Heidy Paola Leon Amaya-6121842

CINTICA ENZIMTICA
La cintica enzimtica estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas. Estos
estudios proporcionan informacin directa acerca del mecanismo de la reaccin cataltica
y de la especificad del enzima. La velocidad de una reaccin catalizada por un enzima
puede medirse con relativa facilidad, ya que en muchos casos no es necesario purificar o
aislar el enzima. La medida se realiza siempre en las condiciones ptimas de pH,
temperatura, presencia de cofactores, etc., y se utilizan concentraciones saturantes de
sustrato. En estas condiciones, la velocidad de reaccin observada es la velocidad mxima
(Vmax). La velocidad puede determinarse bien midiendo la aparicin de los productos o la
desaparicin de los reactivos.
TABLAS Y GRAFICAS
A

Vo

1/A

1/Vo

A/Vo

Vo/A

10

28,6

0,1

0,03496503

0,34965035

2,86

20

44,4

0,05

0,02252252

0,45045045

2,22

30

54,5

0,03333333

0,01834862

0,55045872

1,81666667

40

61,5

0,025

0,01626016

0,6504065

1,5375

50

66,7

0,02

0,0149925

0,74962519

1,334

60

70,6

0,01666667

0,01416431

0,84985836

1,17666667

70

73,7

0,01428571

0,01356852

0,94979647

1,05285714

80

76,2

0,0125

0,01312336

1,04986877

0,9525

90

78,3

0,01111111

0,01277139

1,14942529

0,87

100
80
0,01
0,0125
1,25
0,8
Tabla 1. Resultados sistemas de linealizacion de la ecuacin de Michaelis.
Mtodo
Lineweaver
Hanes
Hofstee

Pendiente Interseccin
Ka
0,2498
0,01
24,98
0,01
0,2502
25,02
-25,007
100,01
25.02
Tabla 2 Resultados relacin curvas de linealizacion

Vm
100
100
100

Michaelis
90
80
70

Vo

60
50
40
30
20
10
0
0

20

40

60

80

100

120

[A]

Grafica 1. Curva de Michaelis.

[ ]

La representacin grfica de la ecuacin de Michaelis-Menten (v0 frente a [A]) es una

hiprbola (Grafica 1). La Vmax corresponde al valor mximo al que tiende la curva
experimental, y la KM corresponde a la concentracin de sustrato a la cual la velocidad de
la reaccin es la mitad de la Vmax.

Lineweaver-Burk
0.04
0.035

y = 0.2498x + 0.01

0.03

1/Vo

0.025
0.02
0.015
0.01
0.005
0
0

0.02

0.04

0.06

0.08

0.1

0.12

1/A

Grafica 2. Curva de Lineweaver-Burk

Representa 1/v frente a 1/s y permite determinar a partir de medidas experimentales
parmetros bsicos de la cintica enzimtica como la constante de Michaelis y la
velocidad mxima de reaccin

Hanes
1.4

y = 0.01x + 0.2502

1.2

A/Vo

1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0

20

40

60

80

Grafica 3. Curva de Hanes

100

120

La grafica de Hanes, es una representacin de la cintica de enzimas en la que la relacin

de la concentracin de sustrato inicial [A] para la velocidad de reaccin V se representa
frente a [A]. Se basa en el reordenamiento de la ecuacin de Michaelis-Menten se
muestra a continuacin:
[ ]

[ ]

[ ]

Hofstee
90
80
70

Vo

60
50
40
30

y = -25.007x + 100.01

20
10
0
0

0.5

1.5

2.5

3.5

Vo/A

Grafica 4. Curva de Hostfee

De manera similar a otras tcnicas que linealizan la ecuacin de Michaelis, el diagrama de
Hofstee permite visualizar rpidamente los parmetros cinticos importantes
como Km y Vmax, pero est menos afectado por el margen de error que el diagrama de
Lineweaver-Burke, debido a que asigna el mismo peso a todos los puntos para cualquier
concentracin del sustrato o velocidad de reaccin.

INHIBICIN ENZIMTICA
Molculas diferentes del sustrato pueden unirse al enzima reduciendo total o parcialmente
su actividad cataltica. Estas molculas reciben el nombre de inhibidores
Los estudios sobre inhibicin enzimtica nos dan informacin sobre las vas metablicas,
una visin acerca de los mecanismos de accin de drogas y toxinas, y una mejor
comprensin de los mecanismos de las reacciones enzimticas. La determinacin de Km y
Vmax tiene gran importancia y utilidad al trabajar con inhibidores, pues en base a los
valores obtenidos se puede determinar la presencia y tipo de inhibidor.
Inhibicin competitiva
Un inhibidor competitivo, compite con el sustrato por el sitio activo de la enzima e impide la unin
del sustrato.
Los inhibidores competitivos son, frecuentemente, compuestos que se parecen estructuralmente al
sustrato y que se combinan con la enzima formando el complejo [EI]. Debido a que el inhibidor se
une de manera reversible a la enzima, se puede cambiar el sentido de la competicin en favor del
sustrato simplemente aadiendo ms sustrato. Cuando hay suficiente sustrato se minimiza la
probabilidad de que se fije una molcula de inhibidor por lo que la reaccin muestra la misma Vmax
que la reaccin sin inhibidor, pero Km aumenta en presencia del inhibidor
Inhibicin acompetitiva
En este caso el inhibidor se une al complejo [ES], con lo cual el valor de Km disminuye (como si la
enzima tuviera ms afinidad por el S). Tambin disminuye la Vmax ya que el complejo [SEI] es
inactivo.

[A]Mm

V0

V10

V20

V30

1/A

1/Vo(0)

1/Vo(10)

1/Vo(20)

1/Vo(30)

100

66,7

50

40

0,01

0,0149925

0,02

0,025

133

88,9

66,7

53,3

0,5

0,0075188

0,01124859

0,0149925

0,01876173

150

100

75

60

0,33333333

0,00666667

0,01

0,01333333

0,01666667

160

106,7

80

64

0,25

0,00625

0,00937207

0,0125

0,015625

166,7

111,1

83,3

66,7

0,2

0,0059988

0,0090009

0,0120048

0,0149925

171,4

114,3

85,7

68,6

0,16666667

0,00583431

0,00874891

0,01166861

0,01457726

175

116,7

87,5

70

0,14285714

0,00571429

0,00856898

0,01142857

0,01428571

177,8

118,5

88,9

71,1

0,125

0,0056243

0,00843882

0,01124859

0,0140647

180

120

90

72

0,11111111

0,00555556

0,00833333

0,01111111

0,01388889

10

181,8

121,2

90,9

72,7

0,1

0,00550055

0,00825083

0,0110011

0,01375516

Tabla 3. Determinacin tipo inhibidor

Inhibidor No Competitivo
0.03

y = 0,012x + 0,012

0.025

y = 0,01x + 0,01

0.02

y = 0,007x + 0,007

1/Vo

0.015

y = 0,005x + 0,005

0.01
0.005
0
-2

-1.5

-1

-0.5

0.5

1.5

-0.005
-0.01

1/A

Grafica 5. Tipo de inhibidor

Un inhibidor no competitivo es el que se fija a un sitio distinto del que se fija el sustrato. La fijacin
del inhibidor puede o no bloquear la fijacin del sustrato, pero si este ltimo se une al sitio activo
no se puede transformar a P o lo hace a menor velocidad. El inhibidor disminuye de manera
efectiva la concentracin de enzima activa por lo que disminuye la Vmax aparente (Vmax).
Frecuentemente el efecto sobre Km es nulo.

I
0
10
20
30

Inhibidor no competitivo
pendiente
interseccin
0,005
0,005
0,007
0,007
0,01
0,01
0,012
0,012
Tabla 4. Resultados tipo inhibidor

y = 0.0003x + 0.005
R = 1

Kii
0.014
0.012
0.01

Kii

0.008
0.006
0.004
0.002
0
-30

-20

-10

-0.002

10

20

30

40

[I]

Grafica 5. Determinacin Kii

y = 0.0003x + 0.005
R = 1

Kis
0.014
0.012
0.01

Kis

0.008
0.006
0.004
0.002
-30

-20

0
-10 -0.002 0

10

20

[I]

Grafica 5. Determinacin Kis

30

40