UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MXICO

FACULTAD DE ODONTOLOGA
EQUIPO: 6
GRUPO: 1003
LABORATORIO DE BIOQUMICA
AISLAMIENTO DE CIDOS NUCLEICOS
5 INTEGRANTES
1. D!"# G$%&'#% D()$# *(+#'
,. L-.#% /#$"#$ 0#1123( G(4!2#'(
3. M5( P#+!(%( D($2#' A'#6($+!
7. R($8#' R+!98:#% ;(!#$ A'#6($+!(
5. S($"(<(!2( R+!98:#% M-$23(
I$"!+:332-$ 0.5
1.0
O46#"2= 0.5
>2.-"#121 ,.0
,.0
M#"+'89( 0.5
R#1:'"(+1 ,.0 3.0
C:#1"2$(!2 0.5
3.5 D213:12-$ ,.0
C$3':12-$ 1.5
R#)#!#$32(1
424'28!&?3(1
0.5 0.5
13-febrero-13
INTRODUCCIN
Los cidos nucleicos, el ribonucleico (RNA) y desoxirribonucleico (DNA) son las molculas
res!onsables de la "erencia en los or#anismos y de los $irus% Tienen como &unci'n
!rimordial re!licarse duran(e la di$isi'n celular% Los cidos nucleicos son !ol)meros
lineales de n*cleo (odos, +ue se unen en(re si a (ra$s de !uen(es &os&odies(er ,-,.-a los
residuos a/*car% 0l DNA (iene n*meros i#uales de adenina, (iamina, #uanina y ci(osina%
Los cidos nucleicos se encuen(ran se encuen(ran asociados a !ro(e)nas, cuando se
me/clan en soluciones con &enol o alco"ol isoamilico se lo#ra la !reci!i(aci'n de las
!ro(e)nas mismas +ue son remo$idas !or cen(ri&u#aci'n%
O120TI3O
Aislar DNA de ")#ado de !ollo
4I5T06I6
5ara ex(raer el DNA de la clula ser necesario rom!erla median(e al#unos
reac(i$os +ue !ro$o+uen la lisis de las membranas celulares%
METODOLOGA
7% 4omo#enei/amos el ")#ado de !ollo con 6A6
8% 5asamos el "omo#enei/ado a (ra$s de #asa doble y ex!rimimos
,% 6e cen(ri&u#a duran(e . minu(os a ,999 r!m
:% Desec"amos el sobrenadan(e y resus!endimos la !as(illa en . ml% de Tris en un $aso
de !reci!i(ado
.% A;adimos 9%. ml% de 0DTA y "omo#enei/amos
<% A;adimos 7 ml% de soluci'n de C6C y "omo#enei/amos
=% 3er(imos el con(enido del (ubo len(amen(e en un $aso de !reci!i(ado con e(anol &r)o% 0l
DNA asciende como na(a blanca
R06ULTADO6
1. Describir y ex!licar !or+ue se reali/a cada !aso duran(e el aislamien(o
a) 4omo#eni/aci'n> Una me/cla uni&orme de las sus(ancias con similares &ases%
Donde se in(en(a reali/ar un !roceso +ue re(rase la se!araci'n%
b) Lisis celular> es la ro(ura de la membrana celular
c) Disociaci'n> La !ro(e'lisis es la de#radaci'n de !ro(e)nas ya sea median(e
en/imas es!ec)&icas, o !or medio de di#es(i'n in(ramolecular , +ue ca(ali/an la
ru!(ura de s'lo una o de !ocas uniones !e!()dicas%
d) 0x(racci'n> 6e eliminan las !ro(e)nas de la mues(ra u(ili/ando sol$en(es
or#nicos como el e(anol%
e) 5reci!i(aci'n> el ADN se !reci!i(a con 8 $olumenes de e(anol absolu(o o 7
$olumen de iso!ro!anol ba?o las si#uien(es condiciones> mayor a 8 " a 89
cen()#rados de 7. a ,9 min a menos =9 cen()#rados, o 79 o 7. min en "ielo
seco con e(anol%

2. 0x!licar la u(ilidad de cada reac(i$o !ara la ex(racci'n%
a) TRI6> 0s el nombre com*n de (ris ("idroxime(il) aminome(ano% 6e (ra(a de un
com!ues(o muy u(ili/ado en el labora(orio !ara !re!arar disoluciones (am!'n@ el #ru!o
cidoAbase +ue e?erce el (am!onamien(o es el amino% Necesario !ara a?us(ar el !4 al
$alor indicado
b) 0DTA> cido e(ilendiamino (e(raac(ico (a $eces A0DT en es!a;ol)% 0n sus &ormas
des!ro(onadas (
8B
y
:B
), es un conocido a#en(e +uelan(e de ca(iones di$alen(es, en
es!ecial Ca
8C
y D#
8C
%
c) ci(ra(o de sodio> a(ra!a los iones de &orma +ue les im!ide, la acci'n de las en/imas
+ue di#ieren es(as molculas% 6e in(en(a eliminar la ac(i$idad de las nucleasas, !ara ello,
las e(a!as de remoci'n de las !ro(e)nas deben ser lle$adas a cabo (an !ron(o como se
!ueda, y adems, en &r)o%
d) cloruro de sodio> colabora !ara e+uilibrar las &uer/as i'nicas%
e) e(anol> Alco"ol% 0n !resencia de sales ((em!era(ura de a!roximadamen(e E89 FC )
!reci!i(a ADN, reduciendo la cons(an(e dielc(rica del sol$en(e%
&) cloruro de ma#nesio> cuyo ob?e(i$o es ob(ener un #ran n*mero de co!ias de un
&ra#men(o de ADN !ar(icular, !ar(iendo de un m)nimo@ en (eor)a bas(a !ar(ir de una *nica
co!ia de ese &ra#men(o ori#inal, o molde%
#)GAmerca!(oenol> se em!lea !ara reducir los !uen(es disul&uro y !uede ac(uar
como an(ioxidan(e biol'#ico, reciclando radicales "idroxilo (en(re o(ros) 6e em!lea
am!liamen(e debido a +ue el #ru!o "idroxilo le con&iere buena solubilidad en a#ua, a la
$e/ +ue disminuye la $ola(ilidad% Debido a su reducida !resi'n de $a!or, su olor, aun+ue
desa#radable, es menos moles(o +ue el de o(ros (ioles relacionados%
CU06TIONARIO
DESCRIBIR LAS PROPIEDADES FSICO@QUMICAS DEL DNA
- Densidad> 0xis(e una relaci'n lineal en(re el con(enido en HCC y la densidad del
ADN de(erminada en un #radien(e de densidad% A mayor con(enido en HCC mayor
densidad !osee el ADN%
- Absorci'n de lu/ ul(ra$iole(a a 8<9nm> 0l DNA mues(ra un mximo de absorci'n de
lu/ ul(ra$iole(a a 8<9nm%
- 0&ec(o "i!ercr'mico> Una soluci'n de DNA bica(enario incremen(a la absorci'n de
lu/ U3 a medida +ue se desna(urali/a !or calor% La (em!era(ura en la +ue el .9I
del DNA es( en &orma de cadena sencilla se denomina Tem!era(ura media de
&usi'n (Tm)%
- Desna(urali/aci'n> 0n (odas las clulas se es(n cons(an(emen(e rom!iendo y
re&ormando los !uen(es de "idr'#eno en(re las cadenas com!lemen(arias del DNA%
0s(e &en'meno es muy r!ido y ocurre en se#men(os limi(ados, de (al manera +ue
se conser$a la es(ruc(ura "elicoidal, de doble cadena del DNA% Cuando se
in(roducen condiciones drs(icas como un !4 ele$ado o al(as (em!era(uras, se
rom!en los !uen(es de "idr'#eno y las dos cadenas se se!aran
0l DNA (ambin !uede desna(urali/arse con com!ues(os +ue in(er&ieren con la
&ormaci'n de !uen(es de "idro#eno, como son la &ormamida, el dime(il sul&'xido o
al#unas sales como el !erclora(o% La reacci'n de desna(urali/aci'n !uede se#uirse
midiendo la absorbencia de la lu/ ul(ra$iole(a, ya +ue las bases, al se!ararse las
cadenas del DNA +uedan ms libres, y absorben ms lu/ ul(ra$iole(a%
- Rena(urali/aci'n> 0l DNA +ue se desna(urali/' !or calor (iende a &ormar
nue$amen(e la cadena doble cuando la soluci'n se en&r)a len(amen(e% 0s(a
!ro!iedad del DNA !ermi(e conocer el #rado de "omolo#)a (secuencias de bases
similares) en(re dos molculas di&eren(es de DNA%
- 4ibridaci'n> Las (cnicas de desna(urali/aci'n y !os(erior rena(urali/aci'n se
u(ili/an !ara conse#uir la "ibridaci'n de cidos nucleicos, es decir, una $e/
se!aradas las dos "ebras del DNA doble "lice, es !osible $ol$er a &ormar una
doble "lice con una "ebra de DNA +ue sea com!lemen(aria ("ibridaci'n de DNA
con DNA) o $ol$er a &ormar una doble "lice con un se#men(o de RNA +ue
con(en#a la secuencia com!lemen(aria ("ibridaci'n de DNA con RNA)%
Las (cnicas de "ibridaci'n !ermi(en, !or e?em!lo, iden(i&icar el #en +ue "a dado lu#ar
a un de(erminado ARNAmensa?ero%
EXPLICAR QU FUNCIAN TIENE CADA REACTIVO EN EL AISLAMIENTO DEL DNA.
- Tris> La soluci'n Tris, o (ri ("idroxime(il) aminome(ano, es una soluci'n bu&&er
biol'#ica com*n +ue se u(ili/a en (odo el !roceso de ex(racci'n de ADN ya +ue
es(e es sensible al !4 de cual+uier (i!o de &uen(e duran(e dic"o !roceso% La
soluci'n Tris se u(ili/a duran(e la lisis celular, la eliminaci'n y la !reci!i(aci'n de
com!onen(es celulares no deseados !ara man(ener un !4 es(able%
Adems, la soluci'n Tris in(erac(*a con el L56 (li!o!olisacrido) de la membrana, lo
cual sir$e !ara deses(abili/ar la membrana a*n ms%
- 6acarosa> Heneralmen(e, se incluye sacarosa en el bu&&er de mues(ra !ara
aumen(ar la densidad%
- Cloruro de ma#nesio> 0l 0DTA es un com!onen(e +uelan(e, +ue se une al
ma#nesio, en(re o(ros me(ales% 0l ma#nesio es un co&ac(or de la
desoxirribonucleasa% Al unir el ma#nesio al 0DTA, la ac(i$idad de la
desoxirribonucleasa !resen(e disminuye%
- GAmerca!(oe(anol> Ayudar a desna(urali/ar las !ro(e)nas !or la ru!(ura de enlaces
disul&uro en(re residuos de cis(e)na% 6e em!lea en al#unos !ro(ocolos de
aislamien(o de RNA !ara eliminar ribonucleasas liberadas duran(e la lisis celular%
0llo se debe a +ue las ribonucleasas son !ro(e)nas es(abili/adas median(e
numerosos !uen(es disul&uro% La acci'n del GAmerca!(oe(anol desna(urali/a
irre$ersiblemen(e es(as molculas, lo cual !re$iene la di#es(i'n del RNA duran(e el
!rocedimien(o%
- Lauril sul&a(o de sodio (6D6)> 0s un de(er#en(e ani'nico +ue ac(*a como a#en(e
solubili/an(e de !ro(e)nas y de com!onen(es de (e?idos y membranas%
- 0DTA> 0s un a#en(e +uelan(e de iones me(licos como Ca8C y D#8C% In"ibe la
acci'n de las nucleasas al no "aber co&ac(ores libres !ara su ac(i$idad y as)
!ro(e#e al DNA%
- Ci(ra(o de sodio> Jac(ores como los iones Ca8C y D#8 son im!or(an(es !ara la
ac(i$idad de las DNAasas% 0l ci(ra(o de sodio !resen(e en las soluciones
em!leadas !ara la ex(racci'n y !uri&icaci'n del ADN, a(ra!a es(os iones e im!ide,
de es(a &orma, la acci'n de las en/imas +ue di#ieren es(as molculas%
- Cloruro de sodio> Las sales aumen(an el !oder i'nico de la soluci'n y ocasionan la
!reci!i(aci'n del DNA%
- 0(anol> 0l com!le?o de DNA se solubili/a aumen(ando la concen(raci'n salina y se
!reci!i(a con e(anol%
0l e(anol se!ara el DNA de o(ros com!onen(es celulares, los cuales son de?ados en la
soluci'n acuosa%
DI6CU6IN
Debido a las !ro!iedades &)sicoA+u)micas del DNA del ")#ado u(ili/ado, se "omo#enei/o
con $arios reac(i$os, se me/claron de &orma correc(a, !or (an(o, se ob(u$ieron resul(ados
exi(osos en donde des!us de cen(ri&u#ar y me/clar con el e(anol la sus(ancia, !udimos
obser$ar +ue el DNA ex(ra)do (#racias a la eliminaci'n de !ro(e)nas) ascendi' con una
consis(encia !arecida a la na(a, !e+ue;as "ebras +ue al remo$erlo aumen(aban, no
"abr)a sido !osible si no se "ubiesen u(ili/ado las can(idades correc(as de reac(i$os,
considerando las !ro!iedades del DNA%
CONCLU6IN
Ob(ener DNA im!lic' la ca!acidad de los reac(i$os !ara rom!er las membranas , !or lo
(an(o #racias a es(os lo#ramos el ob?e(i$o de s(a !rc(ica%
BIBLIOGRAFA
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- Le"nin#er (899M), 5rinci!ios de 1io+u)mica% 0s!a;a> Ome#a%