TINCIONES HEMATOLOGICAS

Para poder diferenciar los componentes de un extendido de sangre es necesario

teirlos.
Los colorantes ms comnmente usados para las tinciones hematolgicas son los
derivados de la anilina: colorantes de romanowsky.
La tincin de tipo romanowsky es muy importante en el laoratorio de hematolog!a
por"ue con ella puede otenerse una gran cantidad de informacin a partir de un
frotis sangu!neo ien teido.
Consiste en:
#$ul de metileno y sus productos de oxidacin %a$ul &
'osina (
La accin cominada de estos colorantes produce el efecto romanowsky.
Las propiedades de tincin de las tinciones de romanowsky dependen de:
)el enlace de los colorantes a las estructuras "u!micas
)e las interacciones del a$ul y la eosina (
Eemplos de tinciones e!ecto romanowsky:
*right
*right + giemsa
Leishman
,ay grumwald
-enner
,ay grunwald.giemsa
Se"#n s$ composicin %$&mica se distin"$en tres "r$pos de colorantes:
Los cidos como la eosina/
Los sicos0 como el a$ul de metileno y
Los neutros0 cominaciones de uno cido y uno sico "ue dan tinciones
policromas.
Los colorantes cidos y sicos se encuentran como sales y su caracter!stica
cida o sica la da su fraccin cromog1nica %generadora de color& al tener carga
positiva o negativa.
'n un colorante cido0 la fraccin cromog1nica posee carga negativa %colorante
aninico&.
'n un colorante sico0 la fraccin cromog1nica posee carga positiva %colorante
catinico&.
)urante la coloracin las fracciones cromog1nicas se ligan a componentes
tisulares de carga contraria.
1
Metacromasia: una coloracin es metacromtica cuando tie selectivamente
determinadas estructuras de otro color distinto al colorante. %a$ul de metileno0 a$ul
de toluidina0 tionina&
'olicrom(tica: 2ami1n hay cominaciones de colorantes "ue dan lugar a
tinciones pol!cromas.
'anptica: 3na coloracin es panptica cuando se utili$an sucesivamente
sustancias colorantes neutras.
'ancrmica: cuando se aplican todas las sustancias colorantes neutras 4untas.
)itales: son a"uellas "ue se efectan sore c1lulas "ue estn vivas0 mediante la
introduccin de un colorante en la circulacin de un organismo vivo.
S$pra*ital: una tincion supravital es a"uella "ue se reali$a sore c1lulas o te4idos
vivos0 pero "ue estn aislados del organismo del "ue proceden. Las tinciones no
vitales se reali$an sore c1lulas muertas. La coloracin de c1lulas muertas
re"uiere un proceso previo de fi4acin0 "ue tiene por o4eto el mantener inalterada
su estructura y el adherirlas firmemente a la superficie del portao4etos. La fi4acin
puede reali$arse mediante calor0 aun"ue haitualmente se reali$a con etanol o
metanol.
'l mecanismo por el cual determinados componentes de la estructura celular se
tien por ciertos colorantes y no por otros depende de:
)iferencias en la estructura "u!mica.
)iferencias de afinidad.
Las sustancias asfilas recien este nomre por"ue muestran afinidad por los
colorantes sicos %o alcalinos&.
Las sustancias acidfilas tienen afinidad por los colorantes cidos.
Los colorantes son sensi+les a la concentracin inica de protones ,p-.
Las distintas estructuras celulares se teirn con el colorante de ph antagnico
#s!:
Los colorantes cidos teirn las estructuras sicas %hemogloina0 grnulos
de los eosinfilos llamados as! por su atraccin a la eosina.&.
Los colorantes sicos teirn las estructuras cidas %adn0 arn citoplasmtico&
denominadas estructuras asfilas.
Las estructuras neutrfilas son a"uellas "ue tienen afinidad por amos
colorantes.
5olorante cido 5olorante sico
6raccin cromog1nica %.& 6raccin cromog1nica%7&
%aninico& %catinico&
2
'osina #$ul de metileno
Para sustancias cidofilas Para sustancias asfilas
%7& %.&
8rupos sicos %hemogloina0 8rupos cidos
granulacin eosinfilos& %ncleo0 citoplasma0 riosomas&
)esarrollan color ro4o )esarrollan color a$ul
TINCI/N 0E 12IGHT3
Metdica
'xtracto de las t1cnicas de tincin hematolgica de la casa Panreac.
Fundamento
'l colorante utili$ado es una solucin de eosina y una me$cla de a$ul de metileno
%del 9: al ;9<& y a$ur = %del >: al ?9<& 4unto con otros derivados del alcohol
met!lico.
)ada la presencia de metanol en la composicin del colorante0 no es necesario un
paso previo de fi4acin antes de la coloracin.
@lo si se van a guardar las extensiones sin teir de un d!a para otro
precederemos a su fi4acin para evitar el deterioro del frotis.
Material necesario
,icroscopio ptico.
5ristali$ador.
Puentes de tincin.
Pipetas Pasteur con chupete.
6rasco lavador.
8uantes.
3
2uos de ensayo.
Reactivos
@olucin de eosina.a$ul de metileno segn *right.
@olucin tampn pA ;0?.
#ceite de inmersin.
Muestra
@angre capilar fresca o venosa anticoagulada. Los anticoagulantes ms
adecuados son la heparina y el ')2#.
Tcnica
Beali$ar un frotis sangu!neo muy fino. )e4ar secar al aire.
@ore la extensin colocada hori$ontalmente en el puente de tincin verter > ml
de eosina.a$ul de metileno. )e4amos actuar un minuto y lavamos con solucin
tampn pA ;0?. )e4amos escurrir y secar en posicin vertical.
Cnmediatamente antes de su empleo y en un tuo de ensayo0 diluimos :09 ml.
de eosina.a$ul de metileno con :09 ml de solucin tampn pA ;0?. ,e$clamos
ien y curimos con esta dilucin la extensin. 2eimos durante D.9 minutos y
lavamos con agua del grifo. Eolvemos a lavar con solucin tampn pA ;0?.
)e4amos escurrir y secar en posicin vertical.
Lectura de resultados
)epositamos una gota de aceite de inmersin y oservamos con el o4etivo de
>:: x.
Las c1lulas se oservan coloreadas de la misma manera "ue con la tincin de
8iemsa.
Gl+$los +lancos te4idos con colorante de 1ri"-t

LCF6G5C2G =#@H6CLG 'G@CFH6CLG F'32BH6CLG
4
TINCI/N 0E MA5 G26N1AL07GIEMSA , TINCI/N 'AN/'TICA.
'l empleo cominado de los colorantes may grunwald y giemsa se conoce con el
nomre de tincin panptica de may grunwald giemsa.
@e asa en el uso de soluciones preparadas a ase de colorantes de acentuado
poder policromatfilo y metacromtico
6undamento:
@e asa en el agregado de la solucin de may grunwald formada por eosinato de
a$ul de metileno en alcohol met!lico 0 la "ue fi4a el extendido y tiene afinidad por
los citoplasmas.
Luego se agrega el colorante giemsa diluido %en el momento de reali$arse la
coloracin&0 esta constituido por a$ures "ue son derivados por oxidacin del a$ul
de metileno. 2iene afinidad por los ncleos y ciertas granulaciones.
La eosina es un colorante cido por lo tanto tie los componentes acidfilos de las
c1lulas.
'l a$ul de metileno es un colorante sico por lo tanto se une a las fracciones
asfilas
's importante respetar las condiciones de la coloracin ya "ue variaciones de ph
pueden alterarla. 'n esta coloracin se traa4a a ph neutro o ligeramente alcalino.
@i se traa4a a ph cido0 har mayor cantidad de sustancias cargadas
positivamente y se asorer mayor cantidad de eosina. Los extendidos ad"uieren
una tonalidad ro4isa.
@i el ph es muy sico0 har mayor fi4acin de a$ul de metileno y se exagerarn
los colores a$ules.
May "r$nwald
5omina la eosina %colorante cido& con el a$ul de metileno %colorante sico&
'l proceso de tincin empie$a con la fi4acin con metanol cuya accin es fi4ar la
pel!cula de sangre por precipitacin y adherencia de las prote!nas celulares al
portao4etos de vidrio.
La tincin efectiva se inicia con la adicin de un amortiguador al colorante lo "ue
da lugar a su ioni$acin.
La eosina y el a$ul de metileno son sensiles a camios de ph de las diferentes
estructuras celulares.
'l reactivo en medio acuoso tiene la accin de diferenciar tiiendo:
sustancias acidfilas color ro4o
sustancias asfilas color a$ul
5
ncleo se colorean a$ul
Los grupos cidos de citoplasma %estructuras asfilas&

riosomas afinidad por colorantes sicos
2ienen apetencia por el colorante sico tincin por a8$l de metileno

Los grupos sicos de mol1cula de se colorea ro4o
hemogloina %estructura acidfila&
afinidad por colorantes cidos
tienen apetencia por el colorante cido tincin por la eosina
Giemsa
derivados por oxidacin del a$ul de metileno %metiltionina& a$ures %a00c&
's responsale de la coloracin prpura de la cromatina leucocitaria y granulaciones
citoplasmticas %a$urfilas&

Gservadas al microscopio0 las c1lulas presentan las siguientes coloraciones.
Aemat!es: color rosado
8rnulos neutrfilos: de rosa a lila
8rnulos eosinfilos: de ro4o a anaran4ado
8rnulos asfilos: a$ul violceo oscuro
5itoplasma de neutrfilos: rosa claro
5itoplasma de linfocitos: a$ul celeste claro
5itoplasma de monocitos: a$ul grisceo
Fcleo de neutrfilos y linfocitos: violeta oscuro
Fcleo de monocitos: prpura a$ulado algo ms claro "ue los anteriores
6
'ritrocitos policromatfilos: a$ul violeta
Punteado asfilo: a$ul oscuro
5uerpos de howell yollie: ro4o prpura
Pla"uetas: prpura oscuro o violeta con un halo a$ul claro a su alrededor.
La coloracin celular es muy variale en cuanto a tonalidades0 dependiendo del
tiempo de tincin y de los lotes de colorantes0
Ca$sas de error
2incin demasiado a$ulada:
. 'xtensin demasiado gruesa
. 'xcesivo tiempo de tincin
. Lavado inadecuado
. #lcalinidad del colorante0 del agua o tampn
2incin demasiado rosada:
. 2incin insuficiente
. 'xcesivo tiempo de lavado
. #cide$ del colorante o tampn
Gtras causas:
. 3tili$acin de portas sucios
. @ecado del colorante durante el periodo de tincin
. Lavado inadecuado durante la tincin
. Presencia de polvo en el portao4eto
. ,ala filtracin del colorante antes de su uso
. Ph impropio del colorante o los diluyentes
. 'l agua destilada no es siempre neutra
. Precipitacin del colorante sore el port.o4eto deido a inadecuado lavado o
uso del colorante "ue no ha sido filtrado adecuadamente
2incin cida: los eritrocitos se tien ien pero los leucocitos se tien muy plidos
o no se tien.
2incin sica o alcalina: los eritrocitos se tien plidos y el ncleo de los
leucocitos excesivamente a$ules.
)ee corregirse el ph del agua destilada o amortiguador.
Ad*ertencias:
>.. limpie$a del porta.o4etos
para evitar coloraciones defectuosas deen utili$arse siempre porta.o4etos
cuidadosamente limpios0 desengrasados y secos. )ee evitarse el contacto de
los dedos con la superficie destinada a la extensin.
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?.. agua destilada
las coloraciones defectuosas de extensiones de sangre se deen casi siempre
al empleo de agua destilada con exceso de cido carnico. Por eso hay "ue
emplear agua reci1n destilada para diluir los colorantes y para lavar las
extensiones sangu!neas. 'l ph adecuado es 9.I
D.. preparacin de la extensin
las extensiones una ve$ secas deen fi4arse lo antes posile %no ms de ?J
horas& para luego ser teidas por el colorante de eleccin. @lo se puede usar
edta0 nunca utili$ar otro anticoagulante para hacer el frotis.
J.. m1todo de coloracin
no teir nunca las preparaciones cerca de humos de cidos o lcalis fuertes.
la tincin en extensiones sore porta.o4etos se reali$a en general de tal
manera "ue 1sta "ueda cuierta por la solucin colorante con una capa de ? cm.
)e espesor pero evitando "ue se derrame por los ordes .si se aplica una
cantidad demasiado pe"uea de solucin de colorante se pueden producir
precipitados del colorante.
9..dilucin del colorante giemsa
es importante "ue la dilucin del giemsa dee ser preparada en el instante en
"ue se va a usar y 4ams antes0 dado "ue el colorante produce su efecto mximo
en el momento en "ue la solucin stock se adiciona al agua.
K.. lavado de las extensiones
sin volcar el colorante0 eliminando del porta.o4etos mediante un reve y
vigoroso chorro de agua. @i se volcara antes de lavar0 se adherir!a al frotis el
precipitado "ue siempre se forma en las me$clas de colorantes y del "ue una
parte se acumula en la superficie en forma de pel!cula irisada. 'l lavado no dee
ser prolongado deido a "ue el agua decolorar!a los elementos recientemente
teidos. 5onviene efectuarlo con agua destilada.
;.. secado
inmediatamente despu1s de efectuado el lavado escurrir el agua colocando el
porta.o4etos en posicin casi vertical0 limpiando previamente su parte posterior
con un lien$o.


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