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FACULTAD

DE
CIENCIAS EXACTAS
Y NATURALES

Estudio preliminar de microorganismos presentes en la fuente hidrotermal


del Centro Recreacional San Vicente, Santa Rosa de Cabal y sitios aledaos,
perteneciente al Macizo Volcnico Parque De Los Nevados de la cordillera
Sur Occidental de Colombia.

Catalina Rios, Santiago Arango Otalvaro, Oscar Taman, Andrs Camilo Betancurt Barco.

Resumen
Se presentan los resultados del trabajo de campo dirigido al reconocimiento de los
microorganismos presentes en las fuentes termales y en los tapetes bacterianos del
escenario natural, ecoturstico y lugar de esparcimiento familiar Termales de San Vicente
en Santa Rosa de Cabal para resaltar la importancia de realizar estudios dirigidos a
contribuir al conocimiento de los microorganismos presentes en los biofilm y fuentes
termales que son continuamente frecuentadas por el ser humano. Evaluando la presencia de
coliformes especficamente E. coli para determinar si hay contaminacin y su origen. Los
resultados del estudio mostraron la presencia de algas filamentosas en todas las fuentes
hdricas analizadas, pseudomonas en las fuentes lodosas a los cuales se les realizo una
prueba de diversidad con el ndice de Simpson y adems de hallarse microfauna como
rotferos; asimismo confirmando coliformes en todas las fuentes termales y la ausencia de
E. coli en las piscinas.

Palabras Clave: Aguas termales, microorganismos, bacterias, coliformes, Escherichia coli,


biodiversidad.

Abstract

The results of fieldwork led to the recognition of microorganisms in hot springs and natural
bacterial mats, ecotourism and place of family recreation Thermal San Vicente in Santa
Rosa de Cabal scenario are presented to highlight the importance of studies aimed at
contributing to the knowledge of microorganisms in the biofilm and hot springs that are
constantly frequented by humans. Evaluating the presence of coliforms and E. coli
specifically to determine if contamination and its origin. The study results showed the
presence of filamentous algae in all water sources analyzed, pseudomonas in the muddy
sources that I were made a test diversity index and Simpson besides being microfauna as
rotifers; also confirmed coliform in all the hot springs and the absence of E. coli in the
pools.

1.

Introduccin

La actividad volcnica ha jugado un papel importante en la formacin de lagos y lagunas en


varias regiones del mundo, como es el caso de los cuerpos de agua en reas de actividad
volcnica o tectnica localizados a lo largo de la Cordillera de los Andes, como las aguas
termales de San Vicente que hace parte de esta cadena volcnica en la Cordillera Sur

Occidental colombiana. En Colombia, las investigaciones biolgicas con aguas termales de


origen volcnico son escasas. Salazar, Naundorf, et al (2011).
La composicin qumica de las aguas termales est ntimamente ligada a la constitucin
geolgica de la regin en que brotan, y esto permite muchas veces prever la naturaleza de
las aguas que se encuentran en ellas, lo que indirectamente es la mejor prueba de la estrecha
relacin entre las agua termales y la geologa del pas, porque en los terrones sedimentarios
las aguas encuentran generalmente muchas sustancias fcilmente solubles, como son las
sales de los metales ligeros y oxidables, sale alcalinas y alcalino terreas que en ellos se
encuentra en condiciones muy apropiadas para su redisolucin y movilizacin.
La mineralizacin de las aguas termales dependen de tres factores: en primer lugar, de la
temperatura y la presin existente en la zona donde ha tenido lugar la mineralizacin
original: en segundo, de la composicin de las sustancias minerales que en ella se
encuentra, y, tercer lugar, de los gases disueltos que modificar el pH y el rH de las aguas.
La mineralizacin de las aguas termales puede producirse por distintas maneras. Por simple
disolucin de sustancias directamente solubles en el aguas, como el cloruro sdico, el
sulfato sdico, el sulfato clcico, etc.; por reacciones qumicas entre cuerpos ya existentes
en el agua sobre los minerales de los terrenos atravesados o tambin sobre otros
compuestos del agua misma. San Miguel (1956)
Las aguas termales han sido utilizadas en gran medida en el campo medicinal debido a su
alta temperatura y minerales presentes, que otorgan propiedades que contribuyen a
disminuir molestias fsicas. Adems se han desarrollado investigaciones acerca de la
diversidad microbiana en ambientes extremos con el fin de determinar cules son las
caractersticas particulares que les permite sobrevivir a dichas condiciones y comprender el

papel que desempean en su hbitat natural, por lo tanto han tomado gran importancia en
las aplicaciones de procesos industriales y biotecnolgicos debido a que las enzimas
producidas son estables a altas temperaturas las cuales resisten los fuertes procesos (Haki &
Rakshit 2003).
Los microorganismos termfilos se encuentran en diferentes hbitats, adaptados para
sobrevivir y reproducirse a altas temperaturas (60 a 110C) y a bajas concentraciones de
oxigeno (Edwards et al. 1990); han sido aislados en fuentes termales marinas, areas,
volcnicas, fumarolas y manantiales terrestres, los cuales han sido considerados como
manifestaciones de la actividad geolgica; caracterizados por tener propiedades fsicas (pH,
temperatura y concentracin mineral) y qumicas que han condicionado la diversidad de
microorganismos anaerobios y autctonos de cada tipo de fuente termal distribuidas en el
mundo (Rubiano 2006.) reflejando la facultad de estos organismos para adaptarse a
ambientes extremos (Stetter 1999). Los estudios ecolgicos realizados sobre la microbiota
de manantiales termales ha cambiado la visin de la biodiversidad microbiana y de su
composicin, estructura y funcin en diferentes manantiales calientes (Ward et al.1998).
Las bacterias existen en la naturaleza en dos formas: en estado de libre flotacin o
planctnicas, las cuales constituyen el 1%; o formando colonias de microorganismos ssiles
conocidos como biofilm, los cuales representan el 99% de todas las bacterias (Sanclement
et al. 2005). Los tapetes microbianos o biofilm, representan entonces una antigua estrategia
de supervivencia procariota, debido a que los tapetes protegen a las bacterias frente a
fluctuaciones medioambientales de humedad, temperatura y pH, al igual que concentrando
nutrientes y facilitando la eliminacin de desechos (Nazar 2007). Las bacterias capaces de
conformar un biofilm son varias, en las cuales estn incluidas tanto gram negativas como

gram positivas al igual que bacterias patgenas y no patgenas (Diemond & Miranda
2007).
Considerando lo anterior y con el fin de aportar nueva informacin, es pertinente resaltar la
importancia de realizar estudios dirigidos a contribuir al conocimiento de los
microorganismos presentes en los biofilm y fuentes termales que son continuamente
frecuentadas por el ser humano.

Materiales y Mtodos.

rea de estudio
El trabajo de campo se llev a cabo en Noviembre 2014; termales San Vicente se encuentra
ubicado en la cordillera sur occidental en el departamento de Risaralda piso bioclimtico
constituye un rea de 400 hectreas aproximadamente, se encuentra a una altura de 2300
msnm con una temperatura entre los 14 y 15C, rodeado por un bosque muy hmedo
montano alto, con un dosel superior formado por arboles muy grandes, que en la mayora
de los casos es la palma de cera del Quindo y otros rboles de estatura mediana con una
altura entre los 5 a 10 mts., que forman la parte media del bosque y en el suelo una
vegetacin rastrera; este es uno de los lugares ms hmedos de la cordillera central con
unos 3500 mL de lluvia anual contra 2200 mL de Manizales, en las siguientes coordenadas
geogrficas 4 51 2n y 753201; lugar caracterizado por sus fuente hidrotermales
carbonatadas y pH alcalino cercano 9, ya que en Colombia la mayora de las fuentes
minerales se encuentran distribuidos en la regin andina y atlntica asociadas al cordn o

falla del pacifico (Rubiano 2006) estos ecosistemas por lo general son cidos por los altos
niveles de azufre elemental y sulfuro.

PROCEDIMIENTO
Recoleccin de tapetes microbianos o biofilm:
Se tomaron cortes de los tapetes microbianos de la superficie de la pared de rocas dentro de
los saunas cercanos a las piscinas 1, 2 y principal, cortes cuidadosos con navaja para evitar
alterar o macerar las muestras, las cuales posteriormente fueron depositadas en frascos
estriles con un poco de agua del termal para conservarlas hasta su posterior anlisis
microscpico en el laboratorio, adems se registr la temperatura del sauna.

Pruebas bacteriolgicas:
Se tomaron muestras de agua en recipientes estriles de las diferentes piscinas del
ecosistema termal, incluyendo agua del grifo y agua del rio Campo alegre y se registr la
temperatura de cada una de ellas. Las muestras se conservaron en frio hasta que fueron
analizadas en el laboratorio. All se realiz un recuento viable de mesfilos y anlisis de
coliformes.

Anlisis cualitativo de coliformes:

1. Prueba presuntiva: En dos tubos con caldo lactosado se sembr 0.1 ml y 1 ml


respectivamente de la muestra a estudiar y se encubaron a 37C por 24 hs.

2. Prueba confirmativa: Se realiza para identificar si hay presencia de Coliformes


(Escherichia coli), sembrando 0.1 ml de la muestra en el agar EMB.
3. Prueba doble confirmativa: De obtenerse colonias de E. coli en el agar EMB, se
tomaron dos muestra para sembrar en caldo Brila (2 tubos); un tubo fue llevado a la
incubadora a una temperatura de 36 - 37C; El siguiente tubo a una temperatura de 45,5C.
Si se observa crecimiento del microorganismo en los tubos son de origen animal y humano
respectivamente.
Tambin se hizo una siembra en el agar sabouraud para saber si haba presencia de hongo
y/o saprofitos.

Resultados.
En la tabla 1 se presentan los resultados correspondientes al anlisis de presencia de
coliformes en los agares EMB y Centrimide; en los cuales se evidencia que todas las
muestras analizadas las contienen. Adicionalmente, las muestras fueron sometidas a una
prueba confirmativa para determinar si las coliformes halladas correspondan a Escherichia
coli, obteniendo la muestra del desage de la piscina de burbujas positiva para esta
enterobacteria.
Adems se puede mostrar que en algunos agares es incontable el nmero de formacin de
colonias por unidad (UFC) demostrando la cantidad de bacterias formadas en estas aguas.

Tabla1: anlisis de presencia coliformes, especficamente E. coli que se encuentra en el agar EMB
GRUPO
G1-M1
G1-M1
G1-M1
G1-M5
G1-M5
G1-M5
G1-M4
G1-M4
G1-M4
G1-M3
G1-M3
G1-M3
G1-M2
G1-M2
G1-M2
G2-M1
G2-M1
G2-M1
G2-M2
G2-M2
G2-M2
G2-M3
G2-M3
G2-M3
G2-M4
G2-M4
G2-M4
G2-M5
G2-M5
G2-M5
G3-M1
G3-M1
G3-M1
G3-M2
G3-M2
G3-M2
G3-M3
G3-M3

AMBIENTE
AGUA NACIMIENTO
AGUA NACIMIENTO
AGUA NACIMIENTO
RO
RO
RO
PISCINA PRINCIPAL
PISCINA PRINCIPAL
PISCINA PRINCIPAL
PISCINA ALGAS
PISCINA ALGAS
PISCINA ALGAS
PISCINA BURBUJAS
PISCINA BURBUJAS
PISCINA BURBUJAS
POZOS DEL AMOR
POZOS DEL AMOR
POZOS DEL AMOR
SPA DE HUESPEDES
SPA DE HUESPEDES
SPA DE HUESPEDES
PISCINA DE ALGAS 1
PISCINA DE ALGAS 1
PISCINA DE ALGAS 1
PISCINA PRINCIPAL
PISCINA PRINCIPAL
PISCINA PRINCIPAL
NACIMIENTO
NACIMIENTO
NACIMIENTO
POZOS DEL AMOR
POZOS DEL AMOR
POZOS DEL AMOR
PSICINA DE LAS BURBUJAS
PSICINA DE LAS BURBUJAS
PSICINA DE LAS BURBUJAS
SPA DE HUESPEDES
SPA DE HUESPEDES

AGAR
EMB
SABOREAUD
CENTRIMIDE
EMB
SABOREAUD
CENTRIMIDE
EMB
SABOREAUD
CENTRIMIDE
EMB
SABOREAUD
CENTRIMIDE
EMB
SABOREAUD
CENTRIMIDE
EMB
SABOREAUD
CENTRIMIDE
EMB
SABOREAUD
CENTRIMIDE
EMB
SABOREAUD
CENTRIMIDE
EMB
SABOREAUD
CENTRIMIDE
EMB
SABOREAUD
CENTRIMIDE
EMB
SABOREAUD
CENTRIMIDE
EMB
SABOREAUD
CENTRIMIDE
EMB
SABOREAUD

UFC
174
8
incontable
640
656
4520
508
incontable
320
230
128
175
384
41
incontable
80
160
288
544
377
864
incontable
512
135
1160
540
incontable
127
89
50
20
14
66
600
74
120
incontable
37

2 Verde metlico

G3-M3
G3-M4
G3-M4
G3-M4
G3-M5
G3-M5
G3-M5

SPA DE HUESPEDES
NACIMIENTO
NACIMIENTO
NACIMIENTO
RO
RO
RO

CENTRIMIDE
EMB
SABOREAUD
CENTRIMIDE
EMB
SABOREAUD
CENTRIMIDE

incontable
568
3
169
3
327
48

En la tabla 2 contiene los resultados de las muestras obtenidas de los biofilm, en ellos se
observ la evidente estratificacin (Figura 1) y los microorganismos presentes,
obtenindose que los tapetes microbianos estn conformados por algas filamentosas (stas
pueden ser coenogonium), entre las cuales se encuentran algas septadas y no septadas
(Figura 2). Los microorganismos hallados corresponden a las muestras tomadas de los
tapetes de la piscina de lodo y su respectivo desage, entre los cuales se identifican
rotferos (Figura 3), pseudomonas, algas cianofceas, diatomeas, etc.

Tabla 2: Microorganismos obtenidos en el biofilm y su estructura.

ESTRUCTURA
(BIOFILM)
LUGAR
T
Sauna 1

44C

Sauna 2

44C

Desage
piscina
36C
lodoterapia

MICROORGANISMOS

MICROORGANISMOS
algas septadas, algas no
septadas
algas septadas, algas no
septadas
Algas septadas, algas no
septadas,
algas
cianofceas,
pseudomonas.

Piscina
40C
lodoterapia

Sauna 3

44C

Piscina de
42C
algas
Nacimiento
de
agua 58C
termal

Pseudomonas, rotferos,
Diatomeas,
Algas
cianofceas,
Fragillarias
s.p., Gomphonemas s.p.,
Naviculas
s.p.,
Cloroficeas, Clodophoras
s.p., Osillatorias
s.p.
Bacillurioficeas
algas septadas, algas no
septadas
algas septadas, algas no
septadas
algas septadas, algas no
septadas

Figura 1. Estratificacin del Biofilm.

Figura 2. Algas filamentosas.

Figura 3. Rotfero

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Todo esto se realiz con un barrido en el microscopio en zigzag, contando los


microrganismos presentados en cada cuadro mostrado, en la Tabla 3 y las Figuras
(4, 5 y 6) se muestran los microorganismos con su correspondiente Phylum que se
presentaron en este barrido en las distintas piscinas. Adems en la tabla 4 se muestran
aquellos microorganismo que se poda observar en las aguas termales, algunos de estos se
repetan en las diferentes aguas analizadas, a los cuales se les realizo una prueba de
diversidad con el ndice de Simpson que se muestra en la Tabla 5 con su respectiva
ecuacin. Como el resultado fue tan bajo (0.94) y el tope en el ndice de Simpson es de 5;
esto se interpreta en qu; a mayor valor del ndice indica una mayor biodiversidad del
ecosistema; por lo tanto la biodiversidad del ecosistema estudiado (Aguas termales de San
Vicente) es bajo.

Tabla 3. Microorganismo y su correspondiente Phylum


Microorganismo
Fragillaria
Navicula sps
Closterium aciculare
Cosmarium contractum
Ankistrodesmus acicularis
Gloeocystis gigas
Kirchneriella lunaris
Monoraphidium
Oocystis sp
Anabaena sp
Occillatoria
Chrooccucus turgidus
Trachelomonas sp
Diatomea
Dactylococcopsis acicularis

Phylum
bacillariophyta
bacillariophyta
charophyta
charophyta
chlorophyta
chlorophyta
chlorophyta
chlorophyta
chlorophyta
cianobacteria
cianobacteria
cianophyta
euglenophycota
heterokontophyta
Negibacteria

11

Figura 4 Primera muestra de la especie Chrooccucus


turgidus

Figura 5 Segunda muestra de la especie Chrooccucus turgidus

Figura 6 Varios microorganismos encontrados con poco zoom (10x)

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Tabla 4. Microorganismos reconocidos en las diferentes piscinas termales

Microorganismos
Aphanizomenon
Anabaena sp
Ankistrodesmus
acicularis
Aphanizomenon
Chrooccucus turgidus
Closterium aciculare
Cosmarium
contractum
Dactylococcopsis
acicularis
Diatomea
Fragillaria
Gloeocystis gigas
Kirchneriella lunaris
Monoraphidium
Navicula sps
Occillatoria
Oocystis sp
Trachelomonas sp

Turco
Nacimiento Piscina de algas
1
Turco2 Turco Principal
+
+
-

Lodoterapia
-

Total
0
15

+
-

+
+
+

+
-

+
+

24
12
22
32

20

+
+
+
-

+
+
-

+
+
-

+
+
+
+

+
+
-

+
+
+
+
-

17
3
8
5
1
14
1
35
4
1

Tabla 5. ndice de Simpson

Microorganismos sp
A
B
C
D
E
F
G
H
I

N de
Individuos
15
24
12
22
32
20
17
3
8

13

J
K
L
M
N
O
P
Total:

5
1
14
1
35
4
1
214

1/D= 1/ 1.055 = 0.94

Discusin.

Los Tapetes bacterianos o Biofilm estn conformados por comunidades microbianas


estratificadas que normalmente corresponden a cianobacterias ubicadas en la parte superior
del tapete; bacterias fototrficas anoxignicas en las capas anteriores y hasta donde pueden
penetrar rayos luminosos y finalmente (en las capas inferiores) presentan bacterias
quimioorganotrofas, con una especial abundancia de sulfato reductoras. Madigan, et al
(2003).

En la mayora las fuentes hdricas analizadas se determin la presencia de coliformes, lo


cual puede explicarse por la manipulacin y contacto antropogenico, es decir, durante el
bao y desplazamiento de las personas de un lugar a otro pueden dispersar estos
organismos y aumentado la posibilidad de contaminacin. Por lo tanto, se hace

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indispensable

realizar

controles

peridicos

que

permitan

identificar

posibles

contaminaciones microbiolgicas o qumicas. Rods, B. (2000)

La presencia de E. coli fue evidente en la muestra correspondiente a las que se les tomo a la
piscina de burbujas, lo cual lleva a concluir que su presencia est asociada a
contaminaciones por materia fecal humana, asimismo las temperaturas que oscilan entre los
36C y la composicin del hbitat proporciona caractersticas ptimas para el crecimiento
y desarrollo de este microorganismo mesfilos, resaltando que las fuentes que tienen
temperaturas superiores a 40C no favorecen la supervivencia de este. Por otro lado
tambin pueden encontrarse en ellas microrganismos aloctonos, procedentes de otro habitas
(suelo, heces, vegetales), considerados contaminantes pero que coexisten con los anteriores,
adaptndose a las condiciones adversas, siendo los mayor inters sanitario Salmonella,
Escherichia coli, Clostridium perfringens, Pseudomonas aeruginosa y Legionella. Rosa &
Mosso (2010)
Hay que tener en cuenta que estos estudios fueron hechos con las mnimas condiciones
requeridas, con los registros poco exactos ya que hubo un margen de error que no se
consider, como la forma de tomar las muestras del agua a estudiar, ya que en ros o cursos
de agua ser preciso considerar diversos factores, tales como: profundidad, caudal,
distancia a la orilla, etc. La muestra se tomar lo ms lejos posible de la orilla, procurando
no remover el fondo y evitando los remansos o zonas de estancamiento.
Para tomar una muestra del agua de un lago o de un ro se sujetar el frasco por el fondo en
posicin invertida, sumergindolo completamente y dndole la vuelta en sentido contrario a
la corriente (ro) o desplazndolo horizontalmente en la direccin de la boca del frasco

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(lago). Laboratorio de la Calidad de Agua (2011). Ya que no se tom las medidas


necesarias se pudo a ver contaminado el agua por contacto externo o del propio recolector.
Es por ello que es recomendable hacer otro muestreo tanto para asegurar los resultados
como posibles como para tomar las medidas que no se tomaron con anterioridad.

Con el presente trabajo se quiere mostrar que las aguas termales de San Vicente necesita un
mejor control de calidad de agua, y una mejor supervisin del lugar para evitar
contaminantes por microorganismos que pueden llegar a ser patgenos, y perjudiciales para
las personas que van a este sitio como un relajante o un medicinal espacio, teniendo en
cuenta los resultado obtenidos para darle margen de duda del control sanitario que se lleva
a cabo en este sitio.

Referencias

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