GUIA TCNICO - COAGULAO

INTRODUO
HEMOSTASIA
o processo pelo qual o sangue permanece lquido vascular, apesar das leses que venham a sofrer.
A fluidez do sangue depende da:

Integridade do endotlio,

Velocidade do fluxo sanguneo,

Presena de heparina, anticoagulante natural, produzido pelos mastcitos.
Os trs mecanismos envolvidos na hemostasia so:

Resposta Vascular;

Atividade plaquetria;

Coagulao do sangue.
Sabe-se que a funo bsica da circulao nutrir os tecidos. Ento, para que os nutrientes, gases,
hormnios, catablitos e anticorpos sejam distribudos ou removidos dos tecidos necessrio que o sangue
possa fluir dentro de um vaso sangneo qualquer. Assim, a fluidez sangnea deve ser mantida e
garantida, de modo que se evite o extravasamento de sangue e tambm a deposio intravascular de
clulas e substncias formando um cogulo chamado trombo. O extravasamento de sangue o que origina
as hemorragias e a formao de trombos pode ocluir um vaso. Com isso, o tecido que se encontra depois
do local ocludo vai sofrer falta de oxignio, ocorrendo necrose que nada mais do que um infarto.
Ento, quando o sangue escapa do interior dos vasos perde a fluidez, torna-se viscoso e em pouco
tempo forma um cogulo que, posteriormente se retrai, organiza ou dissolve. Este o fenmeno normal da
hemostasia, que compreende um conjunto de mecanismos que visam interromper a perda continuada de
sangue.
A hemostasia o resultado da ao conjunta de trs mecanismos principais e independe da causa da
leso do vaso sanguneo, que pode ser conseqncia de trauma, infeco, ruptura espontnea ou da
seco cirrgica planejada.
Os trs mecanismos devem atuar em perfeita harmonia para que a hemostasia seja completa. A
ausncia ou a disfuno de qualquer um dos mecanismos torna a hemostasia deficiente e perpetua a perda
sangunea.
Assim, deve haver um equilbrio que evite o extravasamento ou perda de sangue e a formao de
trombos. A esse equilbrio chamamos Hemostasia. Esse processo envolve quatro sistemas relacionados:
os vasos sangneos, as plaquetas, os fatores da coagulao e a fibrinlise.
FUNO DOS VASOS SANGUNEOS NA HEMOSTASIA
Os vasos sangneos so recobertos internamente por uma camada celular chamada endotlio, e
logo abaixo deste endotlio temos uma camada rica em colgeno. A integridade desse endotlio pode
garantir o perfeito funcionamento do mecanismo de hemostasia. Porm, quando um vaso sangneo
lesado, para que seja contido o extravasamento de sangue, inicia-se uma srie de reaes. Uma dessas
reaes a vaso constrio, ou seja, o estreitamento do dimetro do vaso para reduzir a quantidade de
sangue que chega naquele ponto lesado. Se o vaso pequeno, como os capilares, pode selar-se, se as
pontas cortadas se tocarem. Mas, se o vaso de maior calibre, a leso no contida apenas com a vaso
constrio. Neste caso, o colgeno exposto com a leso vai estimular a ao das plaquetas sobre o local
lesado.
FUNO DAS PLAQUETAS NA HEMOSTASIA
As plaquetas tm o formato de um disco redondo enquanto circulam na corrente sangnea.
Todavia, as plaquetas sofrem uma mudana no formato quando entram em contato com o colgeno exposto
na parede do vaso sangneo lesado. Este contato com o colgeno inicia a adeso plaquetria, o ato em
que as plaquetas individualmente aderem ponta lesada do vaso. Para essa adeso plaquetria ocorrer de
forma efetiva, necessrio uma protena do plasma denominada fator de Von Willebrand.
Assim que as plaquetas aderem superfcie do vaso, tornam-se ativadas. Estas plaquetas ativadas
perdem sua forma normal de disco e intumescem, tornando-se mais esfricas. Ao mesmo tempo, formam
numerosas projees espiculares, tornam-se pegajosas e comeam a se unir uma s outras. Este processo
chamado de agregao plaquetria. Por causa do grande nmero de plaquetas presentes no sangue
circulante, um tampo de plaquetas forma-se em poucos segundos para estancar o sangramento, em casos
de pequenas leses.
O tampo plaquetrio, embora seja um agregado frouxo de plaquetas, pode interromper o
sangramento, se o orifcio do vaso lesado for pequeno. Nas leses maiores, porm, o tampo plaquetrio
que se formou, apesar de aumentar e se organizar, ainda instvel e pode ser arrastado pela corrente
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sangnea e diluir-se. Torna-se necessria, portanto, a formao de um cogulo sangneo para completar
a hemostasia.
FORMAO DO COGULO
A modificao de um conjunto de protenas do plasma constitui o mecanismo final da hemostasia,
que forma um cogulo no local da leso do vaso. Estas protenas so denominadas Fatores da
Coagulao. O cogulo, ento, o resultado de alteraes complexas nos fatores da coagulao, cuja
etapa final a transformao do fibrinognio em fibrina.
O fibrinognio um importante fator da coagulao produzido pelo fgado e a fibrina a matriz
protica do cogulo. Esta forma um emaranhado semelhante a uma rede, na qual ficam retidas as
plaquetas e as hemcias que participam da composio do cogulo.
Aps qualquer leso vascular, um cogulo comea a ser formado em 15 a 20 segundos. Em cerca
de 3 a 6 minutos, a leso do vaso completamente ocluda pelo cogulo.
OS FATORES DA COAGULAO
Os fatores da coagulao so protenas do plasma que circulam no sangue sob a forma inativa,
exceto o fator IV que o mineral Clcio. Quando um vaso lesado, uma srie de reaes complexas leva
ativao dos fatores da coagulao, resultando na formao de um cogulo de fibrina. Os fatores da
coagulao so numerados de I a XIII, na ordem pela qual foram descobertos e no em sua ordem de ao.
Assim, a forma inativa circulante do fator de coagulao designada pelo seu nmero e a forma ativa, pelo
seu nmero seguido da letra a. Por exemplo, o fator XII ativado o fator XIIa. Os fatores da coagulao
esto listados a seguir:
Fator
Fator l
Fator ll
Fator lll
Fator lV
Fator V
Fator Vll
Fator Vlll
Fator lX
Fator X
Fator Xl
Fator Xll
Fator Xlll

Nome
Fibrinognio
Protrombina
Tromboplastina / fator tecidual
Clcio
Ativador protrombina
Proconvertina
F.anti-hemofilico
Christmas
Stuart
Antecedente tromboplastnico do plasma
Hageman
Estabilizador de fibrina

A interao dos fatores da coagulao envolve reaes muito complexas. Todavia, a reao inteira pode ser
resumida nas duas equaes seguintes:
Protrombina _Tromboquinase + Clcio Trombina.
Fibrinognio __________ Fibrina.
O resultado final um cogulo de fibrina estvel para estancar a sangria e aps a dissoluo do cogulo
quando no mais necessrio.
VIAS METABLICAS DA COAGULAO
O processo de coagulao que leva formao do cogulo de fibrina envolve trs importantes vias
metablicas: a via intrnseca, a via extrnseca e a via comum.
A Via Extrnseca assim chamada porque um dos fatores da coagulao que a compe no est
presente na circulao sangnea. o fator III ou fator tissular (tromboplastina), que liberado quando o
vaso sangneo lesado. A tromboplastina age ativando o fator VII. O clcio necessrio para que ocorra
esta ativao. O fator VII ativado (fator VIIa) participa da ativao do fator X a fator Xa.
A Via Intrnseca composta por fatores essencialmente circulantes, ou seja, todos os seus fatores
esto presentes na circulao sangnea. Esta via iniciada quando o fator XII, o chamado fator de contato,
entra em contato com certas superfcies que o ativam para formar o fator XIIa. A reao final da via
intrnseca a ativao do fator VIII a fator VIIIa. Este ltimo, por sua vez, ativa, juntamente com o fator VIIa
(da via extrnseca), o fator X a fator Xa. A via intrnseca pode ser ativada pelo contato do fator XII com
vrias superfcies como, por exemplo, a agulha e a seringa ou o tubo de vidro usado durante a coleta de
sangue.
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A Via Comum ativada quando, ou pela via intrnseca ou pela extrnseca, o fator X ativado a fator
Xa. O restante da cadeia de ativao de fatores segue uma via comum. Uma reao complexa resultante da
atuao do fator Xa, do clcio e do fator Va leva ativao da protrombina a trombina. A trombina, ento,
age como ativadora do fibrinognio, levando formao da fibrina. O cogulo de fibrina, porm, no
estvel at que o fator XIII ativado (fator XIIIa) a torne suficientemente estvel para conter uma hemorragia.
O fator XIIIa tambm muito importante no processo de cicatrizao. Tem sido observado que pacientes
com deficincia do fator XIII demoram a cicatrizar.
FIBRINLISE
Aps o cogulo de sangue ter servido na funo de estancar a hemorragia, dever ser dissolvido.
Este processo chamado fibrinlise. Dois importantes componentes atuam neste processo: o
plasminognio e a plasmina. O plasminognio encontra-se na circulao e deve ser ativado para chegar a
plasmina que vai acelerar o processo de destruio do cogulo.
Quando colocamos sangue em um tubo de ensaio, somente o mecanismo intrnseco desencadeia a
coagulao, o vidro das paredes do tubo de ensaio, ativa o fator XII e as plaquetas. A principal diferena
entre os dois mecanismos que a via intrnseca mais lenta que a extrnseca.
A trombose nada mais do que a exacerbao do mecanismo de coagulao com o seu controle
fibrinoltico alterado, levando formao de uma massa granulosa, seca e opaca como produto final, ao
contrrio do cogulo, que tem superfcie brilhante e mida, estrutura homognea, elstico e no adere
parede vascular ou cardaca. Em autpsias, por exemplo, s vezes necessrio fazer uma distino
meticulosa entre ambas as massas plaquetrios, tal a semelhana entre os seus mecanismos geradores,
porm, com significados clnicos discrepantes.
COAGULOGRAMA
Os mtodos laboratoriais para o diagnstico das desordens hematolgicas so considerados a
seguir. Para este estudo, porm, torna-se importante dividi-los em dois grupos. O primeiro grupo que
corresponde aos testes que avaliam o primeiro momento do sistema hemosttico, no qual atuam os vasos
sangneos e as plaquetas e o segundo grupo que corresponde aos testes que avaliam o segundo
momento no qual atuam os fatores da coagulao.
Para avaliar o primeiro tempo de hemostasia, os principais exames so:

Tempo de sangria,

Prova do lao,

Contagem de plaquetas

Agregao plaquetria.
Para avaliar o segundo tempo de hemostasia, tambm chamado de tempo plasmtico, os principais
exames so:

Teste de coagulao,

Tempo de protrombina (TP),

Tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPA)

Dosagem de fibrinognio.

Neste material, ser enfatizado os testes de TP, TTPA e Fibrinognio que avaliam o segundo tempo
da hemostasia e so comercializados pela Labtest.
TEMPO DE PROTROMBINA
O tempo de protrombina ou tempo de Quick realizado adicionando-se ao plasma descalcificado
pelo citrato, um excesso de fator tecidual (tromboplastina). Considerando que a protrombina convertida
em trombina num tempo uniforme, a adio de clcio com quantidade conhecida de cloreto de clcio produz
a coagulao do plasma. O tempo entre a adio do clcio e a coagulao chamado tempo de
protrombina.
O tempo de protrombina um teste para avaliar a via extrnseca e a via comum, ou seja, os fatores
VII, X, V, II e o fibrinognio. Assim, o tempo de protrombina estar aumentado em casos de deficincia de
fibrinognio e de qualquer um dos fatores mencionados anteriormente, em pacientes que fazem uso de
anticoagulantes, nas doenas hepticas e deficincia de vitamina K, pois os fatores II, VII e X so
dependentes desta vitamina.
O teste pode auxiliar no acompanhamento do uso de anticoagulantes e na avaliao do risco
cirrgico.
O tempo de protrombina ou TP, consiste na determinao do tempo de coagulao de um Plasma
citratado, aps a adio de tromboplastina (fator III) e de clcio, 37C. A adio de um excesso de
tromboplastina promover a ativao de todo o fator VII contido na amostra de plasma. O fator VIIa assim
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ativado, ativar o fator X, iniciando a via comum da coagulao. Desta forma, o TP mede os fatores
envolvidos na Via Extrnseca e na Via Comum
A tromboplastina um reagente obtido no crebro humano, de coelho de boi ou de macaco. Ele
contm o fator tissular, composto por um parte protica e uma parte fosfolipdica que substitui o fator 3
plaquetrio (F3P), na ativao dos fatores que se ligam a fosfolipdeos de membrana. O TP sensvel a
reduo dos fatores: VII, X, V, II e I. o TP teste mais sensvel para avaliao da reduo dos fatores
vitamina K dependentes (II, VII, IX e X), sendo o teste usado no controle de paciente em uso de
anticoagulante orais.
RNI (RELAO NORMALIZADA INTERNACIONAL)
Como so usados diferentes tipos de fator tissular no reagente de TP, a Organizao mundial de Sade
preconizou o uso do RNI para padronizar mundialmente o resultado obtido durante o teste. Isso significa
que o resultado do RNI praticamente o mesmo se usado em diferentes laboratrios no mundo inteiro.
O RNI nada mais do que o TP corrigido a padres mundiais. O uso de anticoagulantes orais avaliado
somente pelo RNI.
Para o clculo do RNI, cada fabricante do fator tissular fornece o ISI (ndice de Sensibilidade
Internacional), que normalmente fica entre 1,0 e 2,0.
A Labtest trabalha com o ISI entre 1,0 e 1,3. Quanto mais prximo de 1,0 o ISI, melhor a
sensibilidade.
Os fabricantes atribuem os valores do ISI para cada lote de reagente preparado.
TEMPO DE TROMBOPLASTINA PARCIAL ATIVADA
o tempo medido entre a adio de clcio, na presena de uma cefalina (fator de contato) e a
coagulao do plasma. A presena de um fator de contato (cefalina) ativa as reaes da via intrnseca da
coagulao. O tempo de tromboplastina parcial corresponde ao tempo gasto para ocorrer a coagulao do
plasma recalcificado em presena de cefalina.
O TTPA estar aumentado quando o paciente tiver deficincia de fatores da via intrnseca (XII, XI,
IX e VII) e de fatores da via comum (X, V, II e fibrinognio). o caso de pacientes com hemofilias A e B,
doenas hepticas, uso de anticoagulantes e deficincia de vitamina K, uma vez que os fatores II, IX e X
dependem desta vitamina.
O TTPA consiste na determinao do tempo de coagulao do PPP (Plasma Pobre em Plaquetas)
citratado, aps a adio de um ativador da fase de contato da coagulao (por isso dito ativado), e de
um reagente, a cefalina, que substitui o fosfolipdio da membrana plaquetria ou F3P, uma vez que se
trabalha com o PPP. O ltimo reagente a ser adicionado o clcio, que reverte ao do citrato.
O ativador da fase de contato pode ser o caolim, o cido elgico, a celite ou ainda o dextram. Este
ativador que colocado em excesso vai ativar o fator XII, na presena de precalicrena e cininognio de alto
peso molecular, e o fator XIIa vai transformar o fator XI em XIa. O XIa ativa o fator IX em IXa, e este junto
com o fator VIII-C que atua como cofator vai ativar o fator X. Esta a chamada Via Intrnseca da
coagulao. O fator Xa inicia ento a Via Comum, ativando o fator II na presena de fator V e do F3P, que
no TTPA representado pela cefalina. O fator IIa ou trombina, coagula ento o fibrinognio, transformandoa em fibrina.
A cefalina um fosfolipdeo extrado de crebro de maneira semelhante tromboplastina, mas com
a diferena que a cefalina no possui atividade de fator tissular, isto , no capaz de ativar o fator VII (por
isso ela chamada tromboplastina parcial).
FIBRINOGNIO
O fibrinognio (fator l) uma glicoprotena sintetizada no fgado e est envolvida na etapa final da
coagulao, que consiste na sua converso em fibrina, sob a ao da trombina.
O Fibrinognio uma protena importante na resposta de fase aguda.
Aplicaes prticas:

Hiperfibrinogenemia: elevao em diferentes patologias: Processos inflamatrios e infecciosos
agudos, traumas, neoplasias, ps-operatrio, uso de anticoncepcionais orais, etc.

Hipofibrinogenemia: diminuio da produo heptica.

Via comum da cascata.

Indicao: aps resultados alterados para APTT e PT.

Risco de trombose arterial e venosa.

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COLETA DAS AMOSTRAS
Usar plasma colhido em citrato trissdico anidro 109 mmol/L (3,2%)**.
Deve-se ser criado um Procedimento Operacional Padro (POP) que estabelea procedimentos
adequados para coleta, preparao e armazenamento da amostra. Enfatizamos que os erros devidos
amostra podem ser muito maiores que os erros ocorridos durante o procedimento analtico.
Considerando que a qualidade da amostra fundamental para a exatido dos resultados,
recomenda-se a utilizao dos procedimentos que se seguem:
1. Obter o sangue por puno venosa e evitar garroteamento prolongado, hemlise, formao de bolhas e
aspirao de lquido tissular (fator lll). A agulha deve penetrar diretamente na veia na primeira tentativa
(puno venosa atraumtica). O sangue deve fluir livremente sem que seja necessrio aplicar
demasiada fora ao mbolo. No realizar o teste em amostra cuja puno for difcil (puno traumtica).
2. Coletar a amostra com seringa de plstico e centrifugar em tubos de plsticos. O uso de material de
vidro no siliconizado ativa os fatores da coagulao e reduz falsamente o tempo de protrombina (PT) e
o tempo de tromboplastina parcial ativada (APTT). Aps remover a agulha, utilizar a poro central da
amostra na seringa, usando as pores anterior e posterior para outros testes.
3. No caso de sistema de coleta a vcuo, usar tubo de plstico ou vidro siliconizado. Ao realizar coleta
somente para testes de coagulao, coletar duas amostras. A primeira em um tubo sem anticoagulante
ou em tubo contendo citrato (tampa azul) que deve ser desprezada. A segunda amostra coletada em
tubo contendo (tampa azul) ser utilizada para a realizao dos testes. No caso de coleta mltipla, a
amostra para testes de coagulao dever ser obtida aps a coleta de amostra em tubo sem
anticoagulante e antes da coleta em tubo contendo EDTA.
4. Misturar 9 partes de sangue com 1 parte de citrato ou 3 mL de sangue e 1 gota de Trombstab (Labtest
Ref. 45). Homogeneizar 3 ou 4 vezes por
inverso suave. No usar oxalato, pois o Fator V
muito sensvel a este anticoagulante.
5. Em pacientes que apresentam hematcrito maior que 55% a relao entre os volumes de sangue e de
anticoagulante deve ser ajustada para garantir a exatido do resultado. Para calcular o volume de
anticoagulante necessrio em funo do hematcrito e do volume de sangue, utilizar a frmula que se
segue:
Volume de anticoagulante (mL) = 0,00185 x volume de sangue (mL) x (100 -hematcrito).
Exemplo: Para um hematcrito de 60% usar 0,22 mL de citrato e completar para 3,0 mL com sangue. Para
usar Trombstab (Labtest Ref. 45), adicionar 2 gotas a 0,5 mL de gua e usar na proporo indicada pelo
clculo.
6. Centrifugar at 1 hora aps a coleta a 3000 rpm ou 1500 g durante 15 minutos*. No necessrio
remover o plasma do tubo. Manter o tubo tampado at a execuo do teste para evitar mudana do pH
da amostra, que pode interferir nos resultados.
7. Manter as amostras entre 18 24 C e realizar o teste at 4 horas aps a coleta. No refrigerar o
plasma, pois pode haver ativao do Fator Vll pelo sistema Calicrena, reduzindo falsamente o TP. Caso
exista possibilidade de congelamento rpido, o plasma pode ser congelado a 20 C negativos por 2
semanas ou 70 C negativos por 6 meses. Sugerimos c ongelar o material em alquotas de 0,5 mL e,
para evitar evaporao do material durante o perodo de armazenamento, utilizar frascos adequados
para congelamento (criotubos). As amostras devem ser descongeladas rapidamente a 37 C e
testadas imediatamente.
8. A presena de cogulos implica rejeio da amostra.
Amostras de sangue devem ser consideradas como potencialmente infectantes. Portanto, ao manuselas devem-se seguir as normas estabelecidas para biossegurana.
Para descartar os reagentes e o material biolgico, sugerimos aplicar as normas locais, estaduais ou
federais de proteo ambiental.

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* Clculo da fora centrfuga relativa (g) disponvel no Guia Tcnico de Bioqumica (Informaes Gerais).
** O anticoagulante usado para ensaios da coagulao deve ter entre 105 a 109 mmol/L ou 3,13% a 3,2%.
Usualmente descreve-se 3,2% de citrato trissdico dihidratado. Outros anticoagulantes so inaceitveis.

O Trombstab Ref. 45 Labtest composto por Citrato de Sdio Dihidratado 18,8 g/dL, ou seja:
1) 18,8 g_________________100 mL
X_____________________1000 mL
X = 188 g
2) 1 ____________________ 294,1 mol/L
X ____________________ 188 mol/L
X = 0,6392 mol/L
3) 0,6392 mol/L = 639,2 mmol/L
utilizado 1 gota (0,05 mL) de Trombstab Ref. 45 para 3 mL de sangue, o equivalente a uma diluio
de 1:60, ou 9 partes de sangue para 1 parte de citrato, o equivalente a uma diluio de 1:10. Corrigindo
as diluies, tm-se a relao 1:6. Assim:
4) 639,2 / 6 = 106,5 mmol/L

15/01/2009

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APTT HEMOSTASIS REF. 502
TTPA (Tempo de Tromboplastina Parcial Ativada) o tempo medido entre a adio de clcio, na presena
de um ativador (fator de contato cido elgico) e a coagulao do plasma. O TTPA avalia as vias intrseca
e comum da cascata da coagulao. O TTPA estar aumentado quando o paciente apresentar deficincia
de fatores da via intrseca (Xll, Xl, lX e Vlll ) e da via comum (X, V, ll e l). O TTPA pode ser utilizado tambm
com sucesso para monitorar pacientes em terapia com heparina.
PRINCPIO DA REAO
O reagente contendo ativador plasmtico (cido elgico) desencadeia o mecanismo de coagulao da via
intrnseca atravs da ativao do fator Xll (Hageman), que formaum complexo com o cininognio de alto
peso molecular (HMWK) e com a pr-calicrena (PK). O fator Xll ativado atua sobre o fator Xl gerando o fator
Xl ativado que na presena de fosfolpides e clcio transforma o fator lX em uma enzima ativa (fator lXa),
que ativa o fator Vlll, formando o complexo lXa-fosfolipide-Vllla que ativa o fator X. Esse fator ativado
transforma a protrombina em trombina que atua sobre o fibrinognio gerando fibrina. A fibrina
macroscopicamente demonstrada pelo aparecimento de um cogulo.
O TTPA realizado incubando o plasma citratado com o reagente contendo ativador e fosfolpides.
Aps a adio de clcio, faz-se a medio do tempo de formao do cogulo.

APRESENTAO
Ref.
502.1 - Reagente 1
502.2 - Reagente 2

502-1/4
4 mL
6 mL

Temperatura Armazenamento: 2 - 8 C

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ESPECIFICAES

Metodologia:
Aplicao:
Amostra:
Volume de Reagente:
Volume de amostra:
Volume de Reagente:

Coagulomtrica
Manual, semi-automtico e automtico.
Plasma (colhido em citrato trissdico anidro 109 mmol/L 3,2%)
0,1 mL
0,1 mL
0,1 mL

ESPECIFICAES QUALIDADE ANALTICA (Labtest 2005)

EQA Especificao: Desejvel
Erro Total: 4,5%
Bias: 2,3%

CVa: 1,4%

REAGENTE DE TRABALHO
O uso dos reagentes se faz obrigatoriamente com aplicao bi-reagente.
O produto pode ser empregado para determinao do TTPA utilizando equipamentos automticos e
semi-automticos.
Os reagentes quando no abertos e mantidos nas condies propostas pelo fabricante, so estveis at
a data de expirao. Aps abertos sua estabilidade pode ser reduzida por diversos fatores como: ponteiras
mal lavadas introduzidas ao reagente, exposio prolongada do Reagente 1 ao ar atmosfrico e
temperatura ambiente (expor somente o necessrio para realizao dos testes).
ORIENTAES
Devido ao baixo custo do Reagente 2 (Cloreto de Clcio), foi adicionado um volume maior do que o
Reagente 1. Conforme a apresentao do produto, resultar em sobra do Reagente 2 o que no caracteriza
desvantagens ao cliente.
Consultar sempre as instrues de uso do produto.
INTERFERENTES
O TTPA pode estar aumentado em indivduos em uso de cido acetilsaliclico, aztreonam, ofloxacino,
metronidazol e fenitona.
A reduo do TTPA pode ser observada em indivduos em uso de anti-histamnicos, digitlicos,
contraceptivos orais, tetraciclina e estrgenos conjugados.
importante tambm que a amostra seja coletada, preparada e armazenada conforme orientaes no
item AMOSTRA nas Instrues de Uso.
Amostras ictricas, lipmicas e hemolisadas podem modificar os resultados de modo imprevisvel.
Materiais sujos (tubos e ponteiras), temperatura no controlada, contaminao dos reagentes e
amostras,

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PT HEMOSTASIS REF. 501
O Tempo de Protrombina (TP) usado como ferramenta de triagem e como um teste quantitativo para
fatores de coagulao nas vias extrnsecas e comuns da coagulao. Este teste ser prolongado em
pacientes com distrbios congnitos ou adquiridos que reduzem a atividade dos fatores I
(fibrinognio),..II..(protrombina),..V,..VII..e..X.
O TP tambm amplamente utilizado para se monitorar a terapia com anticoagulante oral. Os
anticoagulantes orais reduzem a atividade dos fatores de coagulao dependentes da vitamina K (II, VII, IX,
X, Protena C e Protena S) e se observa um TP prolongado como resultado.
PRINCPIO DA REAO
A tromboplastina (fator tissular, fator III) desencadeia o mecanismo de coagulao da via extrnseca
formando, com o fator VII, um complexo estequiometricamente dependente do clcio. O fator VII
transformado em uma enzima ativa (fator VIIa), que atua sobre o fator X gerando o fator Xa e este
juntamente com fosfolpides do fator tissular, fator Va e clcio formam o Complexo Ativador da Protrombina,
que transforma a protrombina em trombina. Essa, por sua vez, atua sobre o fibrinognio gerando fibrina. A
formao da fibrina macroscopicamente demonstrada pelo aparecimento de um cogulo. O TP o tempo
necessrio para a formao de fibrina aps a mistura de tromboplastina, plasma e clcio. Os resultados so
obtidos atravs da comparao entre os tempos de coagulao do plasma de pacientes e do plasma de
referncia, representando a medida da atividade dos fatores do complexo protrombnico (fatores II, V, VII,
X).

APRESENTAO
Ref.
501.1 - Reagente 1

501-5/2
2 mL

Temperatura Armazenamento: 2 - 8 C

15/01/2009

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ESPECIFICAES
Metodologia:
Aplicao:
Amostra:
Volume de Reagente:
Volume de amostra:

Coagulomtrica - Quick
Manual, semi-automtico e automtico.
Plasma (colhido em citrato trissdico anidro 109 mmol/L 3,2%)
0,2 mL
0,1 mL

ESPECIFICAES QUALIDADE ANALTICA (Labtest 2005)

EQA Especificao: Desejvel
Erro Total: 5,3%
Bias: 2,0%

CVa: 2,0%

REAGENTE DE TRABALHO
O reagente apresenta-se liofilizado e deve ser preparado com o uso de gua prpria para laboratrio
(tipo l ou ll). Adicionar 2 mL de gua ao frasco, recolocar a tampa, homogeneizar suavemente e deixar em
repouso (entre 15 25 C) durante 15 minutos. Ante s de utilizar, hemogeneizar suavemente. No agitar por
inverso ou vigorosamente.
O produto pode ser empregado para determinao do TP utilizando equipamentos automticos e semiautomticos.
O reagente quando no aberto e mantido nas condies propostas pelo fabricante, estvel at a data
de expirao no rtulo. Aps aberto e reconstitudo, o reagente deve ser manuseado de acordo com as
boas prticas de laboratrio para evitar contaminaes de natureza qumica e microbiana que podem
provocar reduo da estabilidade.
O reagente reconstitudo estvel 7 dias entre 2 8C, 8 horas a 37C e 24 horas a temperatura
ambiente (entre 15 25C).
ORIENTAES
Preparo do Plasma de Referncia: obter atravs de misturas de plasmas citratados de, no mnimo, 3
indivduos sadios. No usar plasmas de portadores de doenas hepticas ou de mulheres grvidas ou em
uso de contraceptivos orais.
Deve-se obter o tempo do plasma referncia para cada lote de PT Hemostasis.
Manter registro dos lotes de PT Hemostasis e dos tempos do plasma de referncia.
INTERFERENTES
O TP pode estar aumentado em indivduos em uso de corticoesterides, contraceptivos orais (falhas na
excreo de sais biliares), asparaginase, clofibrato, eritromicina, etanol, tetraciclina, heparina e warfarin,
bem como na presena de EDTA.
A reduo do TP pode ser observada em indivduos em uso de anti-histamnicos, butabarbital,
fenobarbital, contraceptivos orais (diminuio da resposta aos anticoagulantes orais), vitamina K e cafena.
importante tambm que a amostra seja coletada, preparada e armazenada conforme orientaes no
item AMOSTRA nas Instrues de Uso.
Amostras ictricas, lipmicas e hemolisadas podem modificar os resultados de modo imprevisvel.
Materiais sujos (tubos e ponteiras), temperatura no controlada, contaminao dos reagentes e
amostras,
CLCULOS

R=

Tempo em segundos do plasma do paciente

Tempo..em..segundos..do.. plasma..referncia

R: Relao
RNI = R

ISI

USO DA TABELA
Vide tabelas respectivas de cada lote.

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FIBRINOGEN HEMOSTASIS REF. 503
O fibrinognio uma glicoprotena sintetizada no fgado, sendo a principal fonte de muitos fatores de
coagulao, alm de constituir um fator de risco para a coronariopatia e o acidente vascular cerebral.
uma protena importante na resposta de processos inflamatrios de fase aguda. Sua determinao pode
auxiliar na distino das coagulopatias adquiridas, coagulao intravascular disseminada, na fibrinlise
primria e secundria, na hipofibrinogenemia e hiperfibrinogenemia.
PRINCPIO DA REAO
Uma quantidade padronizada de trombina adicionada a uma amostra de plasma citratado e o tempo de
coagulao medido. Na presena de concentrao elevada de trombina, o tempo de coagulao do
plasma citratado diludo inversamente proporcional concentrao de fibrinognio. Para obter a
concentrao de fibrinognio, o tempo de coagulao de um plasma comparado com os tempos de
coagulao de uma srie de diluies de um plasma contendo concentrao conhecida de fibrinognio.

APRESENTAO
Ref.
503.1 - Reagente 1 (Tampo)
503.2 - Reagente 1 (Trombina Bovina)
503.3 - Reagente 1 (Plasma Referncia)

503-5/2
2 mL
2 mL
2 mL

Temperatura Armazenamento: 2 - 8 C
ESPECIFICAES
Metodologia:
Aplicao:
Amostra:
Volume de Reagente 2:
Volume de amostra:

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Coagulomtrica
Manual, semi-automtico e automtico.
Plasma (colhido em citrato trissdico anidro 109 mmol/L 3,2%)
0,1 mL
0,2 mL (amostra diluda 1:10 com R1).

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ESPECIFICAES QUALIDADE ANALTICA (Labtest 2005)
EQA Especificao: Desejvel
Erro Total: 13,6%
Bias: 4,8%

CVa: 5,4%

REAGENTE DE TRABALHO
O reagente 1 (Tampo) pronto para uso e deve ser utilizado na diluio das amostras, calibrador e
controles.
O reagente 2 (Trombina) apresenta-se liofilizado e deve ser preparado com o uso de gua prpria para
laboratrio (tipo l ou ll). Adicionar 2 mL de gua ao frasco, recolocar a tampa, homogeneizar suavemente e
deixar em repouso (entre 15 25 C) durante 15 min utos. Antes de utilizar, homogeneizar suavemente. No
agitar por inverso ou vigorosamente. O reagente reconstitudo estvel por 7 dias entre 2 8C, 24
horas entre 15 30C e 30 dias quando congelado na s primeiras 4 horas aps reconstituio
(congelar e descongelar uma nica vez).
O reagente 3 (Plasma Referncia) apresenta-se liofilizado e deve ser preparado com o uso de gua
prpria para laboratrio (tipo l ou ll). Adicionar 2 mL de gua ao frasco, recolocar a tampa, homogeneizar
suavemente e deixar em repouso (entre 15 25 C) d urante 15 minutos. Antes de utilizar, homogeneizar
suavemente. No agitar por inverso ou vigorosamente. O plasma reconstitudo estvel 8 horas entre 2
8C.
O reagente quando no aberto e mantido nas condies propostas pelo fabricante, estvel at a data
de expirao no rtulo.
O produto pode ser empregado para determinao do fibrinognio utilizando equipamentos automticos
e semi-automticos.
OBSERVAES
O resultado do paciente e do controle somente devem ser lidos dentro da curva de calibrao. Caso
contrrio, no considerar os resultados. Se o tempo de coagulao da amostra menor que o tempo de
coagulao da diluio 1:5 da curva de calibrao, repetir o teste diluindo a amostra 1:30, ler o resultado na
curva de calibrao e multiplicar o resultado por 3. Quando o tempo de coagulao da amostra maior que
o tempo de coagulao da diluio 1:30 da curva de calibrao, repettir o teste diluindo a amostra 1:3, ler o
resultado na curva e multiplic-lo por o,3. No utilizar diluio inferior a 1:3 porque a presena de
interferentes pode produzir resultados inexatos. Se o tempo de coagulao da diluio 1:3 maior que o
maior tempo de coagulao da curva de calibrao, o resultado deve ser reportado como menor que a
menor concentrao da curva de calibrao.
O reagente 1 possui aspecto turvo. Esta caracterstica uma vantagem exclusiva do produto Labtest que
utiliza a tecnologia PCT (Polmero Coloidal Tamponado), proporcionando aumento na caracterizao da
formao da fibrina.
Para realizao da curva, consultar as instrues de uso do produto. Em dosagens manuais, o cliente
deve traar a curva em papel log-log. Entretanto, para otimizar o uso do produto, est disponvel no site da
Labtest uma planilha para insero dos dados da curva e amostra, na qual os resultados so calculados
automaticamente.
INTERFERENTES
O fibrinognio pode estar aumentado em mulheres em uso de contraceptivos orais, em fumantes e em
mulheres grvidas. Como o fibrinognio uma das protenas de fase aguda, pode-se encontrar valores
elevados em processos inflamatrios.
Podem ocorrer redues do fibrinognio com o uso de clofibrato e dextran, no alcoolismo crnico e por
efeito de EDTA.
Nveis elevados de paraprotenas, anticorpos antitrombina e drogas que ativam o sistema fibrinoltico
podem interferir com a dosagem de fibrinognio.
Amostras ictricas, lipmicas e hemolisadas podem modificar os resultados de modo imprevisvel.
Materiais sujos (tubos e ponteiras), temperatura no controlada, contaminao dos reagentes e amostras;

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POSSVEIS ERROS: PR-ANALTICOS, ANALTICOS E PS-ANALTICOS
INTRODUO
Uma parcela importante dos procedimentos da qualidade assegurada consiste na preveno dos erros
obtida pela otimizao dos processos operacionais. Quanto mais organizado o laboratrio, maiores so as
possibilidades de eliminar a ocorrncia de erros. Portanto, as aes da qualidade assegurada e a
otimizao da organizao do laboratrio so somatrias para a reduo dos erros nos ensaios.
Usando Controles Publicao Labtest.

POSSVEIS CAUSAS DE ERROS PR-ANALTICOS

Falta de padronizao na coleta:

Utilizar anticoagulante incorreto (exemplo: EDTA, Heparina);

Seqncia de multicoleta incorreta;

Puno traumtica (uso de amostra hemolisada);

Material inadequado usado na coleta;

Preparo do paciente inadequado;

Identificao incorreta da amostra;

Troca de amostra;

Demora na separao do plasma (centrifugao) e processamento;

Deixar amostra aberta ao ambiente;

Armazenamento inadequado.

POSSVEIS CAUSAS DE ERROS ANALTICOS

No conhecer o produto (procedimento).

Erros na diluio de amostras e na preparao dos reagentes;

Erros de pipetagem (tcnica de pipetagem inadequada);

Usar ponteiras de tamanho inadequado, mal adaptadas, obstrudas ou sujas;

No pipetar amostra ou reagente;

Contaminao de amostras (heparina) e reagentes;

Usar instrumentos no calibrados e equipamentos em condio de manuteno precria;

Utilizar reagentes de diferentes lotes (perda de rastreabilidade);

Usar gua de m qualidade;

Utilizar produtos vencidos (RDC 302);

Armazenar reagentes em temperaturas inadequadas.

POSSVEIS CAUSAS DE ERROS PS-ANALTICOS

Erro na digitao dos resultados;

Troca de laudos;

Laudos com dados incompletos;

Designar uma faixa incorreta de valores esperados (Valores de Referncias);

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GLOSSRIO DAS SIGLAS
A%: Atividade de Protrombina (percentual)
HMWK: Cininognio de Alto Peso Molecular
ISI: ndice de Sensibilidade Internacional.
OMS: Organizao Mundial de Sade.
PCT: Polmero Coloidal Tamponado.
PK: Pr-calicrena
PPP: Plasma Pobre em Plaquetas.
PTT, APTT, aPTT, TTPa ou KPTT: Tempo de Tromboplastina Parcial Ativado.
R: Relao
RNI, INR: Relao Normalizada Internacional.
RPM: Rotaes Por Minuto.
TP, TAP: Tempo de Protrombina ou Tempo de Atividade da Protrombina.

REFERNCIAS
1..CLIA Requirements for Analytical Quality. Disponvel em http://www.westgard.com/clia.htm.
2. GUDER WG, et. al. Amostras: do Paciente para o Laboratrio. Git Verlag GMBH, 1996. Darmstad.
3. Labtest: Dados de arquivo.
4. Labtest: Instrues de Uso dos produtos da Linha Hemostasis.
5..NCCLS. Collection, Transport, and Processing of Blood Specimens by Venipuncture; Approved Standard
Fifth Edition. NCCLS document H3-A5, 2003.

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