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TALLER: PROPAGACIN In Vitro DE PLANTAS CARNVORAS




Dr. Eugenio Prez Molphe Balch
Unidad de Biotecnologa Vegetal
Dpto. de Qumica C. C. Bsicas
Universidad Autnoma de Aguascalientes
eperezmb@correo.uaa.mx


INTRODUCCIN

Las plantas carnvoras representan uno de los
ejemplos ms interesantes de la evolucin de los
seres vivos. Si bien son vegetales, han
desarrollado la capacidad de atraer, capturar y
digerir animales pequeos, usualmente insectos.
A partir de sus presas, las plantas carnvoras
pueden absorber nutrientes, por ejemplo
Nitrgeno y Fsforo, que son escasos en los
hbitats en los que estas especies han
evolucionado. En todos los casos, los nutrientes
tomados de sus presas son slo un complemento
de los que la planta toma del suelo, o bien
produce ella misma a travs de la fotosntesis.
Uno de los primeros cientficos que se apasion
por el estudio de estas plantas fue el propio
Charles Darwin, quien public el libro
Insectivorous Plants en julio de 1875.

Las plantas carnvoras son raras, ya que de los
varios cientos de miles de especies vegetales que
se conocen, slo unas 650 han desarrollado esta
adaptacin. Estas especies pertenecen a 15-18
gneros, incluidos en 8-9 familias vegetales
diferentes. Los mecanismos mediante los cuales
estas plantas capturan a sus presas se dividen en
activos y pasivos. Los primeros son los ms raros,
e implican el desarrollo de trampas con
capacidad de movimiento que atrapan a la presa
al ser activadas por la presencia de la misma.
Este mecanismo activo lo tienen las plantas de
los gneros Aldrovanda y Dionaea. La segunda es
la conocida como Atrapamoscas o Venus
atrapamoscas, y es quiz la planta carnvora
ms conocida. El segundo tipo de mecanismo es
el pasivo. En este caso no hay movimiento y las
presas se ven atrapadas por trampas pegajosas,
por trampas llenas de lquido o con estructuras
que les permiten ingresar, ms no salir de la
planta. Las plantas carnvoras de los gneros
Drosera, Pinguicola, Byblis y Drosophyllum
producen un muclago pegajoso sobre
estructuras similares a tentculos, o
directamente sobre las hojas. Las presas que se
posas sobre la planta quedan adheridas a este
muclago sin posibilidades de escapar. Por su
parte, las plantas de los gneros Darlingtonia,
Nephentes y Sarracenia, desarrollan hojas
modificadas en forma de recipientes cilndricos
cuyo fondo tiene un lquido que contiene las
enzimas digestivas. Las presas que entran a la
trampa y caen en el lquido ya no tienen la
posibilidad de salir. Finalmente, en el gnero
Genlisea, las trampas poseen estructuras con
pelos rgidos orientados de forma tal que
permiten el ingreso de la presa, ms no su salida
(Pietropalo y Pietropalo, 1986).

Adems de su importancia ecolgica, y del
inters cientfico que despiertan, las plantas
carnvoras son muy apreciadas por los
coleccionistas, lo que causa que sean saqueadas
de su ambiente natural. Esto, junto con la
deforestacin, cambios en el uso del suelo y
cambio climtico, han colocado en situacin de
amenaza a muchas de estas especies. De hecho,
ms de la mitad de las especies de plantas
carnvoras estn catalogadas como especies
amenazadas por la Lista Roja de la UICN
(Jennings y Rohr, 2010).

Por otro lado, recientemente se ha descubierto
que la mayora de las especies de plantas
carnvoras producen compuestos qumicos,
como naftoquinonas, flavonoides, antocianinas y

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compuestos fenlicos, que tienen un gran inters
desde el punto de vista mdico. Siendo esta una
razn ms para que se tomen las medidas
necesarias para asegurar la conservacin de
estas especies (Egan y van der Kooy, 2013).

La propagacin de la gran mayora de las
especies de plantas carnvoras suele ser
complicada y poco eficiente. Esto hace que estas
plantas sean en general difciles de obtener por
los aficionados o coleccionistas. Sin embargo, las
tcnicas de propagacin masiva de plantas a
travs de mtodos biotecnolgicos, que se han
desarrollado en tiempos recientes, han resultado
muy eficientes para este tipo de plantas. Gracias
a estas tcnicas, la disponibilidad de muchas de
las especies de plantas carnvoras se est
incrementando de manera notable. La
propagacin de plantas por mtodos
biotecnolgicos, conocida tambin como
propagacin in vitro o micropropagacin,
consiste en la produccin masiva de plantas
utilizando sistemas de cultivo de tejidos en
medios artificiales, y en condiciones controladas.
Las etapas que se siguen son: a) Establecimiento
de cultivos in vitro. Para esto es indispensable la
desinfeccin de tejidos viables que luego son
inoculados en los medios artificiales; b)
Multiplicacin del tejido: Consiste en la
produccin de nuevos brotes en los cultivos,
normalmente para esto se utilizan reguladores
del crecimiento (fitohormonas) del grupo de las
citocininas; c) Desarrollo y enraizamiento de los
brotes producidos. Esta etapa permite que los
brotes adquieran vigor y formen un sistema
radical para que sean capaces de sobrevivir a la
ltima etapa del proceso, que es; d) Adaptacin y
transferencia a suelo. En esta etapa las plantas
generadas in vitro son transferidas a condiciones
naturales y se desarrollan ya como plantas
normales (Prez-Molphe-Balch et al. 1999).

Egan, P.A., van der Kooy, F. 2013. Phytochemistry of the
Carnivorous Sundew Genus Drosera (Droseraceae)-
Future Perspectives and Ethnopharmacological
Relevance. Chemistry & Biodiversity 10:1774-1790.
Jennings, D.E., Rohr, J.R. 2010. A review of the
conservation threats to carnivorous plants. Biological
Conservation 144: 1356-1363.
Prez-Molphe-Balch, E., Ramrez-Malagn, R., Nuez-
Palenius, H.G., Ochoa-Alejo, N. 1999. Introduccin al
Cultivo de Tejidos Vegetales. Universidad Autnoma de
Aguascalientes. ISBN 968-6259-62-7.
Pietropalo, J., Pietropalo, P. 1986. Carnivorous Plants of
the World. Timber Press, Portland. 206 pp.

Objetivos del Taller

El alumno conocer algunos aspectos
importantes de la biologa de las plantas
carnvoras. Entender tambin el papel de la
Biotecnologa Vegetal como herramienta para la
conservacin y uso racional de estas plantas.
Practicar la propagacin masiva de algunas
especies a travs de esta disciplina.

Programa del Taller

FECHA HORARIO ACTIVIDAD LUGAR
0
8
/
0
9
/
1
4

15:00-17:00
Introduccin al
tema (Sesin
Terica)
Aula por
designar
0
9
/
0
9
/
1
4

15:00-18:00
Prctica 1.
Multiplicacin
in vitro de
plantas
carnvoras.
Unidad de
Biotecnologa
Vegetal
(Edificio 207)
1
0
/
0
9
/
1
4

15:00-18:00
Prctica 2.
Desarrollo y
enraizamiento
y de brotes de
plantas
carnvoras
generados in
vitro.
Unidad de
Biotecnologa
Vegetal
(Edificio 207)
1
1
/
0
9
/
1
4

15:00-18:00
Prctica 3.
Transferencia a
suelo de
plantas
carnvoras
propagadas in
vitro.
Unidad de
Biotecnologa
Vegetal
(Edificio 207)

Prcticas

Material Vegetal a emplearse en el Taller
[Cultivos in vitro de]:
Byblis liniflora (Norte de Australia y Nueva
Guinea)
Dionaea muscipula (Carolina, E.U.A.)

3
Drosera burmannii (Malasia)
Drosera capensis (Sudfrica)
Drosera ericksoniae (Australia)
Drosera peltata (Australia)
Drosera pygmaea (Australia)
Pinguicula moraniensis (Mxico)

PRCTICA 1. Multiplicacin in vitro de plantas
carnvoras.

Medio de Cultivo: Medio de Murashige y Skoog al
50%, pH 5.7, con 1.5 % de sacarosa, 3 g L
-1
de
Phytagel y 2 mg L
-1
de 2iP. [Tres frascos por
persona]

Procedimiento:
Todo el trabajo se realiza en la campana de flujo
laminar con instrumentos estriles (pinzas y
bistur). Atender las indicaciones del instructor.

1. Tomar una masa de plantas de la especie
seleccionada y colocarla en una caja de
Petri estril.
2. Separar cuidadosamente la masa en
porciones ms pequeas (aprox. 1 cm de
dimetro). Hacer esto con ayuda de
pinzas y bistur estriles.
3. Inocular una porcin de tejido por
recipiente de cultivo.
4. Sellar y marcar los frascos de cultivo.
Colocar los recipientes en el cuarto de
incubacin.
5. A los 5-6 das revisar los recipientes y
desechar los contaminados.
6. A los 35-40 das observar los resultados
definitivos.

Resultados esperados: Deber observarse la
multiplicacin de la planta original hasta obtener
masas de plantas similares a las usadas para
montar esta prctica, esto por efecto de la
citocinina (2iP) agregada al medio de cultivo.

PRCTICA 2. Desarrollo y Enraizamiento de
brotes de plantas carnvoras generados in vitro.

Medio de Cultivo: Medio de Murashige y Skoog
al 50%, pH 5.7, con 1.5% de sacarosa, 3 g L-1 de
Phytagel como gelificante.
[Tres frascos por persona]

Procedimiento:
Todo el trabajo se realiza en la campana de flujo
laminar con instrumentos estriles. Atender las
indicaciones del instructor.

1. Tomar una masa de plantas de la especie
seleccionada y colocarla en una caja de
Petri estril.
2. Separar cuidadosamente la masa para
obtener plantas individuales. Hacer esto
con ayuda de pinzas y bistur estriles,
cuidando no daar los tejidos.
3. Inocular dos plantas por recipiente de
cultivo. Presionar un poco la base de la
planta contra el medio de cultivo para
que se introduzca en el mismo y la planta
se mantenga erguida.
4. Sellar y marcar los frascos de cultivo.
Colocar los recipientes en el cuarto de
incubacin.
5. A los 5-6 das revisar los recipientes y
desechar los contaminados.
6. A los 25-35 das observar los resultados
definitivos.

Resultados esperados: Deber observarse la
formacin de races en cada una de las plantas
inoculadas, esto por efecto de la ausencia de
citocinina en el medio. Al mismo tiempo la planta
crecer y sus hojas se diferenciarn. Una vez
formado un sistema radical vigoroso, las plantas
estn listas para su adaptacin y transferencia a
suelo.

Prctica 3. Transferencia a suelo de plantas
carnvoras propagadas in vitro.

Materiales: Recipientes de cultivo (macetas o
terrarios, consultar al instructor acerca de los
tipos de recipientes y sistemas de cultivo
apropiados para este tipo de plantas). Los
recipientes deben tener uno o ms orificios para
el drenaje en la parte inferior.

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Substrato para la siembra: Se recomienda una
mezcla de turba (peatmoss) con arena (1:1).

Plantas carnvoras producidas in vitro, ya
enraizadas y preadaptadas al medio externo*.

* 1 semana antes de la prctica se elimina el
sello del recipiente de cultivo y se afloja la tapa.
Esto permitir que la humedad relativa dentro y
fuera del recipiente se equilibre de manera
paulatina, dndole a la planta oportunidad de
adaptarse a esta diferencia.

Procedimiento:

1. Sacar cuidadosamente las plantas de los
recipientes de cultivo. Lavarlas muy
suavemente con agua destilada para
eliminar todo resto de medio de cultivo.
En el caso de las especies que producen
compuestos pegajosos, no tocar ni
humedecer estas reas.
2. Sembrar las plantas en las macetas o
recipientes con el substrato previamente
hidratado.
3. Cubrir las plantas con una bolsa de
plstico transparente u otro tipo de
estructura transparente que sirva para
retener la humedad. Paulatinamente hay
que hacer orificios o abrir parcialmente
esta cubierta.
4. Colocar el recipiente con las plantas en
un sitio bien iluminado, pero sin que
reciban sol directo.

Resultados esperados: Cuando las plantas
muestren seales de haber reiniciado su
crecimiento ya en suelo (cuando se observe la
aparicin de nuevas hojas), puede considerarse
que han sobrevivido al proceso de adaptacin.
En este momento pueden ser transferidas a un
sitio con mayor iluminacin, incluso algunas
horas de sol directo, con el fin de que alcancen
su desarrollo ptimo y adquieran todo su
colorido.



Recomendaciones:

Riego: El sistema de riego ms adecuado para
estas plantas es el que reciben desde abajo. Para
esto, los recipientes o macetas debern
colocarse en un recipiente de un dimetro un
poco mayor, el cual debe contener unos
centmetros de agua. El objetivo es que el agua
suba por capilaridad a travs de los orificios de
drenaje y de esta forma se mantenga el
substrato siempre hmedo. El riego debe
hacerse siempre con agua potable de garrafn,
nunca con agua de la llave. Esto debido a que
todas las plantas carnvoras requieren de un
medio ligeramente cido para su desarrollo
ptimo, y el agua corriente lo har alcalino.

Fertilizacin: Las plantas carnvoras han
evolucionado en suelos muy pobres en
nutrientes. Por este motivo son muy sensibles a
la fertilizacin. Hay que evitarla o hacerla con un
fertilizante foliar muy diluido. No es necesario
alimentarlas con insectos. Estas plantas
cuentan con mecanismos muy eficientes para
atraerlos por s mismas.

Perodos de reposo: Muchas de las especies de
plantas carnvoras dejan de crecer en ciertas
pocas del ao, entrando en un perodo de
reposo. En algunas incluso muere o se marchita
la parte area. Sin embargo, pasada la poca de
reposo vuelven a brotar. Por lo anterior es
recomendable asegurarse de que las plantas
estn realmente muertas, y no en reposo, antes
de eliminar algn cultivo.

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