UNIVERSIDAD AUTONOMA CHAPINGO

Divisin de Ciencias Forestales

Factores que controlan la germinacin en semillas
de palma dulce, Brahea dulcis (H. B. K.) Mart.


Tesis Profesional


Que como requisito parcial
para obtener el ttulo de:


Ingeniero en Restauracin Forestal



Presenta:

Miguel Angel Romero Morales


Chapingo, Mxico. septiembre del 2004

sta tesis, Factores que controlan la germinacin en semillas de palma
dulce, Brahea dulcis (H. B. K.) Mart. Fue realizada por Miguel Angel Romero
Morales, bajo la direccin de la Dra. Mara Antonieta Goytia Jimnez y del Dr.
Leovigildo Crdova Tllez. Ha sido revisada y aprobada por el siguiente
Comit Revisor y Jurado Examinador, para obtener el Ttulo de Ingeniero en
Restauracin Forestal



PRESIDENTE: Dra. Ma. Antonieta Goytia Jimnez ______________________



SECRETARIO: Dr. Leovigildo Crdova Tllez ______________________



VOCAL: Dr. Dante Arturo Rodrguez Trejo ______________________



SUPLENTE: Dr. A. Gil Vera Castillo ______________________



SUPLENTE: Ing. Reyes Bonilla Beas ______________________




Chapingo, Texcoco, Edo. de Mxico, septiembre 2004

AGRADECIMIENTOS

A Dios...

A la Universidad Autnoma Chapingo y a la Divisin de Ciencias Forestales.

A la Dra. Mara Antonieta Goytia Jimnez

Al comit revisor de ste trabajo por sus sabias y oportunas aportaciones

Al CONACyT por los recursos asignados para mi formacin

Al Programa para la Formacin de Jvenes Investigadores y Emprendedores

Al personal administrativo de la Reserva de la Biosfera Barranca de
Metztitln , por facilitar el material biolgico para la realizacin de sta tesis

Al MC. Alejandro Manso por facilitar las instalaciones del laboratorio de
cultivos vegetales.

Al Sr. Mario Venegas Peralta por su ayuda en la realizacin de los cotres
histolgicos.

Al MC. Jorge Valdez Carrasco por prestar el equipo para la toma de
fotografas

Al personal del laboratorio de semillas de la Divisin de Ciencias Forestales.

A todos los maestros que con sus enseanzas contribuyeron a mi
formacin.
DEDICATORIA



A mis padres:

Maria de Jess Morales Morales

Y

Jernimo Romero Ortega

con amor, respeto y admiracin



A mis hermanos:

Lucia, Anglica y Jernimo


A mi siempre amiga Mary,

A Beln

A Magda.


Y a mis maestros-amigos:
Pedro Carrillo, Mardonio, Fernando Bravo
Luis y Martn

NDICE GENERAL


CONTENIDO PAG


NDICE DE CUADROS......................................................................................... i
NDICE DE FIGURAS.......................................................................................... ii
RESUMEN .......................................................................................................... iv
SUMARY............................................................................................................................ v
1 INTRODUCCIN.......................................................................................... 1
1.1 Objetivos............................................................................................... 2
1.1.1 General ........................................................................................... 2
1.1.2 Particulares..................................................................................... 2
2 REVISIN DE LITERATURA ....................................................................... 3
2.1 Aspectos generales de B. dulcis ........................................................ 3
2.1.1 Taxonoma de la especie................................................................ 3
2.1.2 Descripcin botnica....................................................................... 3
2.1.3 Distribucin geogrfica ................................................................... 4
2.1.4 Ecologa de la palma. ..................................................................... 5
2.1.5 Usos................................................................................................ 5
2.1.6 Normatividad................................................................................... 7

CONTENIDO PAG

2.2 Anatoma y morfologa general de semillas ...................................... 8
2.3 Germinacin ......................................................................................... 8
2.4 Condiciones para la germinacin....................................................... 9
2.4.1 Proceso de germinacin bajo condiciones normales...................... 9
2.4.2 Condiciones que limitan la germinacin........................................ 10
2.4.3 Limitantes endgenas de las semillas .......................................... 10
2.4.4 Limitantes exgenas a la semillas ................................................ 11
2.5 Tratamientos pre-germinativos......................................................... 12
2.6 Anlisis de semillas ........................................................................... 13
2.6.1 Pureza .......................................................................................... 13
2.6.2 Peso de 100 semillas.................................................................... 13
2.6.3 Contenido de humedad................................................................. 13
2.6.4 Viabilidad...................................................................................... 15
2.7 Ensayos de germinacin................................................................... 15
2.8 ndices para el anlisis de la germinacin....................................... 15
3 MATERIALES Y MTODOS ...................................................................... 17
3.1 Datos de colecta................................................................................. 17

CONTENIDO PAG

3.2 Descripcin de la semilla .................................................................. 17
3.3 Anlisis de semillas ........................................................................... 17
3.3.1 Pureza .......................................................................................... 17
3.3.2 Peso de 100 semillas.................................................................... 18
3.3.3 Contenido de humedad................................................................. 18
3.3.4 Viabilidad...................................................................................... 19
3.4 Cortes anatmicos............................................................................. 19
3.5 Ensayo de germinacin en cultivo in-vitro ...................................... 19
3.5.1 Prueba de desinfestacin ............................................................. 20
3.5.2 Medio de cultivo............................................................................ 20
3.5.3 Siembra de semillas...................................................................... 21
3.5.4 Siembra de embriones.................................................................. 21
3.6 Diseo experimental .......................................................................... 21
3.7 Cortes en embriones ......................................................................... 22
3.8 Descripcin del proceso germinativo .............................................. 22
4 RESULTADOS Y DISCUSIN................................................................... 23
4.1 Descripcin de las semillas .............................................................. 23

CONTENIDO PAG

4.2 Anlisis de semillas ........................................................................... 24
4.2.1 Contenido de humedad................................................................. 24
4.2.2 Ensayo de viabilidad..................................................................... 25
4.3 Ensayo de germinacin..................................................................... 26
4.3.1 Semillas ........................................................................................ 26
4.3.2 Embriones..................................................................................... 27
4.4 Cortes histolgicos en embriones ................................................... 28
4.5 ndice de viabilidad..............................................................................29
4.6 Descripcin del proceso germinativo .............................................. 31
5 CONCLUSIONES ....................................................................................... 33
6 LITERATURA CITADA............................................................................... 34

i
NDICE DE CUADROS

CUADRO PAG


1. Productos y usos comunes de la palma dulce ....................................... 6
2. Especies del gnero Brahea contempladas en Norma Oficial
Mexicana NOM-059-ECOL-2001 y sujetas a proteccin especial.......... 7
3. Efecto del contenido de humedad sobre la viabilidad y plagas de
semillas almacenadas. ......................................................................... 14
4. Contenido de humedad requerido para el almacenamiento de
algunas semillas tolerantes al secado.................................................. 14
5. Descripcin de los tratamientos utilizados en el ensayo de
germinacin en cultivo in-vitro. ............................................................. 19
6. Diseo experimental en la siembra de semillas y embriones de B.
dulcis. ................................................................................................... 22
ii
NDICE DE FIGURAS


FIGURA PAG


1. Morfologa interna y externa en semillas de a) Sabal mexicana:
testa te, endospermo en, cotiledn co y radcula ra; b) Agave
lecheguilla: testa, cotiledn, endospermo y radcula. Niembro
(1983). ....................................................................................................8
2. Descripcin de la semilla de B. dulcis: a) Frutos secos, b)
endospermo de color amarillento y color blanco lechoso, c)
cotiledn co en corte transversal, d) cotiledn y embrin em
proyectado fuera de la semilla, cubierta cu de aspecto coriceo .........23
3. Comparacin de la morfologa interna y externa de semillas de: a)
A. mexicana testa te, endospermo en, cotiledn co, hipocotilo hi y
radcala ra; b) S. mexicana testa, endospermo, cotiledn,
hipocotilo y radcala; c) B. dulcis testa, endospermo, cotiledn, eje
embrionario ee y pliegue pl...................................................................24
4. Ensayo de viabilidad con cloruro 2,3,5-trifeniltetrazolio donde se
muestran: a) semillas enteras teidas y; cortes transversales de: b)
endospermo en, cotiledn co y embriones teidos, c) semillas
parcialmente teidas y d) semillas no teidas.......................................25
5. Embrin proyectado a) necrtico, deforme y proceso de
germinacin suspendido y b) medio en el que se detecta tincin
obscura originada por oxidacin de compuestos fenlicos en el
tratamiento semilla escarificada............................................................26

iii
FIGURA PAG

6. Experimento en fotoperiodo: a) semilla escarificada, b) embrin
solo, c) embrin con 10 mg l
-l
GA3, d) embrin con 1 mg l
-l
de
GA3, e) embrin con 1 mg de ABA, f) semilla con testa, g) embrin
con 364 mg l
-l
GA3, h) 100 mg l
-l
GA3 e i) 5 mg de ABA.......................27
7. Cortes histolgicos de embriones: a) corte transversal del
cotiledn c con grupos de clulas sin ncleos y b) sin ncleos en
todo el corte, haz vascular hv; c) corte longitudinal con ncleos y
embrin definido, d) ausencia de ncleos y embrin amorfo, se
destacan el tubo polnico tp, el eje embrionario ee compuesto de
los primordios foliares pf, la plmula pl y radcula r; e) y f) cortes
transversal del eje embrionario con coleoptilo co y micrpilo m. ..........30
8. Cortes histolgicos de embriones: detalles de pices del cotiledn
c a) clulas con ncleo y grupos de clulas sin ste , b) corte con
clulas sin ncleo y haz vascular hv, c) divisin celular, y d)
grnulos de almidn ga.........................................................................31
9. Descripcin de la germinacin: a) semilla; b) ruptura de la testa y
emergencia del embrin en forma de chipote; c) estructura en
forma de gancho; d) emisin de radcula ra y coleoptilo cl , entre
stos se encuentra la coleoriza co; e) desarrollo de la primer hoja
h y el sistema radical sr, epicotilo ep y hipocotilo hi..............................32

iv


RESUMEN

Se analizaron los factores endgenos que controlan la germinacin en semillas de
Brahea dulcis, colectadas en noviembre del 2001 en La Palma, Municipio de
Metztitln, Estado de Hidalgo, as mismo se describi la morfologa interna,
externa y el proceso de germinacin de las mismas.

El experimento se estableci en cultivo in vitro con dos tratamientos de luz:
fotoperiodo de 16 horas de luz por ocho horas de oscuridad y oscuridad. Se
utilizaron semillas con testa y escarificadas, embriones con 0, 1, 10, 100 y 364 mg
l
-l
de cido giberlico (GA3), 1 y 5 mg de cido abscisico (ABA). Estos tratamientos
no tuvieron efecto alguno sobre la germinacin en semillas y desarrollo de los
embriones de B. dulcis.

En los cortes de semilla se encontr que el 36 % no presentaban un embrin bien
desarrollado, cuando ste estaba formado el 25 % present clulas con ncleos,
el 12.5 % grupos de clulas sin ncleos y el 62.5 % embriones con clulas sin
ncleos.

Palabras clave: Brahea dulcis, germinacin, cido abscisico, cido giberilico.
v

SUMARY

Endogenous factors that affect the germination in seeds of Brahea dulcis palm
were analyzed. Thus, both the external and internal morphology and the
germination process were described. The seeds were collected in November 2001
from La Palma, Metztitln, Hidalgo State.

Experiment was established in-vitro with two conditions: a light regime of 16 hours
light/8 hours darkness and total darkness. The treatments were: seeds with coat
and seeds out coat, embryos with 0, 1, 10, 100 and 364 mg l-l of gibberellic acid
(GA3), 1 and 5 mg of abscisic acid (ABA). These treatments did not have any
effect on the seeds germination and embryos development. 36% of seed cuts did
not present a developed embryo. 25% of those cuts that presented a developed
embryo had cells with nuclei, an the other 12.5% present groups of cells nuclei and
the 62.5% did not present nuclei in the cells.

Key words: Brahea dulcis, germination, abscisic acid, gibberellic acid.





1
1 INTRODUCCIN
El problema de obtencin de plntulas en B. dulcis va sexual fueron manifestados
por Fregoso (1943), quien recomend proponer alternativas para solucionarlo en
ese tiempo y prevenil enfrentarlo en el futuro, lo cual podra ser ms difcil y,
adems y costoso. Este problema sigue vigente en la actualidad.

En la naturaleza la presencia de limitaciones endgenas y exgenas para la
germinacin de semillas en el suelo tiene importancia en la conservacin del
banco de semillas y la distribucin, tanto en el tiempo como en el espacio, de
plntulas y brinzales (Camacho, 1994 b). En el vivero deTopiltepec, Estado de
Guerrero, donde se han realizado prcticas para reproducir plantas de B. dulcis, a
partir de la recoleccin de semillas han notado que el proceso de germinacin
puede durar de 2 a 3 meses, an despus de tratar las semillas cido sulfrico
(Illsley et al., 2001). En un ensayo realizado preliminar en el que las semillas de la
especie referida se escarificaron sometindolas a agua caliente y fuego no
mostraron efecto favorable sobre la germinacin.

La hoja de palma ha sido utilizada principalmente para la extraccin como textil
que significa ingresos marginales para quienes la aprovechan. El proceso de
aprovechamiento se restringe a la extraccin del brote tierno de la palma, llamado
velilla, situacin que limita la reproduccin sexual de la especie
1
. El corte de la
velilla favorece la proliferacin de hijuelos, mismos que al llegar a su estado adulto
son de porte bajo, ste tipo de aprovechamiento ha disminuido la reproduccin
sexual por la baja produccin de frutos, lo que puede generar reduccin en la
viabilidad gentica dentro de las poblaciones sujetas a aprovechamiento (Ramrez,
1996). La reproduccin vegetativa de B. dulcis, originada por el modo de
aprovechamiento de la hoja en la que se extraen los pices foliares (cogollos),

1
RAMREZ., J . La palma: hacia un manejo campesino. En
www.conabio.gob.mx/institucion/conabio_espaol/doctos/palmas.html

2
hace escasa la produccin de frutos y dificulta la reproduccin por semillas (Illsley
et al., 2001).

En el estado de Guerrero, los campesinos han detectado la disminucin en el
porte de las plantas, calidad y tamao de las hojas que se utilizan para el tejido de
diversas artesanas, principalmente sombreros
1
.

Es necesario que se realicen estudios encaminados a obtener mtodos para
producir plantas de B. dulcis en vivero a partir de semillas con la finalidad de: 1)
conservar la variabilidad gentica y 2) utilizar dicha especie en actividades de
reforestacin, en este caso, en las zonas ridas de la Barranca de Metztititln,
Estado de Hidalgo, con problemas de erosin. De sta manera plantear
estrategias para la conservacin del recurso a largo plazo.
1.1 Objetivos
1.1.1 General
Describir la morfologa de la semilla y tratar de detectar los factores endgenos
que controlan la germinacin en semillas de una poblacin de Brahea dulcis (H. B.
K.) Mart.
1.1.2 Particulares
Describir la morfologa interna y externa de las semilla, evaluar tratamientos para
promover la germinacin y describir el proceso de germinacin de la semilla.


1
RAMREZ., J . La palma: hacia un manejo campesino. En
www.conabio.gob.mx/institucion/conabio_espaol/doctos/palmas.html
3
2 REVISIN DE LITERATURA
2.1 Aspectos generales de B. dulcis
2.1.1 Taxonoma de la especie
1

Reino: Plantae
Divisin: Magnoliophyta
Clase: Liliopsida
Subclase: Arecidae
Superorden: Areciforae
Orden: Arecales
Familia: Arecaceae Schultz Sch., (Palmae)
Subfamilia: Coryphoideae
Tribu: Corypheae
Subtribu: Livistoninae
Gnero: Brahea (Erythea, Glaucothea)
Especie: B. dulcis (H. B. K.) Mart.
Sinonimias: Corypha dulcis Kunth y B. berlandieri H. B. K.
Nombres comunes: Palma dulce, soyal, soyate, palma abanico, cocaisle, palma de
sombrero, palma corriente, palma dulce.
2.1.2 Descripcin botnica
Hbito de crecimiento: La palma dulce, B. dulcis, mide de dos a siete metros de
altura (Martnez 1979). En algunos casos, el tallo es decumbente y alcanza los
ocho metros, una palma puede estar rodeada de individuos jvenes, que se
conocen como palmas secundarias, y no desarrollan tallo hasta pasados los cinco
aos. sta situacin se presenta en lugares perturbados; contrariamente, en
lugares inaccesibles o alejados a poblaciones, como en la mixteca oaxaquea, se
desarrollan palmas adultas aisladas y sin la presencia de palmas secundarias
(Castillo, 1993).

1
Palm and cycad Societies of Florida, Inc. 1998-2003. En:
http://www.plantapalm.com/vpe/taxonomy/vpe_taxonomy.htm
4

Hojas: abanicadas de 50 a 70 cm con pecolos espinosos y cubiertos por una
vaina foliar que las protege (Martnez, 1979). Castillo (1993) reporta longitudes
que van de 20 a 100 cm. con presencia de pubescencia de color blanquecino en el
envs, venacin palmetinerve y disposicin de las hojas en el verticilo en forma de
espiral, las cuales son persistentes. La palma produlce en promedio cuatro hojas
cada dos meses (Ramrez 1996).

Inflorescencia: mide hasta 2.5 m de largo (Martnez 1979). Su coloracin es
blanco amarillenta debido a la presencia de tomento que las cubre, es una
inflorescencia de tipo indeterminado y presenta una brctea tubular (Castillo,
1993).

Flores: de color blanco amarillento, ssiles y miden de 2 a 3 mm, se consideran
flores perfectas por presentar cliz, corola, androceo y gineceo

Fruto: globoso, de 16 a 17 mm de dimetro (Martnez 1979). Castillo (1993)
menciona que es una drupa de 0.5 a un cm de dimetro, el exocarpio es de color
blanco amarillento ya que est cubierto totalmente de pubescencia, la parte
interna es de color caf rojizo, el mesocarpio es de coloracin blanquecina y de
textura carnosa

Semilla: blanca, ovoide y dura (Martnez, 1979). Las semillas son difciles de
obtener, pero presentan germinacin rpida (Barboza, 1999). Se encuentran de
500 a 600 semillas por inflorescencia y germinan en un periodo de cinco meses
(Fregoso, 1943).
2.1.3 Distribucin geogrfica
B. dulcis se encuentra principalmente en la Meseta Central de Mxico (Barbosa,
1999). Particularmente se distribuye en los estados de Guerrero, Oaxaca,
5
Veracruz, Puebla, Hidalgo, Michoacn, J alisco (Martnez, 1979), Morelos,
Quertaro, San Luis Potos
1
y Tamaulipas (Urbina, 1995).
2.1.4 Ecologa de la palma.
La palma se desarrolla en climas templados y sub-clidos; en asociaciones
vegetales del tipo selva baja caducifolia y en transicin a encinares,
ocasionalmente estn en asociacin con un estrato herbceo de gramneas
(Rzedowski, 1978). Su distribucin se restringe a suelos someros con
afloramientos calizos, ricos en carbonatos de calcio, y con poca humedad
(Miranda y Hernndez, 1963). Prospera entre los 1 200 y 2 200 m s n m (Urbina,
1995).

La especie tiene estrecha relacin con los incendios, a los que responde
favorablemente emitiendo rebrotes (Rzedowski, 1978).

La germinacin de las semillas est asociada al proceso digestivo de zorros y
coyotes, ya que los frutos al ser consumidos, y las semillas pasar por el tracto
digestivo, con una acidez en el estmago a pH inferior o igual a 1
2
. Lo cual es
considerado como un proceso de escarificacin que facilita su germinacin al ser
desechadas va excretas
3
.

Las plantas establecidas forman estructuras micorrzicas, de tipo endomicorriza
4
.
El crecimiento de la palma es lento (Ramrez, 1996).
2.1.5 Usos
El uso de la palma es diverso y se utilizan todas las partes de la misma con
distintos fines (Ramrez, 1996). En el cuadro 1 se presenta un listado de los

1 y 2
RAMREZ., J . La palma: hacia un manejo campesino. En
www.conabio.gob.mx/institucion/conabio_espaol/doctos/palmas.html

32
SNCHEZ-PEALVER., D. Anatoma de un carnvoro y necesidades nutricionales. En
http://www.weim.net/sanpan/acba/lobos.htm

4
ANNIMO. En www.phcmexico.com.mx/relacion3.html

6
productos y usos comunes de las partes de palma utilizada en Guerrero y
Metztitln, Hidalgo.

Cuadro 1. Productos y usos comunes de la palma dulce

Uso o descripcin

Partes de la
plante

Productos
Guerrero
a
Barranca de Metztitln
b

Fruto

----

Alimento.


Tenates

Cestos para guardar tortillas.
Bozales Red que se sujeta al hocico
de los bueyes mientras se
trabaja en la milpa.

Textil en la elaboracin
de sombreros petates,
tenates y artesanas.
Cinta Materia prima para elaborar
sombreros, bolsas. etc.

Tecol
petates
Canastas para recoleccin
de mazorcas de maz.


Hoja tierna
Mecapales Franja de tejido que va a la
frente para facilitar la carga
de bultos.


Hoja madura

Mecates

Cuerdas para amarres.


Hoja seca

----

Para techos de las casas.


Tallo

----

Construccin de paredes y
techos.


Brcteas
foliares

Capotes

Capa para protegerse de la
lluvia

Cuaxtlis Almohadones que se
colocan bajo la silla de
montar




Raz

Escobetas

Para limpieza


Planta entera

----

Ornato religioso

Fuente: a) Ramrez J . La palma: hacia un manejo campesino.
b) J ess C., M. A . 2001. com. pers.


7
2.1.6 Normatividad
En el cuadro 2 se muestran las especies del gnero Brahea que se encuentran en
el listado de plantas sujetas a proteccin especial y su estatus de distribucin,
contempladas en la Norma Oficial Mexicana NOM-059-ECOL-2001
1
. B. dulcis no
se encuentra en sta lista por ser una especie abundante en Mxico (Barbosa,
1999); Sin embargo, se menciona a B. berlandieri con la categora sujeta a
proteccin especial y endmica, considerada como sinonimia de B. dulcis.

Cuadro 2. Especies del gnero Brahea contempladas en Norma Oficial Mexicana NOM-
059-ECOL-2001 y sujetas a proteccin especial

Especie Nombre comn Categora Distribucin

B. berlandieri*

palma Berlandier

Pr

endmica
B. edulis palma de Guadalupe Pr endmica
B. moorei palmilla enana azul Pr endmica
B. nitida palma pitshan Pr no endmica
Pr: Sujeta a proteccin especial
Fuente: Norma Oficial Mexicana NOM-059-ECOL-2001
* Sinonimia de B. dulcis

El aprovechamiento de B. dulcis est regulado por la Norma Oficial Mexicana
NOM-006-RECNAT-1997
2
, en la que se establecen los procedimientos, criterios y
especificaciones para realizar el aprovechamiento, transporte y almacenamiento
de dicho recurso. El aprovechamiento irracional de las palmas: camedor
(Chamaedorea spp.), de sombrero (B. dulcis), palapa (Orbignya guacuyule), real o
micharo (Sabal mexicana), guano (Chrisophylla spp.), datilera (Phoenix dactylifera)

1
Instituto Nacional de Ecologa. 2002. NORMA Oficial Mexicana NOM-059-ECOL-2001, Proteccin
ambiental-Especies nativas de Mxico de flora y fauna silvestres-Categoras de riesgo y especificaciones para
su inclusin, exclusin o cambio-Lista de especies en riesgo. En: ttp://www.ine.gob.mx/ueajei/norma59a.html

2
SEMARNAP: Especies con usos maderables en bosques tropicales y subtropicales den los estados de
Durango, Chihuahua, J alisco. Michoacn, Guerrero y Oaxaca. En:
http://148.233.168.204/pfnm2/fichas/brahea_dulcis.htm

8
y washingtonia (Washingtonia robusta), entre otras; puede ocasionar severos
daos al recurso y recursos asociados
1


2.2 Anatoma y morfologa general de semillas
De manera general las partes fundamentales que conforman las semillas son: 1) la
cubierta seminal o testa; 2) tejidos de reserva, el perispermo, endospermo y
cotiledones y 3) el embrin, conformado por la radcula y plmula (Niembro,1983).
En la Figura 1 se muestra la composicin de dos semillas de especies afines a B.
dulcis.










Figura 1. Morfologa interna y externa en semillas de a) Sabal mexicana: testa te, endospermo en, cotiledn
co y radcula ra; b) Agave lecheguilla: testa, cotiledn, endospermo y radcula. Niembro (1983).

2.3 Germinacin
La germinacin se define como la reanudacin del crecimiento del embrin que
implica la ruptura de las cubiertas seminales y la emergencia de una nueva planta
independiente y que requiere de una compleja secuencia de cambios bioqumicos,
morfolgicos y fisiolgicos (Hartmann, 1971). Hartmann y Kester (1983) la definen
como la emergencia de la radcula y plmula; Camacho (1994) seala que es la
reiniciacin del metabolismo y transcripcin del cdigo gentico; por otro lado,

1
SEMARNAP: Norma Oficial Mexicana NOM-006-RECNAT-1997, que establece los procedimientos,
criterios y especificaciones para realizar el aprovechamiento, transporte y almacenamiento de hojas de palma.
En: http://www.cemda.org.mx/infoanap/legislacion/docs/noms/recursos/NOM-006-RECNAT-1997.dot
te
en
co
ra
te
co
en
ra
a b
9
Desai et al. (1997) la considera como el desarrollo del embrin de una semilla y la
iniciacin de procesos anablicos y catablicos. Todos stos autores coinciden en
que la germinacin es un proceso esencial para las plantas con semillas. Mc
Donald y Copeland (1985) mencionan que la germinacin es el papel ms
importante en las especies de reproduccin sexual, por el hecho de asegurar la
supervivencia de las especies.
2.4 Condiciones para la germinacin
Hartmann y Kester (1983) mencionan tres condiciones especficas que se
requieren para que se inicie la germinacin: 1) semilla madura y viable, 2) la cual
haya superado toda barrera fsica o qumica capaz de impedir o detener la
germinacin y 3) ser colocada en condiciones que favorezcan dicho proceso.
2.4.1 Proceso de germinacin bajo condiciones propicias
Para que la germinacin tenga lugar en una semilla se requiere de ciertos
procesos consecutivos, y Stanley et al., (1974) los resume de la siguiente manera:
1) Imbibicin de agua; 2) Activacin de procesos metablicos y 3) Crecimiento del
embrin. Hartman y Kester (1983), consideran los mismos procesos y para cada
uno especifican lo siguiente:

Imbibicin de agua: absorcin de agua por la semilla en la que se hidrata el
protoplasma celular y ocasiona la iniciacin de la sntesis de enzimas y de
protenas especficas. Simultneamente la elongacin celular y la emergencia de
la radcula se hacen evidentes, lo cual seala el fin de sta primera etapa.

Activacin de procesos metablicos: los principales procesos son la digestin y
traslocacin de lpidos, protenas y carbohidratos, de los tejidos de reserva hacia
el embrin, actividades reguladas por procesos bioqumicos.

Crecimiento del embrin: la divisin y elongacin celular del eje embrionario es
el principal proceso que genera el crecimiento de estructuras como la radcula,
plmula y tallo.
10

Establecimiento de la planta: ocurre la diferenciacin del hipocotilo y picotilo.
La plntula depende de las reservas seminales, endospermo, hasta el momento
en el cual las primeras hojas inician con la actividad fotosinttica (Hartmann,
1971). Camacho (1994 a) considera que es la ltima fase de germinacin.
2.4.2 Condiciones que limitan la germinacin
La ausencia de germinacin en las semillas o inhibicin del crecimiento, en la que
intervienen diversas condiciones, reciben distintos nombres, entre los que se
encuentran: dormancia, dormicin, latencia, letargo, reposo y vida latente
(Camacho 1994 c).

Hartman (1971) divide a dichas condiciones en dos grupos: las de origen
endgeno a la semilla y las de origen ambiental (exgenos). En el primer grupo se
encuentran: la latencia causada por las propiedades fsicas o qumicas de la
propia cubierta seminal; las caractersticas del embrin; la presencia de
inhibidores qumicos y; la latencia combinada en la que se presentan dos o ms
de las anteriores (Annimo 1983). En el segundo grupo intervienen principalmente
humedad, temperatura, intercambio gaseoso y luz (Stanley et al., 1974).
2.4.3 Limitantes endgenas de las semillas
Impermeabilidad al agua: la impermeabilidad de las cubiertas seminales es tpica
en distintas especies (Mc Donald y Copeland, 1985). Las semillas con sta
caracterstica se reconocen por tener testa lisa y que no se hincha con el remojo
(Camacho, 1994).

Resistencia mecnica: la resistencia mecnica se atribuye a testas que limitan la
elongacin del embrin a causa de no haberse dado la ruptura de la cubierta
durante la imbibicin (Mc Donald y Copeland, 1985), tal es el caso de cubiertas
leosas (Camacho, 1994).

11
Restriccin del intercambio gaseoso: en ocasiones, las cubiertas de las
semillas pueden tener permeabilidad selectiva, esto es, permitir el paso del agua,
pero no el de los gases como el oxgeno y dixido de carbono (Mc Donald y
Copeland, 1985). Lo que resulta en bloqueos metablicos en el embrin
(Camacho, 1994).

Embriones inmaduros: los embriones rudimentarios e inmaduros se generan
cuando las semillas son cosechadas antes de que se cumpla con la madurez
morfolgica (Mc Donald y Copeland, 1985), sin que se haya completado el
desarrollo del embrin (Camacho, 1994). En este caso la madurez se hace visible
con cambios morfolgicos (Annimo, 1983)

Inhibidores qumicos: las sustancias qumicas que inhiben la germinacin se
presentan, comnmente, en semillas de plantas halfitas y se caracteriza por las
altas concentracin de sales en las cubiertas (Camacho, 1994). Los ms
importantes son el cido abscsico, cloruro de sodio, cloruro de calcio, cido
ctrico, acetaldehdo, benzaldehdo, cafena y cocana, entre otros (Niembro,
1979).
2.4.4 Limitantes exgenos a la semillas
Disponibilidad de humedad: es el factor ms importante por los requerimientos
del proceso de germinacin, y la limitacin de humedad afecta el porcentaje y
velocidad de germinacin, y en algunos casos la inhibe (Annimo, 1983).

Requerimientos de temperatura: el rgimen de temperaturas determina el nivel
de las relaciones bioqumicas, as como la imbibicin e intercambio gaseoso
(Annimo, 1983), por lo que la presencia o ausencia de temperaturas extremas es
un factor que impide la germinacin en algunas especies de plantas (Dasai et al.,
1997)

12
Intercambio gaseoso: en ste intervienen principalmente la demanda de oxgeno
y la liberacin de bixido de carbono, el cual en altas concentraciones inhibe la
germinacin (Annimo, 1983).

Requerimientos de luz: la respuesta germinativa al estimulo luminoso vara entre
las especies de acuerdo a la cantidad y calidad de luz (Annimo, 1983).
2.5 Tratamientos pre-germinativos
Lo que se pretende al aplicar tratamientos que estimulen la germinacin es
aprovechar al mximo la capacidad de un lote de semillas para producir plantas
(Camacho, 2000). A continuacin se presentan en resumen algunos de los
tratamientos pre-germinativos ms comunes.

Escarificacin mecnica: el tratamiento consiste en permitir el paso de agua y
gases al endospermo mediante la ruptura o desgaste de la testa (Annimo, 1983).

Estratificacin: en la estratificacin se aplica agua caliente a las semillas
contenidas en un sustrato arenoso para que se embeban (Camacho, 1994). El
enfriamiento en hmedo es otro tratamiento en el que se remojan las semillas de
12 a 24 horas y se someten a temperaturas bajas (de 0 a 10 C) dentro de un
sustrato que conserve la humedad (Hartman, 1971).

Remojo: se requiere sumergir las semillas en agua para que se ablanden las
cubiertas o que sean lavados o disueltos los inhibidores (Annimo, 1893).

Alternancia de temperaturas: Hartmann (1971) sugiere temperaturas de 77 a
100 C

Lavado: Camacho (1994) recomienda que se aplique un lavado con agua
corriente.

13
Reactivos qumicos: se hace uso, sobre las semillas, de cido sulfrico
concentrado, proporcin 1 a 2 y con duracin mnima de 10 minutos (Hartmann,
1971). Los tiempos de inmersin de la semilla en el cido y la concentracin del
mismo varan en cada especie, dependiendo de las caractersticas presentes en
las semillas (Bonner et al., 1974). Otros qumicos empleados son el agua
oxigenada, alcohol o acetona con distintos propsitos (Annimo, 1983). El cido
giberelico es usado con frecuencia en pruebas de laboratorio (Bonner et al., 1974).
2.6 Anlisis de semillas
2.6.1 Pureza
En los resultados del anlisis de pureza se determina la proporcin de: 1) semilla
pura de la especie de inters y 2) de otros materiales en donde se consideran
semillas de otras especies forestales o malezas y material inerte como restos de
frutos, basuras y tierra o piedras (Bonner e. al., 1974). La suma de los pesos de
los componentes deber compararse con el peso inicial y los porcentajes de cada
componente deben dar como resultado el 100% (Ministerio de Agricultura, 1976).
2.6.2 Peso de 100 semillas
El valor de ste componente es afectado por el tamao de semilla, y su valor
depende del contenido de humedad y proporcin de semillas llenas o vanas
(Bonner et al., 1974). La determinacin se hace a partir del peso por separado en
cuatro o ms submuestras de cien semillas cada una (ISTA, 1959). La finalidad es
obtener el peso de 1000 semillas puras y determinar el nmero de semillas por
kilogramo (Ministerio de Agricultura, 1976).
2.6.3 Contenido de humedad
En sta prueba se determina la cantidad de agua de las semillas a partir de la
obtencin del peso fresco y seco de una muestra de por lo menos 100 g (ISTA,
1959). La muestra que se remitir a sta prueba deber guardarse en un
recipiente cerrado e impermeable, al que se le haya eliminado la mayor cantidad
de aire (Ministerio de Agricultura, 1976). Camacho (1994 d) establece intervalos
14
del contenido de humedad que se relacionan con daos que pudieran sufrir las
semillas almacenadas (Cuadro 3). En el Programa Nacional de Reforestacin se
trabaja con el contenido de humedad que permite el almacenamiento de semillas
afines a B. dulcis y de zonas ridas (Cuadro 4), sta condicin de almacenamiento
permite que las semillas conserven su viabilidad (PRONARE, 2000).

Cuadro 3. Efecto del contenido de humedad sobre la viabilidad y plagas de semillas
almacenadas.

Contenido de
humedad
Posible dao

Menor de 5%

Prdida de viabilidad

De 5 a 10%

Longevidad prolongada en las tolerantes al secado.

Mayor de 10%

Las semillas tolerantes al secado se hacen susceptibles al
ataque de hongos e insectos, si hay temperatura mayor a 0.

Mayor de 18%

Aumenta el riesgo por ataque de hongos; puede haber dao
por calentamiento y en presencia de temperaturas inferiores a
las que ocurre el congelamiento.

Entre 20 y 30%

Se puede mantener la viabilidad de las semillas intolerantes al
secado

Mayor de 30 %

Ocurre la germinacin, o muerte por congelamiento.
Fuente: Camacho (1994d)

Cuadro 4. Contenido de humedad requerido para el almacenamiento de algunas semillas
tolerantes al secado.


Especie


Familia

% de humedad

Agave spp

Agavaceae 5-8
Boucarnea spp Agavaceae 5-10
Nolina spp Agavaceae 5-10
Phoenix dactylifera Arecaceae 5
Washingtonia filifera Arecaceae
Yucca carnerosana Agavaceae 5-8
Yucca filifera Agavaceae 5-8
Fuente: PRONARE, 2000
15
2.6.4 Viabilidad
La determinacin de la viabilidad en semillas se realiza a partir de sales de
tetrazolio (cloruro 2, 3, 5, tetrazolio) en solucin al 1% tiene como principio los
procesos de reduccin en clulas vivas (ISTA, 1959). Al ser embebida la solucin
por las semillas, clulas vivas toman el hidrgeno liberado por enzimas
deshidrogenasas, y en procesos de reduccin, el tetrazolio que es incoloro y se
convierte en trifenil-formasan de color rojo e insoluble en agua (Ministerio de
Agricultura, 1976), resultando coloreado el tejido vivo (Bonner et al., 1974).
2.7 Ensayos de germinacin
Los ensayos de germinacin se efectan con el propsito de determinar el
porcentaje de semillas que producen plantas normales al ser puestas en
condiciones favorables de humedad, temperatura, luz y aireacin (Escalante,
1988). La muestra de semillas del lote destinado a ste ensayo debe someterse a
ambientes en los que la temperatura, luz, humedad y aireacin estn
estrictamente controlados (ISTA, 1959).

Las plntulas se contabilizan como normales cuando la radcula alcanza cuatro
veces el largo de la semilla, aquellas semillas que germinan de forma anormal se
contabilizan slo cuando el porcentaje es alto (Bonner et al., 1974). Las semillas
que emiten radcula u otro rgano que impida el establecimiento de una plntula
plantas con posibilidades de llegar a ser adultas son considera como plntula
anormal (Camacho, 1994).
2.8 ndices para el anlisis de la germinacin
La calidad de los lotes de semillas no siempre se refleja en los porcentajes de
germinacin, y se relaciona con factores que Bonner (1974) engloba en el trmino
vigor. ste trmino puede ser medido de varias formas mediante los siguientes
ndices.

Velocidad de germinacin: tambin llamada energa o capacidad germinativa y
que se define comnmente por el porcentaje de germinacin total ocurrido en la
16
tasa ms alta de germinacin, esto se refiere al nmero de das requeridos para
que ocurra de 50 al 90 % de la germinacin total, (Bonner, 1974). La utilidad
practica es para el clculo en la necesidad de semillas para siembra (Camacho,
1994a). En el mismo sentido se han definido y utilizado los siguientes:

Tiempo de germinacin: se utiliza el tiempo medio de germinacin, al reducirse
el tiempo de germinacin las plntulas se establecen mejor, dicho ndice no es
empleado para la certificacin de semillas aun cuando refleja la calidad de las
mismas (Camacho, 1994a).

Uniformidad germinativa: se refiere a la cercana entre los tiempos de las
semillas germinadas e indica el tiempo disponible y requerido para dicho proceso y
labores asociadas (Camacho, 1994a).

17
3 MATERIALES Y MTODOS
3.1 Datos de colecta
Las semillas de B. dulcis fueron proporcionadas por el Ing. Miguel ngel de J ess,
las cuales se colectaron en noviembre del 2001. La colecta fue en La Palma,
Municipio de Metztitln, Estado de Hidalgo, dentro de la Reserva de la Biosfera
Barranca de Metztitln, a 1 860 m s n m, entre las coordenadas extremas 20 30
de latitud norte y 98 48 de longitud oeste.

El clima es el BSh seco semiclido, con temperatura media anual de 20.2 C y
precipitacin total de 437.1 mm (Garca, 1985).

Las semillas proporcionadas fueron tratadas con arazn para prevenir el ataque
de hongos.
3.2 Descripcin de la semilla
La descripcin de semilla no se encontr reportada en la literatura consultada, por
lo que sta se realiz a partir de mediciones en forma transversal y longitudinal,
descripcin del color y observacin de los tejidos en su forma y localizacin, se
observaron cortes anatmicos de la semilla completa y del embrin montados en
preparaciones fijas y ensayos recomendados por la ISTA (1959).
3.3 Anlisis de semillas
3.3.1 Pureza
La determinacin de la pureza se realiz mediante la identificacin y separacin
en dos componentes de la muestra: 1) semillas de B. dulcis y 2) otros materiales,
como el inerte, restos de frutos, basuras, tierra o piedras. Los resultados se
expresan en porcentaje, conforme a Bonner (1974).


18
100 *

=
Pi
Pp
P .......................................................................................................(1)

Donde:

P =Pureza
Pp =Peso de la muestra con semilla pura
Pi =Peso de la muestra con impurezas
3.3.2 Peso de 100 semillas
Se obtuvo conforme a ISTA (1959), utilizando diez submuestras de 100 semillas
del componente de semilla pura, siendo pesadas en una balanza analtica. El
nmero de semillas en un kilogramo se calcul conforme a Bonner (1974).

Semillas por kilogramo =(100 semillas * 1 000 gr ) / 15.824 gr
1
......................... (2)
3.3.3 Contenido de humedad
Las muestras de semillas destinadas para sta prueba se guardaron en un frasco
tapado. La prueba se realiz en una estufa de secado a temperatura de 75 C
durante 96 horas, tiempo en el que se obtuvo su peso constante, se utilizaron
semillas con testa y sin testa, 10 muestras de 100 gr para cada prueba. El valor se
expresa en porcentaje obtenido a partir de la siguiente ecuacin.

100 *

=
Po
Po Pv
CHo ...........................................................................................(3)

Donde:

CHo =Coeficiente de humedad base anhidra
Pv =Peso fresco de la semilla
Po =Peso anhidro de la semilla

1
Peso de la muestra (promedio de las 10 submuestras).
19
3.3.4 Viabilidad
La viabilidad se determin utilizado el teido con sales de tetrazolio en 20 semillas
que fueron lijadas para retirarles la testa, 10 de estas fueron cortadas por la mitad
quedando el embrin dividido longitudinalmente. Las semillas se pusieron a
remojaron durante 24 horas en agua destilada, posteriormente se sumergieron en
la solucin acuosa al 1% durante 48 horas, tiempo en el que se observ tincin. El
resultado se expres en porcentaje.
3.4 Cortes anatmicos
Se realizaron cortes longitudinales y transversales en semillas, principalmente, de
la misma muestra utilizada para el ensayo de viabilidad, las observaciones fueron
realizadas en imgenes tomadas a partir de la digitalizacin de los cortes.
3.5 Ensayo de germinacin en cultivo in-vitro
Se estableci un experimento en el Laboratorio de Cultivo de Tejidos Vegetales
del departamento de Fitotecnia de la Universidad Autnoma Chapingo del 27 de
noviembre del 2003 al 30 de julio del 2004. Se trabaj con dos ambientes: 1)
fotoperiodo de 16 horas luz por 8 de oscuridad y 2) oscuridad, la que se mantuvo
en una cmara obscura, ambos con los tratamientos que se describen en el
cuadro 5. El experimento se mantuvo a 25 C, temperatura que Chatty y Tissaoui
(1999) reportan como ptima para germinar semillas de palmas, despus de haber
trabajado con 21 especies y 5 niveles de temperatura.

Cuadro 5. Descripcin de los tratamientos utilizados en el ensayo de germinacin en
cultivo in-vitro.

Tratamiento Descripcin
1 Semilla con testa
2 Semilla escarificada
3 Embrin
4 Embrin +1 mg l
-l
GA3
5 Embrin +10 mg l
-l
GA3
6 Embrin +100 mg l
-l
GA3
7 Embrin +364 mg l
-l
GA3
8 Embrin +1 mg de ABA
9 Embrin +5 mg de ABA
20

Para las concentraciones de cido giberlico (GA3) se utiliz el producto Biogib

y
stas fueron definidas a partir de las utilizadas por Elkiey-T et al. (1995) en
semillas de Seaforthia elegans. Camacho (2000) recomienda ampliamente la
utilizacin de substancias reguladoras del crecimiento vegetal como las giberelinas
en concentraciones de 500 a 1000 p.p.m. para estimular la germinacin en
palmas. El cido abscisico (ABA) se adicion conforme a las concentraciones
probadas por Aberlenc, et al. (2001) en la palma de aceite Elaeis guineensis.

Se utiliz una semilla o embrin como unidad experimental con cinco repeticiones
por tratamiento tanto en fotoperiodo como en oscuridad, utilizando un total de 20
semillas y 70 embriones.
3.5.1 Desinfestacin
Previo al experimento, se realiz una prueba para definir el tratamiento de
desinfestacin a utilizar. En 20 semillas, que fueron lavadas con detergente y
enjuagadas en agua corriente, posteriormente se sumergieron muestras de 10
semillas en cloro al 25 y 50 % durante 15 minutos, finalmente se enjuagaron tres
veces con agua destilada esterilizada y se sembraron en frascos de boca ancha.
El tratamiento de desinfestacin seleccionado fue el segundo, cloro al 50%.
3.5.2 Medio de cultivo
La composicin del medio de cultivo para la siembra de semillas y
embrionesconsistio de: sales de solucin madre base (MS), 100 mg l
-1
de inositol,
3% de sacarosa, 0.4 mg l
-1
de tiamina, 0.5 mg l
-1
de piridoxina y 2 mg l
-1
de glicina.
La mzcla de stos compuestos fue aforada a 1000 ml, ajustando el pH a 2.7
0.1. En la mezcla final se adicion 0.8 % de agar agar, y el medio preparado se
coloc en un agitador magntico para medir y ajustar el pH.

El medio se prepar en nueve matraces de Erlenmeyer de 250 ml, 150 ml de
solucin madre para cada tratamiento, posteriormente se depositaron 15 ml del
21
medio de cultivo dentro de 90 tubos de ensayo previamente esterilizados, mismos
que se volvieron a introducir en un autoclave.

En los tratamientos: Embrin +1 mg de ABA y Embrin +5 mg de ABA, el cido
abscisico (ABA) se adicion en los tubos previo a su esterilizacin y en los
tratamientos: Embrin +1 mg l
-l
GA3, Embrin +10 mg l
-l
GA3, Embrin +100 mg
l
-l
GA3 y Embrin +364 mg l
-l
GA3, el cido giberilico se incorpor filtrado a los
tubos en una campana de flujo laminar el da de la siembra, el medio de los
tratamientos: Semilla con testa, Semilla sin testa y Embrin, se manejo sin
compuestos adicionales.
3.5.3 Siembra de semillas
Para el tratamiento uno las semillas con testa fueron desinfestadas conforme al
procedimiento elegido en el punto 3.5.1. Las 10 semillas utilizadas en el
tratamiento dos fueron escarificadas con una lija para madera del nmero. La
siembra se realiz en un ambiente de campana de flujo laminar, depositando una
semilla por tubo de ensayo con la ayuda de unas pinzas de diseccin, tomando las
medidas de limpieza requeridas.
3.5.4 Siembra de embriones
La extraccin de embriones, a partir de semillas desinfectadas, se realiz con un
bistur nmero 24 haciendo un corte tangencial aproximndose al embrin, mismo
que era removido con la punta de una aguja de diseccin a manera de escarpelo.
El embrin extrado era depositado inmediatamente dentro del tubo de ensayo
correspondiente.
3.6 Diseo experimental
El diseo empleado fue bloques completos al azar con cinco repeticiones como se
muestra en el cuadro 6. Se utiliz una semilla como unidad experimental, 90
semillas en total, 45 semillas en ambiente de fotoperiodo con 16 horas luz por 8
horas de oscuridad y el resto en ambiente oscuridad.


22

Cuadro 6. Diseo experimental utilizado en la siembra de semillas y embriones de B.
dulcis.

T
2
R
1
T
5
R
1
T
3
R
1
T
4
R
1
T
8
R
1
T
1
R
1
T
7
R
1
T
6
R
1
T
9
R
1

T
2
R
2
T
5
R
2
T
3
R
2
T
4
R
2
T
8
R
2
T
1
R
2
T
7
R
2
T
6
R
2
T
9
R
2

T
2
R
3
T
5
R
3
T
3
R
3
T
4
R
3
T
8
R
3
T
1
R
3
T
7
R
3
T
6
R
3
T
9
R
3

T
2
R
4
T
5
R
4
T
3
R
4
T
4
R
4
T
8
R
4
T
1
R
4
T
7
R
4
T
6
R
4
T
9
R
4

T
2
R
5
T
5
R
5
T
3
R
5
T
4
R
5
T
8
R
5
T
1
R
5
T
7
R
5
T
6
R
5
T
9
R
5

T =tratamiento, R =repeticin.
3.7 Cortes en embriones
Se realizaron cortes histolgicos se realizaron en el Laboratorio de Histologa y
Citologa del Departamento de Preparatoria Agrcola, mediante la tcnica conocida
como inclusin en parafina. Previamente se realizaron pruebas de tincin para
seleccionar los tiempos adecuados, stos fueron 40 minutos en safranina y 45
segundos en verde rpido. Los cortes se hicieron en sentido transversal y
longitudinal al embrin, con espesor de 14, stos se montaron, se observaron al
microscopio y se digitalizaron. Las observaciones hechas sobre los cortes se
contrastaron entre si para poder indicar los detalles encontrados.
3.8 Descripcin del proceso germinativo
La descripcin del proceso germinativo se realiz en base a lo observado en una
semilla de B. dulcis que mostr germinacin completa. Los registros se realizaron
en las fechas tres, 11 y 29 de diciembre del 2003, 25 de enero y 14 abril del 2004.
El proceso descrito puede modificarse o corroborarse al momento de considerar
un mayor numero de semillas que al germinar sean observadas. El proceso se
ilustra con un esquema que corresponde a la etapa de desarrollo de la plntula.

23
4 RESULTADOS Y DISCUSIN
4.1 Descripcin de las semillas
La semilla proviene de una drupa, con testa de color ocre cuando seca (Figura
2a), es de forma ovoide, mide de 4 a 8 mm de longitud y de 3 a 7 milmetros en su
seccin transversal (Figura 2b). El cotiledn es de color blanco lechoso a
amarillento (Figura 2c), entre la testa y la semilla se encuentra una cubierta de
aspecto coriceo (Figura 2d).

La semilla presenta embrin dentro del cotiledn color blanco en forma de
torpedo, mide de 0.5 a 1 mm de ancho por 1 a 3 mm de largo (Figura 2c), Debe
mencionarse que el cotiledn responde rpidamente a la adsorcin de agua, ya
que se observ en todos los casos su proyeccin hacia fuera de la semilla como
resultado de la hidratacin (Figura 2c) cuando fueron sometidas a medios con
agua.














Figura 2. Descripcin de la semilla de B. dulcis: a) Frutos secos, b) endospermo de color amarillento y color
blanco lechoso, c) cotiledn co en corte transversal, d) cotiledn y embrin em proyectado fuera de
la semilla, cubierta cu de aspecto coriceo.

co
co
cu
24

El peso determinado de 100 semillas fue de 15.824 gr. Lo que dio como resultado
6319 semillas por kilogramo, es decir 0.6 g por semilla. El lote analizado tubo 99 %
de pureza.

La morfologa de semillas de B. dulcis, tanto interna como externa, descrita en
ste trabajo se compara con la descrita para Sabal mexicana y Acrocomia
mexicana por Niembro (1983), las tres especies pertenecen a la familia Arecaceae
(Figura 3).









Figura 3. Comparacin de la morfologa interna y externa de semillas de: a) A. mexicana testa te,
endospermo en, cotiledn co, hipocotilo hi y radcala ra; b) S. mexicana testa, endospermo,
cotiledn, hipocotilo y radcala; c) B. dulcis testa, endospermo, cotiledn, eje embrionario ee y
pliegue pl.
a) y b) Niembro (1983).
c) El autor (2004)

4.2 Anlisis de semillas
4.2.1 Contenido de humedad
El contenido de humedad vari de 12.32% para las semillas con testa y 12.30%
para las semillas sin testa, ambos porcentajes fueron superiores a los que se
manejan en almacenamiento por el Programa Nacional de Reforestacin
(PRONARE) para especies afines y de zonas ridas (Cuadro 4). Camacho (1994d)
indica que a ste contenido de humedad las semillas que son tolerantes al secado
se hacen susceptibles al ataque de hongos e insectos, si hay temperatura mayor a
0, situacin que no se presento ya que las semillas se trataron, desde su colecta
a b c
en
te
co
ra
hi
en
te
co
hi
ra
en
co
ee
te
15 mm
7 mm 6 mm
pl
25
con arazn. Por lo que contenido de humedad obtenido en sta prueba es un
indicador que pudiera estar manifestando la presencia de actividad metablica
dentro de la semilla (Camacho, 2000).
4.2.2 Ensayo de viabilidad
En el ensayo con cloruro de tetrazolio se observaron tres grados de tincin: El
45% correspondiente a semillas con el endospermo, cotiledn y embrin teidos
totalmente (Figuras 4a y 4b), en la segunda figura el color del cotiledn es ms
intenso; el 30% corresponde a semillas parcialmente teidas (Figura 4c) y; el 25%,
a semillas que no se tieron (Figura 4d). ISTA (1959) establece algunas
particularidades para semillas que presentan tinciones parciales en 19 especies
forestales, y considera viables solamente aquellas semillas que presenten
embriones completamente teidos. Estos resultados indican que el 45% de las
semillas eran viables, y el 65% no fueron viables, retomando la clasificacin hecha
por Bonner (1974).













Figura 4. Ensayo de viabilidad con cloruro 2,3,5-trifeniltetrazolio donde se muestran: a) semillas enteras
teidas y; cortes transversales de: b) endospermo en, cotiledn co y embriones teidos, c) semillas
parcialmente teidas y d) semillas no teidas.
en
en
en
co
co
co
26
4.3 Ensayo de germinacin
4.3.1 Semillas
El tratamiento de escarificacin de la testa no favorecio la germinacin en
semillas de B. dulcis ya el porcentaje de germinacin fue 0%, igual al tratamiento
de semilla sin escarificacin de testa. Sin embargo se discuten las observaciones
hechas durante el desarrollo del experimento.

El tratamiento con escarificacin, mostr el 87% de proyeccin del embrin fuera
del cotiledn a los tres das, situacin que se present en ambos ambientes (luz y
oscuridad). La estructura proyectada se torn necrtica y deforme (Figura 5a), por
otra parte el proceso de germinacin se detuvo por completo en todos los casos,
ello es reportado por Bonner (1974) como una situacin anormal. ste
comportamiento se ha relacionado con la presencia de compuestos fenlicos,
cido abscsico, algunos terpenos, entre otros compuestos qumicos (Camacho,
1994). En el medio se detect una tincin obscura (Figura 5b) originada
posiblemente por la oxidacin de compuestos provenientes de grupos se suponen
fenlicos (Manson, comunicacin personal.), dicha oxidacin se present tanto en
condicin de fotoperiodo como en oscuridad.









Figura 5. Embrin proyectado a) necrtico, deforme y proceso de germinacin suspendido y b) medio en el
que se detecta tincin obscura originada por oxidacin de compuestos fenlicos en el tratamiento
semilla escarificada.
27
4.3.2 Embriones
Los tratamientos embrin, 1 , 10, 100 y 364 mg l
-l
GA3 y uno y cinco mg de ABA,
no tuvieron efecto alguno sobre el desarrollo de los embriones (Figuras 6c, 6d, 6e,
6f, 6g, 6h, 6i), el porcentaje de crecimiento fue 0%.

En experimentos realizados por Broschat y Donselman (1988) encontraron que la
aplicacin de 1000 ppm de GA3 se acelera la velocidad de germinacin en
Crisalidocarpus lutescens, Syagrus romanzoffiana, Phoenix roebelenii, y ocasiona
elongacin de los brinzales; Elkiey-T et al. (1989) reporta que 1000 ppm de GA3
en semillas de Archontophoenix cunninghamiana acelerando la germinacin y
obtienen obtuvieron mejores resultados cuando la aplicacin la combinaron con
escarificacin. En ste mismo sentido Hisajima-S et al. (1990) utilizaron 1000
p.p.m. de GA3 en embriones de Metroxylon sagu bajo condiciones de cultivo in-
vitro y observaron que el crecimiento en los mismos fue estimulado.










Figura 6. Experimento en fotoperiodo: a) semilla escarificada, b) embrin solo, c) embrin con 10 mg l
-l

GA3, d) embrin con 1 mg l
-l
de GA3, e) embrin con 1 mg de ABA, f) semilla con testa, g)
embrin con 364 mg l
-l
GA3, h) 100 mg l
-l
GA3 y i) 5 mg de ABA.

Aberlenc et al. (2001) aplicaron 5 , 25 y 50 M de ABA, el cual intervino en la
maduracin de semillas y aument la sobrevivencia de embriones de palma de
aceite Elaeis guineensis, la ltima concentracin manifiesta inhiba la emisin de
brotes del embrin.
f d c e
g
h b a i
28

Los resultados que se obtuvieron contrastan con las observaciones hechas por
Fregoso (1943) quien reporta hasta 90 % de germinacin de semillas en el suelo
al pie de la planta, en ste caso habr de cuestionar si el lote de semilla
germinada corresponde a un mismo ao. Barboza (1999) menciona que es fcil
obtener semilla de B. dulcis, y que dichas semillas germinan con facilidad,
situacin contraria a la que se present en este trabajo.
4.4 Cortes histolgicos en embriones
Las estructuras que se observan en los cortes conforme al Departament of
Agriculture (1952) en los embriones son el cotiledn, micrpilo, los tubos polnicos,
haces vasculares y el eje embrionario compuesto por los primordios foliares,
plmula y radcula, el coleoptilo que se encuentra envolviendo estos ltimos
(Figuras 7a, 7b, 7c, 7d, 7e y 7f).

En los cortes transversales se observaron embriones con grupos de clulas sin
ncleos (Figura 7a) y tambin se presentaron cortes en donde la ausencia de
ncleos en las clulas del embrin fue total (Figura 7b). En los cortes
longitudinales se presentaron casos contrastantes, en un grupo se observaron
cortes en los que la totalidad de las clulas presentaron ncleos y el embrin est
bien definido (Figura 7c), por el contrario en un segundo grupo, en el corte (Figura
7d) no se ven ncleos y el embrin es una masa amorfa de clulas.

En acercamientos hechos al microscopio sobre algunos cortes, se observ en
pices de embriones clulas con ncleo y grupos de clulas sin ste, en el mismo
corte (Figura 8a) y cortes con clulas sin ncleo (Figura 8b). Adems, hay indicios
de actividad celular manifiesta por la divisin nuclear (Figura 8c). Por otra parte, en
un corte en donde no se presentan ncleos se ven grnulos de almidn dentro de
las clulas (Figura 8d). El almidn se almacena en organelos llamados granos o
grnulos de almidn y son la principal estructura en la que se almacenan las
reservas (carbohidratos) para el embrin dentro de las semillas (Derek B. y Mlack
M., 1985).
29

Los porcentajes cuantificados para cada una de las observaciones hechas son los
siguientes: del total de los 30 embriones cortados se obtuvieron 753 cortes
montados y en el 25 % se observaron ncleos, en el 12.5 % se presentaron
grupos de clulas sin ncleos y en el 62.5 % de los embriones no se observaron
ncleos en las clulas.

Ramrez, (1996) menciona que el proceso y modo de aprovechamiento de la
palma limita la reproduccin sexual de la especie y que puede generar la
reduccin en la viabilidad gentica. En el mismo sentido Derek y Mlack (1985)
mencionan que la prdida de la variabilidad gentica en gran medida se ha debido
a la endogamia ocurrida por los patrones de consumo sobre los recursos
naturales.
4.5 ndice de viabilidad
La ISTA (1959) presenta un ndice de viabilidad para 19 especies forestales que
se basa en el patrn de tincin de las semillas, una directriz semejante podra ser
elaborada para la especie en estudio. En ste apartado se propone la elaboracin
de un ndice a partir del diseo de un modelo matemtico que valore la correlacin
entre los resultados obtenidos en el ensayo con cloruro de tetrazolio y las
observaciones hechas en cortes histolgicos de embriones. Para ello se sugiere
elaborar ensayos de viabilidad en semillas y clasificar stas de acuerdo con el
patrn de tincin presentado: 1) semillas con el endospermo, cotiledn y embrin
teidos totalmente; 2) semillas parcialmente teidas y 3) semillas no teidas.
Posteriormente, elaborar cortes histolgicos sobre embriones correspondientes a
cada patrn encontrado, as mismo cuantificar lo encontrado en cada situacin: 1)
clulas con ncleos en toda la superficie del corte; 2) grupos de clulas sin
ncleos y 3) ncleos ausentes en el total de las clulas. Lo antes propuesto
deber corroborarse con ensayos de germinacin, por lo tanto se deber trabajar
con semillas que procedan de un mismo lote. De sta manera se podra saber con
certeza en que casos se considerara a la semilla como viable con slo observar el
patrn de tincin obtenido en el ensayo con cloruro de tetrazolio.
30


Figura 7. Cortes histolgicos de embriones: a) corte transversal del cotiledn c con grupos de clulas sin
ncleos y b) sin ncleos en todo el corte, haz vascular hv; c) corte longitudinal con ncleos y
embrin definido, d) ausencia de ncleos y embrin amorfo, se destacan el tubo polnico tp, el eje
embrionario ee compuesto de los primordios foliares pf, la plmulapl y radcular; e) y f) cortes
transversal del eje embrionario con coleoptilo co y micrpilo m.

c
tp
r
co c
m
co
c tp
pl
pf
r
ee
c
hv
c
hv
31

Figura 8. Cortes histolgicos de embriones: detalles de pices del cotiledn c a) clulas con ncleo y grupos
de clulas sin ste, b) corte con clulas sin ncleo y haz vascular hv, c) divisin celular, y d)
grnulos de almidn ga.

4.6 Descripcin del proceso germinativo
El proceso que a continuacin se describe es con base a las observaciones
hechas sobre una semilla germinada, situacin por la cual no se trata de una
descripcin concluyente. Debido a que el proceso podria modificarse o
corroborarse al considerar las observaciones hechas sobre un lote mayor de
semillas germinadas.

El tipo de germinacin observada fue hipogea, debido a que en ningn momento
fue expuesto el cotiledn por encima del medio de cultivo. Primeramente se
observ un rpido desarrollo del coleoptilo y despus de la primer hoja.

hv
c
ga
c
32
En la primer etapa se observ la ruptura de la testa en la semilla y la estructura
expuesta fue un pequeo chipote (Figura 9b), proveniente de la emergencia del
embrin que tom la forma de un gancho (Figura 9c) de la que se diferenciaron la
radcula y el coleoptilo (Figura 9d), ambos unidos a la semilla por dicho gancho. El
epictilo e hipocotilo se desarrollaron por encima y debajo de la semilla
respectivamente dando forma a la primer hoja y al sistema radical (Figura 9e).

La hoja emitida tubo un rpido desarrollo, de coloracin verde intenso y most un
sistema de nervaduras paralelas. La raz creci aun ms rpido que la hoja,
tornndose de color blanquecino a blanco amarillento, delgada, emitiendo races
laterales.



Figura 9. Descripcin de la germinacin: a) semilla; b) ruptura de la testa y emergencia del embrin en forma
de chipote; c) estructura en forma de gancho; d) emisin de radcula ra y coleoptilo cl , entre
stos se encuentra la coleoriza co; e) desarrollo de la primer hoja h y el sistema radical sr, epicotilo
ep y hipocotilo hi.
a b c d e
3 dic. 11dic. 29 dic. 25 ene. 14 abr.
cl
co
ra
ep
hi
sr
1 cm
h
33
5 CONCLUSIONES

Los tratamientos: semilla con testa, semilla escarificada, embrin +1 mg de ABA,
embrin +5 mg de ABA, embrin +1 mg l
-l
GA3, embrin +10 mg l
-l
GA3, embrin
+100 mg l
-l
GA3 y embrin +364 mg l
-l
GA3, no tuvieron efecto alguno sobre la
germinacin en semillas de B. dulcis, por lo que no se recomienda su uso.

Se encontraron dos factores endgenos a la semilla de B. dulcis en la poblacin
de La Barranca de Metztitln, Estado de Hidalgo, que pudieran estar controlando
su germinacin: 1) la ausencia de ncleos en las clulas de embriones que se
deduce como el factor principal, endgeno, que afecta la germinacin de las
semillas analizadas y 2) los compuestos provenientes de grupos fenlicos
detectados en semillas escarificadas, que no fueron un factor determinante,
debido a que se busc disminuir su efecto con la adicin de cido giberlico

El proceso germinativo observado cumpli con lo descrito en la literatura, sin
embargo, para poder corroborar dicho proceso se deben considerar las
observaciones sobre un lote mayor de semillas germinadas, ya que el proceso se
describi con base a una semilla germinada.

34
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