Universidade Federal de Minas Gerais UFMG

Medicina Veterinria 3 Perodo Set/2013

Trabalho Prtico de Fisiologia Veterinria


Terapia Hormonal Substitutiva
Prof
a
. Dr.
a
Maristela O. Poletini, PhD



Alunos:

Amanda Vasconcellos
Ana Luiza Moreira
Isabella Macedo
Juliana Favato
Fbio Marques

Larissa Andrade
Gabriela Medeiros
Roberta C. Branco
Vanessa Vaz
Yule Thais
INTRODUO:
A secreo de estrgenos e progesterona pelo ovrio e de testosterona pelos
testculos mantm o trato reprodutivo em um estado funcional que bem
caracterstico de cada sexo. Neste experimento sero observadas as
alteraes induzidas pela castrao em ratos (fmeas e machos) bem como os
efeitos da reposio hormonal sobre o trato reprodutivo desses animais.

PLANEJAMENTO EXPERIMENTAL:
Neste estudo foram utilizadas trs ratas, sendo que duas delas foram
ovarioectomizadas. O peso mdio de cada animal era de aproximadamente
280gr cada um. Uma rata foi mantida sem interveno cirrgica, para controle.
Das ratas operadas, uma recebeu teraputica substitutiva (TS) e uma rata
recebeu apenas leo inerte (veculo dos hormnios que foram ministrados), nos
trs dias anteriores ao sacrifcio.
FMEAS:
Rata 1: controle (no castrada)
Rata 2: rata ovariectomizada + leo (0,1ml/100g peso corporal, o que
correspondeu a 0,25ml) via subcutnea
Rata 3: rata ovariectomizada + Estradiol (5 g/0,1ml/100g peso corporal, o que
correspondeu a 0,25ml) via subcutnea

MACHOS:
Para este estudo trs ratos sero utilizados, sendo dois castrados e um
mantido sem interveno, para controle. O peso mdio de cada animal era de
aproximadamente 280gr cada um. Dos ratos castrados, um recebeu
teraputica substitutiva (TS) e um receber apenas leo nos trs dias
anteriores ao sacrifcio.
Rato 1: controle (no castrado)
Rato 2: castrado + leo (0,1ml/100g peso corporal, o que correspondeu a
0,3ml), via intramuscular
Rato 3: castrado + Propionato de testosterona (300 g/0,1ml/100g peso
corporal, o que correspondeu a 0,3ml) via subcutnea.


MTODOS E PROCEDIMENTOS REALIZADOS:
Os animais foram castrados no dia 2 de setembro de 2013, utilizado um
antibitico injetvel, passado Banamina de uso tpico nas feridas. A cirurgia foi
executada pela professora Maristela Poletini e por auxiliares tcnicos do
laboratrio de fisiologia. A castrao consiste na inciso de um corte de cerca
de 2 cm abaixo do fim das costelas, com a retirada anterior desse local dos
pelos, utilizando uma pina hemosttica, corta-se o ovrio direito exposto com
o peritnio. Aps o primeiro corte, no lado direito, segurava-se a tuba uterina
por alguns minutos para estancar a hemorragia. Em seguida, era feita a sutura
na camada muscular e na pele. Aplica-se o antibitico, e na ferida, a Banamina.
O mesmo procedimento foi repetido na lateralidade, para a retirada do ovrio
esquerdo.
Nosso grupo iniciou a terapia hormonal no dia 5 de setembro (quinta-feira), fez
a segunda aplicao em 6 de setembro (sexta-feira) e a ltima dose foi
realizada em 8 de setembro (domingo). As injees foram feitas utilizando-se
seringas idnticas s que se usa para aplicar insulina, por apresentarem
melhor graduao para escalas baixas de ml, com agulha 0,8x25 21G de 1
polegada. A tcnica para aplicao tanto do leo quanto do hormnio, a fim
que ambos tivessem disperso lenta e gradual no corpo do animal consistia em
aplicao no flanco traseiro do animal, penetrando a agulha na pele, apenas
por via subcutnea, na parte interna da coxa, para que os lquidos se fixassem
bem na parte da pele, indo at a pele do outro lado da coxa, sem transpassa-
la, evitando-se haver perda de material inoculado para fora do tecido. Todos os
ratos reagiram bem ao procedimento, e foram segurados pela mesma pessoa,
aplicados com sucesso pelos alunos.
No ltimo dia de aplicao, o macho que estava sob tratamento de
Testosterona no apresentou o mesmo comportamento dos outros animais.
Seu batimento cardaco estava aqum do esperado, estava aptico,
apresentava diarreia pastosa, esverdeada e ftida, sendo o nico animal que
defecou durante o procedimento. Tambm no esboou reao de fuga nem
ao ser pego, nem ao ser solto na caixa. Ficou muito quieto, diferentemente dos
outros animais, que fugiam rapidamente do contato humano. Esse rato
aparentava estar clinicamente doente, fato que comunicamos professora. O
sacrifcio tanto dos animais que receberam medicao ou leo, quanto os
animais-controle foi realizado no dia 9 de setembro, por anestesia com
Thiopental (60mg/kg), procedimento feito pelos tcnicos do ICB.
Assim que recebemos os animais sacrificados, e j pesados, iniciamos o
procedimento cirrgico de necropsia. O primeiro lote a ser estudado no nosso
grupo foi o das fmeas. Primeiro efetuamos a abertura do abdmen, por
inciso cirrgica de tcnica em V, quando avaliamos as diferenas
macroscpicas dos animais. Observou-se macroscopicamente que a fmea
que recebeu injeo de Estradiol apresentou o tero aumentado e muito
vascularizado comparando-se com as outras duas. A que recebeu leo de
milho no teve alteraes visveis. A fmea-controle apresentava tero nas
propores normais, que um pouco maior que a do leo, e menor do que a
do estradiol, pois este causou hiperplasia no rgo.
No macho, foram retiradas prstata e a vescula seminal. Antes da retirada da
vescula, foi feito o esvaziamento total do lquido indgena desse rgo, para
que o lquido seminal no coagulasse e comprometesse o resultado, formando
uma massa slida sobre o rgo. Tanto tero quanto prstatas e vesculas
seminais foram pesados individualmente, e os dados anotados em planilha
prpria, para computao e cruzamento de dados com os demais grupos.
Macroscopicamente, no rato controle, tanto a prstata quanto a vescula
seminal ficaram imutveis, o que era esperado. As peas do rato que recebeu
leo de milho no apresentaram aumento de tamanho, j as do rato que
recebeu Propionato de testosterona notou-se um leve aumento no tamanho,
comparando-se com a do milho ou com o rato-controle.
Todos os rgos retirados dos animais foram colocados em placa de petri de
vidro com papel-filtro embebido em soluo salina de NaCl 0,9%, a fim de
evitar desidratao durante o processo de avaliao e pesagem.
Neuro-hipfise Cortou-se a cabea dos animais, decepando-a. Removeu-se o
pelo da cabea da parte occiptal at os olhos. Abriu-se a caixa craniana com
alicate isolando o encfalo pra a retirada da hipfise. Dissecou-se com cuidado
a eminncia mediana, para extrao da neuro-hipfise, tanto dos animais
machos quanto dos animais fmeas.
Foto 1: teros das trs ratas. Notar intensa vascularizao no animal controle.
Fotos: Por Ana Luiza Moreira


Foto 2: Peas dos machos (vesculas seminais e prstatas)



Foto 3: Neuro-hipfise


CONCLUSO E DISCUSSO
Considerando o Grfico da Prstata, aps o experimento, podemos concluir
que a Testosterona teve um efeito trfico, utilizando o DHT e o 5-alfa-Redutase
deste rgo, devido ao peso da prstata constatado post mortem. Uma vez que
este apresentou um peso parevel ao considerarmos o peso da prstata do
animal controle que estava normal, e da prstata atrofiada do animal com
aplicao do leo de milho inerte.
No Entanto, no grfico de comparao do peso da Vescula Seminal, a
Testosterona restaurou os valores do controle, uma vez que os receptores de
Testosterona sejam mais sensveis converso do DHT em Testosterona,
tendo efeito trfico direto e indireto sobre o rgo, como observado no animal
que recebeu a reposio hormonal de Propionato de Testosterona, que a
Vescula Seminal apresentou um elevado crescimento, se assemelhando com
a Vescula do animal controle. J no grfico da hipfise, a Testosterona no
apresentou grande alterao em relao aos outros animais.
Nas fmeas, observa-se o equivalente, em que a reposio do Estradiol
tambm funcionou com efeito trfico usando precursores para sua utilizao
pelo organismo, uma vez que os ovrios sejam produtores de tais precursores,
em que o rgo (tero) utilizou todo o restante destes precursores para
converter o hormnio, assim como observado nos grficos em que houve
crescimento do tero que recebeu Estradiol, e atrofia do tero que recebeu
leo de milho, como nas imagens descritas acima, a grande vascularizao do
tero do animal controle, uma vez que tendo a hipfise atuao direta no eixo
Hipotlamo Hipfise Gnadas, o animal que recebeu estradiol apresentou
um peso elevado em relao aos outros animais, inclusive o controle,
mostrando sua atuao na converso do Estradiol, como mecanismo de
compensao.
Observando que, o leo de milho utilizado, teve como propsito induzir o
mesmo estresse fisiolgico da aplicao de Testosterona ou Estradiol nos
animais. E que a quantidade e o tempo do experimento, poderiam influir
diretamente no resultado final, uma vez que uma reposio prolongada
demonstraria efeitos muito semelhantes e um animal controle.

Observaes adicionais: O macho que recebeu leo de milho apresentava um
inchao escrotal quando sacrificado. E o macho que recebeu Testosterona
tinha frequncia cardaca reduzida durante a reposio hormonal realizada.






0
50
100
150
200
250
300
350
1
tero (mg/100g)
Controle
0
20
40
60
80
100
120
140
1
Prstata (mg/100g)
Controle Cast + leo



0
50
100
150
200
250
1
V. Seminal (mg/100g)
Controle Cast + leo
0
1
2
3
4
5
6
1
Hipfise Fmea
(mg/100g)
Controle Cast + leo
0
1
2
3
4
5
1
Hipfise Macho
(mg/100g)
Controle Cast + leo