Professional Documents
Culture Documents
A)TOMA DE MUESTRA:
Dilución 1:10.
Tomar 10 ml de muestra con una pipeta serologica estéril de 10 ml. (Muestras líquidas)
o en muestras sólidas pesar asépticamente 10 g de muestra.
Homogenizar en 90 ml de Buffer de Fosfatos estéril.
Con el método Simplate se podrá tener un rango de conteo con dilución 1:10 de <20
UFC/ml hasta 7380 UFC/ml.
Dilución 1:100
Tomar 1 ml de la dilución 1:10
Homogenizar en un tubo de ensayo con 9 ml de buffer de fosfatos estéril.
Con el método Simplate se podrá tener un rango de conteo con dilución 1:100 de <200
UFC/ml hasta 73800 UFC/ml.
Y así sucesivamente usted podrá aumentar 10 veces el rango de conteo en cada dilución
pasando solamente 1 ml de la dilución anterior a 9 ml de buffer de fosfatos estéril.
FUNDAMENTO:
Este método esta basado en tecnología de enzimas múltiples en donde un buffet de sustratos
que es proporcionado por el reactivo hacen un enlace enzima-sustrato con las enzimas que contienen la
bacteria mesófilica. Produciendo así después de 24 horas de incubación una flourescencia debido a la
reacción enzima-sustrato de la cual el sustrato desprende una molécula de color la cual es la 4-metil
umbeliferona (MUG).
Procedimiento:
Este reactivo se disuelve en 100 ml de agua destilada estéril, tiene una vida útil de 12 hrs en
refrigeración.
Este reactivo se disuelve en 9 ml de agua destilada estéril, tiene una vida útil de 12 hrs en
refrigeración.
3) Se homogeniza con movimientos circulares de la placa y golpeando un poco para eliminar las
burbujas que se pudieron haber formado.
C) Lectura:
1) Después de 24 hrs de incubación se incide la luz UV en cada una de las placas contando los pocillos
fluorescentes refiriendo este número a una tabla de NMP proporcionada por su distribuidor
multiplicando este número por la dilución que se halla hecho.
Por ejemplo: si en mi placa 1:10 cuento 1 pocillo fluorescente el NMP correspondiente es de 2
multiplicando por la dilución x 10= 20 UFC/g.
COLIFORMES Y E. COLI
FUNDAMENTO:
Procedimiento:
Este reactivo se disuelve en 9 ml de agua destilada estéril, tiene una vida útil de 12 hrs en
refrigeración.
3)Se homogeniza con movimientos circulares de la placa y golpeando un poco para eliminar las
burbujas que se pudieron haber formado.
4)Se retira el exceso de la placa y se invierte, incubando posteriormente a 35ºC por 24 hrs.
C)Lectura:
Después de 24 hrs de incubación podremos ver a simple vista ya que los pocillos positivos dan un tono
de rosa a rojo (esos corresponden a Coliformes totales) y este número de refiere a una tabla de NMP
reportando como Coliformes UFC/g o ml y posteriormente se incide la luz UV en cada una de las
placas contando los pocillos fluorescentes (estos corresponderán a E. Coli) refiriendo este número a una
tabla de NMP proporcionada por su distribuidor multiplicando este número por la dilución que se halla
hecho, reportando el nùmero de E. Coli UFC/g o ml de muestra. .Por ejemplo: si en mi placa 1:10
cuento 1 pocillo positivo el NMP correspondiente es de 2 multiplicando por la dilución x 10=Reportare
20 UFC/g
FUNDAMENTO:
Este método esta basado en tecnología de enzimas múltiples en donde un buffet de
sustratos que es proporcionado por el reactivo hacen un enlace enzima-sustrato con las enzimas
que contienen la bacteria mesófilica. Produciendo así después de 48 horas de incubación (30 ºc)
una flourescencia debido a la reacción enzima-sustrato de la cual el sustrato desprende una
Procedimiento:
Este reactivo se disuelve en 9 ml de agua destilada estéril, tiene una vida útil de 1 semana en
refrigeración.
3)Se homogeniza con movimientos circulares de la placa y golpeando un poco para eliminar las
burbujas que se pudieron haber formado.
4)Se retira el exceso de la placa y no se invierte, incubando posteriormente a 30ºC por 48 hrs o a 25 ºC
por 72 hrs.
C)Lectura:
1) Después de 48 o 72 hrs de incubación se incide la luz UV en cada una de las placas contando los
pocillos fluorescentes refiriendo este número a una tabla de NMP proporcionada por su distribuidor
multiplicando este número por la dilución que se halla hecho.
2) En el formato color indicator, todas los pocillos que cambien a un color diferente en tonalidad al
púrpura-violeta de inicio, son tomados como positivos (tonalidades comunes: blanco, melón, café,
rojizo)
Por ejemplo: si en mi placa 1:10 cuento 1 pocillo fluorescente el NMP correspondiente es de 2
multiplicando por la dilución x 10= 20 UFC
PROCEDIMIENTOS
PRODUCTOS IDEXX
COLILERT (Presencia/Ausencia)
USO.-
se utiliza para detección simultanea, identificación y confirmación de resultados para coliformes totales
y E. Coli en agua.
PRINCIPIO.-
Los microorganismos objetivos tienen afinidad por el nutriente indicador que corresponde con
su metabolismo y que puede usar como una fuente importante de carbono. Los nutrientes indicadores
específicos de colilert, el orto-nitrofenil-b-d-galactopiranoside (ONPG) y el 4 metil-umbeliferil-b-d-
glucuronido (MUG) corresponden a las enzimas constitutivas que siempre están presentes en las
bacterias y que solo existen en las coliformes y E. Coli las bacterias coliformes tienen la enzima B-
galactosidasa y si existe una bacteria coliformes tienen la enzima B-galactosidasa y si existe una
bacteria coliforme en la muestra metabolizada el ONPG dará una coloración amarilla. E.Coli contiene
la enzima B-Glucuronidasa y si esta se encuentra en la muestra metabolizada el MUG producirá
fluorescencia.
PROCEDIMIENTO.-
INTERPRETACIÓN: