
toxinologa y comportamiento de las serpientes del gnero Micrurus sp. presentes
en Colombia en estado de cautiverio.

Igualmente solo se reporta la Dl
50
para dos de las cinco especies evaluadas; la
especie Micrurus surinamensis en la Amazonia Colombiana tiene una Dl
50
de10,25
g/ratn utilizando ratones de 25 a 35 gramos e inoculandolos
intraperitonealmente (Silva, 1.994) y una Dl
50
para la especie Micrurus mipartitus
de 9 mg/ratn utilizando como biomodelo ratones albinos de 18 -20 gramos por
nivel (Pineda, 2.002).

Es de aclarar que existe error en las unidades de medida en la Dl
50
terica
planteada por Pineda (2.002) para la especie M.mipartirus ya que los resultados
de dosis letales se determinan en g por gramos o peso del animal inoculado, lo
que dificulta una comparacin de las dosis letales medias tericas y las obtenidas
experimentalmente.

La DL
50
del veneno de cada una de las cinco especies del gnero Micrurus sp.
puede ser determinada a travs de inoculaciones por va intraperitoneal en ratones
albinos de la especie Mus musculus con pesos entre 17 y 19 gramos sin distincin
de sexo. Se demostr resultados satisfactorios tanto en sensibilidad como en
reproducibilidad al utilizar un modelo estadstico Spearman Karber el cual nos
permiti calcular una Dl
50
inicial de trabajo.

Se encontr que la toxinologa de los venenos puede variar entre especies y an
utilizando el veneno de un mismo ejemplar obteniendo como resultado este orden
de toxicidad en las cinco especies de Micrurus sp. evaluadas: Micrurus mipartitus
< Micrurus dumerilii< Micrurus surinamensis< Micrurus isozonus< Micrurus
medemi. Indicando que el que tiene una menor DL
50
se caracteriza como el ms
txico.

Estos cambios en la Dl
50
puede atribuirse a los diferentes niveles de stress a los
que son sometidas las serpientes, que conllevan a la muerte por inanicin y a los
cambios en la alimentacin que se deben implementar para lograr mantenerlas
con vida por un largo periodo de tiempo.

En la evaluacin del Lote Piloto: AC-005 de suero antiofidico antielapdico
producido por Laboratorios Probiol S.A., se demostr que posee una capacidad
84 84
neutralizante de los cinco lotes de veneno utilizados del gnero Micrurus sp. Es
muy importante lo anteriormente mencionado, ya que respalda el uso del suero
polivalente en accidentes causados por las especies: Micrurus surinamensis,
Micrurus mipartirus, Micrurus isozonus, Micrurus dumerilii y Micrurus medemi.
El suero antiofidico antielpdico neutraliza de la misma forma los diferentes
venenos mencionados anteriormente sin importar la especie que se refieran,
estando en una relacin de efectividad de aproximadamente 0.3mg/ml del Lote
Piloto de suero anticoral frente a los cinco Lotes de veneno micrrico analizados.
Es decir que 1 cm de suero anticoral polivalente est neutralizando 0.3 mg de
veneno micrrico de las especies evaluadas.

Esto nos indica que no hay especificidad en la relacin del suero anticoral y
tampoco se tendran en cuanta las dosis letales medias de cada uno de los
venenos. En este sentido el suero antiofidico antielapdico analizado tiene el
mismo grado de efectividad independientemente de las especies evaluadas y
teniendo constante el volumen de veneno utilizado.

85 85

10. RECOMENDACIONES

Las serpientes del gnero Micrurus sp. en estado de cautiverio mueren por
inanicin, por lo tanto se debe implementar diferentes dietas para suplir las
necesidades vitales de acuerdo con sus hbitos de alimentacin en su hbitat
natural; el cual debe basarse en lo reportado por Silva (1.994) y lo recomendado
por Maldonado (2.006), una alimentacin a base de celicilias, bachias, alevinos y
pequeas serpientes.

La determinacin de la dosis letal media se realiz utilizando 13 individuos del
gnero Micrurus sp., que sirven como base a posteriores estudios ampliando la
muestra experimental y as se aumentara la cantidad en mg de cada uno de los
lotes de veneno a evaluar.

Se recomienda determinar la Dl
50
del veneno de las serpientes de acuerdo a la
zona geogrfica de su captura, ya que se han demostrado variaciones
significativas en su composicin que podran tener importancia mdica,
filogentica y taxonmica.

Para calcular una Dl
50
inicial de trabajo o reto en la fase experimental inicial se
debe utilizar un modelo estadstico que permita calcular la dosis letal media inicial
experimental sin tener en cuenta una d entre las diluciones. En la determinacin
de la Dl
50
de la fase experimental final se debe utilizar un modelo estadstico
utilizando una d aprobada por la OMS.

El grado de toxicidad de los venenos evaluados presenta variabilidades entre
especies e incluso utilizando el veneno de un mismo ejemplar, por lo tanto no se
recomienda un mtodo para la dosificacin del suero anticoral y difcilimente
puede concebirse una prueba nica general.

En el clculo de la DE
50
planteada por el Instituto Clodomiro Picado de Costa Rica
no se tiene en cuenta la dosis letal media del lote de veneno, pero esta dosis
efectiva media del suero antiofidico debe cubrir mnimo 3DL
50
del lote de veneno a
evaluar.

86 86

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[47] RUSSOW, L. 1.999. Bioethics, Animal Research, and Ethical Theory. ILAR
OURNAL, Vol. 40 No 1. USA.

[48] SILVA, Haad. Juan Jos. 1.994. Los Micrurus de la Amazona Colombiana.
Biologa y toxicologa experimental de sus venenos. Corporacin Colombiana para
la Amazonia Araracuara, COA. Colombia Amaznica, Vol. 7, No. 1 2,
P.p. 41 138.

[49] SILES, Villarroel. Medardo. 1978/79, Padronizao da Titulao da Actividade
Txica de Venenos Botrpicos, em Camundongos. Mem.Inst. Butantn. P.p.
42/43: 311 323.

[50] STOCKER, K.F. 1.999. Composition of snake venoms. En: Stocker K.F,
editor. Medical use of snake venom proteins. Boca Raton: CRC Press. P.p. 34
50.

[51] THEAKSON, R.D.G. LAING, G.D. FIELDING, C.M. 1.995. Treatment of
snake bites by Bothorps species and Lachesis muta in Ecuador: Laboratory
screening of candidate antivenoms.

[52] VAZQUEZ, De Kartzow. R. Alejandro. 1995. Mordedura de Serpientes
venenosas, Gua prctica para su identificacin, clasificacin, diagnstico y
tratamiento de accidente ofdico. Ediciones Rosaristas. Primera Edicin. P.p 8
103.

[53] VITAL, Oswaldo. DAS, Marcos. 1.983/84. Aes pr-juncionais e ps-
juncionais da peonha da cobra coral Micrurus corallinus na juno
neuromuscular. Mem. Instituto Butantan, P.p. 47/48:13-26.

[54] WORLD HEALTH ORGANIZATION. Progress in the characterization of
venoms and standardization of antivenoms. Laboratoy Mannual. Geneva. 5-44 pp.
1981.

91 91

INDICE ALAFABETICO

Accin Postsinptica: Actividad neurotxica del veneno en un sitio
especfico de accin dentro de la unin neuromuscular despus de la
sinapsis.

20
Accin Presinptica: Actividad neurotxica del veneno en un sitio
especfico de accin dentro de la unin neuromuscular antes de la
sinapsis.

21
Dosis Letal Media (DL
50
): Es la dosis de preparacin u organismo que
mata el 50% de los animales inoculados.

43
Dosis Efectiva Media (DE
50
): Es la dosis de preparacin en la que
sobrevive el 50% de los animales inoculados.

45
Liofilizado: Deshidratar algo en vaco. El Suero antiofdico Liofilizado no
necesita refrigeracin ya que es seco.

37
Miotxico: Daos en el corazn por efectos de una intoxicacin.

26
Monovalente: Se hace referencia al Suero antiofdico especfico para una
sola especie de serpientes.

35
Neurotxico: Daos en el sistema nervioso por efectos de una
intoxicacin.

31
OMS: Organizacin Mundial de la Salud.

37
Polivalente: Se hace referencia al Suero antiofdico que tiene efectividad
sobre varias especies de una misma familia de serpientes.

36
Proteroglifas: Tipo de denticin de las Micrurus. Su aparato venenoso
consta de un diente acanalado a cada lado de la parte anterior de la
maxila y dos glndulas productoras de veneno. Dichos dientes son
profundamente acanalados y por medio de un conducto se comunican con
las glndulas, que son grandes y estn colocadas en la regin temporal,
una a cada lado de la cabeza. Los dientes inyectores de las serpientes
proteroglifas son fijos y relativamente cortos, pero esto se encuentra
compensado por un activo veneno neurotxico.
27
92 92

Tanatofdios: Son las modificaciones osteolgicas de los huesos de las
serpientes para inocular toxinas por medio del aparato venenoso. Las
serpientes Proteroglifas y Solenoglifas son conocidas como tanatofdios.

27
Toxinologa: Estudio de las toxinas producidas por glndulas secretoras
de veneno.

21
Va Intraperitoneal (I.P): Dcese de lo que est o se pone en el interior
del peritoneo. Inculos intraperitoneales.

32
Va Intramuscular (I.M): Dcese de lo que est o se pone en el interior de
los msculos. Inyeccin intramuscular.

32
Va Intravenosa (I.V): Dcese de lo que est o se pone en el interior de las
venas. Inyeccin intravenosa.

33

93 93

ANEXOS

94 94

ANEXO A. FICHA DE ASPECTOS BIOLOGICOS DE LAS ESPECIES EN
ESTUDIO

1. IDENTIFICACIN TAXONMICA:

NOMBRE CIENTFICO: NOMBRE VULGAR: CODIGO
Micrurus s.surinamensis Coral Ms-001

2. CATEGORIA DE AMENAZA UICN: No aplica APNDICE CITES: No aplica

3. SEXO: Hembra EDAD: aprox. Neonato____Juvenil____Adulto__X__

4. CONDICIONES FISICA:

4.1 Tegumento: Piel cubierta de escamas.
4.2 Sistema seo: Constituido por vrtebras que le permiten gran flexibilidad.
4.3 Denticin: El tipo de denticin presente es llamado Proteroglifa, el maxilar superior es alargado (belfas).
4.4 Estado.reproductivo: El ejemplar se encuentra apto para la reproduccin.
4.5 Descripcin: Dentro del gnero Micrurus es una especie de mayor tamao en comparacin con otras especies del mismo
gnero, posee colores aposemticos rojo, amarillo, negro, que indican advertencia; su cabeza es pequea de color rojo con lneas
negras en forma de red, con cuello no diferenciado y ojos muy pequeos.
4.6 Locomocin: Serpentino, la serpiente contrae sus msculos para generar una serie de movimientos ondulatorios, este es la
locomocin comn en todas las serpientes de coral.

5. MOFORMETRIA:

Longitud total: 89,5 cm. Longitud Cola: 8.0 cm.

6. DISTRIBUCIN GEOGRFICA: Geogrficamente se encuentra en la Amazona y Orinoqua Colombiana; presentando una alta
ocurrencia poblacional en las regiones limtrofes de Brasil y Per con Colombia. Se aprecia una disminucin de la incidencia
poblacional hacia el norte y el centro de la Amazonia Colombiana, en los territorios de Guaviare, Guaina, Vaups y Orinoqua.

7. HBITAT: Habitan en zonas de clima medio y clido. Algunas especies tienen vida semisubterrnea, hbitos nocturnos y prefieren
permanecer ocultas bajo la hojarasca, piedras, troncos, son de carcter manso, tmidas de hbitos nocturnos. Su hbitat natural es el
bosque tropical siempre cerca de reas acuticas entre 0 y 600 msnm.
8. HISTORIA NATURAL DE LA ESPECIE EN CAUTIVERIO:

8.1 Patrn de actividad: Durante el da su actividad es mnima, en la noche tiene mayor actividad.
8.2 Locomocin y postura: Permanece enrollada en las cajas herpetolgicas, cuando se le va ha extraer el veneno, se levanta la
cola y esconde la cabeza.
8.3 Dormideros: Se le acondicion un recipiente plstico transparente, con tierra negra rica en humus, y un recipiente con agua.
8.4 Dieta: Alimentacin artificial inducida con ratones pinck (recin nacidos) de la especie Mus musculus. El Doctor Jairo Maldonado
realiza una mezcla de harinas y carnes, y las ha mantenido por ms de un ao en el Serpentario del Parque Recreacional y Zoolgico
Piscilago en Nilo Cundinamarca.

9. COMPORTAMIENTO DEL INDIVIDUO:

9.1 Patrn de actividad: En general su patrn de actividad es mnimo. Mantener esta especie en cautiverio es una tarea difcil para
el investigador, ya que pierden el apetito y no se alimentan por si mismas.
9.2 Comportamiento Social: Cuando se les extrae veneno son agresivas, por lo general las serpientes se mantienen en cajas
individuales; solo se mantienen ms de dos serpientes de la misma especie cuando son de la misma camada.
9.3 Interaccin con otras especies: El comportamiento social con otras especies es agresivo.

10. MANIPULACIN: La inmovilizacin de la serpiente se hace directamente con la mano, debido a su tamao, ya que las pinzas
herpetolgicas lastimaran la serpiente o expondran al investigador a una mordedura letal; para ello se toman medidas preventivas, y
la manipulacin solo lo realiza una persona experta.

11. TRANSPORTE: Se transportan por medio de cajas herpetolgicas.
95 95







5. MOFORMETRIA:

Longitud total: 92,0 cm. Longitud Cola: 11,0 cm.







96 96




3. SEXO: Macho EDAD: aprox. Neonato____Juvenil__ X___Adulto______



5. MOFORMETRIA:

Longitud total: 64.5 cm. Longitud Cola: 8.5 cm.







97 97







5. MOFORMETRIA:

Longitud total: 73,5 cm. Longitud Cola: 6,5 cm.







98 98

1. IDENTIFICACIN TAXONMICA: 1

Micrurus mipartitus Rabo de aj , cabeza de chocho, rabo de candela. Mp-001


3. SEXO: Macho EDAD: aprox. Neonato____Juvenil____Adulto__X__


4.1 Tegumento: Piel cubierta de escamas. Posee 15 hileras de escamas dorsales y carecen de escama loreal.
4.5 Descripcin: Presenta colores aposemticos: negros, rojos y blancos, esta serpiente presenta un anillo rojo en la cabeza, y
cinco anillos rojos en la cola intercalados de anillos negros, el resto de su cuerpo posee un anillo negro, seguido de un anillo
blanco. Su cabeza es pequea, sin diferenciacin de cuello, el ojo es pequeo.

5. MOFORMETRIA:

Longitud total: 90 cm. Longitud Cola: 9,5cm.

6.DISTRIBUCIN GEOGRFICA: Geogrficamente se encuentra principalmente en la Cordillera de los Andes, Antioquia y Choc,
encontrndose ampliamente distribuida en todo el territorio Colombiano, a una altura aproximada de 1.800 metros sobre el nivel
del mar.

7. HBITAT: Habitan en principalmente en zonas hmedas, zonas productoras de caf y selvticas, esta especie vive en cercana
estrecha con los seres humanos, ya que prefieren los cultivos de caf. Tiene hbitos nocturnos y subterrneos, pero tambin se
encuentra oculta entre la hojarasca, grietas, y troncos podridos.


8.1 Patrn de actividad: Tiene mayor actividad nocturna.
8.2 Locomocin y postura: Permanece buscando la manera de ocultarse en la tierra cuando se va a manipular para extraer su
veneno.
8.3 Dormideros: Se le acondicion un recipiente plstico transparente, con tierra negra, con hojarasca y un recipiente con agua.
8.4 Dieta: Alimentacin artificial inducida con ratones pinck (recin nacidos) de la especie Mus musculus. El Doctor Jairo
Maldonado realiza una mezcla de harinas y carnes, y las ha mantenido por ms de un ao en el Serpentario del Parque
Recreacional y Zoolgico Piscilago en Nilo Cundinamarca.


9.1 Patrn de actividad: En general su patrn de actividad es mnimo. Mantener esta especie en cautiverio es una tarea difcil
para el investigador, ya que pierden el apetito y no se alimentan por si mismas.
9.2 Comportamiento Social: Cuando se les extrae veneno no tiene conducta agresiva.

herpetolgicas lastimaran la serpiente o expondran al investigador a una mordedura letal; para ello se toman medidas
preventivas, y la manipulacin solo lo realiza una persona experta.

11. TRANSPORTE: Se transportan por medio de cajas herpetolgicas
99 99


NOMBRE CIENTFICO: NOMBRE VULGAR: Mis-001
Micrurus isozonus Coral


3. SEXO: Macho EDAD: aprox. Neonato____Juvenil__ X__ Adulto ____

4. CONDICIONES FISICAS:

4.5 Descripcin: Dentro del gnero Micrurus es una especie de tamao grande, posee colores aposemticos negro, amarillo,
rojo; el patrn de coloracin del cuerpo es tres anillos negros intercalados de dos anillos amarillos, en medio de dos anillos rojos.
Existe pocos reportes acerca de su biologa.

5. MOFORMETRIA:

Longitud total: 53 cm. Longitud Cola: 3 cm.

6. DISTRIBUCIN GEOGRFICA: Geogrficamente esta especie se encuentra en la Regin de la Orinoqua. De su Ubicacin
geogrfica se conoce muy poco.

7. HBITAT: Habitan la regin de la Orinoqua, se distribuye aproximadamente en Colombia hasta los 1.400 metros sobre el nivel
del mar.


8.1 Patrn de actividad: Mayor actividad nocturna.
8.2 Locomocin y postura: En el da permanece enrollada, locomocin serpentina, en el momento de manipularla para la
extraccin del veneno, la serpiente se torna agresiva, se enrolla escondiendo la cabeza debajo de su cuerpo y levanta la cola a
manera de seuelo.
8.3 Dormideros: Se le acondicion un recipiente plstico transparente, con tierra negra, con hojarasca, y un recipiente con agua.
8.4 Dieta: El Doctor Jairo Maldonado implement una dieta que incluye cecilias, bachias, serpientes pequeas y alimentacin
artificial inducida con una mezcla de harinas y carnes.

9. COMPORTAMIENTO DE LA ESPECIE:

9.1 Patrn de actividad: Nocturno.
9.2 Comportamiento Social: Se ha logrado satisfactoriamente mantener viva dos aos en cautiverio.
9.3 Interaccin con otras especies: Es agresivo, esta serpiente es ofidifaga.

herpetolgicas lastimaran la serpiente o expondran al investigador a una mordedura letal; para ello se toman medidas preventivas
y la manipulacin solo lo realiza una persona experta.


100 100


Micrurus isozonus Coral Miso-002


3. SEXO: Macho EDAD: aprox. Neonato____Juvenil ____Adulto __ X__


4.5 Descripcin: Dentro del gnero Micrurus es una especie de tamao grande, posee colores aposemticos negro, amarillo,
rojo; el patrn de coloracin del cuerpo es tres anillos negros intercalados de dos anillos amarillos, en medio de dos anillos
rojos. Existen pocos reportes acerca de su biologa.

5. MOFORMETRIA:

Longitud total: 90 cm. Longitud Cola: 4,5cm.

6. DISTRIBUCIN GEOGRFICA: Geogrficamente esta especie se encuentra en la Regin de la Orinoqua. De su Ubicacin
geogrfica se conoce muy poco.

7. HBITAT: Habitan la regin de la Orinoqua, se distribuye aproximadamente en Colombia hasta los 1.400 metros sobre el
nivel del mar.


8.2 Locomocin y postura: En el da permanece enrollada, locomocin serpentina, en el momento de manipularla para la
extraccin del veneno, la serpiente se torna agresiva, se enrolla escondiendo la cabeza debajo de su cuerpo y levanta la cola a
manera de seuelo.
8.3 Dormideros: Se le acondicion un recipiente plstico transparente, con tierra negra, con hojarasca, y un recipiente con
agua.



10. MANIPULACIN: La inmovilizacin de la serpiente se hace directamente con la mano, debido a su tamao, ya que las
pinzas herpetolgicas lastimaran la serpiente o expondran al investigador a una mordedura letal; para ello se toman medidas
preventivas y la manipulacin solo lo realiza una persona experta.


101 101


Micrurus dumerilli Coral Mdm- 001


3. SEXO: Macho EDAD: aprox. Neonato____Juvenil _____ Adulto__X__

4.5 Descripcin: Dentro del gnero Micrurus es una especie de tamao pequeo, posee colores aposemticos, anillos negros
intercalados con anillos blancos en cabeza y cola, sin cuello diferenciado del resto del cuerpo, su cola tiene un adelgazamiento
brusco, el patrn de coloracin del cuerpo es distinto de la cola, a lo largo del cuerpo posee en medio de dos anillos rojos un anillo
blanco seguido de un anillo negro, la cola tiene un anillo negros en medio dos anillos blancos en seis repeticiones.

5. MOFORMETRIA:

Longitud total: 40 cm. Longitud Cola: 7 cm.

6. DISTRIBUCIN GEOGRFICA: Geogrficamente esta especie se encuentra en la Regin Andina, Antioquia, Sierra Nevada de
Santa Martha. En Colombia esta especie se encuentra en tierras del oeste del pas.

7. HBITAT: Habitan en el bosque seco aproximadamente 2.133 metros sobre el nivel del mar.


8.2 Locomocin y postura: En el da permanece enrollada, locomocin serpentina.





102 102


Micrurus dumerilli Coral Mdm -002


3. SEXO: Hembra EDAD: aprox. Neonato____Juvenil ______Adulto__ X__


4.5 Descripcin: Dentro del gnero Micrurus es una especie de tamao pequeo, posee colores aposemticos, anillos negros
intercalados con anillos blancos en cabeza y cola, sin cuello diferenciado del resto del cuerpo, su cola tiene un adelgazamiento
brusco, el patrn de coloracin del cuerpo es distinto de la cola, a lo largo del cuerpo posee en medio de dos anillos rojos un anillo
blanco seguido de un anillo negro, la cola tiene un anillo negros en medio dos anillos blancos en seis repeticiones.

5. MOFORMETRIA:

Longitud total: 59 cm. Longitud Cola: 5,5 cm.

6. DISTRIBUCIN GEOGRFICA: Geogrficamente esta especie se encuentra en la Regin Andina, Antioquia, Sierra Nevada de
Santa Martha. En Colombia esta especie se encuentra en tierras del oeste del pas.

7. HBITAT: Habitan en el bosque seco aproximadamente 2.133 metros sobre el nivel del mar.


8.2 Locomocin y postura: En el da permanece buscando la oscuridad.





103 103


Micrurus medemi Coral Mmd-001




4.5 Descripcin: Dentro del gnero Micrurus es una especie que posee un patrn de coloracin diferente a otras
corales, posee colores aposemticos, anillos negros intercalados con anillos rojos, su cabeza es pequea, sin cuello
diferenciado del resto del cuerpo, su cola tiene un adelgazamiento brusco.
4.6 Locomocin: Serpentino, la serpiente contrae sus msculos para generar una serie de movimientos ondulatorios,
este es la locomocin comn en todas las serpientes de coral.

5. MOFORMETRIA:

Longitud total: 67 cm. Longitud Cola: 9,5 cm.

6. DISTRIBUCIN GEOGRFICA: Este ejemplar proviene de Villavicencio (Meta), de su distribucin geogrfica se sabe
muy poco. Es una especie endmica de Colombia.

7. HBITAT: Habitan en el bosque hmedo tropical y seco entre 250 600 metros sobre el nivel del mar, del territorio
Colombiano.


8.3 Dormideros: Se le acondicion un recipiente plstico transparente, con tierra negra, con hojarasca, y un recipiente
con agua.
8.4 Dieta: El Doctor Jairo Maldonado les implement una dieta que incluye cecilias, bachias, serpientes pequeas y
alimentacin artificial inducida con una mezcla de harinas y carnes.


9.2 Comportamiento Social: Se ha logrado satisfactoriamente la reproduccin en cautiverio de esta especie; se han
mantenido vivas por ms de dos aos con la implementacin de la dieta artificial inducida, ya que la mayora de las
corales no se alimentan voluntariamente en cautiverio.

10. MANIPULACIN: La inmovilizacin de la serpiente se hace directamente con la mano, debido a su tamao, ya que
las pinzas herpetolgicas lastimaran la serpiente o expondran al investigador a una mordedura letal; para ello se toman
medidas preventivas, y la manipulacin solo lo realiza una persona experta.


104 104






4.5 Descripcin: Dentro del gnero Micrurus es una especie que posee un patrn de coloracin diferente a otras corales, posee
colores aposemticos, anillos negros intercalados con anillos blancos, su cabeza es pequea, sin cuello diferenciado del resto del
cuerpo, su cola tiene un adelgazamiento brusco.

5. MOFORMETRIA:


6. DISTRIBUCIN GEOGRFICA: Este ejemplar proviene de Villavicencio (Meta), de su distribucin geogrfica se sabe muy
poco. Es una especie endmica de Colombia.

7. HBITAT: Habitan en el bosque hmedo tropical y seco entre 250 600 metros sobre el nivel del mar, del territorio Colombiano.


8.4 Dieta: El Doctor Jairo Maldonado les implement una dieta que incluye cecilias, bachias, serpientes pequeas y alimentacin


9.2 Comportamiento Social: Se ha logrado satisfactoriamente la reproduccin en cautiverio de esta especie; se han mantenido
vivas por ms de dos aos con la implementacin de la dieta artificial inducida, ya que la mayora de las corales no se alimentan
voluntariamente en cautiverio.

herpetolgicas lastimaran la serpiente o expondran al investigador a una mordedura letal; para ello se toman medidas
preventivas, y la manipulacin solo lo realiza una persona experta.


105 105






4.5 Descripcin: Dentro del gnero Micrurus es una especie que posee un patrn de coloracin diferente a otras corales,
posee colores aposemticos, anillos negros intercalados con anillos amarillos, su cabeza es pequea, sin cuello diferenciado
del resto del cuerpo, su cola tiene un adelgazamiento brusco.

5. MOFORMETRIA:

Longitud total: 59.0 cm. Longitud Cola: 5,5 cm.

6. DISTRIBUCIN GEOGRFICA: Este ejemplar proviene de Villavicencio (Meta), de su distribucin geogrfica se sabe muy
poco. Es una especie endmica de Colombia.

Colombiano.




8.3 Dormideros: Se le acondicion un recipiente plstico transparente, con tierra negra, con hojarasca, y un recipiente con
agua.




9.2 Comportamiento Social: Se ha logrado satisfactoriamente la reproduccin en cautiverio de esta especie; se han mantenido
vivas por ms de dos aos con la implementacin de la dieta artificial inducida, ya que la mayora de las corales no se
alimentan voluntariamente en cautiverio. No son agresivas con individuos de la misma especie.


10. MANIPULACIN: La inmovilizacin de la serpiente se hace directamente con la mano, debido a su tamao, ya que las
pinzas herpetolgicas lastimaran la serpiente o expondran al investigador a una mordedura letal; para ello se toman medidas
preventivas y la manipulacin solo lo realiza una persona experta.


106 106






4.5 Descripcin: Dentro del gnero Micrurus es una especie que posee un patrn de coloracin diferente a otras
corales, posee colores aposemticos, anillos negros intercalados con anillos amarillos, su cabeza es pequea, sin
cuello diferenciado del resto del cuerpo, su cola tiene un adelgazamiento brusco.
4.6 Locomocin: Serpentino, la serpiente contrae sus msculos para generar una serie de movimientos ondulatorios,
este es la locomocin comn en todas las serpientes de coral.

5. MOFORMETRIA:


6. DISTRIBUCIN GEOGRFICA: Este ejemplar proviene de Villavicencio (Meta), de su distribucin geogrfica se
sabe muy poco. Es una especie endmica de Colombia.

Colombiano.

8.3 Dormideros: Se le acondicion un recipiente plstico transparente, con tierra negra, con hojarasca, y un recipiente
con agua.
8.4 Dieta: El Doctor Jairo Maldonado implement una dieta que incluye cecilias, bachias, serpientes pequeas y
alimentacin artificial inducida con una mezcla de harinas y carnes.


9.2 Comportamiento Social: Se ha logrado satisfactoriamente la reproduccin en cautiverio de esta especie; se han
mantenido vivas por ms de dos aos con la implementacin de una dieta artificial inducida, ya que la mayora de las
corales no se alimentan voluntariamente en cautiverio.

10. MANIPULACIN: La inmovilizacin de la serpiente se hace directamente con la mano, debido a su tamao, ya que
las pinzas herpetolgicas lastimaran la serpiente o expondran al investigador a una mordedura letal; para ello se
toman medidas preventivas y la manipulacin solo lo realiza una persona experta.


107 107
ANEXO B. UTILIZACIN DE ANIMALES DE LABORATORIO EN LA
EXPERIMENTACIN BIOLGICA

I. PROGRAMA GLOBAL PARA LA INFRAESTRUCTURA DE LA INVESTIGACIN BIOLOGICA
Y BIOMEDICA EN MANEJO DE ANIMALES DE LABORATORIO INSTITUTO DE
BIOTECNOLOGIA DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA, MAYO DE 2.000.
(Osorio, et al 2.000)

1. PRINCIPIOS TICOS EN EL MANEJO DE ANIMALES DE LABORATORIO

1.1.tica

Este tema compete a todos los individuos pero, con mayor razn a los involucrados en la
investigacin biolgica; desde el tcnico auxiliar que est a cargo del cuidado de los animales,
hasta el ms alto directivo de la institucin productora o usuaria de los mismos. La primera
condicin del investigador que trabaja con animales de laboratorio es el respeto por la vida,
por el dolor o el sufrimiento a que stos pueden ser sometidos en los trabajos bajo su
responsabilidad.

Siempre que se utilizan animales en investigacin habremos de considerar que un objetivo, tan
importante como el de obtener resultados experimentales, ser el de minimizar cualquier dolor o
angustia que stos puedan sufrir. El refinamiento de los procedimientos para conseguir que sean
ms humanos debe ser parte integrante de toda investigacin cientfica.

Esto es importante tanto desde el punto de vista de la preocupacin humanitaria como para cumplir
los requisitos de la legislacin sobre animales de investigacin.

2. TICOS INTERNACIONALES PARA INVESTIGACIN BIOMDICA CON ANIMALES -
CIOM (CONSEJO INTERNACIONAL DE ORGANIZACIONES MDICAS)

2.1 El avance del conocimiento, la proteccin de la salud y/o el bienestar de los hombres y los
animales requiere la experimentacin con animales vivos.

2.2. Siempre que sea apropiado usar mtodos alternativos.

2.3 Realizar experimentacin en animales despus de estudiar su importancia para la salud
humana y animal y para el avance del conocimiento biolgico.

2.4 Seleccionar animales de especie y calidad apropiadas y usar el mnimo nmero requerido
para obtener resultados cientficamente vlidos.
2.5 Tratar a los animales como seres sensibles y considerar imperativo tico el cuidado y uso
adecuado, evitando o minimizando las molestias, la angustia y el dolor.

2.5 Presumir siempre que los procedimientos dolorosos para el hombre tambin causarn dolor
en otras especies vertebradas.

2.6 Procedimientos que pueden causar dolor o angustia momentnea o mnima deben ser
realizados con sedacin, analgesia o anestesia. No realizar procedimientos quirrgicos o dolorosos
en animales no anestesiados o paralizados con agentes qumicos.

2.7 Cuando se requiere apartarse del principio anterior la decisin debe ser tomada por un
Comit Revisor convenientemente constituido. Estas excepciones no deben ser hechas solo para
demostracin o enseanza.
108 108
2.8 Al final de la experiencia, o en el momento apropiado, los animales que puedan sufrir dolor
crnico o severo, angustia, disconfort o invalidez, que no puedan ser aliviados, deben ser
sacrificados sin dolor.

2.9 Los animales mantenidos con fines biomdicos, deben tener las mejores condiciones de vida
posibles, de preferencia con supervisin de veterinarios con experiencia en ciencia de animales de
laboratorio.

2.10 El director del establecimiento es responsable por la calificacin de los investigadores y
dems personal, para realizar los trabajos requeridos, debiendo otorgar adecuadas oportunidades
de entrenamiento.

3. ALTERNATIVAS AL USO DE ANIMALES DE LABORATORIO

Desde que el concepto de Alternativas fue introducido recibi nombres variados segn quienes lo
emplearon. Algunos lo interpretan como un programa para eliminar totalmente al animal
experimental. El concepto ms generalizado en la actualidad parte de la publicacin de Russel y de
Burch que definieron Alternativas como: Cualquier tcnica que Reemplace el uso de animales, que
Reduzca su nmero en n trabajo particular o que Refine un mtodo existente para disminuir el
dolor o el malestar de los animales. Esto de conoce como el princio de las tres Rs (Reemplazo,
Reduccin y Refinamiento).

Como resultado de esta definicin existe una gran gama de tcnicas o abordajes (Biolgicos y no
Biolgicos) que pueden considerarse apropiados como Alternativas.

4. CARACTERSTICAS DE LOS ANIMALES DE LABORATORIO

4.1 Gentica y Reproduccin

Es esencial conocer las caractersticas genticas para seleccionar los animales, a fin de elegir los
portadores de caracteres consistentes con los objetivos experimentales. Debe considerarse las
diferencias conocidas entre especies, colonias o cepas que incluyen: expectativas de vida,
anatoma, tamao corporal, sistemas fisiolgicos y metablicos, caractersticas comportamentales,
susceptibilidad a xenobiticos, etc. Es muy importante conocer la historia gentica completa de los
animales antes de comenzar a trabajar.

Con relacin a tipos genticos los animales se clasifican en colonias exocriadas (outbred stocks),
cepas endocriadas, (inbreb strains), los hbridos, las colonias parcialmente endocriadas, etc. Las
colonias exocriadas son colonias mantenidas de manera que se evite el cruzamiento de familiares
cercanos. Las cepas endocriadas son las obtenidas a partir de una pareja nica, por continuo
cruzamiento entre hermanos o entre padres e hijos. Despus de veinte o ms generaciones con
este mtodo se obtiene un coeficiente de endocra del 98%. Este es el mnimo nivel aceptado
internacionalmente para que una cepa sea designada endocriada. Los hbridos son de dos tipos, el
F1 y el F2. El F1 resulta del cruzamiento de dos cepas endocriadas. Los F2 son los animales
resultantes del cruzamiento entre dos hbridos F1. Colonias parcialmente endocriadas son aquellas
que no han alcanzado por cruzamiento entre hermanos las veinte generaciones.

4.2 Ambiente

Existe abundante evidencia de que las condiciones ambientales en que se cran y experimentan
los animales influye decisivamente en las respuestas a los diferentes tratamientos. Si se requieren
respuestas estandarizadas, las condiciones en que se mantienen los animales deben ser fijas y
comparables en todos los laboratorios del mundo.
109 109
En general, los cambios en el ambiente externo son registrados por los receptores externos de los
animales que envan la informacin al sistema nervioso central el que, a su vez, informar al
sistema neuroendocrino para restaurar cualquier desbalance homeosttico. Esto producir
cambios en el modelo del animal y con ello cambios, reconocibles o no, en las respuestas
ocasionadas por el tratamiento experimental. Estas alteraciones pueden traducirse en una
modificacin del tipo de respuesta o en un aumento de la variabilidad de los resultados entre o
dentro de los laboratorios.

Los principales factores ambientales que afectan a los animales pueden clasificarse en:
4.2.1. Climticos (temperatura, humedad, ventilacin, etc.)

4.2.2. Fisicoqumicos (iluminacin; ruido; presencia de contaminantes, anestsicos y sanitizantes;
composicin del aire y cama, etc.)

4.2.3. Habitaciones (forma, tamao, tipo y poblacin de las jaulas, etc)

4.2.4 Nutricionales (dietas, agua y esquema de administracin).

4.2.5. Microorganismos y parsitos (con especial referencia a los patgenos de cada especie).

4.2.6. Situacin experimental.

5. ASPECTOS A CONSIDERAR EN EL MANEJOS DE ANIMALES DE LABORATORIO EN
PROYECTOS DE INVESTIGACIN

5.1 Recomendaciones para el tratamiento de los Animales

En la prctica el cuidado de los animales de laboratorio recae en varias personas, pero legalmente
y dependiendo de las leyes del pas donde se adelante el estudio, la responsabilidad final con
frecuencia recae en el Investigador principal que est realizando el procedimiento cientfico.

Las recomendaciones bsicas que debe tener en cuenta son:

Acoger los trminos de la legislacin pertinente.

Elegir la especie ms apropiada o la alternativa no animal, si existiere, que responda a las
necesidades del proyecto. Requiere conocimiento previo de la historia natural de dicha especie.
Debe tener en cuenta el estado de conservacin de la especie.

Utilizar el menor nmero posible de individuos (estudio piloto, buen diseo experimental y
uso de pruebas estadsticas apropiadas)

Discutir previamente con colegas el valor cientfico de la investigacin as como los
aspectos ticos de la misma durante todos los procedimientos.

Obtener animales de proveedores serios. En caso de tratarse de animales silvestres, su
captura debe hacerse minimizando el dolor y acogiendo la legislacin vigente.

5.2 Categorizacin de las Molestias

Categorizacin de las molestias o el malestar inducido durante la Fase de Experimentacin:

110 110
5.2.1 Molestias menores: Se consideran como molestias menores los siguientes procedimientos:

Toma de muestra de sangre
Examen rectal
Toma de muestra de flujo vaginal
Administracin forzada de sustancias inocuas
Experimentos terminales bajo anestesia
Vacunas sin coadyuvante
Toma de radiografas en animales no anestesiados

5.2.2 Molestias moderadas: se consideran como molestias moderadas la utilizacin de cualquiera
de los siguientes procedimientos:

Toma frecuente de muestras de sangre
Pruebas de pirgenos
Cateterizacin y canulacin
Uso de Yesos
Inmovilizacin
Cesrea
Recuperacin de anestesia general
Inmunizacin sin adyuvantes completos
Transplantes de piel

5.2.3 Molestias severas: se consideran como molestias severas la utilizacin de cualquiera de los
siguientes procedimientos:

Extraccin del fludo asctico
Sangra total sin anestesia previa
Induccin de defectos genticos
Deprivacin prolongada de comida, agua o sueo
Pruebas de dosis letal 50 y concentracin letal 50
Inmovilizacin con relajantes sin sedacin
Induccin de infecciones experimentales
Pruebas de carcinogenicidad con produccin de tumores
Induccin de convulsiones

6. Categorizacin de la Invasividad producida durante la experimentacin:

CATEGORA PROCEDIMIENTOS
A Experimentos realizados en invertebrados o clulas/ tejidos aislados
B Experimentos que causan nulo o mnimo estrs o malestar
C Experimentos que causan leve estrs o dolor de corta duracin.
D Experimentos que causan de moderado a severo estrs o malestar.
E Procedimientos que causan dolor severo o al lmite de tolerancia de animales conscientes.

111 111

II. FORMULARIO PARA LA EVALUACIN DE PROYECTOS QUE INVOLUCRAN ANIMALES
DE LABORATORIO

Formulario de evaluacin de proyectos de investigacin/docencia en lo referente a manejo de
animales de laboratorio

INSTITUCIN: LABORATORIOS PROBIOL S.A., UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA, TECMOL
FARMACUTICA.

PRIMERA PARTE

1. INVESTIGADOR PRINCIPAL (TITULAR DEL PROYECTO O ACTIVIDAD):
SINDY MONJE BELMONTE.

2. TTULO DEL PROYECTO O PROTOCOLO: DETERMINACIN DE LA
DOSIS LETAL MEDIA (DL
50
) DE CINCO ESPECIES DEL GENERO MICRURUS EN ESTADO DE
CAUTIVERIO EN NILO CUNDINAMARCA (COLOMBIA).

3. EQUIPO DE DOCENCIA O INVESTIGACIN (Personas que manipularn
los animales de este proyecto)

Nombre Institucin Investigador
Estudiante
Posg.
Estudiante de
Preg.
Cargo
SINDY MONJE
BELMONTE
CONVENIO
UNIAMAZONIA Y
PROBIOL

X

X
Investigador
principal

MARTA GMEZ
C.
LABORATORIOS
PROBIOL S.A.

X

Director
Proyecto de
Investigacin

3.1 EXPERIANCIA EN USO DE ANIMALES DEL GRUPO QUE TRABAJAR EL PROYECTO:

3.1.1 EXPERIENCIA PREVIA Si: __X__No: _____

3.1.2 RECIBIR ENTRENAMIENTO Si: __X__No: _____

4. ORGANISMO FINANCIADOR: LABORATORIOS PROBIOL S.A.

5 NATURALEZA DEL TRABAJO

Investigacin Trabajo de Grado Pregrado
X X X

5.1 SUPERVISADO POR:

5.1.1 NOMBRE: MARTA LUCIA GMEZ CABAL

5.1.2 CARGO: DIRECTORA PROYECTO, DIRECTORA DE INVESTIGACIN Y DESARROLLO,
LABORATORIOS PROBIOL S.A.

5.2.1 NOMBRE: FERNANDO IGNACIO ORTZ SUREZ

5.2.2 CARGO: JURADO CALIFICADOR, PROFESOR ASOCIADO, UNIVERSIDAD DE LA
AMAZONIA.
112 112
5.3.1 NOMBRE: GLORIA ELENA ESTRADA

5.3.2 CARGO: JURADO CALIFICADOR, PROFESORA ASOCIADA, UNIVERSIDAD DE LA
AMAZONIA.

6 DURACIN ESTIMADA DEL TIEMPO DE TRABAJO CON ANIMALES DE
LABORATORIO: UN MES.

7 ANIMALES REQUERIDOS:

Especie Cepa Edad Sexo Peso Cantidad Procedencia
Mus
Musculus
Exocriada 20 - 30
(das)
H* M* 17 19
(gramos)
Bioterio de la
Universidad
Nacional
Mus
Musculus
Exocriada 30 40
(das)
H* M*

20 22
(gramos)
Bioterio de la
Universidad
Nacional
H: Hembras M: Machos *Las pruebas de Dosis Letal Media y Dosis Efectiva Media se realizaron
con biomodelos de la especia Mus musculus sin diferenciacin de sexo.

8 PROCEDIMIENTO DE TIPO : TERMINAL:_X__ AGUDO:____ CRNICO:____

9 CATEGORA DE LAS MOLESTIAS*
Menores:_____ Moderadas:______ Severas:__X__

10 CATEGORIA DE INVASIVIDAD*

A:____ B:____ C:____ D:____ E:__X_

*Ver categorizacin correspondiente en ASPECTOS A CONSIDERAR EN EL MANEJOS DE
ANIMALES DE LABORATORIO EN PROYECTOS DE INVESTIGACIN

SEGUNDA PARTE

1. SINTESIS DE LOS OBJETIVOS DEL PROYECTO O DE LA PRCTICA:

1.1 OBJETIVO GENERAL

Determinar la dosis letal media (DL
50
) de cinco especies de la familia Elapidae, gnero Micrurus,
mantenidas en cautiverio en el Parque Recreacional y Zoolgico de Piscilago en el Municipio de
Nilo, Departamento de Cundinamarca (Colombia).

Evaluar la efectividad por medio de la (DE
50
) del Lote Piloto AC-005 de suero antiofdico
antielapdico producido por Laboratorios Probiol frente a los venenos de las cinco especies de
Micrurus sp.a evaluar:

1.Micrurus surinamensis surinamensis, Cuvier, 1.817
2.Micrurus dumerilii, Dumril, Bibron y Dumril, 1.854
3.Micrurus dumerilii, Cope, 1.860
4.Micrurus dumerilii, Griffin, 1.916
5.Micrurus medemi, Roze, 1.967

113 113
2. LA SIGUIENTE INFORMACIN SERA DE UTILIDAD PARA FACILITAR EL
DESARROLLO DE LAS TAREAS QUE UD HA PROPUESTO REALIZAR, POR ELLO LE
SOLICITAMOS DILIGENCIARLA EN SU TOTALIDAD Y DAR A CONTINUACIN LOS
DETALLES PERTINENTES:

Para la realizacin de las pruebas requiere inmovilizar a su animal?

Si:__X__ No:_____

Si su respuesta es afirmativa, que tipo de inmovilizacin har? Qu mtodo usar y que
duracin tendr?

La inmovilizacin que se le di a los Biomodelos de la especie Mus musculus, es manual para
proceder a inocular las diluciones de veneno Micrrico el Lote Piloto de Suero Antiofdico
Anticoral AC 005. La duracin de la inmovilizacin es de 1 minuto aproximadamente.

Realizar procedimientos invasivos?

Si:__X__ No:_____

Si su respuesta es afirmativa, de que tipo, frecuencia y duracin sern estos
procedimientos? Cules son los efectos clnicos esperados durante ellos? Igual si su
respuesta es negativa.

El procedimiento de invasin es la Inoculacin Va Intraperitoneal de Dosis Letal 50 de Veneno
Micrrico y Dosis Efectiva 50 del Lote Piloto AC -005 de Suero Antiofdico Anticoral; una vez
inoculados los Biomodelos se dejan en observacin por 24 48 horas post-inoculacin. Los
efectos clnicos esperados en la Dosis Letal Media es que muera el 50% de la poblacin inoculada
con Veneno Micrrico, utilizando la Metodologa de Laboratorios Probiol S.A de Colombia. Los
efectos clnicos esperados en la Dosis Efectiva Media es que sobreviva el 50% de la poblacin
inoculada con Veneno Micrrico neutralizado con el Suero Antiofdico AntiElapdico Lote Piloto AC
005 producido por Laboratorios Probiol S.A., utilizando la Metodologa del Instituto Clodomiro
Picado de Costa Rica.

El animal ser sometido a algn tipo de privacin?

Si:_____ No:__X___

Si esto es previsible, de que tipo, duracin, frecuencia y dems sern y que se espera
como efecto clnico?

Los biomodelos utilizados no tendrn ningn tipo de privacin en las condiciones ambientales
experimentales; los principales factores ambientales que puedan afectar a los animales sern
constantes, ya que los cambios en el ambiente experimental producirn cambios en el modelo
animal, lo que conlleva al aumento de la variabilidad de los resultados, de lo contrario las pruebas
se invalidan.

Le sern administrados al animal algn tipo de agentes qumicos o biolgicos?

Si:__X__ No:_____
En caso de que su respuesta sea positiva, qu tipo de agentes usar, qu dosis
suministrar, que vas y frecuencias emplear y que efectos clnicos espera?

114 114
A los Biomodelos les sern administrados un agente de tipo Biolgico; en la prueba de Dosis Letal
Media se inocula una dosis por nivel, cada nivel utiliza cinco ratones de Veneno Micrrico por Va
Intraperitoneal esperando que muera el 50% de la poblacin inoculada y en la Prueba de Dosis
Efectiva Media se inocula una dosis por nivel, cada nivel utiliza cinco ratones de Veneno Micrrico
neutralizado con Suero Antiofdico Anticoral (Medicamento de tipo Biolgico a base de
inmunoglobulinas equinas, producido por Laboratorios Probiol S.A. Las dosis son administradas
por Va Intraperitoneal, esperando que sobreviva el 50% de la poblacin inoculada. Ambas pruebas
se mantienen en observacin por 24 48 Horas post-inoculacin.

Para la realizacin del experimento o prctica recurrir al empleo de agentes anestsicos?

Si:__X__ No:_____

En caso de que su respuesta sea positiva, Qu tipo de agentes usar, qu dosis
suministrar, qu vas y frecuencia emplear y qu efectos clnicos espera?

Luego de realizar los registros pertinentes en cada una de las pruebas de potencia y
seroneutralizacin realizadas, los ratones que sobrevivieron se les aplic el mtodo de eutanasia
con Enflurano por Va Respiratoria (Anestesia general), los efectos clnicos esperados son la
muerte por hipoxia de los ratones sobrevivientes.

Describa a continuacin el tipo de manejo que requerir su animal o grupo de animales en
cuanto a dietas, antibiticos, cuidados especiales, etc.

Los Biomodelos fueron mantenidos en Cajas de acero inoxidable tipo Bioterio, en condiciones
ambientales constantes, controlando los principales factores ambientales durante toda la
experimentacin, Climticos (temperatura, humedad, ventilacin), Fisicoqumicos (iluminacin;
ruido, presencia de contaminantes, cama), Habitaciones (Jaulas de tipo Bioterio), Nutricionales
(dietas, agua y esquema de administracin).

Enumere el nombre o nombres de las personas que se encargarn de stos cuidados
especiales en los animales durante el desarrollo del proyecto o prctica:

1. Sindy Monje Belmonte.
2. Marta Gmez Cabal.
En caso de presentarse dolor durante los procedimientos, qu medidas se utilizarn para
aliviarlo?

El Veneno Micrrico utilizado induce efectos tpicamente neurotxicos, produciendo un bloqueo
postsinptico de los receptores colinrgicos de la placa motora. Este veneno se esparce
rpidamente por los tejidos y bloquea los receptores de acetilcolina en los msculos, observndose
a las 24 48 horas postinoculacin una parlisis muscular o la muerte. Los modelos que
sobreviven se les aplic el Mtodo de Eutanasia por Hipoxia.

Qu mtodo de eutanasia se llevar a cabo al final del procedimiento? Quin lo realizar?

Al final del procedimiento a los biomodelos sobrevivientes se les aplic el Mtodo de Eutanasia por
Hipoxia; finalmente todos los biomodelos se incineran.

115 115
TERCERA PARTE
ALTERNATIVAS

Existe algn mtodo alternativo o de reemplazo que no involucre el uso de animales en
trabajos como el que usted propone?

Si:_____ No:__X___

No, porque solo la Prueba Dosis Letal Media es aceptada por la Organizacin Mundial de la Salud,
y es la prueba empleada rutinariamente en laboratorios dedicados a la evaluacin de la toxicidad
aguda en diferentes pases; as como la Prueba de Dosis Efectiva Media en la evaluacin de la
potencia neutralizante de los sueros antiofdicos comerciales.

CUARTA PARTE

Riesgos para el personal o para la poblacin del Bioterio

_____Sin Riesgo _____Radiactivos
_____Qumicos _____Cancergenos
__X__Biolgicos: El personal manipulador de los biomodelos en el bioterio tiene riesgo
biolgico al auto inocularse con el veneno Micrrico empleado en las Pruebas de Dosis
Letal Media y Dosis Efectiva Media.
__X__Riesgo Potencial: La auto inoculacin del Biolgico en evaluacin puede acarrear la
muerte del personal manipulador de los Biomodelos, sino es tratado a tiempo con Suero
Antiofdico Anticoral Polivalente producido por Probiol S.A.

QUINTA PARTE

IDENTIFICACIN DE LAS PERSONAS QUE SE PUEDEN CONTACTAR EN CASO DE
EMERGENCIA:

Suministre los datos de una persona a quien se pueda recurrir en caso de algn imprevisto durante
el experimento o prctica y de un nombre alternativo con el mismo fin:

CLEMENCIA GMEZ CABAL, Mdica Cirujana, Gerente Laboratorios Probiol S.A.. Telfono:
(091) 671 1023, Celular: 310 777 0476.

MARTA GMEZ CABAL, Biloga, Directora de Investigacin y Desarrollo, Laboratorios Probiol
S.A. Telfono: (091) 677 3057, Celular: 310 777 0441.

CLAUDIA MARTNEZ, Biloga, Bacteriloga, Microbiloga, Directora de Aseguramiento y Calidad,
Laboratorios Probiol. Telfonos: (091) 671 1023, 2954832, Celular: 316 671 6632

PARA USO DEL COMIT INSITITUCIONAL DE CUIDADO Y USO DE ANIMALES DE
LABORATORIO

_________________________________________
Firma del Investigador Principal y Responsable

116 116

III. LEY No. 84 DE 1.989. POR EL CUAL SE ADOPTA EL ESTATUTO NACIONAL DE
PROTECCIN DE LOS ANIMALES

CAPTULO SEXTO
DEL USO DE ANIMALES VIVOS EN EXPERIMENTOS E INVESTIGACIN

ARTICULO 23: Los experimentos que se llevan a cabo con animales vivos, se realizarn
nicamente con autorizacin previa del Ministerio de Salud Pblica y slo cuando tales actos sean
imprescindibles para el estudio y avance de la ciencia, siempre est demostrado:

a) Que los resultados experimentales no puedan obtenerse por otros procedimientos o alternativas.

b) Que las experiencias son necesarias para el control, prevencin, el diagnstico o el tratamiento
de enfermedades que afectan al hombre o al animal.

c) Que los experimentos no puedan ser sustituidos por cultivo de tejidos, nodos computarizados,
dibujos, pelculas, fotografas, video u otros procedimientos anlogos.

ARTICULO 24: El animal usado en cualquier experimento deber ser puesto bajo los efectos de
anestesia lo suficientemente fuerte para evitar que sufra dolor.

Si sus heridas son de consideracin o implican mutilacin grave, sern sacrificados
inmediatamente al trmino del experimento.

ARTICULO 25: Se prohbe realizar experimentos con animales vivos, como medio de ilustracin de
conferencias en facultades de medicina, veterinaria, zootecnia, hospitales o laboratorios o en
cualquier otro sitio dedicado al aprendizaje, y con el propsito de obtener destreza manual.

Los experimentos de investigacin se llevarn a cabo nicamente en los laboratorios autorizados
previamente por las autoridades del Ministerios de Salud Pblica y el Decreto 16080 de 1.978 en lo
pertinente.

Tambin se prohbe el uso de animales vivos en los siguientes casos expresamente:

a) Cuando los resultados del experimento son conocidos con anterioridad.

b) Cuando el experimento no tiene un fin cientfico y especialmente cuando est orientado hacia
una actividad comercial.

c) Realizar experimentos con animales vivos de grado superior en la escala zoolgica la
indispensable, segn la naturaleza de la experiencia.

ARTICULO 26: Para todo experimento con animales vivos deber conformarse un comit de tica.

El Ministerio de Salud Pblica no autorizar la realizacin de experimentos con animales vivos sino
cuando est conformado el mismo, que est integrado por no menos de tres (3) miembros, uno de
los cuales deber ser veterinario del Instituto Colombiano Agropecuario, el segundo deber
pertenecer a la autoridad administradora de los recursos naturales; el tercero deber ser
representante de las sociedades protectoras de animales. Los miembros del comit de tica sern
designados por sus respectivas entidades a solicitud del experimentador. El gobierno nacional
reglamentar la forma de proveer las representaciones de las sociedades protectoras de animales
y su junta coordinadora nacional, que tendr tres miembros por un periodo de dos aos. Las
117 117
representaciones de las sociedades protectoras de animales en los comits de tica sern ad-
honorem. Todo comit de tica ser responsable de coordinar y supervisar:

a) Las actividades y procedimientos encaminados al cuidado de los animales.

b) Las condiciones fsicas para el cuidado y bienestar de los animales.

c) El entrenamiento y las capacidades del personal encargado del cuidado de los animales.

d) Los procedimientos para la prevencin del dolor innecesario incluyendo el uso de anestesia y
analgsicos.

e) el cumplimiento de los prescrito en los Artculos 24 y 25 de esta Ley.

El director de un experimento en el que se vayan a utilizar animales vivos, queda obligado a
comunicar al comit de tica, la naturaleza de los procedimientos que vayan a emplearse con los
animales, el nmero y tipo de los mismos, las alternativas al uso de animales y las fuentes y
naturaleza de los fondos de investigacin.

En el sitio en el cual un comit de tica tenga razones para creer que se est violando esta Ley o
que se violar, o que se est violando, ordenar lo siguiente, segn sea pertinente:

a) Suspensin del experimento.

b) Sacrificio del animal cuando se le haya causado enfermedad o lesin incurable.

PARAGRAFO: Son deberes de los comits de tica:

a) Reunirse trimestralmente.

b) Hacer inspecciones por lo menos cuatro (4) veces al ao a las reas de estudio de animales de
cada laboratorio y a los centros de experimentales, de las cuales rendirn un informe a las
autoridades competentes y a la entidad administradora de los recursos naturales.

c) Revisar durante las inspecciones a los centros experimentales o de estudio las condiciones de
manejo y el control del dolor en los animales, para establecer si se cumplen los requisitos
sealados en la presente Ley.

De todas las actuaciones el Comit de tica se rendir informe a las entidades empleadoras del
funcionario.

La violacin de lo dispuesto en cualquiera de los artculos del captulo quinto de esta Ley acarrear
al experimentador pena de multa de cincuenta mil ($50.000,oo) a quinientos mil ($500.000,oo)
pesos.

118 118
ANEXO C. CARACTERISTICAS GENERALES DE LOS BIOMODELOS

1. ESPECIE: Mus musculus

Nombre
Vulgar

Peso
Al Nacer
(g)
Edad al
Desmame
(das)
Peso al
Desmame
(g)
Edad a la
Pubertad
(das)
Peso
Adulto
(g)
Longevidad
promedio
(aos)
Productividad
Cras/Madre/Ao
Nmero
Cromosomas
(2n)
Ratn
Blanco
1 - 2 19 - 21 10 - 12 35 25 - 30 1 - 2 50 - 100 40

2. DATOS DE CRIA Y REPRODUCCIN *

Nombre
Vulgar

Edad
Reproductiva
Rango
Hembra-Macho

Ciclo
Sexual
Duracin
(das)

Receptividad
Sexual
Duracin

Gestacin
Media y Rango
(das)

Tamao
de la Camada

Periodo
Reproductivo
ptimo
Ratn
Blanco
6s 4 - 5 10 20 h
20
19 - 21
6 - 12 7 8 m
* h = Horas s = Semanas a = Aos d = Das m = Meses

3 PARAMETROS FISIOLGICOS Y NUTRICIONALES *

Nombre
Vulgar

Temperatura
Rectal
( C0.5)
Rata
Respiratoria
Mnima
(x y Rango)
Rata
Cardiaca
Mnima
(x y Rango)
Agua
Requerida
(Diaria)
(ml)
Orina
Excretada
(Diaria)
(ml)
Comida
Requrida
(Diaria)
(g)
Ratn
Blanco
37.5 138
90 - 180
470
300 - 650
3 - 7 1 - 3 3 6
*VALORES PROMEDIO Y RANGOS EXTRAIDOS DE LA LITERATURA PARA ANIMALES ADULTOS JOVENES

4 PRUEBAS DE SERONEUTRALIZACIN

4.1 PESOS DE LOS BIOMODELOS

Prueba de Potencia Peso*
50
) 17 19 g / ratn (Mus musculus)
Dosis Efectiva Media (DE
50
* El peso de los Biomodelos en gramos por ratn blanco.

119 119
ANEXO D. FORMATO PRUEBA DOSIS LETAL MEDIA

1. ENSAYO PRELIMINAR PRUEBA GRUESA

EXPERIMENTO No._____

1. DATOS ENSAYO EXPERIMENTAL PRELIMINAR:

1.1 Fecha:________________________1.2 Lugar:________________________

1.3 Lote Veneno: __________________1.4 Especie: _Micrurus_____________

1.5 Biomodelo: Mus msculus_______1.6 Cantidad Inoculada: ____0,5ml____

1.7 Elaborado por: Sindy Monje B.____1.8 No. Ratones Inoculados: ___30___

2. PRUEBA GRUESA DILUCIONES

Dilucin
l

24 Horas /5 /5 /5 /5 /5 /5
48 Horas /5 /5 /5 /5 /5 /5
*Los resultados se anotan en un nmero fraccionario, donde el numerador es el nmero de ratones
muertos y el denominador es el nmero de ratones inoculados por dilucin.

3. PESOS DE LOS BIOMODELOS

50

4. GRUPO CONTROL

4.1. No. Ratones inoculados

CONTROL POSITIVO
Solucion madre (1:1)
CONTROL NEGATIVO
Solucion salina0,9%
24 Horas 0/5 0/5
48 Horas 0/5 0/5
* Los resultados se anotan en un numero fraccionario donde , el numerador es el nmero de ratones muestros y el denominador es el numero
de ratones inoculados. Si el control positivo sobreviven uno o mas ratones la prueba se invalida. Si el control negativo se produce una o mas
ratones la prueba se invalida

120 120
2. ENSAYO FINAL DOSIS LETAL 50 (DL
50
)


1. DATOS ENSAYO EXPERIMENTAL FINAL

1.1 Fecha:________________________1.2 Lugar:________________________



1.7 Elaborado por: Sindy Monje B.____1.8 No. Ratones Inoculados: _________

1.9 Solucion Madre (1:1): ____________

2. PRUEBA FINAL (d) = 1,05

Dilucin
l

24 Horas /5 /5 /5 /5 /5 /5
48 Horas /5 /5 /5 /5 /5 /5
*Los resultados se anotan en un nmero fraccionario, donde el numerador es el nmero de ratones
muertos y el denominador es el nmero de ratones inoculados por dilucin.


50

4. GRUPO CONTROL

4.1. No. Ratones inoculados

CONTROL POSITIVO
Solucion madre (1:1)
CONTROL NEGATIVO
Solucion salina0,9%
24 Horas 0/5 0/5
48 Horas 0/5 0/5
* Los resultados se anotan en un numero fraccionario donde , el numerador es el nmero de ratones muestros y el denominador es el numero
de ratones inoculados. Si el control positivo sobreviven uno o mas ratones la prueba se invalida. Si el control negativo se produce una o mas
ratones la prueba se invalida

121 121
ANEXO E. FORMATO PRUEBA DOSIS EFECTIVA
(DE
50
)

PRUEBA DE POTENCIA


1. DATOS ENSAYO FINAL:

1.1 Fecha:________________________1.2 Lugar:________________________



1.7 Elaborado por: Sindy Monje B.____1.8 No. Ratones Inoculados: ___30___

1.9 Suero Antiofidico Anticoral Polivalente Lote piloto AC005

2. PROTOCOLO DE DOSIFICACION PARA LA DETERMINACION DE LA (DE
50
)

Experimento
No.
mL veneno
(1mg/ml)

mL Solucin
Salina
mL
Antiveneno
Relacin g
Veneno/1ml
Antiveneno

24 Horas

48 Horas
1 0.3 1.2 3.0 100 /5 /5
2 0.3 2.7 1.5 200 /5 /5
3 0.3 3.2 1.0 300 /5 /5
4 0.3 3.45 0.75 400 /5 /5
5 0.3 3.60 0.6 500 /5 /5
CONTROL
(+)
0.3 4.2 ---- Control /5 /5
*Los resultados se anotan en un nmero fraccionario, donde el numerador es el nmero de ratones vivos y el denominador es el nmero de
ratones inoculados por dilucin.


50

122 122

ANEXO F. MATERIALES

1. Recursos Biolgicos:

1.1. Agua de Cicloproceso

Agua destilada, grado inyectable, libre de pirgenos, empaquetada en ampollas de 10 mililitros,
utilizada para diluir el Suero Antiofdico.

1.2. Suero Antiofdico

Se utiliz el Lote Piloto AC 005 de Suero Antiofdico Antielapdico Polivalente Liofilizado
producido por Laboratorios Probiol S.A.

1.3. Solucin Salina Estril

Se utiliz Solucin Salina Estril al 0.9%, en la preparacin de las diferentes diluciones que se
inocularon en los biomodelos, debido a que es una solucin isotnica (es decir que tiene la misma
concentracin molecular que el plasma sanguneo, manteniendo la misma presin osmtica sin
alterar los resultados obtenidos en las diferentes pruebas realizadas), distribuidas en frascos de
500 ml.

1.4. Veneno Elapdico

Se utilizaron venenos de serpientes corales de las siguientes cinco especies* en estudio:

Micrurus surinamensis surinamensis, Cuvier, 1.817
Micrurus dumerilii, Dumril, Bibron y Dumril, 1.854
Micrurus dumerilii, Cope, 1.860
Micrurus dumerilii, Griffin, 1.916
Micrurus medemi, Roze, 1.967

* Lotes de veneno suministrados por el Doctor Jairo Maldonado, Bilogo del Serpentario del Parque Recreacional y Zoolgico de Piscilago en
Nilo (Cundinamarca).

2. Recursos no Biolgicos:

Balas con tapa MICOTAINER Brand Tubes. Lote: 4285895 (5). Exp. 2008.

Cinta de enmascarar tesa Belersdort S.A Colombia. Bajo Tecnologa de BDF.

Cmara Fotogrfica HP Photosmart M407, 4.1 MP, 18 zoom (3x optical, 6x digital).

Frascos nuevos para muestra de orina.

Incubadora 37 C E & Q EQUIPOS. Ref: IAA-9. Serial: 1027. WATT 100. V.A.C:
110. A.A Bogot, Col. 075954.

123 123
Incubadora EDEL STAHL Rost frei memert No. 854. Schwabach W. Germany. Typ. U10.
F Nr 880 994. V: 110. Hz: 50160. W: 1400. DIN 12880 K1.0. Nenntemp: 220
C. Schutzart DIN 40050 IP20.

Jeringas de 1ml RYMCO Estril para insulina U 100 276 x 12 x
0.4mm. REG. MINSALUD: COLOMBIA V 000438 R1. Lote: 2003472. VAL: DIC /
2.008.

Jeringas de 10 ml RYMCO Estril de 216 x 11/2 40 x 0.8 mm. REG. MINSALUD:
COLOMBIA V 0000438. Lote: 2003103. VAL: ABR / 2.008.

Micropipeta de 500 l BIOHT PRO y puntas amarillas.

Micropipeta de 100 l BRAND Transferpette y puntas azules.

Pipetas de 1 ml SUPERIOR W. GERMANY DIN. Tol. 0.01. 1ml: 0.01. Ex. 20 C.

Pipetas de 2 ml. 2
IN
1/10. CORNING USA Reusable No. 97085. TD. 20 C.

Pipetas de 5 ml. 5
IN
1/10. PIREX. USA Reusable No. 7065. TD. 20 C.

Pinzas de Material Quirrgico. Germany Sfainless.

Sofware SPEARMAN KARBER, Mtodo Estadstico No Paramtrico.

Viales limpios con tapn de caucho.

124 124

ANEXO G ANLISIS ESTADSTICOS PARA DETERMINAR LA DL
50
Y DE
50

Anlisis de regresin y anlisis Probit
Para el clculo de los DE
50
y DL
50
generalmente se usa el anlisis Probit. En un experimento tpico
de pruebas de toxicidad aguda se tiene la siguiente situacin:
Concentracin de la sustancia o dosis (d).
Nmero de individuos (n).
Nmero de organismos muertos o afectados (r).
Porcentaje de efecto (p).

La representacin grfica de p vs. d, o relacin dosis-respuesta, genera una curva parablica que
muchas veces presenta dificultades en la construccin de un modelo lineal. Una forma de abordar
este problema es transformando d a una escala logartmica (X = log10(d), lo cual mostrar una
relacin dosis-respuesta de forma S o sigmoidea normal,de esta manera la distribucin de p vs. X
ser de tipo normal.
Posteriormente, mediante las tablas de Probit se transforma p (porcentaje de efecto) a unidades
probit (buscando en una tabla de distribucin normal el valor de z correspondiente a una
probabilidad acumulada igual a p y sumndole a continuacin cinco unidades), se obtiene una
distribucin de puntos en un sistema bivariado de tipo lineal, los cuales se procesan segn un
anlisis de regresin tpico. Vale la pena enfatizar que el Probit es una transformacin sobre la tasa
de efecto (p), y la ecuacin generada es de la forma:

Donde:

125 125
Para facilitar los clculos, simplemente se puede usar un software como el Simfit Versin 5,6
edicin 7 El procedimiento Probit permite encontrar estimadores m-verosmiles de parmetros de
regresin y de tasas naturales (por ejemplo, tasas de mortalidad) de respuesta para ensayos
biolgicos cuantales, analizando porcentajes de efecto vs. dosis dentro del marco de la regresin.

Prueba Estadstica Spearman Karber : Aspecto Terico y Explicacin

El mtodo de Spearman-Krber es un mtodo aproximado, no paramtrico, que proporciona una
buena estimacin de la media y la desviacin estndar. Si la distribucin es simtrica, se obtiene
una estimacin de la concentracin total mediana (CL50/CE50/CI50).
Se utiliz la prueba de distribucin t student y el mtodo de Spearman Karber, aceptado por la
Organizacin Mundial de la Salud para determinar la validez de los experimentos realizados en la
determinacin de la dosis letal media de cinco especies del gnero Micrurus, tcnica estandarizada
por Laboratorios Probiol S.A.

Clculo de la dosis letal Media por el mtodo Spearman Karber

m = X
100
+/- d/n (r n / 2)
m = logaritmo DL
50

X
100
= logaritmo del nivel donde la dosis ms dbil de veneno causa el 100% de
mortalidad.
n = nmero de ratones utilizados en cada dilucin
r = nmero de ratones que mueren en cada dosis
d = valor constante (logaritmo de intervalo de clase)
= sumatoria de ratones muertos por nivel desde X
0
a X
100
incluyendo los
dos valores extremos (X
0
representa el logaritmo de la dosis ms alta
que no produce ninguna muerte).

Clculo de los lmites de confianza DL
50

El clculo de los lmites de confianza para la dosis letal media se utiliz la siguiente frmula:

V(m) = D
2
/ n
2
(n 1). [r (n r)]

Se tomaron valores aproximados de intervalos de confianza al 95%, los siguientes valores: m +/- t
0.05 V(m), t. 0.05, teniendo un valor apropiado para E (n 1) grados de libertad, donde los
grados de libertad se evalan como la suma de los niveles que provocan la muerte de los ratones
entre el 0 100%, estando estos dos valores extremos excluidos.

Do Sis Letal Media Accident e of I Dico

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DETERMINACIN DE LA DOSIS LETAL MEDIA (DL

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