MICROBIOLOGIA

FACULTAD FARMACIA Y BIOQUIMICA

2014
TECNICAS DE SIEMBRA, ESTUDIO DEL DESARROLLO
BACTERIANO EN MEDIOS LIQUIDOS, SEMISOLIDOS Y
SOLIDOS

Para cada bacteria a ser cultivada para
cualquier propsito es necesario proveer el
ambiente bioqumico y biofsico apropiado. El
ambiente bioqumico (nutricional) se hace
disponible como medio de cultivo, y
dependiendo de las necesidades especiales de
cada bacteria particular se ha desarrollado
una gran variedad y tipos de medios de
cultivo con diferentes propsitos y
utilizaciones. Los medios de cultivo son
empleados para el aislamiento y
mantenimiento de cultivos puros de bacterias y tambin son utilizados para la
identificacin de bacterias de acuerdo a sus propiedades bioqumicas y fisiolgicas.
El modo en que las bacterias son cultivadas, y el propsito de los medios de cultivo,
varan ampliamente. Los medios lquidos son utilizados para el crecimiento de
lotes de cultivos puros mientras que los medios slidos son ampliamente
utilizados para el aislamiento de cultivos puros, para la estimacin de poblaciones
de bacterias viables, y una variedad de otros propsitos. El agar, agente glido ms
utilizado para medios slidos o semislidos, es un hidrocoloide derivado de las
algas rojas. El agar es utilizado por sus propiedades fsicas nicas (se funde a 100
grados y permanece lquido hasta enfriarse a 40 grados, la temperatura a la que se
vuelve gel) y porque no puede ser metabolizado por la mayora de las bacterias.
Por lo tanto, como un componente del medio es relativamente inerte, simplemente
mantiene (geliza) los nutrientes que se encuentran en la solucin acuosa.
Los medios de cultivo pueden ser clasificados en varias categoras dependiendo de
su composicin o uso. Un medio qumicamente definido (sinttico) (Tabla 4 y 4b)
es un medio en el que se conoce la exacta composicin qumica. Un medio complejo
(indefinido) (Tabla 5 y 5b) es un medio en el que no se conoce la composicin
qumica exacta. Los medios definidos estn habitualmente compuestos por
bioqumicos puros sacados del stock; los medios complejos habitualmente
contienen materiales complejos de origen biolgico tales como la sangre, la leche,
el extracto de levadura o el extracto de carne, cuya composicin qumica exacta es
obviamente indeterminada. Un medio definido es un medio mnimo (Tabla 4) si
provee slo los nutrientes exactos (incluyendo algunos factores de crecimiento)
necesarios para el crecimiento del organismo. La utilizacin de medios mnimos
definidos requiere que el investigador conozca los requerimientos nutricionales
exactos de los organismos en cuestin. Los medios definidos qumicamente son de
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valor para el estudio de los requerimientos nutricionales mnimos de los
microorganismos, para cultivos enriquecidos, y para una amplia variedad de
estudios fisiolgicos. Los medios complejos habitualmente proveen la gama
completa de factores de crecimiento que pueden ser requeridos por un organismo
por lo que pueden ser utilizados ms prcticamente para cultivar bacterias
desconocidas o bacterias cuyos requerimientos nutricionales son complejos (por
ejemplo, organismos que requieren muchos factores de crecimiento).
Otros conceptos empleados en la construccin de medios de cultivo son los
principios de seleccin y enriquecimiento. Un medio selectivo es aquel que tiene
agregados componentes que inhibirn o prevendrn el crecimiento de ciertos tipos
o especies de bacterias y/o promovern el crecimiento de las especies deseadas.
Uno puede tambin ajustar las condiciones fsicas del medio de cultivo, como el pH
y temperatura, para hacerlo selectivo para organismos capaces de crecer bajo esas
condiciones.
Un medio de cultivo puede tambin ser un medio diferencial si permite al
investigador distinguir entre diferentes tipos de bacterias basado en algn rasgo
observable de su pauta de crecimiento en el medio. As, un medio selectivo,
diferencial para el aislamiento de Staphylococcus aureus, el patgeno bacteriano
ms comn en los humanos, contiene una concentracin muy alta de sal (que el
estafilococo tolerar) que inhibe a la mayora de las otras bacterias, mannitol como
fuente de azcar fermentativo, y un tinte de indicador de pH. De los especimenes
clnicos, slo el estafilococo crecer. S. aureus es diferenciado de S. epidermidis (un
componente no patgeno de la flora normal) por su capacidad de fermentar el
mannitol. Las colonias fermentadoras de mannitol (S. aureus) producen cidos que
reaccionan con el tinte indicador formando un halo coloreado alrededor de las
colonias; las no fermentadoras del mannitol (S. epidermidis) utilizan otros
sustratos no fermentadores en el medio para el crecimiento y no forman un halo
alrededor de sus colonias.
Competencias:

- Realizar diversas tcnicas de siembra
para su cultivo y aislamiento.
- Aplica las tcnicas de aislamiento hasta
la obtencin de cultivos puros.





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MATERIALES:
1.- Tecnicas de siembra en medios liquidos, semislidos y solidos:
- Placas Petri con agar TSA.
- Tubos agar SIMy TSA en agar inclinado
- Tubos con caldo TSB
- Cultivo de Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Bacilus subtilis y Psudomonas
aeruginosa.
2.- Desarrollo bacteriano:
- Utilizar los medios de cultivo preparados en la prctica anterior y proceder a
realizar los sembrados en los distintos medios segn tcnicas.
PROCEDIMIENTO:
1. Tcnicas de Siembra en medios lquidos, semislidos y solidos:

- Con el asa en punta previamente esterilizada, tomar el inoculo del cultivo de
bacterias y sembrar en agar manitol salado y MB, por el mtodo de estra.


















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Con el asa en aro previamente esterilizada tomar una asada de cultivo, y sembrar por el
mtodo de inoculacin en el tubo con TSI.











1. Forrar de manera adecuada las placas Petri con el medio de cultivo respectivo.
2. Controla la esterilidad del medio, por incubacin del mismo a 37 C por 24 horas.











RESULTADOS
Al da siguiente se realiz la lectura de los cultivos comprobando que se realiz una
siembra correcta libre de microorganismos extraos que pudieran contaminar
nuestra muestra, se pudo observar la siembra de Stapylococcus ( Gram + ) en MB,
Steptococcus sp ( Gram + ) en agar manitol salado , y Eschiericha coli (Gram -),
evitndose as la contaminacin y prdida del cultivo en estudio, la salida y
dispersin de microorganismos del cultivo, lo que ocasionara la contaminacin de
utensilios, productos y del personal.



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CUESTIONARIO
1 .- Con que propsito se emplean cada una de las diferentes tcnicas de
siembra?
El mtodo de siembra a emplear depender de los objetivos que se pretendan
alcanzar con el cultivo, ya que en ocasiones se requiere que el desarrollo del
microorganismo se produzca de forma masiva, mientras que en otras resulta
indispensables que las colonias queden aisladas o que las manifestaciones del
metabolismo tengan lugar con tensiones reducidas o privadas de oxgeno, los
mtodos de siembra ms empleados son los siguientes:Siembra por estras,
Siembra por puncin, Siembra volumtrica, Siembra masiva.
Siempre que se utilicen instrumentos de siembra de platino o nicrn, deben ser
calentados en la llama del mechero hasta el rojo vivo, antes y despus de realizar la
siembra, con el objetivo de destruir a los microorganismos contaminantes de la
superficie del instrumento.
Con independencia del tipo de medio y el mtodo de siembra a emplear sta debe
realizarse en las proximidades de la llama del mechero y a que el calor emanado
reduce el nmero de microorganismos presentes en sus inmediaciones, lo cual es
utilizado como un recurso a favor del proceder asptico.
2.- Describe las caractersticas de crecimientos de cada uno de los cultivos
bacterianos proporcionados en la prctica.
Los medios lquidos son utilizados para el
crecimiento de lotes de cultivos puros
mientras que los medios slidos son
ampliamente utilizados para el aislamiento
de cultivos puros, para la estimacin de
poblaciones de bacterias viables, y una
variedad de otros propsitos. El agar, agente
glido ms utilizado para medios slidos o
semislidos, es un hidrocoloide derivado de
las algas rojas. El agar es utilizado por sus
propiedades fsicas nicas (se funde a 100
grados y permanece lquido hasta enfriarse a
40 grados, la temperatura a la que se vuelve
gel) y porque no puede ser metabolizado por la mayora de las bacterias. Por lo
tanto, como un componente del medio es relativamente inerte, simplemente
mantiene (geliza) los nutrientes que se encuentran en la solucin acuosa.


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3.- Describe el mtodo de siembra por incorporacin y seala en que
casos se emplea:
Este mtodo consiste en sembrar cajas de Petri con 1ml de muestra (y de sus
diluciones) y agregar de 10 a 12 mL de agar nutritivo esteril difundido
(teniendo la precaucion de dejarlo enfriar hasta 44-46 grados). Se mezcla
rapidamentey, una vez solidificado el agar, se incuban las placas durante 7 dias
a 20 grados.








BIBLIOGRAFIA
- Romero Cabello, R. Microbiologa y Parasitologa Humana: Bases etiolgicas
de las enfermedades infecciosas. Editorial Panamericana, Mexico 2001. 2 ed
Pp 257-429
- Prescott L. Harley J. Klein D 2000 Madrid.