CONTROL BACTERIANO POR MEDIO DE AGENTES

FSICOS Y QUMICOS
OBJETIVO: Observar el efecto de algunos agentes fsicos y qumicos
utilizados como germicidas para el control de los microorganismos.
GENERALIDADES
Muchas prcticas de la vida cotidiana como la potabilizacin del agua, la
pasteurizacin de la leche o la refrigeracin de los alimentos, tienen por
obeto controlar a las poblaciones microbianas. !ste cntrol tiene varias
razones como prevenir la transmisin de enfermedades, evitar la
contaminacin de algunos productos y evitar la contaminacin
"alimentaria, ambiental, etc.#
$na variedad de agentes fsicos y qumicos son %tiles para provocar la
muerte bacteriana o para prevenir su multiplicacin. !ntre estos
encontramos las radiaciones ultravioleta, la temperatura, los agentes
desinfectantes y otros.
RADIACIN ULTRAVIOLETA
&a mayora de los microorganismos mueren bao grandes dosis de
radiacin electromagn'tica, especialmente en la zona ultravioleta "$(#,
ondas ultrasnicas de muy alta frecuencia y con peque)as dosis de
radiacin ionizante, como los rayos gamma y rayos catdicos. &a muerte
se presenta por los da)os causados al *+, y la variacin en la
resistencia, normalmente re-eada en las diferentes facultades de las
c'lulas para reparar el *+, da)ado por la radiacin.
TEMPERATURA
Muchas c'lulas son sensibles al calor h%medo, despu's de la e.posicin
por algunos minutos a una temperatura ms elevada que su m.ima de
crecimiento. &a proporcin de c'lulas muertas depende del tiempo de
e.posicin y la temperatura.
!l calor mata causando la desnaturalizacin de las
macromol'culas como las protenas, la muerte bacteriana es
proporcional al grado de coagulacin provocado por el calor h%medo.
&a destruccin efectiva por temperaturas baas rara vez ocurre. &a
causa del da)o celular durante el congelamiento no es muy conocida,
pero se sabe que la concentracin de solutos durante el congelamiento
rompe las membranas y causa la lisis durante el deshielo.
DESINFECTANTES
&os desinfectantes son generalmente agentes qumicos que matan a las
bacterias y otros microorganismos. *entro de estos tenemos:
/. 0cidos y lcalis1 2anto los cidos y lcalis son muy bactericidas dado
su grado de disociacin. !ntre estos se puede mencionar 3O4, +aO4,
4+O5 y 467O8.
6. ,gentes o.idantes. !ntre 'stos tenemos el cloro, el per.ido de
hidrgeno, perborato de 7odio, 9ermanganato de 9otasio y :loruro de
:alcio. &os cuales act%an o.idando las mol'culas esenciales de la c'lula.
5. :ompuestos orgnicos. :omo los derivados del alquitrn de hulla, el
cresol, tricresol, alcanfor, creosota, cido f'nico y el fenol que es el de
uso ms com%n. ,ct%an precipitando las protenas. !sta accin guarda
relacin con la destruccin de la estructura de la membrana y sus
funciones.
8. *etergentes. ;stos se dividen en tres grupos
a# compuestos aninicos como las sales sdicas y potsicas de cidos
grasos de peso molecular elevado sulfatos de alquilo y los abones.
b# compuestos catinicos como los compuestos de amonio cuaternario y
el cloruro de benzalconio.
c# compuestos no inicos que incluyen poli'steres y 'steres de
poliglicerol.
&os abones no pueden considerarse antis'pticos o desinfectantes
efectivos puesto que solo son agentes que eliminan las bacterias
mecnicamente de la piel por emulsin de secreciones lipoides en las
cuales estn incluidos los microorganismos.
&os otros grupos de desinfectantes se consideran bactericidas
porque destruyen la integridad de la membrana por alteracin de la
interaccin entre las protenas y lpidos. &os detergentes catinicos son
los ms e<caces debido a la interaccin de la mol'cula del detergente
" carga positiva# con la super<cie de la membrana bacteriana "carga
neta negativa#
,::=>+ O&=?O*=+0M=:,
,ccin oligodinmica es la propiedad antibacteriana que presentan
ciertos metales pesados en cantidades de partes por milln "ppm#, lo
cual se debe a la formacin de sales pobremente disociables con los
grupos sulfhidrilos de las protenas.
!@!:2O *! &, 2!M9!A,2$A,
!l efecto de la temperatura en la eliminacin de bacterias se ilustrar
con un eercicio en el cual se calentarn los tubos con una suspensin de
la bacteria a estudiar por diferentes tiempos, evaluando despu's el
efecto por conteo de c'lulas vivas.
M,2!A=,& B !C$=9O
,sa bacteriolgica
6 mecheros Dunsen
/ vaso de precipitado de 6EF ml
2ela de asbesto
/E tubos de /5 . /FF con tapn de rosca, est'riles
5 tubos de con/F ml solucin salina est'ril
5 pipetas de E ml est'riles
/ asa calibrada de F.FF/ ml
/E placas de agar de soya y tripticasena
:epas de Staphylococcus aureus, Escherichia coli ( 24 hrs incubacin),
Bacillis subtilis (48 hrs de incubacin).
TCNICA
/. 9repare una suspensin ligera de cada bacteria " con la misma
turbidez todas#.
6. *eposite / ml de cada suspensin en E tubos para cada bacteria,
los cuales irn marcados con el tiempo de calentamiento " sin
calentamiento, E, /F, /E y 6F minutos respectivamente#.
5. :aliente los tubos en un ba)o de agua de ebullicin constante por
los tiempos indicados E, /F, /E y 6F minutos y dee un tubo de
cada bacteria sin calentar.
8. *espu's del calentamiento siembre con el asa calibrada una
asada de cada suspensin en las caas marcadas para cada
bacteria con el tiempo de e.posicin "E caas para cada bacteria#.
E. =ncube por 68 horas y cuente cuantas colonias crecen en cada
placa para poder estimar el efecto del tiempo de e.posicin en
cada caso.
PRESENTACIN DE RESULTADOS
/. !labore una curva con el n%mero de bacterias por ml "y# vs el
tiempo de e.posicin ".#.
6. :oncluya cual es el tiempo mnimo de e.posicin para eliminar al
EFG de cada una de las bacterias estudiadas.
ACCIN DE LOS METALES, CLORO, LCALIS Y CIDOS
9ara demostrar el efecto de los metales sobre los microorganismos se
utilizarn soluciones de los compuestos en cuestin que se aplicaran
sobre el medio para que se difundan. Midiendo posteriormente el halo
de inhibicin producido por cada una.
M,2!A=,& B !C$=9O
asa bacteriolgica
Mechero Dunsen
6 caas de 9etri est'riles
6 tubos con 6F ml de agar nutritivo fundido
:epas de Sarcina lutea, Pseudomonas aeruginosa
caas 9etri con discos de papel <ltro impregnados con las sig. soluciones:
H 7olucin de :loruro de 9lata F.8G
H :loruro merc%rico F.8G
H ,cido sulfurico /FG
H 4idr.ido de 7odio al /FG
H :loro IG
H @enol al EG
H Denzal
9inzas para sensidiscos
2;:+=:,
/. =nocular con cada cepa un tubo de agar nutritivo fundido y enfriado
alrededor de 8E por separado.
6. (erter en una caa 9etri est'ril y dear solidi<car sobre una super<cie
nivelada.
5. :olocar un disco impregnado con cada solucin en forma equidistante
sobre las placas.
8. *ear reposar E minutos para que se absorban las soluciones.
E. =ncubar a 5E : por 68 hrs y observar la formacin de halos de
inhibicin de crecimiento.
9A!7!+2,:=O+ *! A!7$&2,*O7
/. Mide los halos de inhibicin de crecimiento.
6. Menciona qu' solucin es ms e<caz.