UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA

MOLINA

FACULTAD DE INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

LABORATORIO 3 - MEDIDA DE LA EFICACIA DE LOS PRODUCTOS DE
DESINFECCIN

Curso: Gestin Ambiental en la Industria Alimentaria

Profesor: Ing. Silvia Melgarejo

Integrantes:
Gmez Castillo, Miguel Alejandro
Escalante Maldonado, Iris
Espinoza Benites, Samuel
Segura Saravia, Angelo


2012 - I
Laboratorio N3: MEDIDA DE LA EFICIENCIA DE LOS PRODUCTOS DE DESINFECCIN 2012 I
GESTIN AMBIENTAL Prof. S.MELGAREJO

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I. INTRODUCCIN

Una higienizacin eficaz comprende dos aspectos complementarios: limpieza y
desinfeccin, operaciones distintas, que se pueden realizar conjuntamente,
consecutivamente o bien independientemente.

La desinfeccin se define como la eliminacin de bacterias, virus y hongos, con
excepcin de las esporas bacterianas.

Uno de los medios para lograr la desinfeccin es a travs del empleo especfico de
desinfectantes, sin embargo no es el nico. Existen tres mtodos para realizar la
desinfeccin: la limpieza, el calor y el uso de compuestos qumicos.

Los desinfectantes deben su accin a los ingredientes activos que contienen.
Entre los principales se tienen: El fenol, cresol, aceite de pino, Alcohol isoproplico,
etc. Los ingredientes activos son complementados emulsificantes y otros
ingredientes inertes como el agua, colorantes, fijadores, etc.

Aunque la desinfeccin da lugar a la reduccin del nmero de microorganismos
vivos, generalmente no mata las esporas bacterianas. Un desinfectante eficaz
reduce el nmero de microorganismos a un nivel que no perjudica la salud. Ningn
procedimiento de desinfeccin puede dar resultados plenamente satisfactorios, a
menos que a su aplicacin le preceda una limpieza completa.

El objetivo de la presente experiencia fue medir la eficacia de los productos de
desinfeccin a travs de una tcnica de test en uso.





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II. REVISION DE LITERATURA

2.1 Desinfeccin

Una gran variedad de agentes desinfectantes se utilizan para destruir a los
microorganismos y difieren grandemente en sus propiedades txicas. La
mayora de los desinfectantes se pueden dividir convenientemente entre
varias categoras, muchas de las cuales estn representadas en otras clases
de pesticidas. (Puig Duran, 2002)

2.2 Caractersticas de un desinfectante ideal

Segn Wildbrett (2000)
Debe ser soluble en agua.
Amplio espectro de actividad.
Estable: tiempo prolongado de vida til.
No debe reaccionar con materia orgnica ni inactivarse en presencia de
ella.
Escasa o nula toxicidad para el ser humano.
Accin rpida.
Capacidad de penetracin.
Accin residual.
Compatible con todos los materiales.
Disponibilidad y buena relacin costo-riesgo-beneficio.
No debe afectar al medio ambiente.







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Segn SOFA ALONSO, ANA. 2004, se encontr los siguientes cuadros:




































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III. MATERIALES Y METODOS

3.1 Materiales

Desinfectantes de cloro al 4.9% y dixido de cloro al 5%.
Estufa
Medios de cultivo: caldo nutritivo y Agar PlateCount.
Beakers 1000 ml
Pipeta 5 ml
Materiales de vidrio
Paos de limpieza
Mica de 15 x 15 cm.



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3.2 Metodologa

Para Superficie Limpia
1. Se limpi de superficie a tratar con detergente durante 30 minutos.
2. Se coloc una plantilla en la superficie limpia.
3. Luego se realiz el hisopado, a continuacin se colocaron los hisopos
en los tubos de prueba.
4. Llevar al Agar PlateCount
5. Incubacin a 37C x 48horas
6. Recuento

Para Superficie con desinfectante
1. Preparar la solucin del desinfectante
2. Aplicar la solucin de desinfectante
3. Esperar 10 min.
4. Hisopado
5. Hisopos a tubos de prueba
6. Llevar al Agar Plate Count
7. Incubacin a 37C x 48 horas
8. Recuento








Fig.1: Desinfectante Clrox Fig.2: Plantilla
Fig.3: Hisopado
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IV. RESULTADOS y DISCUSIN.-

Cuadro 1.- Resultados antes de la desinfeccin: Superficie limpiada con agua y
detergente (mesa 1).
DILUCION OBSERVACIONES
REPETICION 1
10
-1
Contaminado
10
-2
5 colonias
10
-3
3 colonias
REPETICION 2
10
-1
2 colonias, con fondo turbio
10
-2
3 colonias
10
-3
2 colonias
Fig.4: Desinfectado
de la superficie
limpiada con
detergente.
Fig.5: Hisopos en tubos Fig.6: Homogenizado
en el vortex

Fig.7: Placas con Agar Plate Count
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Cuadro 2.- Resultados luego de le desinfeccin con Dixido de cloro 5%:
Superficie limpiada con agua, detergente y desinfectante (mesa 1).
DILUCION OBSERVACIONES
REPETICION
1
10-1 2 colonias
10-2 Contaminado
10-3 1 colonia
REPETICION
2
10-1 2 colonias
10-2 1 colonia
10-3 1 colonia


Cuadro 3.- Resultados antes de la desinfeccin: Superficies limpiadas solo con
agua y detergente de la mesa 2
DILUCION OBSERVACIONES
REPETICION
1
10-1 2 levaduras
10-2 2 levaduras
10-3 2 levaduras
REPETICION
2
10-1 1 levadura
10-2 3 levaduras
10-3 2 levaduras

Cuadro 4.- Resultados luego de la desinfeccin con Cloro 1%: Superficie limpiada
con agua, detergente y desinfectante (mesa 2).
DILUCION OBSERVACIONES
REPETICION
1
10-1 1 colonia en forma de cola
10-2 2 levaduras
10-3 0 levaduras
REPETICION
2
10-1 1 colonia en forma de cola
10-2 3 levaduras
10-3 0 levaduras
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Cabe recalcar que, antes de comprobar la eficacia de los desinfectantes (dixido
ce cloro 5% y cloro1%) utilizados, se limpi el rea de trabajo con una solucin
detergente, debido a que Wildbrett (2000) seala que la limpieza de las superficies
de contacto es la premisa necesaria para hacer lo ms eficaz posible una
desinfeccin subsiguiente, o sea, poder llevar a cabo esta ltima sin la
perturbacin que ocasionan restos de suciedad.

As mismo, ambos desinfectantes fueron diluidos en agua, ya que autor citado
anteriormente indica que en ocasiones es necesario acondicionar las
caractersticas del agua a las exigencias de una desinfeccin por ello difieren los
objetivos de la preparacin el agua que deben adaptarse a cada circunstancia,
adems en la dilucin de los desinfectantes se utiliz agua dura proveniente de la
caera de los laboratorios de microbiologa, por lo que existe la posibilidad de que
esta dureza haya influenciado en el poder desinfectante de la solucin aplicada,
obtenindose recuentos de UFC tras la desinfeccin.

Segn Pumarola (1995) la prctica realizada intenta la comprobacin de la eficacia
del desinfectante en las condiciones reales de uso. Comprueba la observacin o
no del crecimiento de colonias tras la siembra en placas de agar de una dilucin
de 1/10 del producto en cuestin, siendo esto lo realizado en la prctica para
determinar la eficacia del desinfectantes; por otra parte el autor hace mencin que
las bacterias ms utilizadas para los diferentes mtodos de valoracin de
desinfectantes son S. aureus, E. coli, P. vulgaris, P. aeruginosa, S. faecalis, etc.,
siendo probable que estos microorganismos se hayan encontrado en las colonias
que desarrollaron en las placas. Por otro lado, La sensibilidad mayor o menor de
las distintas bacterias a los compuestos qumicos vara segn el mecanismo de
accin de stos. La pared celular, ms compleja, de los gram negativos explicara
su mayor resistencia a los desinfectantes (Pumarola, 1995), por lo que se podra
afirmar que con los desinfectantes trabajados no se pudo eliminar por completo las
bacteria gram negativas, observndose eso en el recuento. Cabe indicar que el
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autor citado anteriormente seala que si el nmero de microorganismos en la
superficie es grande, se necesita ms cantidad de desinfectante o ms tiempo de
exposicin para conseguir un determinado nivel de desinfeccin, es por esta razn
que antes de la aplicacin del desinfectante se realiz la limpieza de la superficie
con una solucin, reducindose de sta manera cierta carga microbiana, adems
de la materia orgnica que protege a los microorganismos e inactiva al
desinfectante.

Cabe agregar que Pidrola (2000) afirma que, en general, a mayor concentracin,
mayor cantidad de molculas activas de producto y mayor capacidad de
destruccin de microorganismos, difiriendo lo anteriormente citado con lo realizado
en la prctica, debido a que no se realiz una desinfeccin con alta concentracin
de desinfectante, siendo esto probablemente el causante del desarrollo de
microorganismos luego de la desinfeccin, incluso el tiempo de exposicin al
desinfectante, que fue de 10 minutos, pudo haber tenido influencia en el resultado
obtenido, debido a que Pidrola (2000) indica que se puede incrementar la
concentracin y reducir el tiempo de contacto o del mismo modo se puede
aumentar el tiempo de exposicin y disminuir la concentracin.

Siempre y cuando teniendo en cuenta la toxicidad del producto, ms an la
superficie de accin es un factor importante para la accin del desinfectante,
puesto que Pidrola (2000) indica que las asperezas y los poros reducen la
posibilidad de contacto con los microorganismos y disminuyen la eficacia del
desinfectante con lo que favorece la formacin de colonias de algunos
microorganismos, siendo esta razn una posibilidad ms veraz dado que en la
prctica, se trabajo en una superficie que presentaba rayones y raspones
influyendo esto en los resultados obtenidos, de igual forma Pidrola (2000) alude
que de 10 a 20C prcticamente se duplica el efecto del producto, es por ellos que
se trabaj con el desinfectante a temperatura ambiente, de este modo la
temperatura no afecto a la eficacia del producto.

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Acto seguido, cabe resaltar que en la prctica, las soluciones desinfectantes se
aplicaron de manera suave sin ninguna presin, lo cual aplica a lo sealado por
Wildbrett (2000), en el tratamiento de superficies limpias puede renunciarse en
general a fuertes acciones mecnicas de la solucin desinfectante en forma de
presin, velocidad de flujo y turbulencia.

A partir de los cuadros 2 y 4 se puede afirmar que el desinfectante con base de
cloro es ms eficiente que el dixido de cloro, puesto que la superficie evaluada
con cloro present un recuento menor que la evaluada con dixido.

Wildbrett (2000) seala que la eficacia de los desinfectantes se puede ver alterada
por varios factores. Entre stos se incluyen las sustancias interferentes (materia
orgnica, dureza del agua), el tipo y grado de contaminacin microbiana, la
concentracin y pH de la solucin desinfectante, el tiempo de exposicin, el diseo
y composicin del objeto a desinfectar y la temperatura a la que se realiza el
proceso de desinfeccin, sien embargo en la prctica no se evaluaron estos
factores, mas solo la eficacia basndose en el recuento de colonias en dos
momentos: antes y despus de la desinfeccin. Hubiese sido ms completo el
anlisis de eficacia, si estos factores se hubiesen tomado en cuenta, tambin al no
contar con fichas tcnicas de las soluciones desinfectantes, no se tuvo informacin
sobre el tiempo de aplicacin, la concentracin adecuada para distintos casos, la
temperatura efectiva de trabajo, entre otros.








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V. CONCLUSIONES

El desinfectante mas eficiente es el de cloro al 4.9%, respecto al dixido de cloro
al 5%.

Los desinfectantes deben utilizarse teniendo en cuenta el o los microorganismos
que se desea(n) eliminar, el material de las superficies aplicadas, el tipo de agua
que se dispone y el mtodo de limpieza empleado.

La suciedad, tiempo de desinfeccin, concentracin de las soluciones
desinfectantes, temperatura de los desinfectantes, estabilidad y tiempo de
desinfeccin son factores que afectan la eficacia de los desinfectantes.

El conocimiento del grado de desinfeccin de un desinfectante y de su
concentracin efectiva es esencial.

VI. BIBLIOGRAFIA

PIDROLA, G. 2000.Medicina preventiva y salud pblica. Masson S.A.
Espaa.

PUMAROLA, A. Microbiologa y parasitologa mdica. Elsevier. Espaa.

PUIG-DURAN, F. 2002. Ingeniera, Autocontrol y Auditoria de la Higiene en la
Industria Alimentaria. Ediciones Mundi-Prensa. Madrid- Espaa

SOFA, A. Uso de Desinfectantes, Cap. 7. Junio 2004-Primera Edicin.
Disponible en:
http://www.saludcapital.gov.co/sitios/VigilanciaSaludPublica/Todo%20IIH/007
%20Desinfectantes.pdf. Visitado el 23 de junio del 2012.
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WILDBRETT, G. 2000. Limpieza y Desinfeccin en la Industria Alimentaria.
Editorial Acribia, Zaragoza. Espaa.


VII. ANEXO

A continuacin se muestra en la Figura 8 el mtodo de dilucin y siembra utilizado.












Los volmenes de desinfectante a diluir se calcularon con la siguiente ecuacin,

Dnde:
- Xml = mililitros de desinfectante a diluir.
- V
f
= volumen de solucin desinfectante que se quiere preparar,
en este caso es de 0.5 L.
- [desinfectante] = concentracin del desinfectante a utilizar,
expresado en porcentaje

Fig.8: Dilucin y siembra en las placas Petri desde los tubos inoculados.
PC PC PC
0.1ml 0.1ml

0.1ml
10ml 9ml 9ml
1ml
1ml
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Seguido se muestran los clculos para la obtencin del volumen de desinfectante
que se va diluir para la obtencin de la solucin desinfectante.


Dixido de cloro 5%:








Cloro 4.9%:








Finalmente, en la siguiente pgina, se presentan las placas petri luego de la
incubacin a 37C durante 48 horas de desinfeccin con cloro al 4.9% , tanto
primera como segunda repeticin, en las figuras 9 y 10 respectivamente










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Fig.9: Mesa 2 desinfeccin con Clrox al 4.9% (1
era
repeticin)
Fig.10: Mesa 2 desinfeccin con Clrox al 4.9% (2
da
repeticin)