Tipos de PCR

PCR anidada
En esta variante de PCR, el producto de una amplificacin es utilizado como moldepara realizar
una segunda amplificacin con iniciadores que se ubican dentro de laprimera secuencia
amplificada. Este tipo de PCR es altamente especfica.
PCR in situ
Es una PCR que se realiza en preparaciones fijadas sobre un portaobjeto. Consisteen una reaccin
de PCR en secciones histolgicas o clulas, donde los productosgenerados pueden visualizarse en
el sitio de amplificacin. Se realiza para ello unaprimera amplificacin del ADN blanco y luego
deteccin mediante hibridacin insitu convencional con sondas de ADN/ARN. De esta manera
puede detectarsecantidades pequesimas del material gentico.
PCR multiplex
Es una PCR en la cual se amplifica ms de una secuencia en una misma reaccin.Emplea dos o ms
pares de iniciadores en un nico tubo de reaccin con el fin deamplificar simultneamente
mltiples segmentos de ADN. Consiste en combinar enuna nica reaccin todos los pares de
iniciadores de los sistemas que queremosamplificar simultneamente, junto con el resto de los
reactivos de la reaccin encantidades suficientes. La ventaja de esta PCR es que se obtiene la
informacin devarios loci en una sola reaccin, utilizando menor cantidad de molde para elanlisis
y menor cantidad de reactivos. Se puede generar rpidamente laconstruccin de una base de
datos.
PCR con transcriptasa inversa (RT-PCR)
Este tipo de PCR utiliza como molde inicial el ARN y se requiere de unatranscriptasa inversa, para
realizar la conversin del ARN a un tipo de ADNllamado ADNc (ADN complementario).
PCR tiempo real
Es una reaccin de PRC cuya principal caracterstica es que permite cuantificar lacantidad de ADN
o ARN presente en la muestra original. Se puede dividir en:a) Tcnica basada en fluorocromos no
especficos.b)Tcnica basada en sondas especficas.En las tcnicas basadas en fluorocromos no
especficos, el ADN se une alfluorocromo (por lo general SYBR Green) produciendo fluorescencia
que esmedida por un termociclador apto para PCR en tiempo real. Permite cuantificarslo una
secuencia por reaccin, pero tiene la ventaja de utilizar iniciadoresnormales para su realizacin. Es
mucho ms econmica que la PCR que utilizasondas especficas. Las tcnicas basadas en sondas
especficas utilizan una sondaunida a dos fluorocromos que hibrida en la zona intermedia entre el
iniciadordirecto (forward) y el inverso (reverse). Cuando la sonda esta intacta, presentanuna
transferencia energtica de fluorescencia por resonancia (FRET). Dichafluorescencia no se produce
cuando las onda esta daada y los dos fluorocromos

estn distantes, producto
de la actividad 5 a 3`exonucleasa de la ADN polimerasa.
Esto permite monitorizar el cambio de patrn de fluorescencia y deducir el nivelde amplificacin
del gen.
Random Primer PCR
Esta variante de la tcnica es muy sensible y especifica, es muy til en el estudio ydiagnstico de
organismos de una misma especie con variaciones genticasespecificas. Su aplicacin permite la
amplificacin de molculas de ADN y genomasque varan entre400 pares de bases hasta 40 Mega
bases. La tcnica utiliza primes
que consisten en un pool de secuencias de los extremos 3 del ADN y una regin 5
constante para la deteccin del primer incorporado