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Resumen...1
Introduccin..2
I.- Pigmentos fotosintticos..3
II.-Fotosntesis....4
III. Clorofilas.......5
IV. Cromatografa..7
Objetivos....10
Hiptesis........10
Material.......10
Metodologa.....10
Resultados....12
Discusin de Resultados. .13
Conclusiones.14
Referencias.....14
RESUMEN:
Los cloroplastos poseen una mezcla de pigmentos con diferentes colores: clorofila-a (verde intenso), clorofila-b
(verde), carotenos (amarillo claro) y xantofilas (amarillo anaranjado) en diferentes proporciones.
Todas estas sustancias presentan un grado diferente de solubilidad en disolventes apolares, lo que permite su
separacin cuando una solucin de las mismas desciende por a travs de una columna de cromatografa
verticalmente sobre una pelcula de un disolvente orgnico, ya que las ms solubles se desplazarn a mayor
velocidad, pues acompaarn fcilmente al disolvente a medida que ste desciende. Las menos solubles avanzarn
menos en la columna.
Aparecern, por tanto, varias bandas de diferentes colores (hasta siete o ms, dependiendo del material utilizado)
que estarn ms o menos alejados de la disolucin alcohlica segn la mayor o menor solubilidad de los
pigmentos. Estas bandas poseern diferente grosor, dependiendo de la abundancia del pigmento en la disolucin.
En la prctica se extrajeron estas clorofilas al primero hervir en agua las espinacas para retirar el almidn, despus
se extrajeron con una mezcla de metanol y ter dietlico las clorofilas y por medio de una extraccin lquidolquido con ter de petrleo clorofilas y carotenos con ayuda de una solucin sobresaturada de NaCl para evitar
emulsiones y obtener las 2 fases. Una vez extrados los pigmentos fotosintticos, se procedi a realizar una
cromatografa de adsorcin para separar las distintas clorofilas que componen dichos pigmentos fotosintticos que
componen las coloraciones de las hojas de las plantas observndose que estas se iban corriendo por la columna
dependiendo de la afinidad que tuvieran por el disolvente y se obtenan en diferentes cantidades de acuerdo al tipo
de clorofila, ya que por ejemplo se obtuvo en mayor cantidad la clorofila alfa debido a que esta es la que compone
casi el 75% de las clorofilas de la planta.
INTRODUCCIN
La clorofila es un pigmento de las plantas, que les
proporciona su color verde y que absorbe la luz
necesaria para la fotosntesis. La clorofila absorbe
principalmente luz violeta roja y azul y refleja luz
verde.
La abundancia de clorofila en hojas y su ocasional
presencia en otros tejidos vegetales es la causa de que
esas partes de las plantas aparezcan verdes, pero en
algunas hojas la clorofila es enmascarada por otros
pigmentos. La extraccin y reconocimiento de estos
pigmentos es interesante para es estudio y
conocimiento de sus propiedades.[1]
Los Pigmentos vegetales, que se encuentran en los
cloroplastos, son molculas qumicas que reflejan o
transmiten la luz visible, o hacen ambas cosas a la vez.
El color de un pigmento depende de la absorcin
selectiva de ciertas longitudes de onda de la luz y de la
reflexin de otras. Constituyen el sustrato
fisicoqumico donde se asienta el proceso fotosinttico.
[5]
PIGMENTOS FOTOSINTTICOS
Entre todos los caracteres ms externos de los
vegetales, el ms notable y caracterstico es
probablemente el color. El color no es nicamente un
carcter llamativo de la vegetacin, sino que, adems,
algunos de los pigmentos que lo condicionan estn
estrechamente ligados a las actividades fisiolgicas del
propio vegetal. Por consiguiente, el estudio de cmo
las plantas viven y se desarrollan requieren el previo
conocimiento de los pigmentos vegetales.
Qu son los pigmentos?
Si es posible encontrar en el reino vegetal todos los
matices y combinaciones de colores del espectro, existe
un predominio general de los colores primarios: verde,
amarillo, rojo, azul. Estos colores son conferidos a los
vegetales por determinados compuestos qumicos
definidos, llamados pigmentos. El color particular que
presenta un determinado rgano vegetal depende
generalmente del predominio de uno u otro o la
combinacin de ellos. Se debe tener claro que cuando
CLOROFILAS
En las plantas superiores, la fotosntesis es posible
debido a la presencia en el cloroplasto, concretamente
en las membranas tilacoidales, de una serie de
pigmentos que tienen capacidad para captar la luz.
Existen dos tipos bsicos de pigmentos fotosintticos:
Clorofilas. Compuestas por una porfirina que lleva
incorporado un tomo de magnesio en el centro del
ncleo tetrapirrlico . El in Mg2* est coordinado con
los cuatro tomos de nitrgeno centrales, lo que hace
de la clorofila un complejo extraordinariamente
estable. La "cabeza" que acabamos de describir, est
unida a una "cola", el fitol, que es un alcohol de 20
tomos de carbono. Cabeza y cola se unen a travs de
un enlace ster en el que intervienen el grupo
alcohlico del fitol y el grupo carboxilo de un cido
propinico que est unido al anillo IV del ncleo
tetrapirrlico. Existen varios tipos de clorofilas, las ms
importantes de las cuales son la "a", y la "b". La
clorofila a tiene un grupo -CH3 en el anillo II mientras
que la clorofila b tiene un grupo -CHO en esa misma
posicin.
Carotenoides. Actan como pigmentos accesorios en
el proceso de la fotosntesis. Existen dos tipos de
pigmentos carotenoides: carotenos y xantofilas.
Los carotenos son hidrocarburos isoprenoides que no
contienen oxgeno y estn formados por largas
molculas con un sistema de enlaces conjugados
alternantes, dobles y sencillos, rematados en cada
extremo por un anillo de ciclohexano insaturadotienen color amarillo-anaranjado.
Las xantofilas tienen una estructura muy similar a la de
los carotenos y su diferencia estriba en la incorporacin
de oxgeno en los extremos de la molcula. Segn el
grupo que se incorpore existen variedades dentro de las
xantofilas. Son de color amarillo.[12]
Clorofila a y b
En las plantas, la clorofila a es el pigmento involucrado
directamente en la transformacin de la energa
lumnica en energa qumica, las clulas fotosintticas
casi siempre contienen un segundo tipo de clorofila, la
clorofila b y otro grupo de pigmentos llamados
carotenoides. Uno de los carotenoides que se
encuentran en las plantas es el -caroteno; los
carotenoides son pigmentos rojos, anaranjados o
amarillos, que en las hojas verdes estn enmascarados
por las clorofilas, que son ms abundantes; sin
embargo en algunos tejidos, como los del tomate
maduro, predominan los colores reflejados por los
carotenoides.
Otras Clorofilas
Ficocianinas y ficoeritrinas
Estos pigmentos de color azul-verdoso y rojo-morado
estn limitados a las cianofceas (algas verde-azules) y
Cromatografa de adsorcin.
Dentro de esta tcnica pueden diferenciarse dos tipos
de cromatografas de adsorcin denominadas
cromatografa cromatografa de columna y de capa fina
(abreviada
TLC,
del
ingls
Thin
Layer
Chromatography).
Para la tcnica de cromatografa de adsorcin en
columna se emplean columnas verticales de vidrio
cerrada en su parte inferior con una llave que permita
la regulacin del flujo de la fase mvil. Las columnas
se rellenan con un adsorbente, como almina o gel de
slice (fase estacionaria), mojado con el disolvente que
se vaya a emplear en el proceso cromatogrfico. En la
parte superior de la columna se pone la disolucin de la
mezcla a separar y a continuacin un depsito que
contenga el eluyente (fase mvil) que se va a utilizar en
la separacin. Se abre la llave inferior de manera que el
eluyente comience a bajar por la columna. En este
proceso, los componentes de la mezcla son adsorbidos
por la fase estacionaria con diferente intensidad, de
manera que el proceso de adsorcin-desorcin hace que
unos componentes avancen ms rpidamente que otros.
El lquido que sale por la parte inferior de la columna
se recoge de manera fraccionada. Si los componentes
de la mezcla avanzan a muy diferente
velocidad se podrn obtener fracciones cromatogrficas
constituidas por un solo componente.[16]
En toda cromatografa hablaremos de los siguientes
trminos :
matriz de la columa. Sustancia que est empapada
LPIDOS SAPONIFICABLES
Una forma de clasificar los lpidos es la que se basa en su
comportamiento frente a la reaccin de hidrlisis en
medio alcalino (SAPONIFICACIN). Los lpidos
saponificables son los que se hidrolizan en medio
alcalino y por lo tanto tienen cidos grasos en su
estructura (ceras, TAG, FG, y EFL), y los no
saponificables son los que no experimentan esta reaccin
(Terpenos, esteroides, prostaglandinas, en este grupo
tambin estaran incluidos los cidos grasos).[20]
[21]
OBJETIVOS:
General: Extraer y separar diferentes pigmentos
vegetales
Especficos:
Escoger el material adecuado para extraer
clorofilas
Aplicar experimentalmente la extraccin por
solventes
Empacar y desarrollar una columna de
fraccionamiento
Indicar los diferentes pigmentos fotosintticos en
la columna de acuerdo a su polaridad
HIPTESIS
Si realizamos una extraccin de las clorofilas de la
espinaca que es una planta verde, con disolventes
orgnicos como el ter de petrleo en el cul las
clorofilas son solubles y adems realizamos una
cromatografa de adsorcin por columna, utilizando
disolventes apropiados como N-propanol en ter de
petrleo los cules presentan afinidad por estos
pigmentos, entonces podremos separar y obtener las
distintas clorofilas que componen los pigmentos
fotosintticos de las espinacas.
MATERIAL
Tijeras
2 vasos de precipitado de 250 ml
1 vaso de precipitado de 150mL
1 probeta de 100ml
2 botes
1 embudo de separacin
1 matraz de fondo redondo
1 pipeta de 1ml, 5ml y 10ml
1 pipeta pasteur
Papel filtro
1 mechero
1 tripie con tela de asbesto
1 columna cromatografca (2X20cm)
1 lana de vidrio
1 embudo de filtracin
1 hielo
MATERIAL BIOLGICO
Hojas de espinaca frescas 2g
REACTIVOS
10
11
Las primeras
xantofilas:
clorofilas
formadas
fueron
de
12
DISCUSIN DE RESULTADOS
Se hirvieron las hojas de la espinaca en agua para
quitar el almidn de las hojas; la extraccin de las
clorofilas se realiz con una mezcla de metanol y
ter dietlico en bao mara hasta quedar las hojas de
la planta incoloras, despus se realiz una extraccin
lquido-lquido en un embudo de separacin en
solucin saturada de NaCl (para evitar que se
formaran emulsiones) y ter dietlico el cul extrae
pigmentos, clorofilas y betacarotenos, por lo cul en
este disolvente fue en el que se obtuvieron los
pigmentos para la cromatografa posterior.
Al realizar la cromatografa de adsorcin en el que
este medio fue la almina (fase estacionaria) y el
eluyente la mezcla de N-propanol en ter dietlico,
de manera que el eluyente comienz a bajar por la
columna y los componentes de la mezcla fueron
adsorbidos por la fase estacionaria con diferente
intensidad, de manera que el proceso de adsorcindesorcin hiz que unos componentes avanzaran
ms rpidamente que otros.
Aparecieron varias bandas de diferentes colores que
estuvieron ms o menos alejados de la disolucin de
N-propanol en ter de petrleo segn la mayor o
menor solubilidad de los pigmentos en dicha
disolucin. Estas bandas tenan diferente grosor,
dependiendo de la abundancia del pigmento en la
disolucin. Las que tenan ms afinidad por el
disolvente bajaban ms rpido que los otros
pigmentos.
Las primeras clorofilas que se extrajeron fueron las
xantofilas, las cules son de color amarillo y olivo.
Estas se obtuvieron en pequea cantidad cada uno
de sus coloraciones diferentes.
13
CONCLUSIONES
Se obtuvieron los pigmentos fotosintticos de la
clorofila, que son los que le dan color a las hojas de las
plantas ya que la fotosntesis es un proceso que permite
a los vegetales obtener la materia y la energa que
necesitan para desarrollar sus funciones vitales, se lleva
a cabo gracias a la presencia en las hojas y en los tallos
jvenes de pigmentos, capaces de captar la energa
lumnica.
14
[17]http://www.ub.es/biocel/wbc/tecnicas/cromatografi
a.htm
[18] Ruben Dario Cortez. Tcnicas de separacin,
cromatografa. [En lnea] Seccin de La Red
Latinoamericana de Qumica. Barquisimeto Lara 301.
Ultima versin 21 de enero de 1.998.
[19] Valcarcel, M. 1988. Tcnicas analticas de
separacin. Editorial Revert. Espaa. pp 335-336,
597-613.
Lawrence, A., Kaplan, y Pesce, J. 1986. Quimica
clinica: Tcnicas de laboratorio, fisiopatologia,
15