rea de sustentabilidad para el desarrollo humano

Programa acadmico de qumica rea tecnologa ambiental

cnolgica de Len.

b e r, H a c e r.

PRCTICA:
Determinacin de Escherichia coli presuntiva en agua residual.

MATERIA:
Microbiologa Ambiental.

PRESENTA:
Luis Gerardo Vera Hernndez.

MAESTRA:
Dra. Rosa Rico Mata.

GENERACIN: 2013-2015
LEN, GUANAJUATO DICIEMBRE 2014

Cdigo:FRLAB08_A

Fecha de liberacin: 13 de octubre de 2010

Vigencia de retencin (VR): 1 ao

Almacenamiento (AL): En forma electrnica o

impresa, en Carpeta de Laboratorista

Modo de Recuperacin (RC): En forma electrnica o

impresa, en Carpeta de Laboratorista

Disposicin final (DS): Destruir

INTRODUCCIN
Los coliformes fecales son un subgrupo de los coliformes totales, capaces de fermentar la lactosa a
44 C en lugar de 37 C como lo hacen los coliformes totales. Aproximadamente el 95% del grupo de los
coliformes presentes en heces estn formados por Escherichia coli y ciertas especies de Klebsiella. El
grupo de coliformes agrupa a todas aquellas especies bacterianas que tienen relacin entre s como
Escherichia coli, tales como Enterobacter, Klebsiella y Citrobacter. La presencia de estos indica que
pueden existir ms tipos de contaminantes en el agua.
Los coliformes fecales se encuentran exclusivamente en las heces de los animales de sangre
caliente, se considera que reflejan mejor la presencia de contaminacin fecal. Estos ltimos se denominan
termo tolerantes por su capacidad de resistir temperaturas ms elevadas. Esta es la caracterstica que
diferencian a coliformes fecales de los totales.
La capacidad de los coliformes fecales de reproducirse fuera del intestino de los animales
homeotrmicos es favorecida por la existencia de condiciones adecuadas de materia orgnica, pH,
humedad. Desde hace mucho tiempo se han utilizado como el indicador ideal para contaminacin fecal. Su
presencia se interpreta como una indicacin de que los organismos patgenos pueden estar presentes y su
ausencia indica que el agua o el alimento estudiado se hallan exentos de organismos productores de
enfermedades.
Un cuerpo receptor de agua, suele estar altamente contaminado, lo cual indica una variedad de
microorganismos que al estar en contacto con la materia fecal tiende a desarrollar las colonias de
coliformes.
Se tomar una muestra representativa de agua respectivamente de la planta de tratamiento de entrada de la
UTL en base a todo esto se decidi implementar un anlisis representativo de esta muestra en el parmetro
de agua, basndose en normativas vigentes aplicadas. NOM-113-SSA1-1994, bienes y servicios mtodo
para la cuenta de microorganismos coliformes totales en placa. NOM-112-SSA1-1994 bienes y servicios
determinacin de bacterias coliformes tcnica del nmero ms probable.
Para los coliformes totales se necesitan medios de cultivo presuntivos como caldo lactosa, caldo Mc
Conkey, caldo formato lactosa glutamato mejorado, caldo lauril triptosa (lactosa) y los medios de cultivo
confirmativos son caldo para produccin de gas, caldo lactosa bilis verde brillante y medio EC.
Escherichia coli presuntiva produce indol que es el subproducto de la degradacin del aminocido

Cdigo:FRLAB08_A

Fecha de liberacin: 13 de octubre de 2010

Vigencia de retencin (VR): 1 ao

Almacenamiento (AL): En forma electrnica o

impresa, en Carpeta de Laboratorista

Modo de Recuperacin (RC): En forma electrnica o

impresa, en Carpeta de Laboratorista

Disposicin final (DS): Destruir

triptfano mediante la enzima triptofanasa. El indol reacciona con el reactivo de Kovacs para producir un
producto de color rojo.
OBJETIVO DE LA ACTIVIDAD
Identificar a los microorganismos termotolerantes (coliformes fecales: Escherichia coli) de una muestra de
agua proveniente del agua de entrada de la planta de tratamiento de la Universidad Tecnolgica de Len.

HERRAMIENTAS, MATERIAL y/o REACTIVOS A UTILIZAR:

Tcnica del nmero ms probable de organismos coliformes en placa (NMP) y Escherichia coli presuntiva

Reactivos
Agua peptonada
Reactivo de Kovacs

Material
10 pipetas de 5 ml estriles.
1 pipeta de 1 ml estril.
1 propipeta
5 tubos con caldo bilis lactosa verde brillante y campanas de Durham estriles.
5 tubos con caldo Mc Conkey y campanas de Durham estriles.
5 tubos con agua triptona estriles.

Equipo
Incubadora

Cdigo:FRLAB08_A

Fecha de liberacin: 13 de octubre de 2010

Vigencia de retencin (VR): 1 ao

Almacenamiento (AL): En forma electrnica o

impresa, en Carpeta de Laboratorista

Modo de Recuperacin (RC): En forma electrnica o

impresa, en Carpeta de Laboratorista

Disposicin final (DS): Destruir

PROCEDIMIENTO

La muestra analizada ser recolectada de la planta de tratamiento de agua residual de entrada de la

Universidad Tecnolgica de Len.

Procedimiento para la preparacin de la muestra (realizacin de diluciones)

1.

En 5 tubos estriles que contengan 9 ml de diluyente de peptona, agregar 1 ml de la muestra al

primer tubo utilizando pipetas estriles y realizar diluciones decimales hasta la dilucin 1/105

2.

Inoculacin en el medio presuntivo: De los 5 tubos de las diluciones anteriores. tomar 1 ml de cada
tubo con la ayuda de pipetas estriles y transferirlos a otros 5 tubos que contienen 9 ml del Caldo Mc
Conkey y campana de Durham e incubar de 35 0,5 C por 24 2 horas.

3. Inoculacin en el medio confirmativo: De cada tubo que muestre formacin de gas en el medio de
cultivo presuntivo caldo Mc Conkey, se deber tomar una azada y sembrar en un nmero igual de
tubos que contengan 9 ml de medio confirmativo caldo bilis lactosa verde brillante.
4. Incubar a 35 0,5 C por 24 2 h, si la formacin de gas no se observa en este tiempo, prolongar la
incubacin a 48 2 horas.
5.

Confirmacin de la presencia de Escherichia coli presuntiva mediante la prueba de indol: inocular 1

ml de los tubos que presentaron crecimiento positivo de caldo bilis lactosa verde brillante en un
tubo que contenga 9 ml de agua de triptona e incubar a 44 C durante 24 h.

Cdigo:FRLAB08_A

Fecha de liberacin: 13 de octubre de 2010

Vigencia de retencin (VR): 1 ao

Almacenamiento (AL): En forma electrnica o

impresa, en Carpeta de Laboratorista

Modo de Recuperacin (RC): En forma electrnica o

impresa, en Carpeta de Laboratorista

Disposicin final (DS): Destruir

6.

Aadir de 0.2 a 0.3 ml de reactivo de Kovacs al tubo de agua de triptona aadindolo por la pared
del tubo. El desarrollo de un anillo de color rojo denota la presencia de indol. La presencia de indol
indica que existe Escherichia coli presuntiva en la muestra analizada

NOTA: La deteccin de Escherichia coli presuntiva se considera una evidencia satisfactoria de

contaminacin fecal. Sin embargo, pueden efectuarse mayores pruebas para la confirmacin de Escherichia
coli si se considera necesario.

Referencia
NMX-AA-042-SCFI-2008 Calidad del agua- Deteccin y enumeracin de Organismos Coliformes,
organismos coliformes termotolerantes y Escherichia coli presuntiva.
NOM-112-SSA1-1994 Determinacin de bacterias coliformes. Tcnica del nmero ms probable.
NOM-113-SSA1-1994 Mtodo para la cuenta de microorganismos coliformes totales en placa.

Cdigo:FRLAB08_A

Fecha de liberacin: 13 de octubre de 2010

Vigencia de retencin (VR): 1 ao

Almacenamiento (AL): En forma electrnica o

impresa, en Carpeta de Laboratorista

Modo de Recuperacin (RC): En forma electrnica o

impresa, en Carpeta de Laboratorista

Disposicin final (DS): Destruir