UNIVERSIDAD TECNOLGICA DE PEREIRA

ESCUELA DE QUMICA
PROGRAMA DE QUMICA INDUSTRIAL
LABORATORIO DE BIOQUMICA.
SESIN # 3:
GLUCLISIS ANAEROBIA: FERMENTACIN ALCOHLICA.
OBJETIVOS:
1. Determinar cualitativa y cuantitativamente la velocidad del proceso de
fermentacin de varios carbohidratos.
2. Analizar las diferentes velocidades en la fermentacin de mono, di y
polisacridos.
3. Comprobar la inhibicin de la ruta metablica ocasionada por el a!.
MARCO CONCEPTUAL:
La Glu!l"#"# $ la F%&'%()a"!( Al*+!l"a.
"l metabolismo es un con#unto de procesos acoplados, de los cuales al$unos
se denominan a(a,!l"*# y se caracterizan por utilizar ener$%a para
producir biomol&culas 'ue tienen estructuras cada vez ms elaboradas( por
otro lado se encuentran los a)a,!l"*#- los cuales se caracterizan por
producir ener$%a a partir de la de$radacin de biomol&culas.
)no de los procesos catablicos de los carbohidratos es la .lu!l"#"#, en la
cual se de$rada una mol&cula de D*$lucosa a dos mol&culas de piruvato, en
un proceso de diez reacciones, en una de las cuales se produce la reduccin
de la coenzima dinucletido de nicotinamida y adenina +cuyas formas
o,idada y reducida son respectivamente AD
-
.AD/ - /
-
0, por ser una
coenzima las concentraciones intracelulares son relativamente ba#as, por tal
motivo para 'ue la $luclisis se manten$a en funcionamiento es necesario
'ue la coenzima vuelva a su estado o,idado.
1as rutas por las cuales se puede reo,idar AD/ - /
-
dependen de la
presencia o ausencia de o,%$eno y por ende de los destinos metablicos del
piruvato, la ruta 'ue este producto 2nal si$a siempre ser utilizada para
re$enerar AD
-
.

D%#)"(* /%l 0"&u1a)*.
"l piruvato formado en la $luclisis puede tomar tres rutas catablicas
alternativas como se muestra en la 2.u&a 33
4i las *(/""*(%# #*( a%&!,"a# y en te#idos u or$anismos aerbicos, la
ruta 'ue si$ue el piruvato es la ruta central de la $r2ca si$uiente, en este
caso se habla de $luclisis aerobia y la coenzima AD/ - /
-
se reo,ida a
trav&s de la cadena respiratoria( en estas condiciones el piruvato se o,ida,
con p&rdida de su $rupo carbo,ilo en forma de C5
2
, dando el $rupo acetilo
del acetil*coenzima A, 'ue es o,idado se$uidamente de manera completa a
C5
2
por el ciclo del cido c%trico.
F".u&a 3.5,idacin de la $lucosa hasta productos
2nales.
"n *(/""*(%# a(a%&!,"a# y en te#idos u or$anismos anaerbicos, las
rutas se$uidas por el piruvato son las 'ue se presentan a derecha e
iz'uierda de la 2.u&a 3, en estos casos se habla de $luclisis anaerobia
denominada tambi&n 4%&'%()a"!(. 1as fermentaciones pueden ser
diferentes dependiendo del te#ido u or$anismo( en al$unos casos como en el
m6sculo, en un e#ercicio e,cesivo o en bacterias cido*lcticas se produce la
fermentacin homolctica en la cual el piruvato se convierte en lactato
como se observa en la 2.u&a 53
F".u&a 53 7ransformacin del piruvato a lactato.
8or otra parte, en otros or$anismos como en las levaduras Saccharomyces
cerevisiae, 'ue se usan para fabricar bebida como la cerveza, el piruvato se
descarbo,ila +pierde C5
2
0, convirti&ndose en acetaldeh%do por accin del
enzima piruvato descarboxilasa3
"l proceso se complementa con la reaccin 'ue $enera el etanol y el a$ente
o,idante +AD
-
0, re'uerido por la levadura para continuar haciendo
$luclisis y disponer de A783
"sta reaccin es promovida por la enzima etanol deshidro$enada,
distribuida en todos los or$anismos, en este caso se habla de fermentacin
alcohlica.
"s interesante notar 'ue en ambas fermentaciones el a$ente reductor es la
coenzima en su estado reducido AD/.
"n la si$uiente 2.u&a se resume la $luclisis anaerobia tanto para la
produccin de lactato como para la produccin de etanol.
Bala(%# /% la .lu*l"#"# $ /% la 4%&'%()a"!( al*+!l"a.
1as rutas de la $luclisis anaerobia con fermentacin homolctica o
etanlica, mostradas en la 2$ura anterior, describen 6nicamente la suerte
'ue si$uen los tomos de carbono de la $lucosa, pero no dice nada acerca
de la ener$&tica de este proceso. "n realidad, tanto durante la $luclisis
anaerobia, se $enera A78 a partir del AD8 y del fosfato. 1as ecuaciones
i$ualadas de la $luclisis y de la fermentacin alcohlica, incluidas las
etapas de conservacin de la ener$%a, son las si$uientes3
"s necesario anotar 'ue se denomina $luclisis al proceso 'ue lleva desde
la $lucosa al piruvato, sin embar$o, en al$unas reacciones intermedias de
este proceso es posible el in$reso de otros monosacridos diferentes a la
$lucosa, como fructosa, manosa o $alactosa, casos en los cuales se habla
de $liclisis.

"n la prctica de laboratorio se pretende observar y cuanti2car la velocidad
a la cual cierto tipo de levadura es capaz de fermentar diferentes sustratos
+mono, di y polisacridos0, midiendo la cantidad de C5
2
'ue se va $enerando
en el tiempo3
9
reaccin
= d(cant. CO
2
)/dt
Ma)%&"al%#:
: 7ubos de ensayo i$uales
: ;ea<er
: ;a=o mar%a
: 7apones
: A$u#as de #erin$a
Su#)a("a#:
: 1evadura fresca al >?
: @lucosa 1A?
: 4acarosa al 1A?
: !ructosa al 1A?
: A$ua destilada.
a! +A,>?0
S%"!( %60%&"'%()al:
a. Adicione a un tubo de ensayo una solucin de $lucosa al 1A ? hasta
las B partes del volumen.
b. Colo'ue el tubo de ensayo en un ba=o mar%a a 3C DC.
c. 8or otra parte debe tener listo un tapn de caucho 'ue case
perfectamente en el tubo de ensayo y atravesado por una a$u#a de
#erin$a desechable. 4obre la parte superior de la a$u#a conecte una
man$uera. 1a man$uera debe lle$ar hasta una probeta llena de a$ua
'ue se encuentra invertida en un recipiente con a$ua.
d. Cuando el tubo con la solucin de az6car haya lle$ado a la
temperatura deseada, adicione 2 m1 de una suspensin de levadura
hidratada.
e. Colo'ue rpidamente, el tapn de caucho y realice el ensambla#e de
todo el sistema.
f. A$ite la solucin con el carbohidrato y la levadura.
$. Determine el volumen de C5
2

producido por el desplazamiento del
a$ua en la probeta, cada cuatro minutos.
h. Calcule la velocidad de produccin de C5
2
durante 2A minutos.
i. 4e=ale sobre el tubo la lon$itud de $as producido cada E minutos y
#. Fepita los pasos +a0 hasta +"0 con fructosa, sacarosa y almidn,
teniendo en cuenta 'ue se duplican los tubos, de tal manera 'ue para
cada uno de ellos se adicionan A,1 m1 del inhibidor y a los otros se les
adiciona solamente el carbohidrato.
<. Fe$istre los datos en la si$uiente tabla3
Ca&,*+7)"%
'0*
Glu*#a F&u)*#a Saa&*#a Al'"/!(
S"(
NaF
C*(
NaF
S"(
NaF
C*(
NaF
S"(
NaF
C*(
NaF
S"(
NaF
C*(
NaF
T"%'0*8'"
(9
V CO
5
E
G
12
1H
2A
Los residuos obtenidos no son considerados peligrosos
Dispngalos por el desage.
R%#ul)a/*# $ 0&%.u()a#:
a. Con los datos obtenidos en el numeral anterior calcule la velocidad de
la reaccin para cada carbohidrato y complete la tabla.
Ca&,*+"/&a)
*
V%l
&%a"!(
@lucosa
!ructosa
4acarosa
Almidn
b. "scriba la reaccin neta balanceada de la fermentacin de cada uno
de los carbohidratos.
c. 4e$6n las ecuaciones del numeral anterior, IDnde ocurrir%a la mayor
produccin de C5
2
J I"st ello de acuerdo con los datos obtenidos
e,perimentalmenteJ
d. 4e$6n la e,periencia Icul es el orden de los carbohidratos se$6n la
rapidez en la fermentacinJ ICmo se podr%a #usti2carJ
e. I"n 'u& consiste la fermentacin lctica y $lic&ricaJ I"n 'u& se
diferencian de la fermentacin etanlicaJ