Unidad 5: FERMENTACIN E INSTRUMENTACION

Objetivos especficos:
5.1. Describir y distinguirn los biorreactores utilizados en los diferentes
procesos biotecnolgicos, uso y aplicaciones.
5.2. Explicar la finalidad de la agitacin en la fermentacin, los diferentes
procesos de separacin y purificacin.


Contenido de unidad
5.1. Fermentacin y tipos de fermentacin.
5.2. Cintica de las fermentaciones.
5.3 Concepto de biorreactor y tipos de biorreactor.
5.4. Transferencia de Oxgeno
5.5. Agitacin y tipos de agitadores.
5.6. Procesos de separacin.
El proceso de fermentacin es anaerbico ya que se
produce en ausencia de oxgeno; ello significa que el aceptor
final de los electrones del NADH producido en la gluclisis no
es el oxgeno, sino un compuesto orgnico que se reducir
para poder oxidar el NADH a NAD+. El compuesto orgnico
que se reduce (acetaldehdo, piruvato) es un derivado del
sustrato que se ha oxidado anteriormente

En los seres vivos, la fermentacin es un proceso
anaerbico: bacterias y levaduras
FERMENTACIN?
TIPOS DE FERMENTACIN?
TIPOS MO SUSTRATO PRODUCTO USOS
Alcohlica Saccharomyces Glucosa Etanol Alimentos,
industrial
Lctica Lactobacillus Lactosa cido lctico Alimentos,
industrial
Actica Acetobacter
aceti
Etanol cido actico Alimentos,
industrial
Butrica Clostridium
butyricum
Glcidos cido butrico
y gas
Olores
ptridos y
desagradables

Cintica de las fermentaciones?
Crecimiento microbiano
Fases del crecimiento microbiano
Rendimientos metablicos
Clculo de Velocidad especfica de crecimiento y constante
de sustrato
El reactor es el corazn de cualquier proceso de
fermentacin o conversin enzimtica. El diseo de
biorreactores es una tarea complicada, basada en
principios cientficos y de ingeniera y en muchas reglas
empricas. Los aspectos especficos del reactor y su
operacin incluyen varias decisiones crticas.
Configuracin
del reactor
Tamao del
reactor
Condiciones del
proceso dentro
del reactor
Modo de
operacin
Costo total
produccin
I+D
Fermentacin
/rxn
Materiales de
partida
Operacin del
biorreactor
Salarios
Servicios
Depreciacin
Seguros
Recuperacin
P
Materiales
Salarios
Servicios
Depreciacin
Seguros
Admon. y
Marketing
COSTO TOTAL DE LA PRODUCCIN EN BIOPROCESOS
ESTRATEGIAS PARA EL DISEO DE BIORREACTORES EN
FUNCIN DE LOS FACTORES DETERMINANTES DEL
COSTO EN EL PROCESO
1) I+D
Maximizar la velocidad del cambio de escala
Maximizar la reproducibilidad de operacin del
reactor
Minimizar el riesgo de contaminacin
ESTRATEGIAS PARA EL DISEO DE BIORREACTORES EN
FUNCIN DE LOS FACTORES DETERMINANTES DEL
COSTO EN EL PROCESO
2) Materiales de partida
Maximizar la conversin del S
Maximizar el rendimiento del P
ESTRATEGIAS PARA EL DISEO DE BIORREACTORES EN
FUNCIN DE LOS FACTORES DETERMINANTES DEL
COSTO EN EL PROCESO
3) Operacin del biorreactor
Maximizar la productividad volumtrica para
minimizar el tamao del reactor
Optimizar las condiciones del reactor
Maximizar la concentracin del
catalizador
Maximizar la productividad especfica y
rendimiento del producto (mejora de
cepa y optimizacin del medio de
cultivo)
ESTRATEGIAS PARA EL DISEO DE BIORREACTORES EN
FUNCIN DE LOS FACTORES DETERMINANTES DEL
COSTO EN EL PROCESO
4) Recuperacin del producto
Maximizar la concentracin de producto que
abandona el reactor
Bioprocesos o tecnologa de las fermentaciones:
Clulas microbianas
Clulas animales
Clulas vegetales

Produccin de
metabolitos primarios:
cido lctico
cido actico
Glicerol
Acetona
cidos
orgnicos
Aminocidos
Vitaminas
Bioprocesos o tecnologa de las fermentaciones:
Produccin de
metabolitos
secundarios:
Penicilina
Estreptomicina

Produccin de
anticuerpos
monoclonales,
vacunas,
protenas
recombinantes

Bioprocesos o tecnologa de las fermentaciones:
Produccin de
enzimas:
Exocelulares:
amilasas,
pectinasas,
proteasas
Intracelulare
s: invertasa,
asparginasa

VENTAJAS DESVENTAJAS
Molculas complejas
(protenas) no son producidas
por mtodos qumicos
Fcil de contaminar
Rendimientos altos Separaciones complejas
Condiciones de
procesamiento estriles
Grandes volmenes de
agua
Reacciones catalticas Bioprocesos lentos
comparados con los
qumicos
No ismeros
Bioprocesos: produccin de compuestos
orgnicos
BIOPROCESOS
SUSTRATOS
REACCIONES
BIOQUMICAS
INTRACELULARES
BIOMASA
METABOLITOS
MACROMOLCULAS
EXTRACELULARES
RELACIN DEL CRECIMIENTO MICROBIANO
CON LOS BIOPROCESOS
TIPO DE CLULAS TAMAO (m)
Bacterias 1 x 2
Levaduras 7 x 10
Animales 40 x 40
Plantas 100 x 100
Tres formas de crec MO en un medio:
Batch
Fed-
Batch
Continuo
MO inoculados en un
volumen fijo
Los nutrientes son
consumidos
Productos (metabolitos y
biomasa) son acumulados

Fases del crec.
Microbiano?
Metabolitos crecen en la
fase estacionaria:
antibiticos
Se detienen antes de la
fase de muerte

BATCH.
FED-BATCH
Adicin graduada de nutrientes
Aumenta el volumen
Produccin de levadura de pan
CONTINUO
BIORREACTORES
No
aspticos
Fermentaciones alcohlicas
Tratamiento de residuos
Aspticos
Antibiticos
Vitaminas
Polisacridos
Protenas recombinantes
El diseo constituye un desafo para la
ingeniera de reactores y bioingeniera
BIORREACTORES
BIORREACTOR DE COLUMNA
DE BURBUJA
BIORREACTORES
BIORREACTOR
DE LECHO
EMPACADO CON
RECIRCULACIN
DEL MEDIO
BIORREACTORES
BIORREACTOR LECHO
FLUIDIZADO
BIORREACTORES
BIORREACTOR CON
AGITACIN
BIORREACTORES
BIORREACTOR TIPO
TORRE
BIORREACTORES
DIGESTOR
ANAEROBIO
DISEO DE BIORREACTORES
Sistema multifsico
No contaminantes
No evaporacin
Cuidar los niveles de oxgeno
Los parmetros: pH,
Temperatura
DISEO DE BIORREACTORES
Todos los materiales que estn en contacto con el medio
de cultivo o MO: anticorrosivos
No txicos: inhibicin del crecimiento
Resistentes a la esterilizacin = vapor
Las partes removibles no deben ser rgidas
Inspeccin visual del medio

ACERO INOXIDABLE 316: pelcula de xido de cromo y
molibdeno
ESCALAMIENTO
Biorreactores a escala laboratorio: 5 10 L
Biorreactores a escala planta piloto: 100-10,000 L
Biorreactores a escala industrial: 20,000 400,000 L
FUENTES DE CARBONO FUENTES DE NITRGENO
Glucosa: glucosa monohidratada,
almidn hidrolizado
Centeno
Lactosa: lactosa pura, suero de
leche
Harina de cacahuate
Almidn: harina de avena, de
cebada, de centeno de soya,
Harina de avena
Azcar: Melaza de betabel, de
caa, azcar morena o refinada
Suero de leche
Frmacos: medios especiales
MONITORIZACIN DE LA FERMENTACIN
FSICOS QUMICOS BIOLGICOS
TEMPERATURA pH Biomasa
PRESIN Oxgeno disuelto Enzima
PESO DEL REACTOR CO2 disuelto Composicin de la
biomasa: ADN, ARN,
PROTENA
NIVEL DEL LQUIDO Y DE
ESPUMA
Potencial redox VIABILIDAD
VELOCIDAD DEL AGITADOR Composicin del
gas de salida
Morfologa
POTENCIA CONSUMIDA Conductividad
CAUDAL DEL GAS Y DEL
MEDIO
Composicin del
medio
VISCOSIDAD DEL CULTIVO
CONTENIDO EN GAS
BIOSENSORES
Clulas inmovilizadas
Biosensores: enzimas, anticuerpos y clulas para una variedad
de sustratos y productos
Glucosa, sacarosa, etanol, cido actico, amoniaco, penicilina,
urea, aminocidos
TRANSFERENCIA DE OXGENO
Fermentaciones aerobias
Las molculas de oxgeno = resistencia al transporte = clulas
TRANSFERENCIA
Interior de la burbuja a interfase gas-
lquido
MOVIMIENTO
Interfase gas-lquido

DIFUSIN
Pelcula lquida inmvil: rodea la
burbuja
TRANSFERENCIA DE OXGENO
TRANSPORTE
Hacia el interior del fluido
DIFUSIN
Pelcula lquida inmvil: rodea a la
clula
MOVIMIENTO
Interfase lquido-clula
TRANSFERENCIA DE OXGENO
DIFUSIN
La clula (partculas)
La difusin del slido hasta
cada clula
TRANSPORTE
A travs del citoplasma
hasta el lugar de la
reaccin
TRANSFERENCIA DE OXGENO
EN UN FERMENTADOR



La mayor resistencia a la transferencia de oxgeno
corresponde a la pelcula lquida que rodea las burbujas de gas


Aspectos a tomar en cuenta referentes al diseo y
operacin de fermentadores: transferencia de
oxgeno

Burbujas
Agitacin: generalmente se usa para cultivos aerobios
Adicin de aire (regulada)
Tamao de la burbuja de aire

FERMENTADOR
Aspectos a tomar en cuenta referentes al diseo y
operacin de fermentadores: transferencia de
oxgeno

Agentes antiespumantes
Protenas, cidos grasos, polisacridos
Problemas: MO contaminantes, impide salida de gases y
prdida de volumen
Anti-espumantes a base de slice



Aspectos a tomar en cuenta referentes al diseo y
operacin de fermentadores: transferencia de
oxgeno

Temperatura
Afectan la solubilidad del oxgeno

Presin de gas y presin parcial de oxgeno
Ley de Henry?
Fermentaciones
Aumento en la transferencia de materia
Aire
enriquecido
con oxgeno
Oxgeno puro
Aumento en
la solubilidad
con aire
comprimido
Aumento de costo
Inhibicin por presiones parciales de oxgeno elevadas
PROCESOS DE SEPARACIN

Etapas fsicas despus de la fermentacin
Proceso de recuperacin (downstream processing)
Proceso de
recuperacin
Aislamiento Purificacin
PROCESOS DE SEPARACIN

PRODUCTO:
CLULAS AA VITAMINAS
A.
ORGNICOS
ENZIMAS VACUNAS
SOLVENTES PROTENAS ANTICUERPOS
PROCESOS DE SEPARACIN

Depende de:
Tamao de la
molcula
Complejidad
qumica
metodologa
adecuada?
EJEMPLO:
La planta Eli Lilly
Produce insulina humana (Humulin)
Aproximadamente 90% de las 200 operaciones son
procesos de recuperacin
Son costosos


PROCESOS DE SEPARACIN

PROCESOS DE SEPARACIN
SEPARACIN DEL
BIOREACTOR
FASE LQUIDA
FASE SLIDA
CONCENTRACIN
O PURIFICACIN
PASOS PROCESOS DE SEPARACIN
SEPARACIN Filtracin
Centrifugacin
Floculacin
CONCENTRACIN Solubilizacin
Extraccin
Proceso trmico
Filtracin con membranas
Precipitacin
PURIFICACIN Cristalizacin
Cromatografa (por
intercambio inico o en gel)
Destilacin
DESHIDRATACIN Liofilizacin
Aspersin
Lecho empacado
FILTRACIN
CENTRFUGA
DE DISCOS
DISPERSIN DE CLULAS EN UN
HOMOGENEIZADOR DE ALTA PRESIN
CROMATOGRAFA
BIOPROCESS AND
BIOSYSTEMS
ENGINEERING