CIDOS NUCLEICOS

32

CIDOS NUCLEICOS
Los cidos nucleicos estn formados por nucletidos
Los cidos nucleicos, cido desoxirribonucleico DNA y cido ribonucleico RNA, son macromolculas
encargadas de almacenar y transferir la informacin gentica. Ambos estn formados por unidades
llamadas nucletidos, cuya representacin aparece a continuacin.

Al analizar el producto de la hidrlisis total de un nucletido se obtienen siempre tres componentes: una
pentosa, una base nitrogenada y un fosfato. La unin de estas tres molculas en relacin 1:1:1 constituye
un nucletido, unidad bsica o monmero de los cidos nucleicos.
La pentosa puede ser: ribosa o desoxirribosa. La diferencia entre ambas reside en que el grupo hidroxilo
(-OH) del carbono 2 de la ribosa es sustituido por un hidrgeno en la desoxirribosa. Los nucletidos con
ribosa (ribonucletidos) son los constituyentes del RNA, mientras que aquellos que tienen desoxirribosa
(desoxirribonucletidos), constituyen el DNA. Los carbonos (C) de las pentosas se representan como C1
, C2, etc., a diferencia de las bases nitrogenadas que se designan como C1, C2, etc.

Las bases nitrogenadas, son una familia de molculas cclicas derivadas de dos anillos bsicos: purina y
pirimidina. El DNA contiene dos bases pricas, adenina (A) y guanina (G) y dos bases pirimidnicas
citosina (C) y timina (T). Las bases pricas son las mismas en el RNA y DNA, sin embargo en el RNA las
bases pirimidnias, son la citosina y el uracilo (U)

CIDOS NUCLEICOS
33

Una base, una pentosa y un fosfato forman un nucletido
En la formacin de un nucletido, la base nitrogenada se une al C 1 de la pentosa mediante un enlace N-
glucosdico mientras que el grupo fosfato se une al C 5 de la pentosa mediante un enlace ster.

Los nucletidos pueden contener uno, dos o tres fosfatos, denominndose respectivamente nucletido
mono, di o tri-fosfato.
Algunas funciones de los nucletidos
Una funcin de los nucletidos es el almacenamiento de energa qumica, logrado a travs de
enlaces de alta energa.

El ATP es el nucletido ms usado a nivel celular, aunque el UTP, GTP, CTP y TTP se emplean tambin
como donadores de energa en reacciones especficas y en la sntesis de cidos nucleicos.
Otra funcin de los nucletidos es formar parte de las coenzimas.
Muchas coenzimas, como el NAD, NADP y el FAD son dinucletidos que participan en reacciones redox.
Estas molculas las estudiaremos ms adelante. La frmula de la coenzima A aparece abajo.

CIDOS NUCLEICOS
34

Muchas molculas sealizadoras especficas en la clula son nucletidos.
Una de las molculas con funcin de segundo mensajero ms comn es el AMP cclico (AMPc). El AMPc
tiene funciones reguladoras en prcticamente todas las clulas animales, modificando actividades
enzimticas en el interior celular, en respuesta a cambios extracelulares. El AMPc se forma a partir del
ATP por la enzima adenilato ciclasa, que cataliza la esterificacin del fosfato 5 con el -OH 3. Esta
enzima est asociada a la cara interna de la membrana plasmtica.


Los nucletidos se unen entre s para formar polinucletidos
Los cidos nucleicos, DNA y RNA, son cadenas de
desoxirribonucetidos o ribonucletidos respectivamente, unidos
entre s por enlaces fosfodister entre los C 5y 3 de las pentosas de
nucletidos consecutivos.
De esta forma el extremo 5 de la cadena polinucleotdica tendr un
grupo fosfato libre y el extremo 3 un grupo hidroxilo libre.
La secuencia lineal de los nucletidos de un cido nucleico se
abrevia con la letra correspondiente a la abreviatura de cada base
nitrogenada comenzando desde la izquierda, por con el extremo 5de
la cadena.
As, el extremo 5 hace referencia al primer nucletido de la cadena y
el extremo 3 al ltimo. La secuencia de bases constituye lo que se
denomina estructura primaria y se lee en sentido 5-3de la cadena
de nucletidos.

El DNA est formado por dos cadenas de desoxirribonucletidos
En 1953 Watson y Crick publicaron un modelo de la estructura tridimensional del DNA y concluyeron que
consista en dos cadenas de polinucetidos enrolladas alrededor del mismo eje, formando una doble
hlice.
La estructura primaria del DNA est definida por la secuencia de las bases en la cadena del
polinucletido. Conocer esta secuencia de bases implica poder descifrar la informacin gentica del DNA.
Las principales caractersticas de la molcula son:
La polaridad de estas dos cadenas es opuesta, es decir el extremo 5de una cadena coincide
con el extremo 3de la otra: son antiparalelas.
La estructura fosfato-pentosa conforma el exterior de la hlice, mientras que las bases se sitan
hacia el interior formando un ngulo recto con el eje de la hlice. Esta disposicin permite que
las bases de ambas cadenas queden enfrentadas en el interior de la doble hlice.
CIDOS NUCLEICOS
35

Las dos hebras de la hlice se mantienen unidas por los puentes de hidrgeno entre las bases
complementarias: la adenina forma dos puentes de hidrgeno con la timina y la guanina forma
tres con la citosina, como se observa a continuacin.



Distintos factores que contribuyen a estabilizar la doble hlice
a. Puentes de hidrgeno entre las bases complementarias. Los puentes de hidrgeno son interacciones
dbiles pero estn presentes en gran cantidad, lo que permite estabilizar la estructura secundara del
ADN.
b. Interacciones hidrofbicas. Las bases son molculas aromticas planas y de naturaleza hidrofbica.
Esta caracterstica permite interacciones hidrofbicas entre las bases enfrentadas de cada hebra.
c. Cargas de los grupos fosfatos. Los grupos fosfatos tienen carga negativa que se encuentran en el
exterior de la molcula, donde pueden interaccionar con el agua, una molcula polar sin carga.
El DNA se desnaturaliza por efecto de la temperatura
Las bases nitrogenadas estn orientadas hacia el centro de la molcula. La especificidad en el
apareamiento de las bases se conoce como complementariedad. Las bases de una de las cadenas de
polinucletidos son siempre complementarias de las bases de la otra cadena.
CIDOS NUCLEICOS
36

Temperaturas de 80 90C, as como valores de pH extremos, provocan la desnaturalizacin del DNA
que consiste en la ruptura de los puentes de hidrgeno entre bases apareadas y la prdida de las
interacciones hidrofbicas entre las bases apiladas. Como resultado de este proceso la doble hlice de
DNA se desenrolla.
Cuando la temperatura o las condiciones de pH retornan a valores fisiolgicos, los segmentos de DNA
desapareados vuelven a enrollarse, es decir, sus bases complementarias se aparean nuevamente y se
obtiene la estructura de doble hlice. Este proceso se denomina renaturalizacin del DNA.
En el proceso de desnaturalizacin los enlaces covalentes del DNA se mantienen inalterados.
Los DNA de distintos orgenes tienen una temperatura de desnaturalizacin o temperatura de fusin
caracterstica que depende de la composicin de bases. Cuanto ms alto sea el porcentaje de bases G-C
mayor ser la temperatura de fusin. Esto se debe a que el par de bases G-C con tres puentes de
hidrgeno es ms estable que el par A-T y por lo tanto requiere ms energa calrica para disociarse.
La transicin de DNA de doble hlice a monohebra puede detectarse por el efecto hipercrmico, que se
debe al incremento de absorcin de luz UV por las bases del DNA.



Curva de Fusin. La absorbancia a 260nm de una
solucin de DNA aumenta cuando se desnaturaliza.
Curvas de Fusin de diferentes DNA con distinto
contenido de G+C
El DNA est asociado a protenas que permiten su empaquetamiento
Tanto en procariotas como en eucariotas el DNA se condensa, proceso que permite una adecuacin a las
dimensiones de las clulas. Por ejemplo, el DNA de la bacteria E. Coli, que forma un slo cromosoma
debe condensarse unas 1000 veces. En eucariotas este proceso es ms evidente, debido al mayor
contenido de DNA de sus clulas y consiste en el enrollamiento de la doble hlice sobre s misma, para
dar lugar a fibras ms cortas y gruesas: DNA superenrollado. El DNA con grupos fosfatos cargados
negativamente se asocia con molculas cargadas positivamente, para estabilizar su estructura. Estas
molculas pueden ser protenas denominadas histonas, a otras protenas bsicas.
Las histonas son protenas de pequeo tamao, con una alta proporcin de aminocidos bsicos que a
pH neutro tienen carga positiva (lisina o arginina), lo que les permite interaccionar con el DNA,
independientemente de la secuencia de nucletidos. La doble hlice se va enrollando a intervalos
regulares alrededor de un complejo de histonas, dando lugar a los denominados nucleosomas. Cada
nucleosoma, est formado por un segmento de DNA superenrollado de unos 200 pares de bases sobre
un octmero de histonas. Las histonas son de cinco tipos: H1, H2A, H2B, H3 y H4.
Un nuclesoma est formado por dos molculas de las histonas H2A, H2B, H3 y H4 segn se observa en
la figura. La histona H1 se asocia con el DNA internucleosmico y favorece la aproximacin de
nucleosomas adyacentes.

CIDOS NUCLEICOS
37


Sin embargo el DNA se debe condensar mucho ms para adaptarse al tamao celular. En la figura se
resumen las sucesivas etapas de condensacin del DNA, desde la doble hlice a los cromosomas. Los
nucleosomas constituyen las unidades bsicas de la cromatina.

El RNA est formado por ribonucletidos
Los nucletidos del RNA se denominan ribonucletidos y se unen entre s del mismo modo que se unen
los desoxinucletidos en el DNA: los nucletidos se unen por enlaces fosfodister entre el fosfato C5de
la pentosa y el OH del C 3 de otra pentosa. Las molculas de RNA, en general constan de una cadena
nica polinucleotdica y si bien no adoptan estructura de doble hlice como en el DNA, pueden tener
regiones de apareamiento de bases complementarias en la misma hebra, como se muestra ms adelante
en rRNA.
Si bien en algunos los casos el RNA constituye el material gentico, como en algunos virus, las funciones
del RNA estn asociadas a la sntesis de protenas.
Los principales tipos de RNA son el mensajero (mRNA), el ribosmico (rRNA), el de transferencia (tRNA)
y el nuclear de pequeo tamao (snRNA). En la tabla se resumen las funciones de cada tipo de RNA.



CIDOS NUCLEICOS
38

RNA mensajero: transportador de la informacin gentica
El mRNA es una nica cadena polinucleotdica que resulta de la transcripcin de un gen, es decir de un
segmento de DNA. La funcin del mRNA es transportar la secuencia de nucletidos de un gen
determinado hasta el ribosoma, donde ocurre la traduccin del mRNA en el proceso de sntesis proteica.
El RNA ribosmico asociado a protenas forma los ribosomas
Los ribosomas estn formados por protenas asociadas a molculas de RNA. En el cuadro que aparece
abajo se indican las diferencias entre ribosomas eucariotas y procariotas as como el tamao de los rRNA
que los conforman. El rRNA contribuye a dar al ribosoma una estructura capaz de acomodar al mRNA y a
la protena durante su proceso de sntesis. Los ribosomas de las clulas eucariotas son muy similares a
las procariotas en cuanto a diseo y funcin. Ambos estn formados por una subunidad grande y una
pequea que se acoplan formando un ribosoma.

Observe en la figura que aparece a continuacin las estructuras espaciales complejas que adoptan los
rRNA, donde se ve la alternancia de regiones apareadas y no apareadas en forma de bucles.

RNA de transferencia: adaptador entre los nucletidos y los aminocidos
Los tRNA son molculas de tamao pequeo que tienen aproximadamente unos 80 nucletidos. Estas
molculas se pliegan formando una estructura tridimensional compleja, presentan 4 segmentos en doble
hlice, que en una representacin sencilla tiene un parecido con una hoja de trbol, segn se ve en la
figura. La forma en hoja de trbol se pliega sobre si misma y adopta una estructura ms compacta y
estable en forma de L, tambin representada en la figura.
CIDOS NUCLEICOS
39




Modelo de tRNA en forma de hoja de trbol. Modelo de tRNA en forma de L.
Las principales caractersticas de la molcula de tRNA se resumen a continuacin:
Regin anticodn, triplete de bases complementario al codn de la molcula de mRNA.
Extremo 3, es una regin corta de tRNA de simple hebra, que interviene en la unin de la
molcula de tRNA con el aminocido correspondiente.
Los tRNA contienen bases que no son comunes en otros RNA como la pseudouridina,
dihidrouridina e inosina. Estas bases se generan por modificaciones de las bases comunes,
posteriores a la sntesis del tRNA.
El extremo 5 presenta una guanina fosforilada.
snRNA: pequeas molculas de RNA nuclear
El snRNA (small nuclear) contiene pocos nucletidos y est asociado a protenas formando complejos. Su
localizacin es en el ncleo celular y como se ver ms adelante estn implicados en el proceso de
maduracin del mRNA: participan en el corte de intrones y ensamble de exones.
TECNOLOGA DEL DNA RECOMBINANTE
El desarrollo de la tecnologa de DNA recombinante o ingeniera gentica, ha cambiado el concepto de la
biologa dado que ha permitido, no solo comprender a nivel molecular los seres vivos, sino modificar en
forma controlada su informacin gentica.
Los trabajos de Watson y Crick que permitieron descifrar la estructura del DNA en los aos -50 fueron el
punto de partida para el desarrollo de esta nueva rama de la biologa. Al mismo tiempo se han dado
importantes desarrollos cientficos que son fundamentales en la tecnologa del DNA recombinante:
1. La capacidad de introducir DNA en una clula, proceso conocido como transformacin, as
como la seleccin de las clulas transformadas.
2. Purificacin de DNA con altos rendimientos.
3. Descubrimiento y purificacin de enzimas de restriccin y enzimas de modificacin del DNA.
Bsicamente con estos tres procedimientos se han podido modificar genticamente organismos como
bacterias, plantas y animales con el objetivo que, tras la introduccin de un gen forneo no presente en
su genoma, el organismo sea capaz de expresar la protena codificada por dicho gen.
Si bien existen numerosos ejemplos de las aplicaciones biotecnolgicas derivadas de la tecnologa del
DNA recombinante, solo vamos a hacer referencia a los procedimientos ms usados para generacin de
plantas transgnicas.
CIDOS NUCLEICOS
40

El principal objetivo de la biotecnologa vegetal es la generacin mediante ingeniera gentica de nuevas
variedades de plantas que presentan alguna caracterstica que mejore su valor frente a la especie ya
existente. Por ejemplo, plantas resistentes al ataque de diferentes patgenos y/o resistentes a
determinados herbicidas, asi como plantas capaces de tolerar a condiciones adversas de cultivo.
Un ejemplo particular del uso de las tcnicas de DNA recombinante es el desarrollo de lneas de maz
transgnico. Estas plantas transgnicas tienen la capacidad de producir molculas con accin insecticida
en forma endgena y se denominan maz Bt. La resistencia al ataque de insectos como los taladros fue
lograda por la introduccin en el genoma del maz del gen que codifica para la protena CryIAb. La fuente
natural de esta protena es una bacteria, Bacillus thuringensi, que ha sido empleada en forma de
aspersin para el control de estos insectos en el cultivo de maz desde hace ms de 30 aos.
Para lograr las plantas transgnicas se debe introducir primero el gen de inters en un vector: un
plsmido. Los plsmidos son DNA extracromosmico que se encuentran con frecuencia en bacterias y se
usan en ingeniera gentica para clonar el gen de inters, obtenindose un plsmido recombinante.
Posteriormente el plsmido recombinante se usa para ser transferido a la clula hospedadora.
Para llevar adelante la introduccin del gen Bt al vector es necesario:
a) cortar el DNA de inters con enzimas de restriccin, en nuestro ejemplo el gen Bt,
b) cortar el plsmido vector con enzimas de restriccin para incorporar el gen en cuestin,
c) unir el DNA de inters al plsmido vector.
Las enzimas de restriccin o endonucleasas son enzimas de origen bacteriano, que reconocen
secuencias especficas en el DNA e hidrolizan el enlace pentosa-fosfato, produciendo un corte en la
molcula de DNA. El esqueleto pentosa-fosfato se rompe entre dos bases en una hebra y en otras dos
bases equivalentes en la otra hebra lo que puede generar un corte a distinta altura en cada hebra y
formar extremos cohesivos como se ve en la figura.

En la actualidad se conocen cientos de enzimas de restriccin y en la mayora de los casos la secuencia
que se reconoce es un palndromo o secuencia simtrica de 4, 5, 6 o ms nucletidos.
Si se digiere el DNA de inters y el vector plasmdico con la misma enzima de restriccin se generaran
extremos cohesivos complementarios y de este modo las molculas de DNA pueden aparear sus bases.
De todas formas para que se una el esqueleto pentosa fosfato se necesita una enzima de modificacin
del DNA denominada DNA ligasa. La ligacin es un paso fundamental para la generacin de DNA
recombinante ya que permite la unin del esqueleto de DNA de distinto origen. Esta enzima sella tanto
extremos cohesivos como romos y requiere la presencia de un grupo fosfato en el extremo 5y de un OH
en un extremo 3.
Como consecuencia de la accin de la ligasa se producirn molculas del vector, es decir del plsmido
bacteriano, que contienen el gen de inters, en este caso el gen Bt. Una vez obtenido el plsmido
recombinante, se procede a transformar las clulas maz.
Con el plsmido recombinante, que lleva el gen de inters, se debe introducir en clulas vegetales, para
lo que hay diferentes estrategias, una es usar una bacteria que infecta plantas: Agrobacterium. A partir de
CIDOS NUCLEICOS
41

una clula transformada con el gen exgeno se obtiene una planta que se denomina transgnica, que son
clones respecto a la clula original. El proceso se simplificado se representa a continuacin.

Las variedades de maz transgnicos con la protena Bt han demostrado ofrecer un control eficaz de los
taladros de maz, primero en ensayos de campo que se viene realizando desde comienzo de los 90, y
posteriormente en la experiencia comercial, con millones de hectreas cultivadas desde 1997.
Electroforesis de DNA
Cuando se aplica un campo elctrico a molculas con carga neta, stas se desplazarn hacia el polo
contrario a su carga. En este principio se basa la tcnica denominada electroforesis y el desplazamiento
de la molcula en cuestin depende de su carga y su tamao.
Un equipo de electroforesis consta de una fuente de poder que genera el campo elctrico y una cuba,
recipiente con dos compartimentos con un electrodo cada uno. En la foto que aparece abajo se indican
los componentes del sistema.


CIDOS NUCLEICOS
42

Los geles van en la cuba sumergidos en un tampn, con pH superior a 8. De esta forma, las molculas de
DNA o RNA sometidas a electroforesis se desplazarn al polo positivo, porque poseen carga neta
negativa a pH superiores a 5.
Cuando la electroforesis se realiza en un gel, este se comporta como un tamiz y permite separar
molculas segn su tamao y forma. As una mezcla de molculas de DNA de diferente tamao, que
pueden resultar de una reaccin con enzimas de restriccin se separarn en funcin de su tamao. En la
figura que aparece a continuacin se observa un gel de agarosa teido con bromuro de etidio, donde se
visualizan bandas que corresponden a fragmentos de DNA con diferente masa molecular.


Las molculas de DNA de mayor tamao migran menos que las molculas de DNA de menor tamao,
que quedan ms prximas al polo positivo. El empleo de un marcador de masa molecular conocido
permite calcular el tamao de las bandas de DNA.