I.

INTRODUCCION

El agua localizada en las zonas saturadas debajo de la superficie del suelo es
conocida como agua subterrnea y ha jugado un papel de suma importancia
desde hace mucho tiempo como sostn del crecimiento poblacional y las
actividades econmicas de la humanidad.
En la actualidad el uso indiscriminado de este recurso acufero ha causado una
degradacin del mismo, debido a la carencia de un conocimiento claro de las
distintas variables geolgicas, fsicas y qumicas. Segn Brooks (2003) el agua
subterrnea es generalmente de mayor calidad que el agua superficial.
Normalmente los usuarios de las fuentes de agua subterrnea ignoran aquellos
contaminantes que pudiesen existir dentro de una zona de recarga o pozo
determinado.

El agua es el solvente universal. Esta misma caracterstica la hace un canal de
transporte y contencin para un gran nmero de enfermedades como las
enfermedades diarreicas la producida por la bacteria Escherichia coli. Adems, a
travs del proceso de infiltracin, ciertos qumicos naturales y artificiales pueden
contaminar severamente las fuentes de agua poniendo en riesgo la salud de las
urbanizaciones que de ella se abastecen.

El presente trabajo busca contribuir al conocimiento sobre el estado de las fuentes
subterrneas de agua en la urbanizacin Nstor Cceres Velsquez. Ya que esta
urbanizacin no cuentan con un sistema de agua potable

El estudio se enfoca en el anlisis de la calidad de agua en parmetros fsicos,
qumicos y bacteriolgicos en tres pozos artesianos y un pozo tubular para
identificar posibles fuentes de contaminacin, as como las zonas de riesgo
alrededor de los pozos del rea bajo estudio. Se espera que la informacin
presentada cree un camino a seguir para futuros estudios de calidad de agua
subterrnea en la zona y que el conocimiento generado pueda ser utilizado por las
autoridades de salud y aquellas personas que se ven directa e indirectamente
afectadas por las condiciones del agua en los pozos.

II. EL PROBLEMA

2.1 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
La urbanizacin Nstor Cceres Velsquez no cuentan con un sistema de
agua potable es por esta razn que se abastecen de agua subterrnea
(pozos artesianos y un pozo tubular) es por ello que nace la NECESIDAD
DE REALIZAR UN ANALISIS DE LA CALIDAD DEL AGUA
SUBTERRANEA en dicha urbanizacin. Para saber de esta manera si el
agua es apta para el consumo humano.

2.2 AREA DEL ESTUDIO
El estudio abarca tres pozos artesianos con profundidades de: 2m, 3m y
2m. Un pozo tubular con una profundidad de 30m, ubicados en la
urbanizacin Nstor Cceres Velsquez Juliaca, provincia de San Romn,
Regin de Puno. La recoleccin de muestras se llev cabo el diecisis de
julio del dos mil trece, la actualizacin de datos y los anlisis de laboratorio
se llevaron a cabo en el mes julio 2013.

Figura N 1: en esta imagen se observa la urbanizacin Nstor Cceres
Velsquez Juliaca y los cuatro puntos de muestreo en distintas manzanas
de la urbanizacin.


Figura N 2: en la imagen se observa el punto nmero cuatro de muestreo,
ubicado en el jirn 1 de mayo en la manzana A-5 lote 1 propietaria Seora
Flora Rosello Zuluaga


III. OBJETIVOS

3.1 Objetivo general
Realizar un anlisis detallado de los pozos artesianos y un pozo tubular
en la Urbanizacin NCV que considere aspectos de calidad de agua
(Parmetros fsicos, qumicos y bacteriolgicos) y ubicacin geogrfica,
con el fin de generar una base de conocimientos actualizados sobre el
estado actual del agua subterrnea en dicha urbanizacin.

3.2 Objetivos especficos
a) Identificar la presencia de indicadores de contaminacin fecal en los
pozos para evaluar el riesgo de presencia de patgenos.
b) Identificar las posibles fuentes de contaminacin para el agua
subterrnea de los pozos artesianos y tubulares.













IV. MARCO TEORICO

4.1 DINMICA DEL AGUA SUBTERRNEA
Una porcin del agua que cae en el suelo a travs de la precipitacin se
infiltra y luego se percola. Estos procesos llevan a la saturacin del suelo
cuando en este existe la estructura necesaria para almacenar agua. As,
este proceso provee el agua subterrnea de recarga que alimentara a
ciertas estructuras de naturaleza geolgica que contienen agua, conocidas
como acuferos. La superficie superior de la zona saturada es llamada
capa fretica o nivel fretico (USGS, 2009). Por otro lado se define el agua
subterrnea como el agua almacenada en el subsuelo en grietas de roca y
en los poros de materiales geolgicos que conforman la corteza de la
Tierra.
En el suelo suceden un gran nmero de procesos que permiten muchos de
los ciclos importantes para el funcionamiento de los ecosistemas, entre
estos se encuentran la infiltracin, que es la capacidad de un material para
permitir el paso de un lquido, como el agua a travs de las rocas (USGS,
2009). Esta capacidad se ve afectada por el tipo de suelo presente en una
zona especfica, por ejemplo la arcilla ralentizar el paso del agua,
mientras la arena facilitar que el agua se mueva a travs del suelo.
Otro proceso importante es el movimiento que tiene el agua por las
distintas aberturas que se presentan en el suelo o algunas rocas, este
proceso se conoce como percolacin. Se asume que la percolacin tiene
lugar si el contenido de humedad del suelo del horizonte superior excede
su capacidad de campo. La tasa de percolacin de la capa superior del
suelo se considera que incrementa como una funcin del contenido del
agua en el suelo de acuerdo a una ley de poder determinada (Clapp &
Hornberger, 1978, citado por Zhiyu et al. 2005).
Un pozo es una perforacin o excavacin que se realiza en el suelo y cuyo
objetivo es la extraccin de agua del nivel fretico. Existen varios tipos de
pozos siendo los ms comunes los escavados o hechos a mano, estos son
normalmente poco profundos y ms baratos a diferencia de los perforados
que son hechos por maquinaria y profesionales especializados (Brooks,
2003).
Otro factor significativo a la hora de evaluar un acufero ser el de la calidad
de agua que es capaz de suministrar y en ese sentido los acuferos
artesianos poseen en general una mejor proteccin natural y la ventaja de
que al ascender naturalmente el agua, bajan los costos de instalacin y de
energa necesarios para su extraccin

4.2. CALIDAD DE AGUA
El agua potable es aquella que cumple con un conjunto de normas
establecidas por instituciones nacionales e internacionales y que se
considera no ocasiona daos a la salud del consumidor. Segn la OPS-
OMS El consumo de agua de mala calidad impacta directamente en
enfermedades diarreicas. El ltimo informe de la Organizacin Mundial de
la salud, destaca que este problema ya no es solo de los pases en vas de
desarrollo y que la calidad de los servicios de agua potable no es en su
mayora adecuada para el mantenimiento de la seguridad sanitaria de los
usuarios. Ms del 90 % del abastecimiento de agua potable es
intermitente, solamente el 44 % dispone de cloracin efectiva y no se
dispone de adecuados sistemas de control y vigilancia de la calidad del
agua. La calidad de agua se define como un concepto complejo que
implica un juicio subjetivo que es funcin del uso y que adems incluye una
relacin de parmetros fsicos, qumicos y biolgicos que define su
composicin, grado de alteracin, y la utilidad del cuerpo hdrico
(SEMAREAN, 2001). Para conocer la calidad se evalan un gran nmero
de parmetros que permiten analizar la condicin en que se encuentra una
fuente de agua en particular, en este estudio se incluyeron los ms
importantes entre ellos el pH, este parmetro es una medida de la acidez o
basicidad de una sustancia (EPA, 2007). El pH posee un mbito de 0 a 14
donde 7 es el valor considerado como neutral. Cuando el valor del pH es
menor de 7 es cido, mientras que si el mismo valor esta sobre este pH es
bsico. El valor recomendado del pH en el agua por la Secretara de Salud
de Honduras (1995) es 6.5 a 8.5. Otro parmetro analizado es la
conductividad. Segn la EPA (2006) la conductividad se define como la
medida de la habilidad del agua de conducir una corriente elctrica, varios
factores influyen en los datos finales cuando se mide este parmetro, por
ejemplo, los compuestos orgnicos tendrn poco efecto, mientras que los
aniones de fosfatos y el nitrato (compuestos inorgnicos) tendrn un efecto
fuerte sobre el resultado. Adems de lo anterior, una descarga de fosfatos
o nitratos, al igual que alguna falla en un pozo sptico pueden aumentar la
conductividad del agua subterrnea. Para la conductividad el valor
recomendado por la Secretara de Salud de Honduras (1995) es 400 s
cm-1. Pasa evaluar la calidad de agua se debe tomar en cuenta la turbidez,
la misma es una caracterstica fsica que causa la interrupcin de la luz por
las partculas presentes, normalmente materia suspendida o impurezas
que interfieren con la claridad del agua (EPA, 1999). Las aguas negras y la
escorrenta son conocidas como fuentes tpicas de turbidez.
El anlisis de nutrientes juega un papel muy importante en la calidad de
agua, especialmente los nitratos y nitritos. Existen diversas fuentes de
nitratos, incluyendo la fijacin por plantas y bacterias, las aguas residuales
y la incorporacin de materia orgnica al suelo para fines de fertilizacin,
siendo los residuos de esta ltima actividad transportados normalmente por
la escorrenta a las aguas cercanas. De acuerdo con Brooks et al. (2003)
las fuentes de nitrgeno incluyen la fijacin de gas por ciertas bacterias y
plantas, adems de la incorporacin de materia orgnica a fuentes de agua
y pequeas cantidades que provienen del desgaste de las rocas. El
nitrgeno orgnico se convierte en amonio, el cual eventualmente se oxida
convirtindose en NO3-N, una forma disponible para las plantas. En
ausencia de oxgeno, el proceso de desnitrificacin puede volver a
convertir el nitrato en amonio y gas de nitrgeno. As como con los nitratos
y nitritos conocer sobre posibles concentraciones de fsforo en el agua es
esencial. El fsforo es un compuesto necesario para el desarrollo de la
agricultura tal y como se conoce en la actualidad. Este elemento es
utilizado principalmente en los fertilizantes agrcolas y tambin se
encuentra de forma natural en los ecosistemas y otras veces como
contaminante (ESA, 1998).
La urbanizacin y la agricultura son fuentes importantes de fsforo para los
acuferos. Segn la ESA (1998) entre los aos de 1950 y 1995, cerca de
600 millones de toneladas de fertilizantes compuestos por fsforo fueron
aplicados sobre la superficie de toda la tierra, esto principalmente sobre
tierras cultivadas. El fsforo se est acumulando en los suelos agrcolas
del mundo. La EPA recomienda un valor mximo permisible de 1 mg L-1
para las concentraciones de fsforo.
El nitrgeno amoniacal es tambin una sustancia qumica que aunque no
afecta de forma directa la salud de las personas, puede comprometer la
eficacia del cloro para desinfectar en el agua. Segn la OMS (2007)
cuando el amonaco est presente en el agua significa que la misma est
contaminada con aguas residuales o desechos de zonas ganaderas. El
amoniaco puede presentarse naturalmente en el agua subterrnea con
sedimentos orgnicos, o en cuerpos de agua superficiales lentos o
estancados que contienen materia orgnica y son mal ventilados. De
acuerdo a Ersoy et al. (2006) las sales de amonaco, los nitratos y
ortofosfatos se originan en zonas agrcolas y residenciales cultivadas. En el
caso del amonio se recomienda que tenga un valor de 0.05 mg L-1 y se
establece como valor mximo admisible 0.5 mg L-1 (Secretara de Salud
de Honduras, 1995).
As tambin las bacterias representan la causa de varias enfermedades
gastrointestinales en los seres humanos. La OPS (1988) menciona que
diversas enfermedades causadas por estos microorganismos son
transmitidas dentro de los miembros de una misma especie, sin embargo
existen bacterias que pueden pasar esta frontera biolgica, por ejemplo a
travs de las heces de los animales. Entre estas bacterias una de las ms
conocidas es Escherichia coli. Esta particularidad le brinda una alta
movilidad, impactando la salud de los seres humanos expuestos al agua
contaminada con estircol.
De acuerdo MINAM lmites mximos permisibles (2008) el abastecimiento
con agua coliformes termo tolerantes 10000 NMP/100ml. Las aguas
subterrneas que no se encuentran conectadas a un sistema de
distribucin se encuentran por ley dentro de esta categora.

4.2. CONTAMINACIN DE AGUA SUBTERRNEA
Generalmente los contaminantes ms importantes de fuentes subterrneas
son materia orgnica, componentes orgnicos sintticos (por ejemplo, PCB
y pesticidas como DDT), microbios, nutrientes (principalmente nitrgeno y
fsforo), grasas, hojarasca y (usualmente a una menor extensin) metales
pesados (cadmio, mercurio y plomo). De acuerdo a Newman et al. (1994)
los contaminantes se pueden introducir al sistema a travs de diferentes
fuentes de contaminacin, clasificadas en puntuales y difusas. Segn
Baptista (2002) una vez que los distintos contaminantes llegan al ambiente,
estos se mueven de acuerdo a varios factores naturales y tecnolgicos
interrelacionados. Este movimiento puede ser rpido o lento, los caminos
pueden ser directos o muy complejos.
Segn la OMS (2007) la irrigacin y el drenaje pueden llegar a desempear
un papel muy importante en el transporte de contaminantes de su fuente al
abastecimiento de agua. Estos tambin pueden afectar la calidad del agua
subterrnea, ya que alteran el agua y el balance de sal en el suelo, el cual
puede cambiar sus caractersticas fsico-qumicas y afectar la lixiviacin de
productos qumicos. Es realmente importante conocer la dinmica del agua
subterrnea, ya que existen poblaciones a nivel nacional que se suplen de
dichas fuentes.

4.3. MARCO CONCEPTUAL

4.3.1. MUESTREO
La recoleccin de las muestras depende de los procedimientos
analticos empleados y los objetivos del estudio.
El objetivo del muestreo es obtener una parte representativa del
material bajo estudio (cuerpo de agua, efluente industrial, agua
residual, etc.) para la cual se analizaran las variables fisicoqumicas de
inters. El volumen del material captado se transporta hasta el lugar de
almacenamiento (cuarto fro, refrigerador, nevera, etc.), para luego ser
transferido al laboratorio para el respectivo anlisis, momento en el
cual la muestra debe conservar las caractersticas del material original.
Para lograr el objetivo se requiere que la muestra conserve las
concentraciones relativas de todos los componentes presentes en el
material original y que no hayan ocurrido cambios significativos en su
composicin antes del anlisis. En algunos casos, el objetivo del
muestreo es demostrar que se cumplen las normas especificadas por
la legislacin (resoluciones de las autoridades ambientales). Las
muestras ingresan al laboratorio para determinaciones especficas, sin
embargo, la responsabilidad de las condiciones y validez de las
mismas debe ser asumida por las personas responsables del
muestreo, de la conservacin y el transporte de las muestras. Las
tcnicas de recoleccin y preservacin de las muestras tienen una
gran importancia, debido a la necesidad de verificar la precisin,
exactitud y representatividad de los datos que resulten de los anlisis.
4.3.2. TIPOS DE MUESTRAS
a) Muestra simple o puntual: Una muestra representa la
composicin del cuerpo de agua original para el lugar, tiempo y
circunstancias particulares en las que se realiz su captacin.
Cuando la composicin de una fuente es relativamente
constante a travs de un tiempo prolongado o a lo largo de
distancias sustanciales en todas las direcciones, puede decirse
que la muestra representa un intervalo de tiempo o un volumen
ms extensos. En tales circunstancias, un cuerpo de agua
puede estar adecuadamente representado por muestras
simples, como en el caso de algunas aguas de suministro,
aguas superficiales, pocas veces, efluentes residuales.
Cuando se sabe que un cuerpo de agua vara con el tiempo, las
muestras simples tomadas a intervalos de tiempo precisados, y
analizadas por separado, deben registrar la extensin,
frecuencia y duracin de las variaciones. Es necesario escoger
los intervalos de muestreo de acuerdo con la frecuencia
esperada de los cambios, que puede variar desde tiempos tan
cortos como 5 minutos hasta 1 hora o ms. Las variaciones
estacionales en sistemas naturales pueden necesitar muestreos
de varios meses. Cuando la composicin de las fuentes vara en
el espacio ms que en el tiempo, se requiere tomar las muestras
en los sitios apropiados.
b) Muestras compuestas: En la mayora de los casos, el trmino
"muestra compuesta" se refiere a una combinacin de muestras
sencillas o puntuales tomadas en el mismo sitio durante
diferentes tiempos. Algunas veces el trmino "compuesta en
tiempo (time-composite)" se usa para distinguir este tipo de
muestras de otras. La mayor parte de las muestras compuestas
en el tiempo se emplean para observar concentraciones
promedio, usadas para calcular las respectivas cargas o la
eficiencia de una planta de tratamiento de aguas residuales. El
uso de muestras compuestas representa un ahorro sustancial
en costo y esfuerzo del laboratorio comparativamente con el
anlisis por separado de un gran nmero de muestras y su
consecuente clculo de promedios.
Para estos propsitos, se considera estndar para la mayora de
determinaciones una muestra compuesta que representa un
perodo de 24 h. Sin embargo, bajo otras circunstancias puede
ser preferible una muestra compuesta que represente un
cambio, o un menor lapso de tiempo, o un ciclo completo de una
operacin peridica. Para evaluar los efectos de descargas y
operaciones variables o irregulares, tomar muestras
compuestas que representen el periodo durante el cual ocurren
tales descargas.
No se debe emplear muestras compuestas para la
determinacin de componentes o caractersticas sujetas a
cambios significativos e inevitables durante el almacenamiento;
sino hacer tales determinaciones en muestras individuales lo
ms pronto posible despus de la toma y preferiblemente en el
sitio de muestreo. Ejemplos de este tipo de determinaciones
son: gases disueltos, cloro residual, sulfuros solubles,
temperatura y pH. Los cambios en componentes como oxgeno
o dixido de carbono disueltos, pH, o temperatura, pueden
producir cambios secundarios en determinados constituyentes
inorgnicos tales como hierro, manganeso, alcalinidad, o
dureza. Las muestras compuestas en el tiempo se pueden usar
para determinar solamente los componentes que permanecen
sin alteraciones bajo las condiciones de toma de muestra,
preservacin y almacenamiento.
Tomar porciones individuales del cuerpo de agua en estudio en
botellas de boca ancha cada hora (en algunos casos cada
media hora o incluso cada 5 min.) y mezclarlas al final del
perodo de muestreo, o combinarlas en una sola botella al
momento de tomarlas. Si las muestras van a ser preservadas,
agregar previamente las respectivas sustancias a la botella, de
tal manera que todas las porciones de la composicin sean
preservadas tan pronto como se recolectan. Algunas veces es
necesario el anlisis de muestras individuales.
Es deseable, y a menudo esencial, combinar las muestras
individuales en volmenes proporcionales al caudal. Para el
anlisis de aguas residuales y efluentes, por lo general es
suficiente un volumen final de muestra de 2 a 3 L. Para este
propsito existen muestreadores automticos, que no deben ser
empleados a menos que la muestra sea preservada; limpiar
tales equipos y las botellas diariamente, para eliminar el
crecimiento biolgico y cualquier otro depsito.
c) Muestras integradas: Para ciertos propsitos, es mejor
analizar mezclas de muestras puntuales tomadas
simultneamente en diferentes puntos, o lo ms cercanas
posible. Un ejemplo de la necesidad de muestreo integrado
ocurre en ros o corrientes que varan en composicin a lo
ancho y profundo de su cauce. Para evaluar la composicin
promedio o la carga total, se usa una mezcla de muestras que
representan varios puntos de la seccin transversal, en
proporcin a sus flujos relativos. La necesidad de muestras
integradas tambin se puede presentar si se propone un
tratamiento combinado para varios efluentes residuales
separados, cuya interaccin puede tener un efecto significativo
en la tratabilidad o en la composicin. La prediccin matemtica
puede ser inexacta o imposible, mientras que la evaluacin de
una muestra integrada puede dar informacin ms til.
4.3.3. .MBITO DE APLICACIN
Estas normas se aplicarn a todos los tipos de aguas, cualquiera que
sea su procedencia, ya sean de grifos, pozos, depsitos, lagos, ros,
manantiales, bocas de riego, etc.
4.3.4. VOLUMEN DE LA MUESTRA
El volumen a tomar debe ser el adecuado paraqu en una sola
muestra se puedan efectuar simultneamente la totalidad de los
anlisis microbiolgicos y estar en funcin de la tcnica analtica a
utilizar.
Para los anlisis que utilicen la tcnica del NMP se tomarn, como
mnimo, 250 ml y para los que empleen la de membranas filtrantes,
como mnimo, 500 ml.
4.3.5. ROTULACIN
Antes de la toma de la muestra se marcar el frasco mediante
rotulador resistente al agua, con una referencia que permita su
identificacin. En todo caso la muestra se acompaar de una ficha o
etiqueta en la que se consignen los datos necesarios que, como
mnimo, sern los siguientes:

Datos del solicitante:
Nombre de la persona o Entidad y direccin completa.
Datos del agua:
Origen de la muestra (pozo, manantial, grifo, cisterna, ro, etctera). Denominacin
y/o referencia.
Direccin o emplazamiento exacto, trmino municipal y provincia.
Fecha y hora de la captacin.
Otros datos:
Consignar si el agua es natural o est sometida a algn tratamiento de depuracin
(cloro, filtracin, carbn activo, etc.). Identificacin de la persona que ha tomado la
muestra.

4.3.6 COLIFORME FECAL
La denominacin genrica coliformes designa a un grupo de especies
bacterianas que tienen ciertas caractersticas bioqumicas en comn e
importancia relevante como indicadores de contaminacin del agua y
los alimentos. Coliforme significa con forma de coli, refirindose a la
bacteria principal del grupo, la Escherichia coli, descubierta por el
bacterilogo alemn Theodor von Escherich en 1860. Von Escherich la
bautiz como bacterium coli ("bacteria del intestino", del griego ,
kolon, "intestino"). Con posterioridad, la microbiologa sistemtica
nombrara el gnero Escherichia en honor a su descubridor.
a) Caracteres bioqumicos
El grupo contempla a todas las bacterias entricas que se
caracterizan por tener las siguientes propiedades bioqumicas:
ser aerobias o anaerobias facultativas;
ser bacilos Gram negativos;
no ser esporgenas;
fermentar la lactosa a 37 C en 48 horas, produciendo cido lctico y
gas.
b) Los coliformes como indicadores
Tradicionalmente se los ha considerado como indicadores de
contaminacin fecal en el control de calidad del agua destinada
al consumo humano en razn de que, en los medios acuticos,
los coliformes son ms resistentes que las bacterias patgenas
intestinales y porque su origen es principalmente fecal. Por
tanto, su ausencia indica que el agua es bacteriolgicamente
segura. Asimismo, su nmero en el agua es proporcional al
grado de contaminacin fecal; mientras ms coliformes se aislan
del agua, mayor es la gravedad de la descarga de heces.
Bacterias que integran el grupo El grupo de los coliformes
incluye bacterias en forma de bacilo, gram negativos, con las
siguientes propiedades bioqumicas: oxidasa negativo y
capacidad de fermentar lactosa, con produccin de gas en 48
horas a una temperatura de 37 C.
c) Coliformes totales
No todos los coliformes son de origen fecal, por lo que se hizo
necesario desarrollar pruebas para diferenciarlos a efectos de
emplearlos como indicadores de contaminacin. Se distinguen,
por lo tanto, los coliformes totales que comprende la totalidad
del grupo y los coliformes fecales aquellos de origen
intestinal.Desde el punto de vista de la salud pblica esta
diferenciacin es importante puesto que permite asegurar con
alto grado de certeza que la contaminacin que presenta el
agua es de origen fecal.
d) Coliformes fecales
Las bacterias coliformes fecales forman parte del total del grupo
coliforme. Son definidas como bacilos gram-negativos, no
esporulados que fermentan la lactosa con produccin de cido y
gas a 44.5 C +/- 0.2 C dentro de las 24 +/- 2 horas. La mayor
especie en el grupo de coliforme fecal es el Escherichia coli.
La presencia de coliformes en el suministro de agua es un
indicio de que el suministro de agua puede estar contaminada
con aguas negras u otro tipo de desechos en descomposicin.
Generalmente, las bacterias coliformes se encuentran en mayor
abundancia en la capa superficial del agua o en los sedimentos
del fondo.
e) E. coliEl aislamiento de esta bacteria en el agua da alto grado
de certeza de contaminacin de origen fecal, alrededor del 99%.
No es absoluta porque se han aislado cepas de E. coli que no
tienen origen fecal, pero es un grado de certeza ms que
razonable para certificar contaminacin con ese origen. Sin
embargo, el aislamiento de este microorganismo no permite
distinguir si la contaminacin proviene de excretas humanas o
animales, lo cual puede ser importante, puesto que la
contaminacin que se desea habitualmente controlar es la de
origen humano. Esto no significa menospreciar la de origen
animal, especialmente dada la existencia de zoonosis,
enfermedades que son comunes al hombre y animales, que
tambin se pueden transmitir por el agua.


4.3.7 OXIGENO DISUELTO
En una u otra forma todos los organismos vivientes dependen del
oxgeno, para mantener el proceso metablico que produce energa
para crecer y reproducirse.
Todos los gases de la atmosfera son solubles en agua en algn grado.
Ambos nitrgeno y O2 son pobremente solubles y desde que no
reaccionan qumicamente con el agua su solubilidad es directamente
proporcional a sus presiones parciales y al contenido de solidos
disueltos.
La solubilidad de O2 atmosfrico en aguas frescas varian de 14.6 PPM
de 0 C a 7 PPM a 35 C. esto es importante pues los procesos de
oxidacin biolgica se incrementan de acuerdo a la condicin de alta
temperatura, cuando el OD es menos soluble.
La baja solubilidad del O2 es el mayor factor que limita la capacidad de
purificacin de aguas naturales y obligan al tratamiento de los
desechos para remover la materia polucionada antes de descargarla al
curso de agua.
En procesos de tratamiento aerobicos biolgicos, es de gran
importancia la solubilidad limitada del O2 porque ella es la que indica el
promedio a que oxigenara absorbido por el medio y por lo tanto, el
costo de aereacion.
Por otro lado el OD:
Es necesario en cantidades adecuadas para la vida de los peces y
otros organismos acuaticos = 4 ppm.
La concentracin de OD se relaciona con la corrosividad de las
aguas, con la actividad fotosinttica y con el grado de septicidad.
La determinacin de OD es la base para la determinacin de la DBO,
por el procediemiento de dilusiones.

SIGNIFICADO SANITARIO
En desechos liquidos, el OD es el factor que determina si los
cambios biolgicos son hechos por organismos aerobicos y
anaerbicos.
Los aerobicos requieren O2 libre y producen productos
terminados e inocuos, mientras que los anaerbicos determinan
productos finales generalmente con algn alto contenido de
materia organica sin estabilizar.
El OD es vital para mantener condiciones aerobicas en aguas
naturales que reciben materia polucionada y en proceso de
tratamiento aerobico para tratamiento de desague y desechos
industriales (SAG).
El O2 es un factor importante en la corrosin del fierro
particularmente en sistemas de distribucin de agua y en
calderas de vapor. Las pruebas de OD sirven como medio de
control
4.3.8 DEMANDA BIOQUIMICA DE OXIGENO: D.B.O
La DBO se define usualmente como la cantidad de Oxigeno requerido
por las bacterias mientras se estabiliza la materia orgnica putrescible
bojo condiciones aerbicas. La demanda de Oxigeno de las aguas
negras, aguas contaminadas y desechos industriales se debe a tres
clases de materiales:
Materiales Orgnicos carbonosos, que se aprovechan como una
fuente de nutrientes por los organismos aerbicos. Materiales
Nitrogenados oxidables, que se derivan de los compuestos de nitrito,
amoniaco y nitrgeno orgnico que sirven de nutrientes a bacterias
especficas como Nitrosomas y Nitrobacter. Ciertos compuestos
qumicos reductores (hierro ferroso, sulfito y sulfuro), que reaccionan
con el oxgeno molecularmente disuelto. En las aguas domsticas,
crudas y sedimentadas, la mayor parte de la Demanda de Oxigeno se
debe a la primera clase de materiales y se determina por la prueba de
DBO.
En efluentes que han sufrido un tratamiento biolgico, una proporcin
de consideracin de la demanda de oxigeno se puede deber, a la
segunda clase de materiales que tambin se incluyen en la prueba de
la DBO.
Los materiales existentes de tercera clase pueden no quedar incluidos
en la prueba de la DBO, a no ser que la prueba se base sobre el dato
calculado del Oxgeno Disuelto inicial Se ha de tomar en
consideraciones que los compuestos de las tres clases influyen,
directamente, sobre el balance de oxigeno de la corriente receptora y
que se deben considerar en la descarga de un desecho a tal corriente.
4.3.8 Nitratos:
Los nitratos son ingeridos por el hombre como parte de su dieta
normal, resultando txicos cuando superan los niveles habituales de
ingesta, siendo la dosis tpica de nitratos para adultos
aproximadamente de 75 mg/da. Mirvish S.S. determin que en
adultos, el nitrato es letal en dosis de 4 a 50 g, en tanto que el nitrito
resulta serlo en dosis de 1,6 a 9,5 g. El nitrato, al ser reducido a nitrito
en el organismo, es txico porque puede generar
metahemoglobinemia, proceso en el cual el ion ferroso de la
hemoglobina de la sangre es oxidado (estado de oxidacin +2) a ion
frrico (estado de oxidacin +3).
La metahemoglobinemia se manifiesta con cianosis (amoratado con
coloracin azul) y anoxia (signos de falta de oxgeno), sntomas
debidos a un defectuoso transporte de oxgeno en la sangre por la
prdida de hemoglobina y por la interferencia de la metahemoglobina
en el transporte de oxgeno. En dosis orales individuales de 2 a 4 g el
nitrato y de 60 a 500 mg el nitrito, han producido casos registrados de
metahemoglobinemia en humanos (Mirvish S.S., 1990).
Los nios de corta edad (de hasta 3 aos) son especialmente
susceptibles a la metahemoglobinemia porque en los nios:
la hemoglobina fetal, que corresponde al 70% de la hemoglobina total, ya
que adquieren el 30% restante no antes de los 3 meses de edad, es ms
fcilmente oxidada a metahemoglobina que la hemoglobina de adultos.
Se presentan deficiencias para reducir la metahemoglobina a hemoglobina
en los glbulos rojos de su sangre.
la ingesta de agua es, en proporcin a su peso corporal, diez veces mayor
que en los adultos.
se presenta un relativamente alto pH en el estmago, lo cual favorece el
desarrollo de bacterias que reducen nitrato a nitrito, especialmente durante
la gastroenteritis.
4.3.9 Conductividad del agua
La conductividad elctrica es la medida de la capacidad del agua para
conducir la electricidad y la resistividad es la medida recproca. Son
indicativas de la materia ionizable presente en el agua. El agua pura
prcticamente no conduce la electricidad; por lo tanto la conductividad
que podamos medir ser consecuencia de las impurezas presentes en
el agua. Es por lo tanto un parmetro fsico bastante bueno para medir
la calidad de un agua, pero deben de darse tres condiciones
fundamentales para que sea representativa:
No se trate de contaminacin orgnica por sustancias no ionizables.
Las mediciones se realicen a la misma temperatura.
La composicin del agua se mantenga relativamente constante

El aparato para las mediciones se llama conductivmetro, y bsicamente lo que
hace es medir la resistencia al paso de la corriente entre dos electrodos que se
introducen en el agua, y se compara para su calibrado con una solucin tampn
de ClK a la misma temperatura y 20 C.
La unidad para la resistividad es el Ohm, pero se emplea el MegaOhm por cm,
la de la conductividad es el Siemens, pero como es muy grande se suele
emplear el micro siemens por cm.
Incluimos una pequea tabla que nos dar una idea segn la medida o la
composicin del agua.





Conductividad
Temperatura de la muestra 25 C Conductividad (S/cm)
Agua Ultrapura 0,05
Agua alimentacin calderas 1 a 5
Agua Potable 50 a 100
Agua de Mar 53.000
5% de NaOH 223.000
50% NaOH 150.000
4.3.10 LA TEMPERATURA
Es un factor abitico que regula procesos vitales para los
organismos vivos, as como tambin afecta las propiedades
qumicas y fsicas de otros factores abiticos en un ecosistema.
Antes de discutir la naturaleza de dichas interacciones, considero
necesario iniciar la presentacin con una distincin entre los
conceptos de temperatura y calor. La distincin entre estos dos
conceptos es a menudo confusa, llevndonos a intercambiarlos
errneamente. El trmino calor implica energa transferida desde
un cuerpo o sistema hacia su ambiente inmediato o viceversa. El
flujo de energa procede siempre de un rea de mayor
concentracin a un rea de menor concentracin, en conformidad
con la segunda ley de termodinmica. Del otro lado temperatura
es un parmetro que nos revela que existe un contraste o
gradiente de energa que provoca el transferimiento de calor. En
trminos fisiolgicos, la temperatura es considerada un parmetro
de mayor significado que el contenido de calor de un cuerpo o
sistema. Un protozoario que nada libremente en un cuerpo de
agua con una temperatura promedio de 10C, es apenas afectado
por la energa total contenida en su hbitat (sin importar que su
hbitat sea una pequea charca o sea un gran lago). El factor de
intensidad, la temperatura (10C), es el mismo para ambos
cuerpos de agua, controlando de igual forma el metabolismo del
protozoario. Asumiendo claro est, que las nicas diferencias
entre los dos ambientes son el tamao de sus respectivas
cuencas hidrolgicas y el contenido de calor asociado a stas.
Tenemos conocimiento de que la temperatura afecta la energa
cintica de los reactivos,as como la estabilidad y actividad de las
enzimas que participan en reacciones bioqumicas. En
consecuencia, la temperatura ejerce una marcada influencia sobre
la reproduccin, crecimiento y el status fisiolgico de todas las
entidades vivas. Los microorganismos como grupo
(particularmente el grupo de las bacterias) demuestran una
capacidad extraordinaria para vivir y reproducirse a lo largo de un
amplio rango de temperaturas (desde temperaturas bajo0C,
hasta temperaturas que alcanzan los 113C). Los
microorganismos se han agrupado en cuatro categoras, a base
de su rango de temperatura ptimo para el crecimiento. Las
categoras son: psicroflicos, mesoflicos, termoflicos e
hipertermoflicos. El rango de temperatura ptimo y el lmite
mnimo y mximo de temperatura que distinguen a cada grupo no
se deben tomar como valores absolutos que establecen la frontera
entre una y otra categora y s como un reflejo del hbitat natural
donde se desarrolla cada grupo.
protozoarios termoflicos ............................................... 56C
algas termoflicas .......................................................... 55 - 60C
hongos termoflicos ....................................................... 60 - 62C
cianobacterias termoflicas ......................................... 70 - 74C
bacterias fototrficas termoflicas .............................. 60 - 62C
eubacterias organotrficas termoflicas .................... 90C
arquebacterias (hipertermoflicas) ............................. 113C
Datos tomados de Brock et al., 1994.
4.3.11 pH
ES ACRONIMO para potencial de hidrgeno, e indica la concentracin
del in hidronio en una solucin.
pH = log 1[H3 O+].dnde, [H3O+] = concentracin del in hidronio en
moles/L El trmino pH expresa la intensidad de un cido, dependiendo
de su capacidad de disociacin, as como de su concentracin. El agua
es un electrolito dbil, enconsecuencia slo una pequea fraccin de
sta se disocia en los iones que componen la molcula: H3O+ (in
cido) y OH- (in bsico). La siguiente ecuacin describe el equilibrio
de disociacin del agua.H2O H+ + OHH2O + H+ + OH- H3O + OHLa
constante de disociacin de agua pura a una temperatura dada est
definida por la siguiente expresin:

















La fraccin del
agua que se ioniza es tan pequea que la concentracin de agua no disociada se
aproxima a 1.0. Esa razn se hace evidente si consideramos una solucin neutra,
dnde por cada tonelada mtrica de molculas de agua habra aproximadamente
0.1 mg de H+ y 1.7 mg de OH-
En agua pura (pH 7.0), la razn de iones de hidronio a iones hidroxilo es igual a
1.0. Esto nos conduce a que la constante de disociacin del agua (Kw ) se puede
expresar como el producto de la concentracin del in hidronio por
la concentracin del in hidroxilo:
Kw = [H3O+] [OH-]
El producto de dicha expresin es de 10-14 moles/L. La tabla 1 nos presenta las
variaciones que se producen en las concentraciones de los iones H3O+ y OH-
segn vara el pH de una solucin La temperatura afecta la constante de
disociacin del agua y por ende, cambios en temperatura redundan en cambios en
las concentraciones relativas de los iones hidronio hidroxilo (Tabla 2).

Importancia ecolgica:
El pH de un cuerpo de agua es un parmetro a considerar cuando queremos
determinar la especiacin qumica y solubilidad de varias substancias orgnicas e
inorgnicas en agua. Es un factor abitico que regula procesos biolgicos
mediados por enzimas (ej. fotosntesis, respiracin); la disponibilidad de nutrientes
esenciales que limitan el crecimiento microbiano en muchos ecosistemas (ej. NH4
+, PO4 -3 y Mg2+); la movilidad de
Metales pesados tales como cobre, que es txico para muchos microorganismos;
as
como tambin afecta o regula la estructura y funcin de macromleculas y
organelos tales como cidos nucleicos, protenas estructurales y sistemas de
pared celular y membranas. Variaciones en pH pueden tener entonces efectos
marcados sobre cada uno de los niveles de organizacin de la materia viva, desde
el nivel celular hasta el nivel de ecosistemas. Para una descripcin del efecto de
pH sobre microorganismos vea Atlas & Bartha, 1992.
Factores que afectan el pH de un cuerpo de agua natural: En el caso de aguas
ocenicas, donde el sistema de amortiguacin de carbonatobicarbonato opera
efectivamente, el pH vara dentro de unos lmites estrechos (8.1 ~ 8.3).
En aguas cercanas a la costa, el pH de agua de mar se puede alejar del valor
promedio indicado por efecto de la actividad fotosinttica, la respiracin celular y el
efecto de descargas de origen antropognico. En aguas interiores las variaciones
en pH son grandes. El pH de lagos alcalinos puede tener valores mayores a 10
11 unidades, mientras que el pH en algunas cinagas o pantanos puede ser
menores de 4.0.

4.3.12 CLORUROS
Los cloruros son sales que resultan de la combinacin del gas cloro
(ion negativo) con un metal (ion positivo). El cloro (Cl2) es altamente
txico y es usualmente utilizado como desinfectante, sin embargo en
combinacin con un metal, como el sodio (Na), es esencial para la
vida, dado que, pequeas cantidades de cloruros son requeridas para
la funcin celular en los seres vivos. En la naturaleza las sales de
cloruro de sodio, cloruro de potasio, y cloruro de calcio estn
ampliamente distribuidas, su solubilidad en agua fra es: 357, 344, 745
g/L, respectivamente. El cloruro, en forma de ion Cl- es uno de los
aniones inorgnicos principales en el agua, su contenido procede de
fuentes naturales, aguas residuales y vertidos industriales. El efecto
antropgenico est mayormente asociado con el ion sodio (Iowa
Department of Natural Resources, 2009).



4.3.13 ALCALINIDAD
Es la capacidad del agua para neutralizar cidos o aceptar protones.
Esta representa la suma de las bases que pueden ser tituladas en una
muestra de agua. Dado que la alcalinidad de aguas superficiales est
determinada generalmente por el contenido de carbonatos,
bicarbonatos e hidrxidos, sta se toma como un indicador de dichas
especies inicas. No obstante, algunas sales de cidos dbiles como
boratos, silicatos, nitratos y fosfatos pueden tambin contribuir a la
alcalinidad de estar tambin presentes. Estos iones negativos en
solucin estn comnmente asociados o pareados con iones positivos
de calcio, magnesio, potasio, sodio y otros cationes. El bicarbonato
constituye la forma qumica de mayor contribucin a la alcalinidad.
Dicha especie inica y el hidrxido son particularmente importantes
cuando hay gran actividad fotosinttica de algas o cuando hay
descargas industriales en un cuerpo de agua. La alcalinidad, no slo
representa el principal sistema amortiguador del agua dulce, sino que
tambin desempea un rol principal en la productividad de cuerpos de
agua naturales, sirviendo como una fuente de reserva para la
fotosntesis. Histricamente, la alcalinidad ha sido utilizada como un
indicador de la productividad de lagos, donde niveles de alcalinidad
altos indicaran una productividad alta y viceversa (Tabla 1). Dicha
correlacin se debe en parte a que la disponibilidad del carbono es
mayor en lagos alcalinos y tambin al hecho de que las rocas
sedimentarias que contienen carbonatos, a menudo contienen tambin
concentraciones relativamente altas de nitrgeno y fsforo (en
comparacin con el granito, otras rocas gneas y regiones donde el
lecho rocoso ha sido desgastado y lavado, los cuales).






























4.3.14 Dureza
Las aguas subterrneas contienen en general sales en disolucin,
siendo su contenido funcin de los suelos en los cuales se encuentran
alojadas o los que atravesaron hasta alcanzar su situacin actual.
Asimismo las aguas ms antiguas han tenido la posibilidad de disolver
una mayor cantidad de sales. Teniendo en cuenta ello resulta que en
general las aguas ms profundas originadas en la precipitacin y su
posterior infiltracin, posee un tenor salino ms elevado, con relacin a
aguas del mismo origen ubicadas a menor profundidad.
Algunas investigaciones han sealado que una dureza intermedia (del
orden de 40-60 mg/L como carbonato de calcio) es beneficiosa para
prevenir enfermedades cardiovasculares. Actualmente otros trabajos
ponen en duda esos resultados y la OMS dej de establecer
parmetros deseables de dureza en el agua de bebida.
Las sales que producen la dureza en agua subterrnea: bicarbonatos,
sulfatos, cloruros y nitratos, todas ellas de calcio y de magnesio. Los
bicarbonatos provienen de una combinacin muy dbil del carbonato,
aportado por las rocas con las cuales el agua entra en contacto, con
una parte del dixido de carbono presente en el agua. La parte de
dixido de carbono incorporada en el bicarbonato se separa al
calentarse el agua y el in carbonato reacciona con los iones de calcio
y de magnesio precipitando en forma de una costra insoluble
caracterstica (sarro). Primero se deposita la costra de carbonato de
calcio (el de magnesio es 5 veces ms soluble). Esta es la dureza
temporal o de carbonatos. La de no carbonatos constituye la otra parte
de la dureza total, est dado por los cloruros, sulfatos y nitratos de
calcio y de magnesio y no es eliminable por ebullicin.
Agua blanda o suave < 50 mg/L como carbonato de calcio.
Agua dura > 150 mg/L como carbonato de calcio.
4.3.15 Color
El color es la capacidad de absorber ciertas radiaciones del espectro visible.
Existen muchas causas y por ello no podemos atribuirlo a un constituyente en
exclusiva, aunque algunos colores especficos dan una idea de la causa que
los provoca, sobre todo en las aguas naturales. El agua pura es bastante
incolora slo aparece como azulada en grandes espesores. En general
presenta colores inducidos por materiales orgnicos de los suelos vegetales:
Color amarillento debido a los cidos hmicos.
Color rojizo, suele significar la presencia de hierro.
Color negro indica la presencia de manganeso.
El color, por s mismo, no descalifica a un agua como potable pero la puede hacer
rechazable por esttica, en aguas de proceso puede colorear el producto y en
circuito cerrado algunas de las sustancias colorantes hacen que se produzcan
espumas. Las medidas de color se hacen en laboratorio por comparacin, y se
suelen medir en ppm de Pt, las aguas subterrneas no suelen sobrepasar las 5
ppm de Pt pero las superficiales pueden alcanzar varios cientos de ppm de Pt. La
eliminacin suele hacerse por coagulacin-floculacin con posterior filtracin o la
absorcin en carbn activo.

IV. MATERIALES Y METODOLOGIA
El estudio consisti en tomar muestras en campo que incluy el registro
de la ubicacin, la medicin del nivel fretico y el anlisis de calidad de
agua. Adems se realizaron anlisis fsico-qumicos y bacteriolgicos en el
laboratorio de calidad de agua.
Se llev a cabo un breve reconocimiento del rea en donde se realizara el
estudio. Se tom en cuenta que la densidad de viviendas alrededor de los
pozos poda tener efectos sobre la calidad del agua subterrnea ya que las
letrinas se encontraban a pocos metros de sus pozos.. Tambin se
consider de importancia la realizacin del anlisis de bacterias termo
tolerantes y coliformes totales. Por otro lado se deban establecer las
caractersticas del agua en los pozos por lo que se recurri a medir
parmetros fsico-qumicos generales del agua entre ellos pH, temperatura,
conductividad, cloruros, dureza, alcalinidad, color y nitratos
4.1 ANALISIS DE MUESTRAS DE AGUA (EXSITU)

4.1.2 ANALISIS DE COLIFORMES TERMOTOLERANTES
El anlisis de coliformes termotolerantes se realiz con el
mtodo de los tubos mltiples que consta de tres etapas: prueba
presuntiva, prueba confirmativa, prueba complementaria. la
prueba presuntiva consiste en colocar volmenes determinados
de muestra en una serie de tubos conteniendo caldo lauril
sulfato y son incubados a 35 C durante 24-48 horas, en esta
prueba la actividad metabolica de las bacterias es estimulada
vigorosamente y ocurre una seleccin inicial de organismos que
fermentan la lactosa con produccin de gas. La formacin de
gas a 35 C dentro de las 24-48 horas, constituye una prueba
presuntiva positiva para la presencia de bacterias del grupo
coliforme. La prueba presuntiva no debe utilizarse
rutinariamente sin confirmacin para el anlisis de agua y
aguas residuales
De acuerdo al objetivo de estudio en algunos casos se puede
usar la prueba presuntiva sin confirmacin o en los casos en
que exmenes anteriores indican que los resultados de la
prueba presuntiva son comparables a la prueba confirmativa
La prueba confirmativa consiste en transferir todos los tubos
positivos de la prueba presuntiva a tubos con contenido caldo
lactosa verde brillante bilis 2% son incubados durante 24-48
horas a 35 C . Esta prueba reduce la posibilidad de resultados
falsos gas positivo que pueden ocurrir por la actividad
metablica de los organismos formadores de esporas . el caldo
lactosa verde brillante bilis contiene agentes selectivos que
suprimen el desrrollo de todos los organismos no coliformes .
La prueba complementaria consiste transferir la inoculacin en
estras. Las bacterias a partir de tubos de caldo lactosa verde
brillante bilis positivos a placas de agar endo o agar eosina azul
de metileno luego son incubados a 35C durante 24 horas se
consideran positivas las colonias tpicas que son nucleadas con
o sin brillo metlico y las colonias atpicas son transferidas a
tubos y tubos con agar inclinado.





4.1.3 MATERIALES
Para este anlisis antes dela toma de muestra todos los materiales de
borosilicato deben ser esterilizados en un autoclave


a) Esterilizacin:
Una esterilizacin segura con calor hmedo requiere temperaturas
mayores a las del punto de ebullicin del agua. Estas temperaturas
son comnmente alcanzadas por el vapor bajo presiones elevadas
en un autoclave. Cuando la presin de un gas aumenta, la
temperatura del gas aumenta proporcionalmente. Como el vapor de
agua es un gas, aumentar su presin en un sistema cerrado aumenta
su temperatura. Como las molculas de agua estn ms
energizadas, su penetracin aumenta sustancialmente. Ocupar el
autoclave es el mtodo preferido para la esterilizacin, a menos que
el material que se necesite esterilizar pueda ser daado por el calor o
la humedad. Un ejemplo de esto son algunos plstico que se pueden
derretir o algunos objetos filosos los cuales pierden su filo.
La temperatura alcanzada en el autoclave son 121.5C y una presin
de 15(Lb/in2), por lo tanto el tiempo requerido para la destruccin de
la mayora de las bacterias resistentes es aproximadamente 15 min.
Para objetos ms densos, sern requeridos ms de 30 minutos, sin
olvidar que las condiciones deben de ser controladas
cuidadosamente para asegurar la correcta esterilizacin.
AUTOCLAVE:
Una autoclave es un recipiente de presin metlico
de paredes gruesas con un cierre hermtico que
permite trabajar a alta presin para realizar una
reaccin industrial, una coccin o
una esterilizacin con vapor de agua. Su
construccin debe ser tal que resista la presin y
temperatura desarrollada en su interior. La presin
elevada permite que el agua alcance temperaturas superiores a los 100 C. La
accin conjunta de la temperatura y el vapor produce la coagulacin de las
protenas de los microorganismos, entre ellas las esenciales para la vida y la
reproduccin de stos, cosa que lleva a su destruccin.
Las autoclaves funcionan permitiendo la entrada o generacin de vapor de agua
pero restringiendo su salida, hasta obtener una presin interna de 103 kPa, lo cual
provoca que el vapor alcance una temperatura de 121 grados Celsius. Un tiempo
tpico de esterilizacin a esta temperatura y presin es de 15-20 minutos. Las
autoclaves ms modernas permiten realizar procesos a mayores temperaturas y
presiones, con ciclos estndar a 134 C a 200 kPa durante 5 min para esterilizar
material metlico; incluso llegan a realizar ciclos de vaco para acelerar el secado
del material esterilizado.
El hecho de contener fluido a alta presin implica que las autoclaves deben ser de
manufactura slida, usualmente en metal, y que se procure construirlas totalmente
hermticas.
Las autoclaves son ampliamente utilizadas en laboratorios, como una medida
elemental de esterilizacin de material. Aunque cabe notar que, debido a que el
proceso involucra vapor de agua a alta temperatura, ciertos materiales no pueden
ser esterilizados en autoclave, como el papel y muchos plsticos (a excepcin
del polipropileno).
Debido a que el material a esterilizar es muy probablemente de uso grabable, se
requiere de mtodos de testificacin de la calidad de dicha esterilizacin, esto
quiere decir que la presin y temperatura aplicadas sern distintas para cada uno
de los productos autoclavados.
Las autoclaves suelen estar provistas de manmetros y termmetros, que
permiten verificar el funcionamiento del aparato. Aunque en el mercado existen
mtodos testigo anexos, por ejemplo, testigos qumicos que cambian de color
cuando cierta temperatura es alcanzada, o bien testigos mecnicos que se
deforman ante las altas temperaturas. Por este medio es posible esterilizar todo
tipo de materiales a excepcin de materiales voltiles, por lo que se debe tener
gran precaucin.
Una autoclave de laboratorio es un dispositivo que sirve para esterilizar material
de laboratorio.
Las autoclaves son ampliamente utilizadas en laboratorios, como una medida
elemental de esterilizacin de material. Aunque cabe notar que, debido a que el
proceso involucra vapor de agua a alta temperatura, ciertos materiales no pueden
ser esterilizados en autoclave, como el papel y muchos plsticos (a excepcin
del polipropileno).
Este producto es de uso general en laboratorio y no es un producto sanitario por
tanto no lleva marcado CE segn la directiva 93/42/EEC ni le es de aplicacin esta
legislacin. Cuando la autoclave est destinada a la esterilizacin de productos
sanitarios tiene unos requisitos especiales.
INCUBADORA DE AIRE CALIENTE :

En biologa, una incubadora es un
dispositivo que sirve para mantener y
hacer crecer cultivos
microbiolgicos o cultivos celulares. La
incubadora mantiene la temperatura,
lahumedad y otras condiciones en grado
ptimo, tales como el contenido de dixido
de carbono (CO
2
) y de oxgeno en su
atmsfera interior. Las incubadoras son esenciales para una gran cantidad de
trabajos experimentales en biologa celular, la microbiologa y en biologa
molecular y se utilizan para cultivos celulares, tanto bacterianos como de clulas
eucariotas.
La forma ms simple de incubadora es la de una caja isotrmica con un sistema
de calefaccin y termostato ajustable, que por lo general se regula con una
temperatura entre 60 y 65 C (de 140 a 150 F), aunque algunos modelos pueden
regularse a mayores temperaturas (generalmente menor de 100 C). La
temperatura ms utilizada, tanto para cultivo de bacterias como de E. Coli, de uso
frecuente, as como de clulas de mamferos es de aproximadamente 37 C, ya
que estos organismos se desarrollan bien en esas condiciones. Para otros
organismos utilizados en los experimentos biolgicos, como
la levadura Saccharomyces cerevisiae, para la cual es ptima una temperatura de
crecimiento de 30 C.
La mayora de las incubadoras de laboratorio tambin poseen la posibilidad de
bajar la temperatura (a travs de la refrigeracin), o la capacidad de controlar los
niveles de humedad o de CO
2
. Esto es importante en el cultivo de clulas de
mamferos, donde la humedad relativa es normalmente es del 95% y se consigue
un pH ligeramente cido manteniendo un nivel de CO
2
del 5%.
La mayora de las incubadoras incluyen un cronmetro, y algunas tambin pueden
ser programadas para realizar un ciclo a travs de diferentes temperaturas,
diferentes niveles de humedad, etc. Las incubadoras pueden variar en tamao
desde una mesa a unidades del tamao de una habitacin pequea.
Hay maneras de sustituir una incubadora, cuando no est disponible. El famoso
cientfico Louis Pasteur utiliz como incubadora un pequeo hueco debajo de la
escalera.
La temperatura mxima para la esterilizacin es 200 C.
1


BALANZA ANALITICA.
La balanza analtica es uno de los
instrumentos de medida ms usados
en laboratorio y de la cual dependen
bsicamente todos los resultados
analticos.

Las balanzas analticas modernas,
que pueden ofrecer valores de
precisin de lectura de 0,1 g a 0,1 mg,
estn bastante desarrolladas de manera que no es necesaria la utilizacin de
cuartos especiales para la medida del peso. An as, el simple empleo de circuitos
electrnicos no elimina las interacciones del sistema con el ambiente. De estos,
los efectos fsicos son los ms importantes porque no pueden ser suprimidos.
La precisin y la confianza de las medidas del peso estn directamente
relacionadas a la localizacin de la balanza analtica. Los principales puntos que
deben de ser considerados para su correcta posicin son:

Caractersticas de la sala de medida

MECHERO BUNSEN :

Un mechero o quemador Bunsen es
un instrumento utilizado en laboratorios cientficos para
calentar o esterilizar muestras o reactivos qumicos.
Fue inventado por Robert Bunsen en 1857 y provee una
transmisin muy rpida de calor intenso en el laboratorio.
Es un quemador de gas del tipo de premezcla y la llama es
el producto de la combustin de una mezcla de aire y gas.
El quemador tiene una base pesada en la que se introduce
el suministro de gas. De all parte un tubo vertical por el que
el gas fluye atravesando un pequeo agujero en el fondo de tubo. Algunas
perforaciones en los laterales del tubo permiten la entrada de aire en el flujo
de gas (gracias al efecto Venturi) proporcionando una mezcla inflamable a la
salida de los gases en la parte superior del tubo donde se produce la
combustin, muy eficaz para la qumica avanzada.
El mechero Bunsen es una de las fuentes de calor ms sencillas del
laboratorio y es utilizado para obtener temperaturas no muy elevadas.
Consta de una entrada de gas sin regulador, una entrada de aire y un tubo
de combustin. El tubo de combustin est atornillado a una base por donde
entra el gas combustible a travs de un tubo de goma, con una llave de
paso. Presenta dos orificios ajustables para regular la entrada de aire.
La cantidad de gas y por lo tanto de calor de la llama puede controlarse
ajustando el tamao del agujero en la base del tubo. Si se permite el paso
de ms aire para su mezcla con el gas la llama arde a mayor temperatura
(apareciendo con un color azul). Si los agujeros laterales estn cerrados el
gas slo se mezcla con el oxgeno atmosfrico en el punto superior de la
combustin ardiendo con menor eficacia y produciendo una llama de
temperatura ms fra y color rojizo o amarillento, la cual se llama "llama
segura" o "llama luminosa". Esta llama es luminosa debido a pequeas
partculas de holln incandescentes. La llama amarilla es considerada "sucia"
porque deja una capa de carbn sobre la superficie que est calentando.
Cuando el quemador se ajusta para producir llamas de alta temperatura,
stas (de color azulado) pueden llegar a ser invisibles contra un fondo
uniforme.
Si se incrementa el flujo de gas a travs del tubo mediante la apertura de la
vlvula aguja crecer el tamao de la llama. Sin embargo, a menos que se
ajuste tambin la entrada de aire, la temperatura de la llama descender
porque la cantidad incrementada de gas se mezcla con la misma cantidad
de aire, dejando a la llama con poco oxgeno. La llama azul en un mechero
Bunsen es ms caliente que la llama amarilla.
La forma ms comn de encender el mechero es mediante la utilizacin de
un fsforo o un encendedor a chispa.

FRASCOS PARA LA TOMA DE MUESTRA:









MATRAZ:

PIPETAS:


TUBO DE ENSAYO.



CALDO LAURIL SULFATO
C.L.S
Medio selectivo recomendado para la
deteccin y recuento de coliformes en aguas,
residuales y alimentos.
Medio rico en nutrientes, que permite un
rpido desarrollo de los microorganismos
fermentadores de la lactosa, an de los
fermentadores lentos.
La triptosa es la fuente de nitrgeno,
vitaminas, minerales y aminocidos, la lactosa es el hidrato de carbono
fermentable, las sales de fosfato proveen un sistema buffer, y el cloruro de sodio
mantiene el balance osmtico
Es un medio selectivo, ya que el lauril sulfato de sodio inhibe el desarrollo de la
flora acompaante.
Por la fermentacin de la lactosa, se produce cido y gas, ste ltimo se evidencia
al utilizar las campanas Durham.
PROCEDIMIENTO:
Una vez esterilizado todos estos materiales mencionados se procede a pesar el
caldo lauril sulfato aplicando la regla de tres simple para 35.6 gramos de CLF aun
litro de agua destilada, para 21 tubos de ensayo
seria220ml por que a cada tuvo entra 9 ml
haciendo los clculos:
A. Preparacin del caldo lauril sulfato.
1 clculos:
35.6g-----------------1000ml
X---------------------220-ml
X=7.832g (Lauril sulfato).


1) Pesamos 7.832 C.L.S en la balanza analtica.








2) Seguidamente diluimos el CLS con calor en el mechero bunsen
3) Colocamos 9ml de CLS en los 21 tubos

4) Giramos el tubo antes de cerrarlo con la torunda.



5) Despus lo incubamos por 24-48 horas a 35 C

















6) en la prueba presuntiva todos los tubos son de gas negativo.
7) Por esta razn ya no procedemos con la prueba confirmativa ni prueba
complementaria







PRUEBA PRESUNTIVA
Todas las operaciones debern efectuarse en absolutas condiciones de a sepsia.

1. Agitar vigorosamente la muestra por lo menos 20 veces para lograr una
distribucin uniforme de los microorganismos.
2. Dependiendo del origen de la muestra y el contenido bacteriano esperado
preparar diluciones.
3. Para preparar las diluciones, con una pipeta estril tomar una alcuota de 1
mL de la muestra original y llevarlo a uno de los tubos conteniendo 9 mL de
agua de dilucin estril, obteniendo de esta manera una dilucin de 10
-1
.
4. Agitar el tubo de la dilucin 10
-1
y con otra pipeta estril tomar una alcuota
de 1 mL y llevarlo a otro tubo con 9 mL de agua de dilucin estril para
obtener una dilucin de 10
-2
.
5. Proceder de la misma manera hasta obtener una dilucin de 10
-3
o hasta
donde sea necesario.
6. Inocular aspticamente con 1 mL de muestra por triplicado, tubos de
fermentacin conteniendo caldo lactosado o caldo lauril triptosa, a partir de
las ltimas 3 diluciones y conservar todas las anteriores en refrigeracin por
si se requiere su utilizacin posterior.
7. Incubar todos los tubos a una temperatura de 35 C durante 24 horas.
8. Despus de 24 horas de incubacin efectuar una primera lectura para
observar si hay tubos positivos, es decir, con produccin de cido, si el
medio contiene un indicador de pH, turbidez y produccin de gas en el
interior de la campana Durham.
9. Al hacer esta verificacin es importante asegurarse que la produccin de
gas sea resultado de la fermentacin de la lactosa, en cuyo caso se
observar turbidez en el medio de cultivo, y no confundir con burbujas de
aire.
10. Para evitar este tipo de confusiones es recomendable revisar las campanas
Durham antes de proceder a la inoculacin y desechar aquellos tubos
cuyas campanas contengan burbujas de aire de alguna manera eliminar
stas y as poder utilizarlos.
11. De los tubos que en la primera lectura den positivos, ya se pueden hacer
las pruebas confirmatorias para coliformes totales y coliformes fecales.
12. En caso de no apreciarse crecimiento en el resto de los tubos, continuarn
en Incubacin 24 horas ms.
13. Despus de 48 horas ( 2h) a partir de la inoculacin, se hace la lectura
final.
14. Si pasadas 48 h tampoco se aprecia crecimiento ni produccin de gas, los
tubos se toman como negativos.

INTERPRETACIN:
Si el total de tubos son NEGATIVOS: El examen se da por terminado,
reportando la AUSENCIA DE COLIFORMES TOTALES Y FECALES en la
muestra analizada.
Todos aquellos tubos que den POSITIVOS para prueba presuntiva se
anotarn convenientemente y se proceder a realizar la PRUEBA
CONFIRMATORIA para Coliformes Totales y Fecales

4.1.4 ANALISIS DE CLORUROS
El anlisis de Cloruros se realiz con el mtodo de Mohr que consiste
En emplear una solucion de de nitrato de plano para titular
recomendadndose que sea 0.0141 N esto corresponde a N/71 solucion o
una en que 1 ml. Sea equivalente a 9.5mg de ion cloruro. La solucion de
nitrato de plata puede normalizarse con soluciones estndar de cloruros
preparadas con cloruro de sodio puro se disuelve 2.396gr de nitrato de
plata en un litro de agua destilada en la ual cada mililitro es equivalente a
0.500mg de Cl.
En el procedimiento los cloruros presentes en la muestra se determinan por
titulacion con la0.0141 N nitrato de plata. El punto final no puede
determinarse al ojo, sin un indicador capaz de demostrr la presencia de
exceso de plata presente.el indicador usadoes el cromato de potasio que da
iones cromato .
Cuando la concentracion de iones cloro se acerca asu terminacion (al
titular)entonces comienza a formarse un precipitado amarillo rojizo . esto da la
evidencia de que todos los cloruros han precipitado.desde que un