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Universidad Autnoma del Carmen.

DES Ciencias de la Salud.
Lic. en Medicina.


Estructura y funcin a nivel molecular.


ESTRUCTURA Y FUNCIN DE LAS PROTENAS.

Catedrtico:
Dr. David Abraham Alam Escamilla.
Investigacin en Toxicologa, Mutagnesis y Carcinognesis Ambiental.


Miembros de equipo:

Alexis Nobles Cupido.
Erick Alberto Lehmann Hernndez.
Luis Alberto Campos Arias.
Margarita Guadalupe Ara Ara.
Malenny Guadalupe Ruedas Arias.
Omar Jess Prez Snchez.
William Eduardo Bustamante Prez.


Fecha de entrega: 03/ Septiembre/ 2014
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Resumen: Simplemente relevante. ...................................... 4
Introduccin. ...................................................................................................................................... 5
Tema 1: Generalidades. .................................................................................................................. 6
1.1 Concepto de protena. ............................................................................................................... 6
1.2 Importancia biolgica. ............................................................................................................... 6
1.3 Propiedades generales. ............................................................................................................ 7
Tema 2: Composicin de las protenas. ....................................................................................... 8
2.1 Concepto de aminocidos. ....................................................................................................... 9
2.2 Estructura de los aminocidos. ................................................................................................ 9
2.3 clasificacin de los aminocidos. .......................................................................................... 10
2.3.1 Aminocidos esenciales ...................................................................................................... 11
2.3.2 Aminocidos no esenciales ................................................................................................ 13
2.4 Enlaces peptdicos. ................................................................................................................. 16
2.4.1 Los pptidos y el enlace peptdico. .................................................................................... 16
2.4.2 Polipptidos o cadenas polipeptdicas si el n de AA es mayor de 10. ...................... 17
Tema 3: Clasificacin. ................................................................................................................... 17
3.1 Solubilidad. ............................................................................................................................... 17
3.2 Forma. ....................................................................................................................................... 20
3.3 Funciones. ................................................................................................................................. 22
Tema 4: Sntesis de protenas. .................................................................................................... 22
4.1 Qu significa sntesis de protenas?. ................................................................................. 23
4.2 Etapa de traduccin del ARN mensajero. ............................................................................ 23
4.2.1 Transduccin. ........................................................................................................................ 24
4.2.2 Transcripcin. ........................................................................................................................ 25
4.2.3 Traduccin. ............................................................................................................................ 25
4.3 Etapa de Postraduccin. ......................................................................................................... 27
4.3.1 Plegamiento. ......................................................................................................................... 27
4.3.2 Glucosilacin. ........................................................................................................................ 28
4.3.3 Protelisis parcial. ................................................................................................................ 28
4.3.4 Modificacin de aminocidos. ............................................................................................ 28
Tema 5: Niveles de Organizacin estructural. ........................................................................... 29
5.1 Estructura primaria. ................................................................................................................. 29
Tabla de contenidos.
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5.2 Estructura secundaria. ............................................................................................................ 29
5.3 Estructura terciaria. ................................................................................................................. 31
5.4 Estructura cuaternaria. ............................................................................................................ 32
5.5 Prdida de la estructura proteica. ......................................................................................... 33
Tema 6: Mtodos de separacin y anlisis de las protenas. Tcnica de Western Blott. ... 35
6.1 En qu consiste la tcnica?. ................................................................................................ 35
6.1.1Fundamentos ......................................................................................................................... 35
6.2 Tipos. ......................................................................................................................................... 36
6.2.1 Mtodo directo ...................................................................................................................... 36
6.2.2 Mtodo indirecto. .................................................................................................................. 36
6.3 Secuencia. ................................................................................................................................ 37
6.3.1 Paso uno: ............................................................................................................................... 37
6.3.2 Paso dos: Las protenas separadas por tamao se transfieren desde el gel a una
membrana de nitrocelulosa........................................................................................................... 38
6.3.3 Paso tres: Incubacin con anticuerpos especficos y revelados. ................................. 38
6.3.4 Paso cuatro: Relevado y anlisis . ..................................................................................... 38
6.4 Aplicaciones. ............................................................................................................................. 38
Conclusin por integrante. ............................................................................................................ 40
Bibliografa. ...................................................................................................................................... 44

Lista de figuras.


Figura 1: Tipos de funciones 7
Figura 2: Estructura de los aminocidos.. 9
Figura 3: Formas enantimeras de los aminocidos.... 10
Figura 4: Proceso de replicacin.... 24
Figura 5: Proceso de transcripcin de ARN 25



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Resumen: Simplemente relevante.

Estudiar la bioqumica de los compuestos fundamentales que conforman a la
estructura humana llega a ser tan relevante, ya que por medio de ella
comprendemos como todos los seres vivos y los organismos consiguen la
supervivencia en ente lugar esfrico y azul, que llamamos mundo. Uno de estos
compuestos fundamentales para todos los organismos vivos son las protenas. Este
elemento que estudiaremos a continuacin es sumamente importante, ya que son
uno de os principales componentes estructurales de nuestro organismo, por
ejemplo, por conocimiento general sabemos que los msculos que poseemos
crecen ingiriendo protenas, pero esto no solamente se delimita a este punto, debido
a que las protenas llegan a ser importantes a otros estratos ms profundos, los
cuales identificaras y comprenders al revisar el siguiente documento. De igual
forma, tenemos tambin otro aspecto fundamental sobre las protenas, el cual es su
composicin y metabolizacin, los cuales tienen un sentido importante conocer
cmo se lleva a cabo esta serie de procesos, ya que al no funcionar o accionar de
una manera errnea, puede desembocar en un dao al ser humano, y por lo
consiguiente en una enfermedad, aunque cabe mencionar que las enfermedades
no solo se pueden originar por un error interno, ya que como sabemos, de igual
forma, las bacterias y los virus nos pueden ocasionar una serie de diversas
patologas, las cuales cargan con diversas afecciones, que al igual que los errores
de metabolizacin, su cura yace en el tema que enfocamos desde el punto de
partida: las protenas. Por ello y por todo lo anterior mencionado podemos ver que
las protenas no solo son esenciales para el organismo para conformar su
estructura, sin que tambin podemos analizar y reparar las afecciones que sufre el
cuerpo estudiando a este conjunto de biomolculas. Por lo cual tu como futuro
mdico es esencial que comprendas y estudies todo lo referente a las protenas y
el impacto que tienen las protenas sobre el cuerpo humano, ya que esta es la base
para comprender la historia natural de muchas enfermedades que hoy afectan en
da a la poblacin, como es el actual mencionado bola o hasta el SIDA (Sndrome
de inmunodeficiencia adquirida), por lo cual resulta esencial comprender al mximo
estas sustancias. Temas como qu es una protena, su composicin, el
metabolismo y todos los procesos referentes con estas biomolculas y su accin
sobre el organismo lo analizaremos en el siguiente documento, el cual te servir
como una gua inicial para irte adentrando en el mundo de fisiologa celular y
entender a nuestro cuerpo desde lo ms bsico, ya que de esta forma ser ms
prctico y funcional estudiar y analizar al cuerpo humano y por consiguiente poder
conseguir de manera ms rpida y por consiguiente eficaz forma de tratar una
enfermedad, aunque cabe aclarar que esto es solo un pequeo pilar del
conocimiento que requerimos.
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Introduccin.


El estudio de las protenas es algo sumamente esencial, ya que juegan un papel
importante en la estructuracin del organismo, ya sea desde los niveles moleculares
hasta el nivel tisular, por lo que hace que su estudio sea algo importante y exhausto
realizar durante la formacin acadmica de las prximas generaciones de
elementos que se especialicen en el rea clnica.
Como sabemos estos elementos forman parte importante de nuestro cuerpo, como
es el ADN (cido desoxirribonucleico), el cual su estructura y funcin est
ampliamente ligado a las protenas, lo cual veremos por medio de la siguiente
monografa.
Se implement la exposicin de estos temas debido a su relevancia en el campo
clnico y como estos conocimientos pueden trascender ms all del aula de clases,
sino poder ser desplegados en la identificacin, tratamiento e incluso prevencin de
algunas enfermedades por medio del conocimiento de estos temas tan importantes.
La realizacin del siguiente trabajo documental ser relevante para nuestros
compaeros ya que otorgara conocimientos esenciales sobre las protenas y
enfocaremos estos conocimientos a una perspectiva aterrizada ms al campo
mdico, generando inters a nuestros compaeros por aprender y conocer sobre
estas biomolculas adems de generar curiosidad e inters por l materia en general,
lo cual ser un objetivo en concreto a lograr.
Cabe sealar que la investigacin presentada a continuacin solo se enfocara a
estudiar en concreto la estructura, clasificacin, procesos de sntesis y la aplicacin
de estos tema al rea patolgica de manera general y concisa, exponiendo lo
relevante sin profundizar a fondo, lo anterior con respecto al rea patolgico, ya que
esto corresponder a futuras asignaturas, ya que por el momento es importante
exponer los temas base para la comprensin de futuros tpicos.
Durante la elaboracin de este documento, el manejo de una fuente bibliogrfica fue
un aspecto relevante, ya que se emple una serie de fuentes confiables, que le
ofrezcan al lector un conocimiento verdico y lo ms confiable posible, por lo cual la
seleccin de las fuentes de informacin fue una labor exhausta.
La seleccin de temas a abordar fue otro punto clave, ya que seleccionar los tpicos
sobre los cuales desarrollaramos esta ex ponencia, sera una tarea prioritaria a
realizar, por cual fue tambin un reto el cual esperamos haber cumplido de manera
satisfactoria, para usted: el lector.
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Tema 1: Generalidades.

1.1 Concepto de protena.

La palabra protena proviene del latn proteios, significando lo primero o lo
fundamental, otorgando alusin a la importancia que tiene para la vida en el planeta
tierra, ya que estas molculas complejas son imprescindibles para la estructura y la
funcin de todas las clulas.
Las protenas se originan a partir de la unin de otras molculas llamadas
aminocidos, estas se agrupan en largas cadenas y se mantienen estables por
uniones qumicas llamadas enlaces peptdicos.
En su composicin existe una gran variedad y tipos de protenas, las cuales pueden
estudiarse o clasificarse tomando en cuenta una serie de criterios, los cuales
veremos ms adelante.
A continuacin asaremos a conocer la importancia biolgica de estos elementos
sobre el organismo.

1.2 Importancia biolgica.

Las protenas como mencionbamos en el inicio, son importantes para la vida de
los diversos organismos, lo cual da pie a su relevancia y est es an mayor cuando
se trata sobre los seres humanos.
Las protenas tienen en el organismo mltiples funciones, las cuales en conjunto
permiten la homeostasis en el organismo, permitiendo que este funcione de manera
adecuada y este en armona y sincronizacin con los dems rganos y sistemas.
Anteriormente se mencion que el nmero de protenas es extenso, pero cada uno
de estos elementos de acuerdo con su estructuracin (figura 1), cumplen labores
importantes como son:
Catalizacin: Est formado por enzimas proteicas que se encargan de
realizar reacciones qumicas de una manera ms rpida y eficiente. Procesos
que resultan de suma importancia para el organismo. Por ejemplo la pepsina,
sta enzima se encuentra en el sistema digestivo y se encarga
de degradar los alimentos.
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Regulacin: Las hormonas son un tipo de protenas las cuales ayudan a que
exista un equilibrio entre las funciones que realiza el cuerpo. Tal es el caso
de la insulina que se encarga de regular la glucosa que se encuentra en
la sangre.
Estructuracin: Este tipo de protenas tienen la funcin de dar resistencia y
elasticidad que permite formar tejidos as como la de dar soporte a otras
estructuras. Este es el caso de la tubulina que se encuentra en
el citoesqueleto.
Defensa: Son las encargadas de defender al organismo. Glicoprotenas que
se encargan de producir inmunoglobulinas que defienden al organismo
contra cuerpos extraos, o la queratina que protege la piel, as como
el fibringeno y protrombina que forman cogulos.
Transporte: La funcin de estas protenas es llevar sustancias a travs del
organismo a donde sean requeridas. Protenas como la hemoglobina que
lleva el oxgeno por medio de la sangre.
Recepcin: Este tipo de protenas se encuentran en la membrana celular y
llevan a cabo la funcin de recibir seales para que la clula pueda realizar
su funcin, como acetilcolina que recibe seales para producir la contraccin.


Todas estas son las funciones que bsicamente cumplen las protenas dentro de
los organismos vivos que encontramos en nuestro organismo, esto sucede debido
a que estas macromolculas poseen en conjunto una serie de factores los cuales
hacen propicias estas adaptaciones, las cuales pasaremos a presentar a
continuacin.

1.3 Propiedades generales.

Como ya observamos, el cuerpo humano posee en su interior mltiples tipos de
protenas, las cuales cumplen con funciones determinadas. Las protenas
notablemente son esenciales, ya que tienen ciertas peculiaridades estructurales que
las hacen nicas (Garrido, Teijn, Blanco, Villaverdes, Mendoza y Ramrez,
2006:104) y por lo cual se diferencian de las otras biomolculas que componen al
organismo. Esta serie de peculiaridades son:
Figura 1: Tipos de
funciones.
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Solubilidad: Se mantiene siempre y cuando los enlaces fuertes y dbiles
estn presentes. Si se aumenta la temperatura y el pH se pierde la
solubilidad.
Capacidad electroltica: Se determina a travs de la electroforesis, tcnica
analtica en la cual si las protenas se trasladan al polo positivo es porque su
molcula tiene carga negativa y viceversa.
Especificidad: Cada protena tiene una funcin especfica que est
determinada por su estructura primaria.
Amortiguador de pH: Actan como amortiguadores de pH debido a su
carcter anftero, es decir, pueden comportarse como cidos (donando
electrones) o como bases (aceptando electrones).

Adems de lo anterior, tambin hay una propiedad muy peculiar de estas
biomoleculas, la cual es la desnaturalizacin de la protena. Esta propiedad en
palabras ms generales consiste en la capacidad que tienen las protenas de
recobrar su estado original. Esto por lo general sucede cuando el ambiente en el
cual se encuentra la protena sufre de cambios drsticos, como son la temperatura,
la el nivel de pH u otros ms. Al suceder esto, se genera un cambio en la estructura
de la protena, alterando el centro activo de la misma, por lo que su funcionalidad
se pierde. El punto en concreto, es que los enlaces peptdicos no se ven afectados,
es decir, solo se desactiva su funcin pero no su estructura, por lo que al retomar
las condiciones adecuadas el ambiente en donde est, se volver a activar su
funcin. Esto lo podemos ver por ejemplo la queratina del cabello, la cual al
exponerse a temperaturas altas, este se ve afectado, lo cual lo podemos ver a travs
del desacomodo del cabello. Esta peculiar propiedad la vemos hacer efecto cuando
el cabello retoma su fijacin.

Tema 2: Composicin de las protenas.

Las protenas como vimos en su definicin, es un conjunto de aminocidos, unidos
por enlaces pptidos. Estos conceptos tal vez sean desconocidos, pero son
fundamentales entenderlos y ver como son indispensables en la elaboracin de las
protenas, por lo cual en este apartado nos concentraremos a explicar la
composicin de las protenas y ver qu sucede si hay un mal funcionamiento en
esta estructura.


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2.1 Concepto de aminocidos.

De acuerdo a Rodrguez (2006) los aminocidos como compuestos formados por
un grupo amino y un grupo carboxilo. La informacin me pareci interesante de la
cual me llamo mucho la atencin este apartado es que todos los organismos
necesitan ciertos aminocidos llamados esenciales o indispensables para su
desarrollo. Si no son administrados en la dieta, ocasionan desde trastornos o
defectos de crecimiento hasta la muerte, lo cual veremos a continuacin.

2.2 Estructura de los aminocidos.

Los aminocidos son compuestos formados por un grupo amino (-NH2) y un grupo
carboxilo (-COOH) en el carbono alfa de la molcula. El resto de la estructura es
variable conocido como radical, el cual determina las caractersticas de la molcula
(figura 2). Cuando aparecen en la molcula los dos grupos, carboxlico y amino, con
cierta proximidad uno al otro, reaccionan intercambiando protones.
En soluciones acuosas se presentan de forma inica dipolar o hibrido. Por lo que
los aminocidos comparten muchas caractersticas de los compuestos inicos: son
solubles en agua (con ciertas excepciones) e insolubles en solventes inorgnicos
no polares, como el ter, acetona y cloroformo. Adems, presentan un elevado
punto de fusin que determina su descomposicin.


El carbono alfa es situado asimtricamente en todos los aminocidos, excepto en la
glicina, que lleva un hidrogeno (H). El grupo R es el que identifica a cada
aminocido. Aunque hay varios aminocidos, solo 20 son importante en el
metabolismo.
Pueden existir en ambas formas enantimeras (figura 3) (enantimeras significa
que tiene una estructura idntica pero invertida, como imgenes en un espejo) cada
Figura 2: Estructura de los aminocidos.
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enantimeras es capaz de rotar el plano de luz polarizada, como se observa en el
siguiente ejemplo:

En los organismos vivos, los aminocidos pertenecen a la serie L (el grupo amino
se encuentra del lado izquierdo), excepto en las paredes celulares de las bacterias.
Los aminocidos se pueden clasificar por el grupo qumico funcional de la estructura
de sus grupos R en alifticos, aromticos y heterocclicos, o bien por la polaridad
del mismo grupo.

2.3 clasificacin de los aminocidos.

Los aminocidos son las unidades qumicas o "bloques de construccin" del cuerpo
que forman las protenas. Las sustancias proteicas construidas gracias a estos 20
aminocidos forman los msculos, tendones, rganos, glndulas, las uas y el pelo.
Existen dos tipos principales de aminocidos que estn agrupados segn su
procedencia y caractersticas. Estos grupos son aminocidos esenciales y
aminocidos no esenciales.
Los aminocidos que se obtienen de los alimentos se llaman "Aminocidos
esenciales".
Los aminocidos que puede fabricar nuestro organismo a partir de otras fuentes, se
llaman "Aminocidos no esenciales".
El crecimiento, la reparacin y el mantenimiento de todas las clulas dependen de
ellos. Despus del agua, las protenas constituyen la mayor parte del peso de
nuestro cuerpo.
A continuacin puedes ver una lista detallada con las caractersticas y propiedades
de cada aminocido.
Figura 3: Formas enantimeras
de los aminocidos.
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2.3.1 Aminocidos esenciales

Se llaman aminocidos esenciales aquellos que no pueden ser sintetizados en el
organismo y para obtenerlos es necesario tomar alimentos ricos en protenas que
los contengan. Nuestro organismo, descompone las protenas para obtener los
aminocidos esenciales y formar as nuevas protenas.
Histidina
Este aminocido se encuentra abundantemente en la hemoglobina y se utiliza en el
tratamiento de la artritis reumatoide, alergias, lceras y anemia. Es esencial para el
crecimiento y la reparacin de los tejidos. La Histidina, tambin es
importante para el mantenimiento de las vainas de mielina que
protegen las clulas nerviosas, es necesario para la produccin tanto
de glbulos rojos y blancos en la sangre, protege al organismo de los
daos por radiacin, reduce la presin arterial, ayuda en la eliminacin
de metales pesados del cuerpo y ayuda a la excitacin sexual.
Isoleucina
La Isoleucina es necesaria para la formacin de hemoglobina,
estabiliza y regula el azcar en la sangre y los niveles de energa. Este
aminocido es valioso para los deportistas porque ayuda a la curacin
y la reparacin del tejido muscular, piel y huesos. La cantidad de este
aminocido se ha visto que es insuficiente en personas que sufren de
ciertos trastornos mentales y fsicos.
Leucina
La leucina interacta con los aminocidos isoleucina y valina para
promover la cicatrizacin del tejido muscular, la piel y los huesos y se
recomienda para quienes se recuperan de la ciruga. Este aminocido
reduce los niveles de azcar en la sangre y ayuda a aumentar la
produccin de la hormona del crecimiento.
Lisina
Funciones de este aminocido son garantizar la absorcin adecuada
de calcio y mantiene un equilibrio adecuado de nitrgeno en los
adultos. Adems, la lisina ayuda a formar colgeno que constituye el
cartlago y tejido conectivo. La Lisina tambin ayuda a la produccin
de anticuerpos que tienen la capacidad para luchar contra el herpes
labial y los brotes de herpes y reduce los niveles elevados de
triglicridos en suero.

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Metionina
La Metionina es un antioxidante de gran alcance y una buena fuente de azufre, lo
que evita trastornos del cabello, piel y uas, ayuda a la
descomposicin de las grasas, ayudando as a prevenir la
acumulacin de grasa en el hgado y las arterias, que pueden obstruir
el flujo sanguneo a el cerebro, el corazn y los riones, ayuda a
desintoxicar los agentes nocivos como el plomo y otros metales
pesados, ayuda a disminuir la debilidad muscular, previene el cabello
quebradizo, protege contra los efectos de las radiaciones, es
beneficioso para las mujeres que toman anticonceptivos orales, ya
que promueve la excrecin de los estrgenos, reduce el nivel de histamina en el
cuerpo que puede causar que el cerebro transmita mensajes equivocados, por lo
que es til a las personas que sufren de esquizofrenia.
Fenilalanina
Aminocidos utilizados por el cerebro para producir la noradrenalina,
una sustancia qumica que transmite seales entre las clulas
nerviosas en el cerebro, promueve el estado de alerta y la vitalidad.
La Fenilalanina eleva el estado de nimo, disminuye el dolor, ayuda a
la memoria y el aprendizaje, que se utiliza para tratar la artritis,
depresin, calambres menstruales, las jaquecas, la obesidad, la
enfermedad de Parkinson y la esquizofrenia.
Treonina
La treonina es un aminocido cuyas funciones son ayudar a mantener la cantidad
adecuada de protenas en el cuerpo, es importante para la formacin
de colgeno, elastina y esmalte de los dientes y ayuda a la funcin
lipotrpica del hgado cuando se combina con cido asprtico y la
metionina, previene la acumulacin de grasa en el hgado, su
metabolismo y ayuda a su asimilacin.
Triptfano
Este aminocido es un relajante natural, ayuda a aliviar el insomnio
induciendo el sueo normal, reduce la ansiedad y la depresin y
estabiliza el estado de nimo, ayuda en el tratamiento de la migraa,
ayuda a que el sistema inmunolgico funcione correctamente. El
Triptfano ayuda en el control de peso mediante la reduccin de
apetito, aumenta la liberacin de hormonas de crecimiento y ayuda a
controlar la hiperactividad en los nios.


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Valina
La Valina es necesaria para el metabolismo muscular y la
coordinacin, la reparacin de tejidos, y para el mantenimiento del
equilibrio adecuado de nitrgeno en el cuerpo, que se utiliza como
fuente de energa por el tejido muscular. Este aminocido es til en el
tratamiento de enfermedades del hgado y la vescula biliar, promueve
el vigor mental y las emociones tranquilas.
Alanina
Desempea un papel importante en la transferencia de nitrgeno de los tejidos
perifricos hacia el hgado, ayuda en el metabolismo de la glucosa, un carbohidrato
simple que el cuerpo utiliza como energa, protege contra la acumulacin de
sustancias txicas que se liberan en las clulas musculares cuando
la protena muscular descompone rpidamente para satisfacer las
necesidades de energa, como lo que sucede con el ejercicio
aerbico, fortalece el sistema inmunolgico mediante la produccin
de anticuerpos.
2.3.2 Aminocidos no esenciales

Los aminocidos no esenciales son aquellos que pueden ser sintetizados en el
organismo a partir de otras sustancias.
Arginina
Este aminocido est considerado como "El Viagra Natural" por el aumento del flujo
sanguneo hacia el pene, retrasa el crecimiento de los tumores y el cncer mediante
el refuerzo del sistema inmunolgico, aumenta el tamao y la
actividad de la glndula del timo, que fabrica las clulas T,
componentes cruciales del sistema inmunolgico. La Arginina, ayuda
en la desintoxicacin del hgado neutralizando el amoniaco, reduce
los efectos de toxicidad crnica de alcohol, que se utiliza en el
tratamiento de la esterilidad en los hombres, aumentando el conteo
de espermatozoides; ayudas en la prdida de peso, ya que facilita
un aumento de masa muscular y una reduccin de grasa corporal,
ayuda a la liberacin de hormonas de crecimiento, que es crucial
para el "crecimiento ptimo" msculo y la reparacin de tejidos, es
un componente importante del colgeno que es bueno para la artritis y trastornos
del tejido conectivo y ayuda a estimular el pncreas para que libere insulina.
cido Asprtico
El cido Asprtico aumenta la resistencia y es bueno para la fatiga crnica y la
depresin, rejuvenece la actividad celular, la formacin de clulas y el metabolismo,
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que le da una apariencia ms joven, protege el hgado, ayudando a
la expulsin de amoniaco y se combina con otros aminocidos para
formar molculas que absorben las toxinas y sacarlas de la
circulacin sangunea. Este aminocido tambin ayuda a facilitar la
circulacin de ciertos minerales a travs de la mucosa intestinal, en
la sangre y las clulas y ayuda a la funcin del ARN y ADN, que son
portadores de informacin gentica.
Cistena
La Cistena funciona como un antioxidante de gran alcance en la desintoxicacin de
toxinas dainas. Protege el cuerpo contra el dao por radiacin,
protege el hgado y el cerebro de daos causados por el alcohol, las
drogas y compuestos txicos que se encuentran en el humo del
cigarrillo, se ha utilizado para tratar la artritis reumatoide y el
endurecimiento de las arterias. Otras funciones de este aminocido es
promover la recuperacin de quemaduras graves y la ciruga, promover la quema
de grasa y la formacin de msculos y retrasar el proceso de envejecimiento. La
piel y el cabello se componen entre el 10% y el 14% de este aminocido.
cido Glutmico
El cido Glutmico acta como un neurotransmisor excitatorio del sistema nervioso
central, el cerebro y la mdula espinal. Es un aminocido importante
en el metabolismo de azcares y grasas, ayuda en el transporte de
potasio en el lquido cefalorraqudeo, acta como combustible para
el cerebro, ayuda a corregir los trastornos de personalidad, y es
utilizado en el tratamiento de la epilepsia, retraso mental, distrofia
muscular y lceras.
Glutamina
Es el aminocido ms abundante en los msculos. La Glutamina ayuda a construir
y mantener el tejido muscular, ayuda a prevenir el desgaste muscular
que puede acompaar a reposo prolongado en cama o enfermedades
como el cncer y el SIDA. Este aminocido es un "combustible de
cerebros" que aumenta la funcin cerebral y la actividad mental, ayuda
a mantener el equilibrio del cido alcalino en el cuerpo, promueve un
sistema digestivo saludable, reduce el tiempo de curacin de las
lceras y alivia la fatiga, la depresin y la impotencia, disminuye los
antojos de azcar y el deseo por el alcohol y ha sido usado
recientemente en el tratamiento de la esquizofrenia y la demencia.
Glicina
La Glicina retarda la degeneracin muscular, mejora el almacenamiento de
glucgeno, liberando as a la glucosa para las necesidades de energa, promueve
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una prstata sana, el sistema nervioso central y el sistema
inmunolgico. Es un aminocido til para reparar tejidos daados,
ayudando a su curacin.
Ornitina
Este aminocido ayuda a pedir la liberacin de hormonas de crecimiento, lo que
ayuda al metabolismo de la grasa corporal (este efecto es mayor si se combina con
la arginina y carnitina), es necesario para un sistema inmunolgico saludable,
desintoxica el amoniaco, ayuda en la regeneracin del hgado y estimula la
secrecin de insulina. La Ornitina tambin ayuda a que la insulina funcione como
una hormona anablica ayudando a construir el msculo.
Prolina
Funciones de este aminocido son mejorar la textura de la piel,
ayudando a la produccin de colgeno y reducir la prdida de colgeno
a travs del proceso de envejecimiento. Adems, la Prolina ayuda en la
cicatrizacin del cartlago y el fortalecimiento de las articulaciones, los
tendones y los msculos del corazn. La Prolina trabaja con la vitamina
C para ayudar a mantener sanos los tejidos conectivos.
Serina
Este aminocido es necesario para el correcto metabolismo de las grasas y cidos
grasos, el crecimiento del msculo, y el mantenimiento de un sistema
inmunolgico saludable. La Serina es un aminocido que forma parte
de las vainas de mielina protectora que cubre las fibras nerviosas, es
importante para el funcionamiento del ARN y ADN y la formacin de
clulas y ayuda a la produccin de inmunoglobulinas y anticuerpos.
Taurina
La Taurina fortalece el msculo cardaco, mejora la visin, y ayuda a prevenir la
degeneracin macular, es el componente clave de la bilis, la cual es necesaria para
la digestin de las grasas, til para las personas con aterosclerosis, edema,
trastornos del corazn, hipertensin o hipoglucemia. Es un aminocido vital para la
utilizacin adecuada de sodio, potasio, calcio y magnesio, ayuda a prevenir el
desarrollo de arritmias cardiacas potencialmente peligrosas. La taurina se ha
utilizado para tratar la ansiedad, epilepsia, hiperactividad, mal
funcionamiento cerebral y convulsiones.
Tirosina
Es un aminocido importante para el metabolismo general. La Tirosina
es un precursor de la adrenalina y la dopamina, que regulan el estado
de nimo. Estimula el metabolismo y el sistema nervioso, acta como
un elevador del humor, suprime el apetito y ayuda a reducir la grasa
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corporal. La Tirosina ayuda en la produccin de melanina (el pigmento responsable
del color del pelo y la piel) y en las funciones de las glndulas suprarrenales, tiroides
y la pituitaria, se ha utilizado para ayudar a la fatiga crnica, la narcolepsia,
ansiedad, depresin, el bajo impulso sexual, alergias y dolores de cabeza.
De acuerdo a Rodrguez (2006) los aminocidos como compuestos formados por
un grupo amino y un grupo carboxilo. La informacin me pareci interesante de la
cual me llamo mucho la atencin este apartado es que todos los organismos
necesitan ciertos aminocidos llamados esenciales o indispensables para su
desarrollo. Si no son administrados en la dieta, ocasionan desde trastornos o
defectos de crecimiento hasta la muerte.

2.4 Enlaces peptdicos.

2.4.1 Los pptidos y el enlace peptdico.

Los pptidos estn formados por la unin de aminocidos mediante un enlace
peptdico. Es un enlace covalente que se establece entre el grupo carboxilo de un
aminocido y el grupo amino del siguiente, dando lugar al desprendimiento de una
molcula de agua.




As pues, para formar pptidos los aminocidos se van enlazando entre s formando
cadenas de longitud y secuencia variable. Para denominar a estas cadenas se
utilizan prefijos convencionales como:

Oligopeptidos Menos de 10 AA

Dipeptidos

2 AA

Tripeptidos

3 AA


Tetrapeptidos

4 AA

17

2.4.2 Polipptidos o cadenas polipeptdicas.- si el n de aminocidos es
mayor de 10.

Cada pptido o polipptido se suele escribir, convencionalmente, de izquierda a
derecha, empezando por el extremo N-terminal que posee un grupo amino libre y
finalizando por el extremo C-terminal en el que se encuentra un grupo carboxilo
libre, de tal manera que el eje o esqueleto del pptido, formado por una unidad de
seis tomos (-NH-CH-CO-), es idntico a todos ellos. Lo que vara de unos pptidos
a otros, y por extensin, de unas protenas a otras, es el nmero, la naturaleza y el
orden o secuencia de sus aminocidos.
Si la hidrlisis de una protena produce nicamente aminocidos, la protena se
denomina simple. Si, en cambio, produce otros compuestos orgnicos o
inorgnicos, denominados grupo prosttico, la protena se llama conjugada

Tema 3: Clasificacin.

La forma de clasificar a las protenas es variada y compleja. Segn Gonzlez (2004)
las protenas se clasifican en cuatro principales criterios, dependiendo su
solubilidad, estructura, componentes y funciones.

3.1 Solubilidad.

El criterio fsico ms utilizado es la solubilidad. As se distinguen:

1. albminas: protenas que son solubles en agua o en disoluciones salinas diluidas
2. globulinas: requieren concentraciones salinas ms elevadas para permanecer
en disolucin
3. pro laminas: solubles en alcohol
4. glutaminas: slo se disuelven en disoluciones cidas o bsicas
5. Escleroproteinas: son insolubles en la gran mayora de los disolventes

Albuminas:
18

Las albminas son las protenas ms abundantes del cuerpo humano. De hecho,
representan el 60 %. Son uno de los tres componentes del plasma de la sangre, con
las globulinas y el fibringeno.
Fabricadas por el hgado, transportan elementos de la sangre como los factores de
coagulacin o incluso las hormonas. Su funcin es mantener el equilibrio hdrico de
la sangre.
Funciones de la albmina:
Mantenimiento de la presin onctica.
Transporte de hormonas tiroideas.
Transporte de hormonas liposolubles.
Transporte de cidos grasos libres. (Esto es, no esterificados)
Transporte de bilirrubina no conjugada.
Transporte de muchos frmacos y drogas.
Unin competitiva con iones de calcio.
Control del pH.
Funciona como un transportador de la sangre y lo contiene el plasma

Tipos de albmina:
Seroalbmina: Es la protena del suero sanguneo.
Ovoalbmina: Es la albmina de la clara del huevo.
Lactoalbmina: Es la albmina de la leche.
Globulinas
Las globulinas son un grupo de protenas solubles en agua que se encuentran en
todos los animales y vegetales.
Entre las globulinas ms importantes destacan las seroglobulinas (de la sangre), las
lactoglobulinas (de la leche), las ovoglobulinas (del huevo), la legumina, el
fibringeno, los anticuerpos (gamma-globulinas) y numerosas protenas de las
semillas.
Las globulinas son un importante componente de la sangre, especficamente del
plasma. stas se pueden dividir en varios grupos.
Principales grupos de globulinas:
19

- globulinas alfa 1 y 2
- globulinas beta
- globulinas psilon.
Globulinas alfa 1:
La alfa 1 o anti tripsina: Es la encargada de controlar la accin de las enzimas
lisosomales.
Globulinas alfa 2:
El grupo de las globulinas alfa 2 est compuesto por las siguientes:
La macro globulina (alfa 2): La funcin primordial de sta es neutralizar las enzimas
proteolticas.
La haptoglobina: Es la encargada de fijar la Hb plasmtica de los eritrocitos, y la
transporta al hgado para que no se excrete por la orina.
La ceruloplasmina: Transporta y fija el 90 por ciento del cobre srico.
La eritropoyetina: Sintetizada en el rin ante una hipoxemia, es la responsable de
la formacin de eritrocitos y plaquetas.
Globulinas beta
La hemopexina: Es la que fija y transporta el grupo hemo de la hemoglobina (Hb)
hacia el hgado.
La transferrina: Transporta hierro del intestino a depsitos de ferritina en diferentes
tejidos, y de all a donde sean necesarios.
Prolaminas:
Las prolaminas son un grupo de protenas de diversas plantas con un alto contenido
de prolina y se encuentra en las semillas de cereales: trigo (gliadinas), cebada
(hordena), centeno (secalina), maz (zeina) y como una protena de menor
importancia, la avenina de la avena. Se caracterizan por un alto contenido en
glutamina y prolina. Algunas prolaminas, en particular, la gliadina, y protenas
similares encontradas en el gnero Triticeae pueden inducir a la enfermedad
celaca.
Prolina es el precursor nico de la hidroxipolina, un intermediario indispensable para
la produccin de colgeno es el cemento que estructura la piel, ligamentos, arterias,
tendones, cartlagos.
Glutelinas:
20

Estas protenas son solubles en cidos diluidos y en lcalis. La protena de
Glutelinas de trigo es un buen ejemplo de Glutelinas. stas, slo se producen en el
material vegetal.
Escleroproteinas:
Estas protenas son insolubles en agua y forman estructuras alargadas.
Se agregan fuertemente formando fibras o laminas. La mayor parte desempean un
papel estructural y/o mecnico. Tienden a formar estructuras de alta regularidad, lo
cual deriva a su vez de la alta regularidad de la estructura primaria. Usualmente son
ricas en aminocidos modificados. Ejemplos de estas protenas son la queratina y
el colgeno.
3.2 Forma.

En cuanto a su forma molecular, podemos distinguir:
Protenas globulares: la cadena poli peptdica aparece enrollada sobre s misma
dando lugar a una estructura ms o menos esfrica y compacta.
protenas fibrosas: si hay una dimensin que predomina sobre las dems, se dice
que la protena es fibrosa. Las protenas fibrosas, por lo general, tienen funciones
estructurales.
Las protenas fibrosas son molculas muy alargadas, cuyas estructuras secundarias
constituyen sus motivos estructurales predominantes. Las protenas fibrosas
desempean un papel estructural, en funciones de conexin, de proteccin o de
soporte. Otras, como las protenas ciliares y musculares presentan funciones
motrices.
Entre las protenas fibrosas podemos encontrar la alfa-queratina, componente
principal del pelo y las uas; el colgeno, presente en la piel, los tendones, huesos
y dientes.
Es el principal componente de la epidermis exterior dura y de sus apndices, como
el pelo, cuerno, uas y plumas. Se clasifican en a queratinas, que se encuentran en
mamferos, y b queratinas, presentes en pjaros y reptiles.
Pelo
Estudios de microscopa electrnica indican que el pelo, constituido principalmente
por a -queratina, consiste en una jerarqua de estructuras. El pelo tiene un dimetro
de 20 A y est constituido por clulas muertas, cada una de las cuales contiene
macrofibrillas empaquetadas (2000 A de dimetro) con una orientacin paralela a
la fibra del pelo.
El colgeno
21

El colgeno es una protena fibrosa componente de la piel, los huesos, los tendones
y los dientes. La unidad bsica de la fibra de colgeno es una triple hlice
denominada tropocolgeno Cada cadena del tropocolgeno, de unos 1000 residuos
de longitud, est formado por una hlice a izquierda con 3,3 residuos por vuelta y
0,29 nm de elevacin. Las tres cadenas que forman el tropocolgeno se enrollan
entre s a derechas. La secuencia de aminocidos del colgeno es
extraordinariamente regular. Prcticamente cada tres residuos contiene una glicina,
tambin presenta una mayor proporcin de prolina que el resto de las protenas.
Otra caracterstica es la presencia de residuos de 4-hidroxiprolina, aminocidos que
raramente se encuentra en otras protenas.
Fibrona de la seda.
La mayor parte de las sedas estn constituidas por la protena fibrosa fibrona y por
una protena amorfa viscosa sericina, que desempea el papel de cementacin.
La fibrona de la seda est formada por cadenas con plegamiento b anti paralelo,
en el cual las cadenas se extienden paralelamente al eje de la fibra. Los estudios
muestran que grandes extensiones de la cadena estn constituidas por seis
residuos que se repiten.
Protenas globulares.

Las protenas globulares, o esferoprotenas son uno de los tres tipos principales de
la clasificacin de las protenas por su forma (globulares,fibrosas y mixtas),
diferencindose fundamentalmente de las fibrosas por ser ms o menos solubles
en disoluciones acuosas (donde forman suspensiones coloidales), siendo las
fibrosas prcticamente insolubles.
Las cadenas poliptidas se pliegan en forma esfrica y poseen una esttructura ms
complejas que las anteriores, ya que puede haber ms de una estructura secundaria
en la misma molcula. Son solubles en agua.

Algunas de las ms importantes son:
Mioglobina: interviene en el transporte y almacenamiento de oxgeno.
Citocromo: es componente de la cadena respiratoria en las mitocondrias.
Ribonucleasa: cataliza ciertos enlaces de ARN
lisozima: cataliza la rotura hidroltica de los polisacridos

22

3.3 Funciones.

Este tipo de divisin lo revisamos en el subtema 1.2, pero no est dems volver a
presentarlo para que quede ms explcita esta informacin:

Catalizacin: Est formado por enzimas proteicas que se encargan de
realizar reacciones qumicas de una manera ms rpida y eficiente. Procesos
que resultan de suma importancia para el organismo. Por ejemplo la pepsina,
sta enzima se encuentra en el sistema digestivo y se encarga
de degradar los alimentos.
Regulacin: Las hormonas son un tipo de protenas las cuales ayudan a que
exista un equilibrio entre las funciones que realiza el cuerpo. Tal es el caso
de la insulina que se encarga de regular la glucosa que se encuentra en
la sangre.
Estructuracin: Este tipo de protenas tienen la funcin de dar resistencia y
elasticidad que permite formar tejidos as como la de dar soporte a otras
estructuras. Este es el caso de la tubulina que se encuentra en
el citoesqueleto.
Defensa: Son las encargadas de defender al organismo. Glicoprotenas que
se encargan de producir inmunoglobulinas que defienden al organismo
contra cuerpos extraos, o la queratina que protege la piel, as como
el fibringeno y protrombina que forman cogulos.
Transporte: La funcin de estas protenas es llevar sustancias a travs del
organismo a donde sean requeridas. Protenas como la hemoglobina que
lleva el oxgeno por medio de la sangre.
Recepcin: Este tipo de protenas se encuentran en la membrana celular y
llevan a cabo la funcin de recibir seales para que la clula pueda realizar
su funcin, como acetilcolina que recibe seales para producir la contraccin.

Tema 4: Sntesis de protenas.

La sntesis de protenas es uno de los procesos celulares ms importantes que
suceden en el organismo, puesto que es esencial para la creacin de estas
biomoleculas. En el rea mdica es primordial comprender y estudiar con gran
23

detenimiento este proceso, ya que es como veremos, hay patologas relacionadas
a este proceso, lo cual estudiaremos a continuacin.

4.1 Qu significa sntesis de protenas?.

Este proceso a grandes rasgos es el mecanismo celular por medio del cual las
clulas generan nuevas protenas por medio de la combinacin de los 20
aminocidos primordiales que existen, los cuales estudiamos anteriormente.
Este nuevo procesamiento de protenas sucede en los ribosomas de las clulas
eucariotas, encontradas en el retculo endoplsmico rugoso, en donde por medio de
una sustancia conocida como ARNm (cido ribonucleico mensajero), es la
encargada de enviar la orden desde el ADN (cido desoxirribonucleico) a este
orgnulo celular para luego llevar a cabo este proceso. Este proceso se divide en
dos etapas muy importantes: La traduccin del ARN mensajero y continuamente las
modificaciones postraduccin, las cuales veremos a continuacin.

4.2 Etapa de traduccin del ARN mensajero.

Esta etapa de la generacin de protenas es la inicial, la cual se caracteriza por estar
implicadas con mayor importancia una serie de componentes, como son:

ARN mensajero: El ARN mensajero (ARNm) transmite la informacin
gentica almacenada en el ADN. Mediante el proceso conocido
como transcripcin, secuencias especficas de ADN son copiadas en forma
de ARNm que transporta el mensaje contenido en el ADN a los sitios de
sntesis proteica (los ribosomas).
ARN de transferencia y aminocidos: Los aminocidos (componentes de
las protenas) son unidos a los ARN de transferencia (ARNt) que los llevarn
hasta el lugar de sntesis proteica, donde sern encadenados uno tras otro.
La enzima aminoacil ARNt - sintetasa se encarga de dicha unin, en un
proceso que consume ATP.
Ribosomas: Los ribosomas son los orgnulos citoplasmticos encargados
de la biosntesis proteica; ellos son los encargados de la unin de los
24

aminocidos que transportan los ARNt siguiendo la secuencia
de codones del ARNm segn las equivalencias del cdigo gentico.

Con los anteriores elementos, la clula procesa estas protenas por medio de la
siguiente secuencia de eventos.

4.2.1 Transduccin.

El proceso de transduccin o tambin llamado replicacin del ADN, inicia dentro del
ncleo de la clula, en la cual una seccin del ADN es separada por medio de una
enzima llamada Helicasa, la cual junto con las protenas fijadoras de ADN; las
cuales son un conjunto de protenas que impiden que al partirse el ADN por efecto
de la Helicasa vuelva a tomar su estructura natural (renaturalice) o forme estructuras
secundarias, lo cual hace que estas dos partes funcionen como moldes para la
replicacin de otra molcula de ADN.
Despus de que la Helicasa funciona, la enzima ARN polimerasa entra en medio de
las dos hlices formadas, procediendo a tomar una hlice como molde, de la cual
copiaran la informacin gentica necesaria para crear el ARN mensajero, el cual
llevara la informacin de forma codificada por medio de las bases nitrogenadas
(Las bases nitrogenadas son compuestos orgnicos cclicos, que incluyen dos o
ms tomos de nitrgeno) de la adenina, citosina, guanina y timina, las cuales
servirn para la futura creacin de protenas.
Continuamente, la enzima RNA primasa, acta sobre los segmentos de la hlice,
sustituyendo el fragmento de ADN faltante por la ADN polimerasa I. Estos
fragmentos son unidos luego por la enzima ADN ligasa, el cual une estos segmentos
de ADN polimerasa con una de las hebras, formando dos molculas de ADN (figura
4), las cuales contendrn una hembra vieja y una hija, otorgndole la caracterstica
de ser llamado este proceso como semiconservador.







Figura 4: Proceso de replicacin.
25

4.2.2 Transcripcin.

Para formar la cadena de ARN a partir del ADN se debe tener en cuenta que cada
nucletido del ADN se ensambla con un determinado nucletido del ARN. La
molcula helicoidal de ADN se desenrolla y deja accesible la cadena a partir de la
cual se inicia la sntesis (armado) del ARN. La enzima (polimerasa del ARN) que
controla la reaccin detecta una regin de la secuencia del ADN, llamada promotor,
que marca el punto de inicio de la sntesis. Los nucletidos se aaden uno por uno
en orden complementario, de esta manera la adenina del ADN se combina con el
uracilo del ARN (A U), en el mismo orden, la timina se ensambla con la adenina
(T A), y la citosina se combina con la guanina y
viceversa (C G, G C). Hay por lo tanto
complementariedad entre el ARN y el ADN de donde
se copia. Al conservar la informacin impresa en esta
parte del genoma (dotacin gentica), el ARN se
constituye en portador de las instrucciones que
determinan la secuencia de aminocidos de una
protena. Dichas instrucciones, en clave, se descifran
leyendo los nucletidos de tres en tres ("tripletes"), y
cada triplete de nucletido, que determina uno de los
20 aminocidos existentes, recibe el nombre de
codn. Durante la traduccin, a medida que se "leen"
los codones, se van aadiendo los aminocidos
correspondientes a la protena que se est formando.

4.2.3 Traduccin.

La sntesis de las protenas se lleva a cabo en el citoplasma de la clula, a diferencia
de la transcripcin del ARN que se produce en el ncleo. El ARNm contiene un
cdigo que se utiliza como molde para la sntesis de protenas. Es decir, se traduce
el lenguaje de la serie de bases nitrogenadas del ARNm al lenguaje de la serie de
aminocidos de la protena. Este proceso denominado traduccin se realiza en los
ribosomas adosados en la membrana del retculo endoplsmico granular o rugoso.
El ribosoma est formado por dos subunidades, una mayor y otra menor.

Los ribosomas utilizan el cdigo gentico para establecer la secuencia de
aminocidos que ha sido codificada por el ARN mensajero. Los aminocidos que
van a formar las protenas estn dispersos en el citoplasma celular. Son acercados
al ARN mensajero por el ARN de transferencia (ARNt). Uno de los lados del ARNt
transporta un triplete de bases llamado anti codn. En el otro lado se une un
Figura 5: Proceso de transcripcin de ARN.
26

aminocido, proceso que demanda gasto de energa
por transformacin de adenosin trifosfato (ATP) en
adenosin monofosfato (AMP).
La sntesis o traduccin de las protenas se divide en
tres fases, llamadas de iniciacin, de elongacin y de
terminacin.

Fase de iniciacin.

La sntesis de protenas comienza en el momento
en que el ARN mensajero se mueve por el ribosoma
hasta el codn AUG. Las subunidades ribosomales
se unen.

En ese preciso instante, el anticodn del ARN de
transferencia se une al codn AUG del ARNm
transportando el aminocido metionina.
Fase de elongacin.

Llega un segundo ARNt llevando su respectivo
aminocido y se acopla al siguiente codn del
ARNm, para el ejemplo, al codn CCU. Hasta aqu
se ha formado un dipptido, donde ambos
aminocidos permanecen unidos por un enlace
peptdico.
El primer ARNt que lleg al ribosoma se retira del complemento ribosmico en busca
de otros aminocidos. El tercer ARNt llega con otro aminocido y se une al codn
del ARNm, a AUC en el ejemplo. El aminocido se adhiere al dipptido antes
formado mediante otro enlace peptdico.
El segundo ARNt se retira del ribosoma. Un cuarto ARNt llega con su aminocido
hasta el ribosoma para acoplarse con el codn UCA del ARNm. La secuencia se
repite tantas veces como aminocidos tenga la futura protena.

Fase de terminacin
La etapa final de la sntesis de protenas contina hasta que aparecen los llamados
codones stop o de terminacin, representados por UUA, UAG y UGA. No existen
anticodones complementarios para los codones stop.

27


En cambio, quienes s reconocen a estos codones son unas protenas
llamadas factores de terminacin, que detienen la sntesis de protenas.
La protena formada se desprende del ribosoma y queda libre en el citoplasma, lista
para ser utilizada por la clula para cumplir una determinada funcin.
El ARNm se desprende del ribosoma y puede ser ledo de nuevo por otros
ribosomas, incluso en forma simultnea. Tambin se liberan el ARNt y el factor de
terminacin. Las subunidades del ribosoma se separan.







4.3 Etapa de Postraduccin.

Algunas protenas emergen del ribosoma preparadas para ejercer su funcin de
inmediato, mientras que otras experimentan diversas modificaciones postraduccin,
que pueden conducir a la protena a la adquisicin de su forma funcional, a su
traslado a un compartimento sub celular determinado, a su secrecin al exterior de
la clula, etc.
4.3.1 Plegamiento.

Muchas protenas adquieren espontneamente la correcta conformacin
tridimensional, pero otras muchas solo adquieren la conformacin correcta con la
ayuda de una o ms protenas chaperonas. Las chaperonas se unen
reversiblemente a regiones hidrfobo - hidrofbicas de las protenas desplegadas y
a los intermediarios de plegamiento; pueden estabilizar intermediarios, mantener
protenas desplegadas para que pasen con facilidad a travs de membranas, ayudar
Proceso de traduccin.
28

a desplegar segmentos plegados incorrectamente, impedir la formacin de
intermediarios incorrectos o impedir interacciones inadecuadas con otras protenas.
4.3.2 Glucosilacin.

La Glucosilacin es la adicin de uno o ms glcidos a una protena lo que da lugar
a las glucoprotenas, que son esenciales en los mecanismos de reconocimiento
celular. La Glucosilacin puede implicar la adicin de unas pocas molculas
glucdicas o de grandes cadenas ramificadas de oligosacridos. Existe un centenar
de glucosiltransferasas distintas, las enzimas encargadas de realizar este proceso.
El mecanismo es bsicamente el mismo en todos los casos; un azcar es transferido
desde un sustrato dador activado hasta un aceptor apropiado.
4.3.3 Protelisis parcial.

La protelisis parcial es una etapa frecuente en los procesos de maduracin de las
protenas. Pueden eliminarse secuencias de aminocidos en ambos extremos o en
el interior de la protena. La protelisis en el retculo endoplsmico y en el aparato
de Golgi son, por ejemplo, esenciales en la maduracin de la insulina; la
preproinsulina codificada por el ARNm es introducida en el retculo endoplsmico;
una peptidasa la corta y origina la proinsulina que se pliega para formar los puentes
disulfuro correctamente; la proinsulina es transportada al aparato de Golgi, donde
es empaquetada en grnulos de secrecin; entonces se elimina un fragmento
(pptido C) por protelisis originando la insulina funcional, que es secretada.
La hiperproinsulinemia familiar es una enfermedad
gentica autosmica dominante causada por un defecto en el proceso de
maduracin de la proinsulina, que da lugar a la presencia en el torrente circulatorio
de insulina y de proinsulina en cantidades similares.
4.3.4 Modificacin de aminocidos.

Slo 20 aminocidos estn codificados genticamente y son incorporados durante
la traduccin. Sin embargo, las modificaciones postraduccin conducen a la
formacin de 100 o ms derivados de los aminocidos. Las modificaciones de los
aminocidos juegan con frecuencia un papel de gran importancia en la correcta
funcionalidad de la protena.
Son numerosos los ejemplos de modificacin postraduccin de aminocidos. La
formacin postraduccin de puentes disulfuro, bsicos en la estabilizacin de
la estructura terciaria de las protenas est catalizada por una disulfuro isomerasa.
En las histonas tiene lugar la metilacin de las lisinas. En el colgeno abunda el
aminocido 4-hidroxiprolina, que es el resultado de la hidroxilacin de la prolina. La
29

traduccin comienza con el codn "AUG" que es adems de seal de inicio significa
el aminocido metionina, que casi siempre es eliminada por protelisis.

Tema 5: Niveles de Organizacin estructural.

Segn Mckee (2003) & Harper (2010), existen varios niveles en la organizacin
estructural de las protenas. La estructura primaria, la secuencia de aminocidos,
est especificada por la informacin gentica. Al plegarse la cadena polipeptdica
se forman determinadas disposiciones localizadas de los aminocidos adyacentes
que constituyen la estructura secundaria. La forma tridimensional global que asume
un polipptido se denomina estructura terciaria. Las protenas que constan de dos
o ms cadenas polipeptdicas (o subunidades) se dice que tienen estructura
cuaternaria. Todo lo anterior lo revisaremos a continuacin.

5.1 Estructura primaria.

Cada polipptido tiene una secuencia de aminocidos especfica. Las interacciones
entre los residuos de aminocidos determinan la estructura tridimensional de la
protena, su papel funcional y sus relaciones con otras protenas. Los polipptidos
que tienen secuencias de aminocidos y funciones semejantes se dice que son
homlogos. Las comparaciones de secuencias de polipptidos homlogos han sido
utilizadas para trazar las relaciones genticas de las distintas especies. Por ejemplo,
las homologas de secuencia de la protena redox mitocondrial citocromo c se han
utilizado mucho en el estudio de la evolucin. Las comparaciones de la secuencia
del citocromo c de numerosas especies han descubierto una cantidad significativa
de conservacin de la secuencia. Los residuos de aminocidos que son idnticos
en las protenas homlogas, que se denominan invariables, se supone que son
esenciales para la funcin de la protena. (En el citoctromo c los residuos invariables
interaccionan con el hemo, un grupo prosttico, o determinadas protenas que
participan en la generacin de energa.)

5.2 Estructura secundaria.

La estructura secundaria de los polipptidos consta de varios patrones repetitivos.
Los tipos de estructura secundaria que se observan con mayor frecuencia son la
hlice . y la lmina plegada . Tanto la hlice a. como la lmina plegada estn
estabilizadas por enlaces de hidrgeno entre los grupos carbonilo y N - H del
esqueleto polipeptdico. Estos patrones se producen cuando todos los ngulos (fi)
(ngulo de rotacin alrededor de C, -C) en un segmento polipeptdico son iguales y
todos los ngulos (psi) (ngulo de rotacin alrededor de Ca - N) son iguales. Debido
a que los enlaces peptdicos son rgidos, los carbonos a. son puntos de giro para la
30

cadena polipeptdica. Varias propiedades de los grupos R (p. ej., tamao y carga, si
hay) unidos al carbono . influyen sobre los ngulos cp y i/J. Determinados
aminocidos estimulan o inhiben patrones especficos de estructura secundaria.
Muchas protenas fibrosas estn formadas casi en su totalidad por patrones
estructurales secundarios.
La hlice . es una estructura rgida en forma de varilla que se forma cuando una
cadena polipeptdica se retuerce en una conformacin helicoidal a derechas.
Se forman enlaces de hidrgeno entre el grupo N-H de cada aminocido y el grupo
carbonilo del aminocido que se encuentra cuatro residuos ms adelante.
Existen 3.6 residuos de aminocido por vuelta de la hlice, y el paso (la distancia
entre los puntos correspondientes de cada vuelta) es 54 nm. Los grupos R de los
aminocidos se extienden hacia fuera de la hlice. Debido a varias restricciones
estructurales (esto es, la rigidez de los enlaces peptdicos y los lmites permitidos a
los valores de los ngulos cp y i/J), determinados aminocidos no estimulan la
formacin de hlice . Por ejemplo, el grupo R de la glicina (un tomo de hidrgeno)
es tan pequeo que la cadena polipeptdica puede ser demasiado flexible. Por otro
lado, la prolina contiene un anillo rgido que impide que gire el enlace N -Ca.
Adems, la prolina no tiene grupo N - H para formar los enlaces de hidrgeno
intracadena que son cruciales en la estructura de hlice a. Las secuencias de
aminocidos con un nmero grande de aminocidos cargados (p. ej., glutamato y
aspartato) y grupos R voluminosos (p. ej., triptfano) son tambin incompatibles con
las estructuras de hlice . Las lminas plegadas se forman cuando se alinean de
lado dos o ms segmentos de cadenas polipeptdicas.
Cada segmento individual se denomina una cadena . En lugar de estar enrollada,
cada cadena est totalmente extendida.
Las lminas plegadas estn estabilizadas por enlaces de hidrgeno que se forman
entre los grupos N-H y carbonilo del esqueleto polipeptdico de cadenas adyacentes.
Hay dos tipos de lminas plegadas : paralelas y antiparalelas. En las estructuras
de lminas plegadas paralelas las cadenas polipeptdicas estn colocadas en la
misma direccin. Las cadenas antiparalelas van en direcciones opuestas. Las
lminas antiparalelas son ms estables que las lminas paralelas debido a que
se forman enlaces de hidrgeno totalmente colineales. En ocasiones se observan
lminas paralelas y antiparalelas mezcladas.
Muchas protenas globulares contienen combinaciones de estructuras secundarias
de hlice . y lmina plegada . Estos patrones se denominan estructuras super
secundarias.
En la unidad a estn conectadas dos lminas plegadas paralelas mediante un
segmento de hlice . En el patrn meandro estn conectadas dos lminas
antiparalelas mediante aminocidos polares y glicinas para realizar un cambio
brusco de la direccin de la cadena polipeptdica denominada inversa o giro . En
las unidades ., dos hlices . sucesivas separadas por un lazo o segmento no
helicoidal quedan engranadas debido a la compatibilidad de las cadenas laterales.
Se forman varias disposiciones de barriles cuando varias configuraciones de
lmina se repliegan sobre s mismas. Cuando una lmina antiparalela se dobla
sobre s misma en un patrn que se asemeja a un diseo de alfarera griega, el
motivo se denomina llave griega.

31

5.3 Estructura terciaria.


Aunque las protenas globulares suelen contener cantidades significativas de
elementos estructurales secundarios, otros factores contribuyen a su estructura.
El trmino estructura terciaria seala las conformaciones tridimensionales nicas
que asumen las protenas globulares al plegarse en sus estructuras nativas
(biolgicamente activas). El plegamiento proteico, un proceso en el que una
molcula desorganizada naciente (recin sintetizada) adquiere una estructura muy
organizada, se produce como consecuencia de las interacciones entre las cadenas
laterales en su estructura primaria. La estructura terciaria tiene varias caractersticas
importantes:
1. Muchos polipptidos se pliegan de forma que los residuos de aminocido
distantes en la estructura primaria quedan cerca.
2. Debido al eficaz empaquetamiento al plegarse la cadena polipeptdica, las
protenas globulares son compactas. Durante este proceso, la mayora de las
molculas de agua quedan excluidas del interior de la protena permitiendo las
interacciones entre los grupos polares y apolares.
3. Las protenas globulares grandes (es decir, aquellas con ms de 200 residuos de
aminocido) suelen contener varias unidades compactas denominadas dominios.
Los dominios son segmentos estructuralmente independientes que poseen
funciones especficas (p. ej., unin de un ion o molcula pequea).
La estructura terciaria se estabiliza por las interacciones siguientes:
1. Interacciones hidrfobas: Al plegarse un polipptido, los grupos R hidrfobos
se acercan debido a que son excluidos del agua. Luego, las molculas de agua muy
ordenadas en cubiertas de solvatacin se liberan del interior, aumentando el
desorden (entropa) de las molculas de agua. La variacin de entropa favorable
es una fuerza impulsora fundamental en el plegamiento proteico
2. Interacciones electrostticas: La interaccin electrosttica ms fuerte en las
protenas se produce entre los grupos inicos de carga opuesta. Denominados
puentes salinos, estos enlaces no covalentes slo son significativos en las regiones
de la protena donde est excluido el agua, debido a la energa que se requiere para
eliminar las molculas de agua de los grupos inicos cerca de la superficie. Se ha
observado que los puentes salinos contribuyen a las interacciones entre las
subunidades adyacentes en las protenas complejas. Lo mismo ocurre con las
interacciones electrostticas ms dbiles (ion-dipolo, dipolo-dipolo, Vander Waals).
Son significativas en el interior de la protena plegada y entre las subunidades o en
las interacciones protena-ligando. (En las protenas que constan de varias cadenas
polipeptdicas cada polipptido se denomina una subunidad. Los ligandos son
molculas que se unen a lugares especficos en molculas mayores, como las
protenas.) Los bolsillos de unin del ligando son regiones sin agua de las protenas.
3. Enlaces de hidrgeno: Se forman un nmero significativo de enlaces de
hidrgeno dentro del interior de una protena y sobre su superficie. Adems de
formar enlaces de hidrgeno entre ellas, las cadenas laterales polares de los
aminocidos pueden interaccionar con el agua o con el esqueleto polipeptdico. De
32

nuevo, la presencia de agua impide la formacin de enlaces de hidrgeno con otras
especies.
4. Enlaces covalentes: Las uniones covalentes se crean por reacciones qumicas
que alteran la estructura del polipptido durante su sntesis o posteriormente.
Los enlaces covalentes ms destacados en la estructura terciaria son los puentes
disulfuro, que se encuentran en muchas protenas extracelulares. En los ambientes
extracelulares estos enlaces fuertes protegen, en parte, a la estructura proteica de
los cambios adversos de pH o de concentracin salina. Las protenas intracelulares
no contienen enlaces disulfuro debido a las elevadas concentraciones citoplsmicas
de agentes reductores.

No se ha resuelto totalmente cul es la naturaleza precisa de las fuerzas que
impulsan el plegamiento de las protenas. Sin embargo, est claro que el
plegamiento proteico es un proceso termodinmicamente favorable, con una
variacin de energa libre global negativa. De acuerdo con la ecuacin de la energa
libre:
~G = ~H - T~S

Una variacin de energa libre negativa en un proceso es el resultado de un
equilibrio entre las variaciones de entalpa y entropa favorables y desfavorables. Al
plegarse la cadena polipeptdica, los valores de H favorables (negativos) son en
parte el resultado del secuestro de las cadenas laterales hidrfobas dentro del
interior de la molcula y la optimizacin de otras interacciones no covalentes. Se
oponen a estos factores la disminucin desfavorable de la entropa que tiene lugar
al plegarse el polipptido desorganizado en su estado nativo muy organizado. Para
la mayora de las molculas polipeptdicas la variacin de energa libre neta entre
los estados plegado y desplegado es relativamente modesta (la energa equivalente
a varios enlaces de hidrogeno). El equilibrio precario entre las fuerzas favorables y
desfavorables, permite a las protenas la flexibilidad que requiere la funcin
biolgica.

5.4 Estructura cuaternaria.



Muchas protenas, especialmente las que tienen pesos moleculares elevados, estn
formadas por varias cadenas polipeptdicas. Como se ha mencionado, cada
componente polipeptdico se denomina una subunidad. Las subunidades en un
complejo proteico pueden ser idnticas o bastante diferentes. Las protenas con
varias subunidades en las que alguna o todas las subunidades son idnticas se
denominan oligmeros. Los oligmeros estn formados por protmeros, que
pueden estar formados por una o varias subunidades. Un gran nmero de protenas
oligomricas contienen dos o cuatro subunidades protomricas, denominadas
dmeros y tetrmeros, respectivamente. Parece haber varias razones para que
existan las protenas con varias subunidades:
33

1. La sntesis de subunidades aisladas es ms eficaz que aumentar sustancialmente
la longitud de una nica cadena polipeptdica.
2. En los complejos supramoleculares, como las fibras de colgeno, la sustitucin
de componentes ms pequeos gastados o daados puede realizarse de manera
ms eficaz.
3. Las interacciones complejas de varias subunidades sirven para regular la funcin
biolgica de una protena.
Las subunidades polipeptdicas se ensamblan y se mantienen unidas por
interacciones no covalentes, corno el efecto hidrfobo, las interacciones
electrostticas y los enlaces de hidrgeno, as como los entrecruzamientos
covalentes. Como con el plegamiento proteico, el efecto hidrfobo es claramente el
ms importante, ya que las estructuras de las superficies de unin complementarias
entre las subunidades son semejantes a las observadas en el interior de los
dominios de las protenas globulares. Aunque son menos numerosos, los
entrecruzamientos covalentes estabilizan significativamente determinadas
protenas con varias subunidades. Entre los ejemplos ms destacados se
encuentran los puentes disulfuro de las inmunoglobulinas y los enlaces de
desmosina y Iisinonorleucina en determinadas protenas del tejido conjuntivo. Los
entrecruzamientos de desmosina conectan cuatro cadenas polipeptdicas en la
protena elastina del tejido conjuntivo, semejante a la goma.
Se forman como consecuencia de diversas reacciones que implican la oxidacin de
las cadenas laterales de lisina.
Se produce un proceso semejante en la formacin de lisinonorleucina, una
estructura entrecruzada que se encuentra en la elastina y el colgeno.
Con mucha frecuencia las interacciones entre las subunidades estn afectadas por
la unin de los ligandos. En el alosterismo, el control de la funcin proteica mediante
la unin de ligandos, la unin de un ligando a un lugar especfico en una protena,
desencadena un cambio conformacional que altera su afinidad por otros ligandos.
Los cambios conformacionales inducidos por el ligando en esas protenas se
denominan transiciones alostricas, y los ligandos que las desencadenan efectores
o moduladores. Los efectos alostricos pueden ser positivos o negativos,
dependiendo de si la unin del efector aumenta o disminuye la afinidad de la
protena por otros ligandos.

5.5 Prdida de la estructura proteica.



De acuerdo a Mckee (2003). Considerando las pequeas diferencias de energa
libre de las protenas plegadas y desplegadas, no es sorprendente que la estructura
proteica sea especialmente sensible a los factores del entorno.
Muchos agentes fsicos y qumicos pueden romper la conformacin nativa de una
protena.
El proceso de destruccin de la estructura se denomina desnaturalizacin.
34

(La desnaturalizacin normalmente no incluye la ruptura de los enlaces peptdicos.)
Dependiendo del grado de desnaturalizacin, la molcula puede perder parcial o
totalmente su actividad biolgica. La desnaturalizacin con frecuencia da lugar a
cambios observables de las propiedades fsicas de las protenas. Por ejemplo, la
albmina de huevo (clara de huevo) soluble y transparente se hace insoluble y
opaca tras calentarla. Como muchas desnaturalizaciones, frer huevos es un
proceso irreversible. El ejemplo siguiente de desnaturalizacin reversible lo
comprob Christian Anfinsen en 1950. La ribonucleasa pancretica de buey (una
enzima digestiva que degrada el RNA) se desnaturaliza cuando se trata con -
mercaptoetanol y urea 8 M.
Durante este proceso, la ribonucleasa, formada por una nica cadena polipeptdica
con cuatro puentes disulfuro, se despliega completamente y pierde toda la actividad
biolgica. La eliminacin cuidadosa mediante dilisis de los agentes
desnaturalizantes produce el repliegue correcto del polipptido y se vuelven a
formar los enlaces disulfuro. El hecho de que el experimento de Anfinsen conduzca
al restablecimiento total de la actividad cataltica de la enzima sirvi como primera
prueba de que la estructura tridimensional est determinada por la secuencia de
aminocidos del polipptido. Sin embargo, la mayora de las protenas que se tratan
de forma similar no se renaturalizan.
Las principales condiciones desnaturalizantes son las siguientes:
1. cidos y bases fuertes. Los cambios de pH dan lugar a la protonacin de algunos
grupos laterales de la protena, lo cual altera los patrones de enlace del hidrgeno
y los puentes salinos. Al acercarse la protena a su punto isoelctrico. sta se hace
insoluble y precipita la disolucin.
2. Disolventes orgnicos. Los disolventes orgnicos hidrosolubles, como el etanol,
interfieren con las interacciones hidrfobas, ya que interaccionan con los grupos R
apolares y forman enlaces de hidrgeno con el agua y los grupos polares de la
protena.
3. Detergentes. Estas molculas anfipticas rompen las interacciones hidrfobas,
haciendo que se desplieguen las protenas en cadenas polipeptdicas extendidas.
(Las molculas antipticas contienen simultneamente componentes hidrfobos e
hidrfilos.)
4. Agentes reductores. En presencia de reactivos como la urea, los agentes
reductores, como el -mercaptoetanol, convierten los puentes disulfuro en grupos
sulfhidrilos. La urea rompe los enlaces de hidrgeno y las interacciones hidrfobas.
5. Concentracin salina. La unin de iones salinos a los grupos ionizables de una
protena disminuye la interaccin entre los grupos de carga opuesta sobre la
molcula proteica. Las molculas de agua pueden entonces formar esferas de
solvatacin alrededor de estos grupos.
Cuando se aaden grandes cantidades de sal a una protena en disolucin se forma
un precipitado. El gran nmero de iones salinos puede competir de forma eficaz con
la protena por las molculas de agua, es decir, se eliminan las esferas de
solvatacin que rodean a los grupos ionizados de la protena. Las molculas
proteicas se agregan y luego precipitan. Este proceso se denomina
salting out. Debido a que el salting out es reversible, suele emplearse como un
primer paso en la purificacin de protenas.
6. Iones metlicos pesados. Los metales pesados, como el mercurio (Hg
35

+) y el plomo (Pb 2+), afectan de varias maneras a la estructura proteica. Pueden
romper los puentes salinos al formar enlaces inicos con los grupos con carga
negativa. Los metales pesados tambin forman enlaces con los grupos sulfbidrilo,
un proceso que puede dar lugar a cambios significativos de la estructura y funcin
proteica. Por ejemplo, el Pb 2+ se une a los grupos sulfhidrilo de dos enzimas de la
ruta de sntesis del hemo. El descenso de la sntesis de hemoglobina que se
produce da lugar a una anemia grave. (En la anemia disminuye por debajo de lo
normal el nmero de eritrocitos o la concentracin de hemoglobina.) La anemia es
uno de los sntomas que se mide con mayor facilidad en el envenenamiento por
plomo.
7. Cambios de temperatura. Al aumentar la temperatura, aumenta la velocidad de
vibracin molecular. Finalmente, se rompen las interacciones dbiles como los
enlaces de hidrgeno, y la protena se despliega. Algunas protenas son ms
resistentes a la desnaturalizacin por el calor, y este hecho puede utilizarse en los
procedimientos de purificacin.
8. Agresin mecnica. Las acciones de agitacin y trituracin rompen el delicado
equilibrio de fuerzas que mantiene la estructura proteica.
Por ejemplo, la espuma que se forma cuando se bate vigorosamente la clara de
huevo contiene protena desnaturalizada.


Tema 6: Mtodos de separacin y anlisis de las protenas.
Tcnica de Western Blott.

6.1 En qu consiste la tcnica?.



El Western Blott o tambin llamada oinmunoblot, es una tcnica analtica usada
para detectar protenas especficas en una muestra determinada. Mediante una
electroforesis en gel se separan las protenas. Las protenas son transferidas desde
el gel a la membrana electroforticamente.
6.1.1Fundamentos

Electroforesis: Para entender la tcnica del Western Blott es necesario comprender
que es una electroforesis y en que se basa. Las protenas suelen tener carga neta;
por lo tanto, si se aplica un campo elctrico a una solucin que contenga una mezcla
de protenas, stas migrarn a una velocidad que depender de su carga neta,
forma y peso molecular. Esta tcnica es conocida como electroforesis. Las
36

separaciones electroforticas se realizan casi siempre en soportes slidos,
generalmente para separar una mezcla de protenas, el soporte de eleccin son los
geles de poliacrilamida.
Western Blott: La tcnica de inmunotransferencia (immunoblotting o Western Blott)
es un sistema rpido y muy sensible para la deteccin y caracterizacin de protenas
que se basa en la especificidad de reconocimiento entre antgeno y anticuerpo.
Implica la separacin por electroforesis en geles de poliacrilamida y una
transferencia cuantitativa e irreversible a una membrana, de las protenas de una
mezcla compleja (lisado total celular). Los antgenos que se han transferido a la
membrana son reconocidos por anticuerpos monoclonales o policlonales
especficos de ellos.

6.2 Tipos.

Se puede hablar de tipos de western Blott segn el tipo de deteccin de las
protenas. Directo: El anticuerpo primario marcado se une al antgeno de la
membrana y reacciona con el sustrato originando una seal detectable. En el
mtodo directo de deteccin, el anticuerpo primario que se utiliza para detectar el
antgeno sobre la superficie de la membrana, debe ir marcado con una enzima

6.2.1 Mtodo directo

El anticuerpo primario sin marcar reacciona con el antgeno. Luego, un anticuerpo
secundario marcado se une al primario y reacciona con el sustrato. En el mtodo
indirecto, se aade primero un anticuerpo primario sin marcar contra el antgeno de
la superficie de la membrana; posteriormente se aade un anticuerpo secundario
marcado contra el anticuerpo primario.
6.2.2 Mtodo indirecto.

Procedimiento.
El procedimiento de Blott consta de 5 etapas:
1- Inmovilizacin de protenas sobre la membrana, generalmente
mediante electrotransferencia.
Se construye lo que se conoce como sndwich, donde se apilan sucesivamente
una esponja plana, pape la absorbente, el gel, la membrana sinttica, ms papel
y finalmente otra esponja plana.
37

2- Saturacin de todos los lugares de unin de protenas de la membrana no
ocupados para evitar la unin no especfica de anticuerpos.
Bloqueo de la membrana, para prevenir la unin inespecfica delos anticuerpos a
otras protenas la membrana, con el riesgo asociado de tener un elevado
background o falsos positivos.
3- Incubacin del Blot con anticuerpos primarios contra la(s) protena(s) de
inters.
Lgicamente, la eleccin del anticuerpo primario para un Western Blot depender
del antgeno que se desee detectar y de los anticuerpos disponibles para ese
antgeno en concreto.
4- Incubacin del Blott con anticuerpos secundarios, o reactivos que actan
de ligando para el anticuerpo primario unido a enzimas u otros marcadores.
Como anticuerpos secundarios se suelen emplear anticuerpos que reconocen a las
inmunoglobulinas (o sea, el anticuerpo primario).5-Sistema de revelado de las
bandas de protenas marcadas con el complejo de anticuerpos.
Lavado de la membrana. Como otros Inmune ensayos, el Western Blott consiste en
una serie de pasos de incubacin con diferentes reactivos (tampones de bloqueo,
anticuerpos, etc.) separados por pasos de lavado. Estos lavados son necesarios
para eliminar los excesos de reactivos no unidos

6.3 Secuencia.


6.3.1 Paso uno: Electroforesis de las muestras de protenas.
Las protenas se desnaturalizan con calor, SDS y sustancias como beta
mercaptoetanol o ditiotreitol que rompen puentes -S-S--El SDS aporta cargas
negativas-Las protenas corren hacia el nodo (+) y se distribuyen en el gelde
acuerdo a su peso molecular Protenas ya corriendo en el gel Fuente de poder
Muestra de protenas para cargar en el gel
Transferencia de las protenas a las membranas.
Ciertas membranas sintticas son capaces de unir protenas de tal forma que
pueden servir como soporte para inmuno ensayos, tenciones y otros anlisis en fase
slida. Las protenas unidas a dichas membranas mantienen su antigenicidad y son
accesibles a sondas. En primer lugar las protenas han de separarse en un gel de
acrilamida (1D o 2D PAGE), y antes de teir el gel, dichas protenas son
electrotransferidas desde el gel hasta una membrana adyacente de nitrocelulosa o
38

PVDF, aplicando un campo elctrico. La transferencia se puede llevar a cabo en
dos tipos de aparatos y por tanto de dos formas diferentes: transferencia hmeda,
en aparatos que poseen cmaras que se llenan de tampn y transferencia se mi
seca, en aparatos que no tienen dichas cmaras y por tanto no necesitan tal
cantidad de tampn.
6.3.2 Paso dos: Las protenas separadas por tamao se transfieren desde el
gel a una membrana de nitrocelulosa.

Otra vez se aprovecha la carga negativa de las protenas Cassette listo para iniciar
transferencia Armado del cassette de transferencia El gel con las protenas se
coloca en el cassette de transferencia Se quitan las burbujas para asegurarla
correcta transferencia Se detiene la corrida electrofortica Se desarma con cuidado
la cuba electrofortica para liberar el gel con las protenas separadas por masa
6.3.3 Paso tres: Incubacin con anticuerpos especficos y revelados.

Protena sobre la membrana Bloqueo de los sitios no ocupados en la membrana
con protena inerte (ej. Albmina) Incubar con anticuerpo primario Incubar con
anticuerpo secundario marcado con HRP Incubar con sustrato especifico Protena
de inters se ve como una banda oscura Revelado quimio luminiscente

6.3.4 Paso cuatro: Relevado y anlisis .

Existen otras tcnicas de revelado de WB sustrato enzima H2O2 producto coloreado
quimio Lum Obsluminol HRP si no si muy sensible3,3diaminobencidina HRP si
marrn no toxico DAB + niquel HRP si negro no toxico, ms sensible que DAB3,3,5,
5tetrametilbencidinaHRP si azul no producto semisoluble4 cloro naftol HRP si azul-
negro no poco sensible Bromo cloro indolilfostato +NBTFAL no azul no reaccin
lenta y progresiva Naftol-AS-MX fosfato+ Fast red FAL no rojo no poco sensible
AP/misty purple FAL no purpura no muy estable HRP = peroxidasa / FAL = fosfatasa
alcalina.

6.4 Aplicaciones.


Se usa principalmente para determinar la presencia o ausencia de una protena
concreta en una muestra. Tambin nos puede ser til para determinar los niveles
39

de dicha protena en esa muestra, o el tamao de esta protena, ya que en
determinadas enfermedades el problema no es la ausencia total de una molcula
sino su reduccin o la expresin de una forma truncada de dicha protena.
Enfermedades Inflamatorias- Enfermedades Infecto-Contagiosas- Perfil de
Citoquinas en Modelos Experimentales- Factores de Crecimiento- Protenas
de Secrecin.
Prueba de VIH; Aunque el VIH suele detectarse mediante la tcnica ELISA,
el Western Blot se usa como prueba confirmatoria cuando el ELISA da un
resultado positivo en un grupo que no es de riesgo o en una poblacin donde
la prevalencia del virus es muy baja. Mediante el Western blot se buscan los
anticuerpos anti-VIH en una muestra de suero humano.

Se transfieren a una membrana las protenas de clulas que, se sabe, estn
infectadas por el VIH. Entonces, se incuba el suero que hay que probar con esta
membrana. Este paso es equivalente a la incubacin con el anticuerpo primario; si
hay anticuerpos anti-VIH en el suero, sern estos los que realicen el papel de
anticuerpo primario.
Se lava, para eliminar los anticuerpos no unidos, y la membrana se vuelve a incubar
con un anticuerpo secundario anti-humano unido a una enzima-seal. La aparicin
de bandas indica la presencia de protenas contralas cuales el suero del paciente
contiene anticuerpos, es decir, el paciente es cero positivo.

Se emplea como prueba definitiva de la encefalopata espongiforme bovina,
comnmente llamada "enfermedad de las vacas locas".
Algunas clases de la prueba para la enfermedad de Lyme usan el Western
Blott.
En veterinaria, ocasionalmente se emplea el Western Blott para confirmar la
presencia del FIV en gatos

Actualmente, el Western Blott es una de las tcnicas ms usadas en el estudio de
la biologa molecular.





40

Conclusin por integrante.

A continuacin presentaremos las diversas conclusiones a la que ha llegado este
equipo de trabajo, hacindolo desde su particular punto de opinin y expresando lo
que cada elemento considera indispensable para el sobre los temas anteriores
mencionados, retomando para cada uno lo que considero lo ms relevante.
Alexis Nobles Cupido:
Las protenas son muy importantes en el ser humano ya que poseen una enorme
cantidad de funciones ya sea catalizadora, transportadora, de defensa, en el
metabolismo, entre otros. Adems sirven como materiales estructurales. Las
protenas tienen o pueden tener de una a varias cadenas polipeptdicas.

Las protenas tienen aminocidos que son las unidades elementales constitutivas
de sus molculas. Cada aminocido contiene un tomo de carbono central al que
llamamos carbono , con el cual se une un grupo amino, un grupo carboxilo, un
tomo de hidrgeno y un grupo R. Los aminocidos pueden ser apolares y neutros,
polares y neutros, cidos y bsicos.
Las protenas pueden clasificarse segn su forma como son las protenas fibrosas
y en protenas globulares.
Algo que es muy importante de las protenas cabe mencionar sus estructuras que
son 4, la estructura primaria, secundaria, terciaria y cuaternaria. La estructura
primaria que es la secuencia de la cadena polipeptdica, la estructura secundaria
que viene siendo el ordenamiento de esas cadenas polipeptidicas. La estructura
terciaria que es el acomodamiento de mayor tamao del polipeptidico maduro y los
dominios que los componen y por ltimo la estructura cuaternaria que es el nmero
y los tipos de unidades polipeptidicas de proteinas oligomericas y su disposicin
espacial.
Estas estructuras se pueden destruir debido a la desnaturalizacin.

Erick Alberto Lehmann Hernndez:
Las protenas son molculas orgnicas que forman parte de la piel, msculos,
tejidos, hormonas etc. Estas tienen una clasificacin y de acorde a ello funciones
especficas, las protenas estn formadas por aminocidos que son compuestos
formados por un grupo amino (-NH2) y un grupo carboxilo (-COOH), y de acorde a
los aminocidos est basada la estructura de las protenas (primaria, secundaria,
terciaria y cuaternaria).
Base a la informacin obtenida en las diferentes fuentes de informacin llegue a la
conclusin de que las protenas son esenciales para el buen funcionamiento del ser
humano y que la ausencia de una de ellas o de algn aminocido podra causar un
desequilibrio en las funciones, algunas enfermedades e inclusive la muerte, por ello
es que es importante un buen metabolismo y sintetizacin de protenas, por lo que
41

todas las protenas y aminocidos deben ser incluidas en la dieta de manera
equilibrada tomando en cuenta que no todas son esenciales, pero aun as todas
tienen una funcin importante.
Luis Alberto Campos Arias:
Estos estn formados por la unin de aminocidos mediante un enlace peptdico.
Es un enlace covalente que se establece entre el grupo carboxilo de un aminocido
y el grupo amino del siguiente, dando lugar al desprendimiento de una molcula
de agua.
Una protena puede adoptar miles de conformaciones debidas al giro libre en torno
a los enlaces sencillos. Sin embargo, en su estado natural slo adoptan una nica
conformacin tridimensional que llamamos conformacin nativa; que es
directamente responsable de la actividad de la protena. Tambin podemos
observar que, cuando se produce el enlace, se desprende una molcula de H2O.

Esto hizo pensar que no poda haber giro libre en todos los enlaces; y efectivamente,
mediante difraccin de Rayos X se vio que el enlace peptdico era ms corto que un
enlace sencillo normal, porque tiene un cierto carcter (60%) de enlace doble, ya
que se estabiliza por resonancia.
Por esa razn no hay giro libre en torno a este enlace. Esta estabilizacin obliga a
que los 4 tomos que forman en enlace peptdico ms los dos carbonos que se
encuentran en posicin a (marcado con a en la ilustracin) con respecto a dicho
enlace, se encuentren en un plano paralelo a l.

Margarita Guadalupe Ara Ara:
Conclu que el cuerpo humano es una protena gigante formada por miles de
aminocidos.
Las protenas son fundamentales para el correcto funcionamiento del cuerpo
humano, como podemos ver todas y cada una de ellas cumplen funciones precisas
y con el mal funcionamiento de por lo menos una se da un desequilibrio en todo el
resto del cuerpo, podemos decir entonces que la clasificacin de las protenas es
necesaria para tener en cuenta las diversas funciones que las mismas cumplen en
nuestro organismo, dicha clasificacin se da de acuerdo a la solubilidad, estructura,
componentes y funciones
Desde mi punto de vista .el criterio fsico ms utilizado es la solubilidad, aqu
distinguimos a las albuminas, globulinas, prolaminas, glutaminas y las
Escleroproteinas, de este grupo la albuminas son las ms abundantes del cuerpo
humano, estas son fabricadas por el hgado, sirviendo de trasporte de la sangre y
42

su funcin es mantener el equilibrio hdrico de la sangre, ahora bien desde el punto
de vista qumico existen dos tipos de protenas, la simple constan slo de
aminocidos o de sus derivados y la conjugada consisten en protenas simples
combinadas con algn componente no proteico., como ejemplo de las simples
mencionamos las histonas, que son aquellas que se encuentran formando parte de
los cromosomas y son quienes intervienen en la expresin de los genes.
Desde un punto de vista funcional se distinguen; las protenas monomericas que
constan de una sola cadena poli peptdica, como la mioglobina y las protenas
oligomericas que constan de varias cadenas poli peptdicas, en cuanto a su forma
molecular, podemos distinguir, a las protenas globulares; la cadena poli peptdica
aparece enrollada sobre s misma dando lugar a una estructura ms o menos
esfrica y compacta y a las protenas fibrosas son molculas muy alargadas, cuyas
estructuras secundarias constituyen sus motivos estructurales predominantes.
Todas estas protenas tiene una funcin en el cuerpo humano, un ejemplo muy claro
es la albumina en la sangre, esta es la que conlleva a que la sangre sea de aspecto
viscoso.

Malenny Guadalupe Ruedas Arias:
Llegu a la conclusin de que las protenas, formadas por largas y compuestas
cadenas de aminocidos son esenciales para nosotros los seres, y su buen
funcionamiento, su estructura y procesos son vitales para el buen desarrollo celular
y as el ser vivo ser un elemento saludable. Por eso un tema muy importante para
m, es La sntesis de las Protenas, ya que por este proceso es por el que se forman
nuevas protenas, a partir de los veinte aminocidos que ya conocimos. Porque
Te imaginas si los aminocidos no fueran transportados de manera correcta hasta
el ARN mensajero? Simplemente los aminocidos no se uniran de forma correcta
por lo que no se formara la protena. Careceramos de capacidad fsica
principalmente. Por eso la importancia de tomar en cuenta el consumo de las
protenas, Especialmente en el embarazo para la buena formacin del futuro beb,
en la niez y en la adultez. Las protenas son especiales y vitales desde los inicios
del ser humano, y todo ser vivo habitable en la tierra, para su buen funcionamiento
interno.

Omar Jess Prez Snchez:
El ser humano es uno de los laboratorios naturales ms impresionantes que
podemos ver en la naturaleza, ya que igual que a los dems animales, en el interior
de nuestro organismo suceden miles de procesos qumicos que tienen como nico
fin la supervivencia del ser en cuestin.
43

Las protenas como nos dice su definicin, es un elemento primordial, por medio del
cual nuestro organismo puede mantener la homeostasis, ya que por ejemplo, qu
haramos sin las hormonas o las enzimas? La respuesta a esta interrogante es por
consiguiente un mal funcionamiento del organismo que al proseguir eventualmente
nos llevara a la muerte, ya que como sabemos, las enzimas son vitales y lo
podemos validar en el mismo proceso de sntesis de las protenas en donde
enzimas como la Helicasa o RNA primasa no sera posible no solo la misma sntesis,
sino que de igual forma no podra generarse una reproduccin del ADN y por
consiguiente no habra una duplicacin celular, lo cual nos llevara a una falla a nivel
tisular de los rganos que nos llevara eventualmente a la perdida de la vida.
Es increble como simples compuestos conformados por elementos tan bsico como
son el Carbono, Hidrogeno, Oxigeno, Nitrgeno, Fosforo y en ocasiones el
Magnesio, pueden forman complejos elementos que hacen una verdadera maquina
excepcional de ingeniera biomolecular.
Otros elementos que de igual forma tienen una transcendencia fundamental son los
aminocidos, los cuales son la base primordial de las protenas, las cuales al unirse
conforman a las valiosas protenas pero aun por si solas este tipo de elementos son
muy esenciales, ya que como estudiamos la Alanina o el Serina son elementos
fundamentales para el desarrollo del organismos, ya que podemos ver que por
ejemplo la Alanina es indispensable en el metabolismo de los carbohidratos y la
Serina es un importante protector de rganos como son el hgado o el cerebro
adems de ser un valioso antioxidante.
El estudio de las protenas y su funcionalidad y composicin es importante no solo
por lo anterior mencionado, sino que hay enfermedades que tienen origen en estos
compuestos, por ejemplo una mal absorcin de nutrientes, crecimiento y desarrollo
inadecuado, como es el sndrome de Turner en las mujeres o hasta el estudio del
SIDA (Sndrome de Inmunodeficiencia Adquirida), por lo cual el estudio de estos
elementos resulta interesante en el rea mdica, Por lo cual me parece interesante
haber estudiado este tema a fondo.

William Eduardo Bustamante Prez:
Las protenas son elementos muy importantes para nuestro organismo, ya que nos
ayuda al crecimiento y al metabolismo de nuestro cuerpo.
Las protenas son macromolculas, consideradas polmeros de unas pequeas
molculas que se llaman aminocidos formados gracias los enlaces peptdicos y
estn formadas bsicamente por carbono, hidrogeno, oxgeno y nitrgeno a veces
contienen azufre y muy rara vez fosforo, hierro, magnesio y cobre y tienen una
estructura tridimensional que les ayuda a llevar a cabo diversas funciones
44

Opino que las protenas son biomolculas muy importantes en la composicin de la
materia viviente, ya que ejercen diversas funciones en la misma: estructurales
(como la queratina o el colgeno), catalticas (como las enzimas pepsina o tripsina),
reguladoras (como la hormona insulina) o incluso como nutrientes (como la
albmina del huevo o la miosina de la carne cuando se descomponen en
aminocidos y se emplean stos en la construccin de nuevas protenas.
Por eso es muy importante consumir alimentos que tengan protenas, ya que nos
ayudara a mantener una buena salud y un buen bienestar fsico.

Bibliografa.

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