COEXISTENCIA DE VIRUS Y BACTERIAS EN NEUMONAS AGUDAS EN ALPACAS

NEONATAS

Fuente: Rev Inv Vet Per 2012; 23 (3): 317-335
AUTORES: Erick Cirilo C, Alberto Manchego S, Hermelinda Rivera H , Ral Rosadio A.

Resumen:
Lugar de Estudio
El estudio de campo se realiz durante las campaas de paricin (enero-marzo de 2004 y
2005) en el Centro de Investigacin y Produccin (CIP) La Raya UNA-Puno y en el Centro
Experimental (CE) La Raya UNSAAC-Cusco. Ambos establecimientos se encuentran en el
lmite vial de los departamentos de Puno y Cusco, dentro de un rea geogrfica con altitudes
desde 4128 hasta 4362 msnm. Adems, se tomaron muestras en los sectores Antacalla y
Huripia, de la Empresa de Propiedad Social (EPS) Rural Alianza, distrito de Nuoa, provincia
de Melgar, departamento de Puno.

Animales
Se estudi 24 cras muertas con diagnstico presuntivo de neumona o padeciendo de alguna
alteracin patolgica en el sistema respiratorio. De estas muestras, 13 fueron del CIP La Raya
UNA-Puno, ocho del CE La Raya UNSAAC-Cuzco y tres de la EPS Rural Alianza-Puno. Estos
animales tenan una edad promedio 20 9 das (5-39 das) y un peso promedio al nacimiento
de 7 1 kg. La mayora de estos animales (n=21) fueron hallados muertos despus de la
inspeccin diaria en las puntas de paricin. Con excepcin de dos cras, el resto (n=22) no
haba recibido antibioterapia alguna.

Estudio Patolgico Macroscpico:
El examen postmorten se concentr principalmente en el sistema pulmonar y ganglios linfticos
regionales utilizando la tcnica convencional de necropsia (Zanabria et al., 2000). La extensin
y localizacin de las lesiones fueron plasmadas en un diagrama pulmonar y la ficha de
necropsia. Las alteraciones macroscpicas fueron clasificadas de acuerdo a la severidad de las
lesiones observadas a la necropsia.

Estudio Histopatolgico:
Las muestras de pulmn fueron procesadas mediante la tcnica histolgica convencional
utilizando la inclusin en parafina y coloracin con hematoxilina-eosina (HE) para describir las
lesiones microscpicas. La duracin del proceso inflamatorio fue considerado como
hiperaguda, aguda, subaguda y crnica.

Deteccin de Antgenos Virales:
En la deteccin de antgenos virales (PI3 y RSB) en las muestras se utiliz la prueba de
inmunofluorescencia directa con anticuerpos policlonales especficos y conjugados con
isotiocianato de fluorescena (VMRD Inc., EEUU) siguiendo las instrucciones del laboratorio
fabricante y metodologa del laboratorio utilizada para lesiones similares en muestras bovinas
(Zanabria et al., 2000).

Aislamiento e Identificacin Bacteriolgica:
Las muestras biolgicas remitidas en medio de transporte Stuart fueron sembradas en Agar
Sangre y McConkey e incubadas en aerobiosis por 20 horas a 37 C. Para la identificacin de
Pasteurella multocida y Mannheimia haemolytica se consideraron las caractersticas culturales
propias a la coloracin de Gram, crecimiento en agar McConkey y reacciones bioqumicas
(Cowan, 1974).







RESULTADOS:

Hallazgos Macroscpicos
Las lesiones ms severas (n=13) fueron agrupadas como neumonas extensivas
fibrinonecrotizantes (n=3) y bronconeumonas bilaterales necrticas purulentas (n=10). En
todos estos casos, las lesiones fueron bilaterales afectando principalmente regiones crneo-
ventrales y en tres casos la pleura estaba adherida a las paredes costales. Los 11 casos
restantes mostraron cuadros de congestin y edema pulmonar.

Neumonas extensivas fibrinonecrotizante:

Los tres pulmones afectados estuvieron aumentados de tamao mostrando consolidaciones
rojizas en el parnquima crneo ventral pulmonar, afectando lbulos apicales, intermedio,
accesorio y la regin anterior de los lbulos caudales. Las lesiones se extendieron en un caso
hasta los lbulos caudales. Se observ abundante depsito de material filamentoso cremoso
sobre la superficie pleural del parnquima consolidado (pleuritis fibrinosa).



En 2/3 casos estaba comprometido el pericardio (pericardititis) y hubo adherencias a la pleura
que dificultaron la remocin pulmonar, mostrando abundante exudado fibrino-sanguinolento en
la cavidad torcica. El parnquima consolidado, al corte, mostr firmeza y de color rojizo
oscuro, fluyendo abundante lquido sanguinolento y exudado purulento de los conductos
respiratorios. El resto del parnquima, no consolidado, se present igualmente enrojecido con
engrosamiento focalizado de las cisuras interlobulares. Los ganglios bronquiales estuvieron
fuertemente enrojecidos y aumentados de tamao, fluyendo al corte un lquido blanquecino
(edema).
















Neumonas bilaterales purulentas:
Se encontr hepatizaciones rojizas bilaterales, localizadas principalmente en lbulos apicales e
intermedios, comprometiendo, en algunos casos, los lbulos caudales. Al corte, el parnquima
afectado mostraba una consistencia firme, aspecto uniforme y de coloracin rojiza intensa,
emanando moderadas cantidades de exudado muco-purulento que involucraban a los
conductos respiratorios

Congestin y edema pulmonar:
Los 11 casos de este grupo mostraron aumento prominente del tamao de ambos pulmones,
con apariencia muy hmeda, brillante y crepitante al tacto. Al corte, las reas afectadas
presentaron un enrojecimiento difuso y exudaciones de copiosa cantidad de lquido sero-
sanguinolento, y abundante lquido espumoso rosado (edema) en los lmenes traqueales y
bronquiales


Hallazgos Microscpicos:

Las alteraciones histopatolgicas correspondieron a las lesiones macroscpicas y se agruparon
en tres tipos: a) severa y difusa bronconeumona fibrinonecrotizante aguda supurativa (3/24), b)
leve a moderada bronconeumona aguda supurativa (10/24), y c) moderada a severa, difusa
congestin y edema pulmonar (11/24).









Antgenos Virales y Aislamiento Bacteriolgicos:

Deteccin viral
La mayora de los casos (22/24) fueron positivos a agentes patgenos. En ocho casos se
identificaron patgenos individuales (virus o bacteria), en 14 casos se detectaron infecciones
mltiples (duales y triples) con asociacin virus y bacteria. Los dos casos negativos,
correspondieron a animales con cambios macroscpicos y alteraciones microscpicas
de tipos congestivos y edematosos difusos.
La prueba de inmunofluorescencia directa identific 19/22 casos positivos a antgenos virales,
donde 13 correspondieron al virus BRS y 9 al virus PI-3. En 3/19 casos se observ la presencia
de ambos virus. En 8 de los 13 casos positivos a BRSV , las lesiones correspondieron a
bronconeumona supurativa difusa aguda, y en los cinco restantes, a congestin y edema
pulmonar difusa. Cuatro de los 9 casos positivos a PI-3 tenan cuadros de congestin y edema
pulmonar, tres presentaban bronconeumona supurativa difusa aguda y dos tenan
bronconeumona fibrinonecrotizante supurativa difusa aguda.

Aislamiento bacteriolgico:
En 16/22 casos se aislaron bacterias. Once fueron positivos a Pasteurella multocida y siete
fueron positivos a Mannheimia haemolytica (en 2 casos se aislaron ambas bacterias). Adems,
en dos casos se aisl Echerichia coli (ambos mostrando lesiones de moderada y difusa
bronconeumona supurativa) y en uno se aisl levaduras. Dos de los cuatro aislamientos
negativos fueron de animales que recibieron antibioterapia.
De los 11 casos positivos a aislamiento de P. multocida, seis cras presentaron congestin y
edema pulmonar, cuatro presentaron bronconeumona supurativa difusa aguda y un caso fue
de bronconeumona necrotizante fibrino-supurativa difusa aguda. De los siete casos positivos a
M. haemolytica, tres mostraron bronconeumona supurativa difusa aguda, dos fueron
diagnosticados como bronconeumona fibrinonectrotizante supurativa difusa aguda y los dos
restantes con cuadros de congestin y edema pulmonar.

Asociacin entre agentes patgenos y cambios histopatolgicos

En 14/22 casos se detectaron infecciones mltiples (virus y bacterias) con una mayor
proporcin (n=10) de infecciones duales y en cuatro casos se tuvo la presencia de tres agentes
patgenos. En las infecciones duales, la asociacin BRSV-P. multocida fue la ms frecuente
(n= 4), seguida de BRSVM. haemolytica (n=3), PI-3-P. multocida (n=2), y BRSV-PI-3 (n=1). En
los casos de infecciones triples, la asociacin entre BRSV / PI-3 y P. multocida fue observada
dos veces, mientras que la coexistencia de BRSV / P. multocida / M. haemolytica y PI-3 / P.
multocida / M. haemolytica fueron observaciones nicas. En los ocho casos positivos restantes
se observ la participacin de un solo agente, con predominancia de PI-3 (n=3), seguido de
BRSV (n=2), M. haemolytica (n=2) y P. multocida (n=1).




























SEROPREVALENCIA DE VIRUS NEUMOPATGENOS EN ALPACAS
ADULTAS DE LA PROVINCIA DE CANCHIS, CUSCO

Fuente: Rev Inv Vet Per 2004; 15 (2): 127-131
AUTORES: Willy Victorio C , Ral Rosadio A , Hermelinda Rivera G y Alberto Manchego
S.

RESUMEN:

El estudio se realiz en seis distritos de la provincia de Canchis, Cusco; la que se caracteriza
por ser una de las principales zonas alpaqueras en el sur del Per, con una poblacin de
138,339 alpacas distribuidas en sus 8 distritos (INEI, 1994). La crianza de alpacas es dentro de
un sistema de produccin mixto y con escasa tecnologa. El estudio se realiz durante los
meses de noviembre y diciembre del 2002, poca en que se registr una temperatura media
mensual de 13.0 y 12.9 C, precipitacin total mensual de 65.9 y 41.5 mm y humedad relativa
media mensual de 63.0 y 70.0%, respectivamente (SENAMHI, 2003).

Animales y toma de muestras
Se seleccion al azar a 345 alpacas adultas, de ambos sexos, aparentemente sanas, dentro de
31 hatos de crianza extensiva. Los animales se identificaron con microchips. Los hatos estaban
distribuidos en las distritos de Sicuani, Checacupe, Combapata, Marangan, Pitumarca y San
Pablo. Se recolect muestras de sangre a los animales seleccionados y los sueros resultantes
se llevaron para su procesamiento al Laboratorio de Virologa de la Facultad de Medicina
Veterinaria (FMV) de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos (UNMSM).

Cepas virales:

Las cepas de los virus utilizados fueron la cepa Cooper del Virus Herpes Bovino 1, la cepa SF-
4 del virus de la Parainfluenza Bovino 3 y la cepa Mohanty del virus Respiratorio Sincitial.

Pruebas serolgicas:
Para la deteccin de anticuerpos contra los virus estudiados se utiliz la prueba de
neutralizacin viral empleando microplacas para cultivo celular de 96 hoyos segn la tcnica
descrita en el manual de la OIE (1996). Se utilizaron cultivos celulares secundarios
procedentes de cornete nasal bovino, cultivados y mantenidos en el Laboratorio de Virologa de
la FMV-UNMSM.

RESULTADOS:

En el Cuadro 1 se presentan los resultados de la prueba de virus neutralizacin y su
distribucin en las diferentes distritos de la provincia de Canchis. Se observa que el VRSB y el
PI3 tuvieron una seroprevalencia de 80.2 7.0% (101/126) y 67.5 4.9% (233/345),
respectivamente.




Los ttulos de anticuerpos variaron entre 1:2 y 1:256 . Por otro lado, la prevalencia del HVB1
fue de 0.4% 0.9% (1/227), siendo el nico animal positivo una hembra adulta Suri
perteneciente a la comunidad de Yucapata, Sicuani y con un ttulo de 1:4 .
























FRECUENCIADELOS VIRUS PARAINFLUENZA-3, RESPIRATORIO SINCITIAL Y DIARREA
VIRAL BOVINA EN UN REBAO MIXTO DE UNA COMUNIDAD CAMPESINA DE CUSCO


Fuente: Rev Inv Vet Per 2006; 17 (2): 167-172
AUTORES: Karina Cabello R.1, Roco Quispe Ch.1 y Hermelinda Rivera G.

RESUMEN:

Animales y muestras
El estudio fue realizado en 21 alpacas, 66 bovinos y 152 ovinos mayores de 6 meses de ambos
sexos, aparentemente sanos y criados en una ganadera extensiva de forma mixta con escasa
tecnologa, pertenecientes a la comunidad de Chahuaytiri. Esta comunidad se encuentra
ubicada en el distrito de Pisac, provincia de Calca, departamento del Cusco, Per, a una altitud
de 3,300 msnm (INEI, 1995). La comunidad, compuesta de 75 familias, posee una poblacin
aproximada de 244 alpacas, 2,181 ovinos y 92 bovinos predominantemente de tipo criollo (K.
Cabello, datos no publicados).

Las muestras de sangre fueron obtenidas por puncin directa de la vena yugular con tubos
vacutainer, identificadas y transportadas al Laboratorio de la Estacin Experimental del Centro
de Investigacin IVITAMarangan, para la obtencin de los sueros por centrifugacin. Estos
fueron conservados en congelacin a -20 C hasta su procesamiento en el Laboratorio de
Virologa de la Facultad de Medicina Veterinaria (FMV) de la Universidad Nacional Mayor de
San Marcos (UNMSM).

Deteccin de anticuerpos neutralizantes:

La deteccin de los anticuerpos contra los virus de la DVB, PI-3 y RSV se realiz mediante la
prueba de neutralizacin viral, segn la tcnica descrita por la OIE (1996) que se encuentra
disponible en el Laboratorio de Virologa de la FMV-UNMSM.
Segn este protocolo, el ttulo del suero fue la dilucin ms alta capaz de neutralizar 75 a 100
DI50CC/50 l de cada virus, evidenciado por la ausencia o presencia del efecto citoptico de
los virus sobre las clulas indicadoras. Ttulos del suero iguales omayores a 1:2 fueron
considerados positivos a anticuerpos contra los virus descritos. La frecuencia viral fue
expresada con intervalos de confianza (IC) del 95% (Daniel, 1996).

Reactivos y biolgicos:
Como sistema indicador de la prueba de neutralizacin viral se utilizaron cultivos primarios de
clulas de cornete nasal de feto bovino normal (CNB), preparado en el Laboratorio de Virologa
de la FMV-UNMSM. Las clulas fueron cultivadas empleando medios de cultivo Eagle Minimal
Esencial Medium (MEM) y Leibowitz (L-15), en una proporcin 50:50 suplementadas con el
10% de suero fetal bovino libre de VDVB (Sigma, EEUU).
Se utiliz la cepa Singer del VDVB, la cepa SF-4 del virus PI-3 y la cepa Mohanty del VRS, as
como sueros positivos y negativos de referencia.

Tamao de muestra:
El tamao de muestra fue obtenido mediante el mtodo no paramtrico de muestreo al azar
simple. Se tom como referencia la prevalencia del 13.3% en el caso de ovinos, 73% en
bovinos (lvarez et al., 2002) y 8% en alpacas (Manchego et al., 1998) con un nivel de
confianza del 95% y un error de 5% (Daniel, 1996).
El tamao muestral mnimo requerido fue de 161 ovinos, 77 alpacas y 70 bovinos. Sin
embargo, no fue posible completar este tamao de muestra por la lejana de las zonas de
pastoreo y la renuencia de algunos campesinos para la coleccin de las muestras.



























Prospeccin serolgica del virus parainfluenza 3 en camlidos sudamericanos en Chile

Fuente: Arch Med Vet 43, 177-179 (2011)
AUTORES: CP Cepeda, C Navarro, MO Celedn

Resumen:
Material y Metodos

Para conocer si los CSA se han infectado con el VPI-3 se utilizo un total de 370 muestras de
sueros procedentes de 87 alpacas, 88 llamas, 89 guanacos y 106 vicuas.
Las muestras de sangre fueron obtenidas entre los aos 2000 y 2006 por puncin de la vena
yugular de animales adultos clnicamente sanos mediante un muestreo no aleatorio. Las
muestras de alpacas procedan de cuatro rebaos ubicados en la Regin Metropolitana; las de
Llamas, de cuatro rebaos de la Regin Metropolitana y de 10 rebaos de la Regin de Arica y
Parinacota; las muestras de guanacos se obtuvieron de animales capturados y mantenidos en
cautiverio procedentes de un rebao de la Regin Metropolitana y de un rebano
de la Regin de Magallanes y la Antartica Chilena; las muestras de vicuas se obtuvieron de
animales mantenidos en semicautiverio en tres localidades de la Regin de Arica y Parinacota.
Antes de realizar la prueba serolgica los sueros se sometieron a 56 C por 30 minutos, se
trataron con caolin al 25% y se adsorbieron con eritrocitos de cobayo, con el fin de eliminar las
protenas termolabiles del complemento, los inhibidores inespecficos de la hemoaglutinacin y
remover posibles autohemoaglutininas (Chanock y Johnson 1964).

Prueba de inhibicin de la hemoaglutinacion (IHA)
Se selecciono esta prueba en virtud de que es la frecuentemente empleada para detectar
anticuerpos contra el VPI-3. El antgeno viral consisti en VPI-3 aislado de bovino, previamente
propagado en cultivos celulares de pulmn fetal bovino y titulado por prueba de
hemoaglutinacin (Chanock y Johnson 1964). La prueba se realizo en microplacas de 96
pocillos, para lo cual se hicieron diluciones en base 2 desde 1:8 hasta 1:256 en solucin
tampn fosfato salino (PBS 0,01 M pH 7,2) en volmenes de 50 l. Cada dilucin de suero se
mezclo, en igual volumen, con una dilucin de virus que contiene ocho unidades
hemoaglutinantes (UHA). Luego de incubar a 25 C durante 60 minutos, se agregaron
eritrocitos de cobayo lavados y suspendidos al 1% en PBS. En forma paralela, se realizaron
controles de suero, de eritrocitos y de UHA del virus. Despus de una segunda incubacin por
40 minutos, se realizo la lectura de la prueba que consisti en determinar la dilucin del suero
con capacidad de inhibir la accin de cuatro UHA del virus (Chanock y Johnson
1964). Se consideraron como muestras positivas aquellas en que diluciones iguales o mayores
a ocho tuvieron la capacidad de inhibir las cuatro UHA del virus y se interpreto como evidencia
de infeccin con un VPI-3.

Resultados y Discusin:

En el cuadro 1 se muestra que de las 370 muestras de sueros de CSA, 91 (24,6%) presentaron
anticuerpos inhibidores de la hemoaglutinacion (AcIHA) para el VPI-3 con valores entre ocho y
256, con una media geomtrica de 31 positivos. La especie que presento mayor numero de
reaccionantes positivos correspondi a las llamas, con un 40,9%, y el menor nmero de
reaccionantes positivos se obtuvo en los guanacos con un 11,2%. La razn de esto podra
deberse a diferencias en la susceptibilidad de infeccin entre las dos especies y a las
posibilidades de contacto con animales infectados tratndose de una especie domestica, la
llama, y de una especie silvestre, el guanaco, a pesar de encontrarse, esta ltima, en
cautiverio.










En el cuadro 2 se muestra la distribucin geogrfica de los animales con anticuerpos para el
VPI-3. En el se observa que los cuatro rebaos de alpacas y los cuatro rebaos de llamas
ubicados en la Regin Metropolitana tienen a lo menos un animal con anticuerpos anti-VPI-3.
De igual forma, ocho de los 10 rebaos de llamas de la Regin de Arica y Parinacota y los tres
rebaos de vicuas fueron reaccionantes al VPI-3. Estos antecedentes permiten establecer que
el virus esta presente en la poblacin de CSA de Chile y considerar, de mayor importancia, su
presencia en las regiones que concentran el 90% de la poblacin de alpacas, llamas y vicuas
del pas. Al respecto, Martin (2010) seala que una de las principales limitaciones en la
produccin de CSA es la elevada mortalidad de las cras, debido al manejo inadecuado y a las
enfermedades infecciosas produciendo prdidas que superan el 50% de los animales nacidos,
lo que origina la perdida de unidades productivas tanto para el autoconsumo como para la
comercializacin.
Bajo este concepto, el VPI-3 podra tener una activa participacin y su control, mediante
medidas profilcticas como son el manejo adecuado de las cras, la disminucin de las
condiciones de estrs y el eventual empleo de vacunas, contribuira a reducir las perdidas
productivas, lo que redunda en una mejora de las condiciones
de vida de las comunidades andinas.