Mtodos de estudio de la alergia

en el laboratorio. Cuantificacin

de inmunoglobulinas especficas

Mtodos Instrumentales Cuantitativos

Tipo I: IgE

Tipo II: IgG/IgM

Tipo III: Inmunocomplejos

Tipo IV: Linfocitos T

Rechazo

Autoinmunidad

Alergia

Mecanismos de hipersensibilidad

IgE participa en la inmuniad

frente a parsitos

Hipersensibilidad tipo I

CUADROS CLNICOS

Rinitis, conjuntivitis
Asma bronquial
Alergia alimentaria: vmitos-diarreas
Alergia cutnea: urticaria-eccema
Shock anafilctico

Pruebas cutneas

Pruebas cutneas

Pruebas de Laboratorio

Cuantificacin de IgE total

Pruebas de Laboratorio

Cuantificacin de IgE especfica de antgeno

Pruebas de Laboratorio

Test de activacin de basfilos

Pruebas de Laboratorio

Cuantificacin de mediadores

Pruebas de Laboratorio

Cuantificacin de IgE total

Concentracin de inmunoglobulinas en suero

Concentracin
(mg/ml)

IgG

IgM

IgA

IgD

IgE

12

1,5

0,03

0,00005

Pruebas de laboratorio

Se utilizan en el diagnstico desde finales

de los aos 60 (1967)

Debido a las bajas concentraciones sricas

las tcnicas inmunolgicas convencionales
no resultaban apropiadas

Tcnicas de radioactividad (1967-1988)

Tcnicas de ELISA (1988) Enzyme-Linked ImmunoSorbent

Assay, Ensayo por inmunoabsorcin ligado a enzimas

Pruebas de laboratorio

RAST (Radio Allergo Sorbent Test, Phadebas, laboratorios Pharmacia),

Tcnicas de ELISA

ELISA
sndwich

Tcnicas de ELISA

Enzima: -galactosidasa
Sustrato: 4-metilumbeliferil--D-galactsido
Fluormetro: Fluorescencia

Cuantificacin de IgE total

Los valores de IgE se expresan en Ku/l

y estn calculados con respecto a un
preparado de referencia internacional
de IgE (75/502) de la OMS.

1 Ku/l equivale a 2,42 ng de IgE

Cuantificacin IgE total

Alrgicos

% Casos

No alrgicos

100 Ku/l

Concentracin IgE

Cuantificacin de IgE
Edad

Valores de IgE

<1 ao

15 Ku/l

1-5 aos

60 Ku/l

5-9 aos

90 Ku/l

9-15 aos

200 Ku/l

Cuantificacin de IgE

Candidiasis generalizada
Sndrome de hiper-IgE
Sndrome de DiGeorge
Reaccin injerto contra husped
Fibrosis qustica
Enfermedad de Hodgkin
Enfermedad de Kawasaki
Nefritis intersticial por medicamentos
Artritis reumatoide (sales de oro)
Pnfigo bulloso
Enfermedades hepticas graves
Infecciones vricas
Parasitosis

Cuantificacin de IgE total

En adultos, valores superiores
a 250 Ku/l se consideran
como altamente probables de

enfermedad alrgica.

Pruebas de Laboratorios

Cuantificacin de IgE especfica de alrgeno

Cuantificacin de IgE
especfica de antgeno

Cuantificacin de IgE especfica

Los valores de IgE se expresan en KuA/l

y estn calculados con respecto a un
preparado de referencia internacional de
IgE (75/502) de la OMS.

1 KuA/l equivale a 2,42 ng de IgE

Cuantificacin de IgE especfica

Resultado(KuA/l) Clases de IgE

Nivel de IgE

<0,35

Ausente

0,35-0,7

Bajo

0,7-3,5

Moderado

3,5-17,5

Alto

17,5-50

Muy alto

50-100

Muy alto

>100

Muy alto

Cuantificacin de IgE especfica

Resultado(KuA/l)

Clases de IgE

Nivel de IgE

<0,35

Ausente

0,35-0,7

Bajo

0,7-3,5

Moderado

3,5-17,5

Alto

17,5-50

Muy alto

50-100

Muy alto

>100

Muy alto

ALERGENOS
ACAROS
Acarus siro (d70)
Blomia tropicalis (d201)
Dermatop. farinae (d2)
Dermatop. pteronyssinus (d1)
Lepidogly. destructor (d71)
Tyropha. putresccentiae (d72)
MOHOS
Alternaria alternata (m6)
Aspergillus fumigatus (m3)
Candida albicans (m5)
Cladosporium herbarum (m2)
PARSITOS
Anisakis (p4)
Ascaris (p1)
Echinococcus (p2)

ANIMALES
Caspa de gato (e1)
Epitelio de perro (e2)
Caspa de caballo (e3)
VENENOS
Abeja (i1)
Avispa-vespula (i3)
Avispa-polistes (i4)
OCUPACIONALES
Latex (k82)
xido de etileno (k78)
MEDICAMENTOS
Amoxicilina (c6)
Ampicilina (c5)
Cefaclor (c7)
Penicilina G (c1)
Penicilina V (c2)

POLENES MALEZAS
Artemisia (w6)
Ceigo (w10)
Diente de len (w8)
Llantn (w9)
Parietaria (w21)
POLENES GRAMNEAS
Ballico (g5)
Cauela (g4)
Centeno (g12)
Grama (g3)
Grama mayor (g2)
POLENES ARBOLES
Olivo (t9)
Pltano de sombra (t11)
ALIMENTOS MARINOS
Almeja (f207)
Atn-pescado azul (f40)
Bacalao-pescad. blanco (f3)
Gamba (f24)

ALIMENT. VEGETALES
Almendra (f20)
Arroz (f9)
Cacahuete (f13)
Cebada (f6)
Centeno (f5)
Garbanzo (f309)
Lenteja (f235)
Manzana (f49)
Melocotn (f95)
Nuez de nogal (f256)
Trigo (f4)

LECHE-HUEVO
Alfa-lactoalbmina (f76)
Beta-lactoalbmina (f77)
Casena (f78)
Leche de vaca (f2)
Clara de huevo (f1)
Yema de huevo (f75)

ALERGENOS

Va area (neumoalergenos, aeroalergenos)

caros
rboles: olivo
Gramneas: hierba timotea
Malezas
Epitelios de animales: perro, gato

Va digestiva (trofoalergenos)

Huevo y leche
Legumbres
Frutas
Pescados y mariscos
Frutos secos

Especificidad:
Sensibilidad:

91 %
89 %

ALERGENOS

Va area (neumoalergenos, aeroalergenos)

caros
rboles: olivo
Gramneas: hierba timotea
Malezas
Epitelios de animales: perro, gato

Phadiatop
Especificidad:
Sensibilidad:

Va digestiva (trofoalergenos)

Huevo y leche
Legumbres
Frutas
Frutos secos
Mariscos y pescados

Mezclas

89 %
98 %

Cuantificacin de IgE especfica

Cuantificacin de IgE especfica

Componentes alergnicos purificados

mRNA
extraction

poly-(A)
poly-(A)
poly-(A)
poly-(A)
poly-(A)
poly-(A)

cDNA synthesis, cloning and

selection of cDNA clones encoding
individual allergenic proteins

Allergy-eliciting
biological material

Extraction,
Immobilization
on solid phase

Production of recombinant allergens,

Immobilization on solid phase

Standard Allergen
ImmunoCAP

Page 6

Recombinant Allergen
ImmunoCAP

Standardization and
research reagents

Frecuencia de sensibilizacin a alergenos individuales

%
100

80
60

40
20

PPE

r1

r2

n4

r5

r6

r11

r12

r1

r2

n4

r5

r6

r7

r11

r12

131

71

111

101

87

17

41

31

percentage

87%

47%

74%

67%

58%

11%

27%

21%

N= 150 pacientes sensibilizados a gramneas

Page 10

r7

Fig. 2. Posible diagrama de decisin para el tratamiento especfico de la alergia al polen de abedul. Previsibilidad

Fig. 3. Posible diagrama de decisin para el tratamiento especfico de la alergia al polen de gramneas.Previsibilidad

Inmunoterapia-Desensibilizacin

Specific vs. cross-reactive allergen components

Most molecules are non-allergenic.
Cross-reactive molecules
Some allergen molecules bind to IgE
abs in many, widely different
sources.
Mainly species-specific molecules
Some allergen molecules only bind
IgE to closely related species like
cat tiger or peanut - soy.

PANALERGENOS

PRP-10: Reactividad cruzada entre plenes, frutas y vegetales (Norte de

Europa). Lbiles al calor, los alimentos cocinados son tolerados.

nsLPT (non-specific Lipid Transfer Protein): Reactividad cruzada entre

plenes, frutas y vegetales (Sur de Europa). Estables al calor y la digestin, se
encuentran en alimentos cocinados.

Tropomiosina: Reactividad cruzada entre crustceos, caros y cucaracha.

Parvalbmina: Reactividad cruzada entre diferente especies de pescado y

anfibios. Protena estable al calor.

Albmina srica: Reactividad cruzada entre alimentos (leche, carne de vaca,

carne de pollo y huevos) y animales (gato, perro y cerdo).

ISAC

Cuantificacin de IgE
especfica de alrgeno

En general, la sensibilidad y especificidad para

plenes y alimentos es del 90-95%
(PROTEINAS)

Para medicamentos (antibiticos, anestsicos)

la sensibilidad y especificidad es <50%
(NO PROTEINAS)

IgE especfica de haptenos

La penicilina acta como hapteno

PENICILINA

Proteina
propia

Anti-penicilina
Anti-protena propia
modificada

Pruebas de Laboratorio

Test de activacin de basfilos

Test de activacin de basfilos

Citometra de flujo

Aadir el alergeno a la sangre perifrica

(basfilos)

Medir la activacin de los basfilos

(CD63)

Alrgenos desconocidos

Dilisis renal

Pruebas de Laboratorio

Cuantificacin de mediadores

Reaccin anafilctica

ELISA sndwich

Curva de triptasa
50
45

40
35
30
25
20

15
10
5
0
0 horas

2 horas

4 horas

24
horas

RESUMEN (Pruebas de Laboratorio)

Cuantificacin de IgE total

Cuantificacin de IgE especfica de alrgeno

ELISA/Arrays: Alrgenos proteicos

Test de activacin de basfilos: Alrgenos no proteicos

Cuantificacin de triptasa

Reacciones anafilcticas: alrgenos desconocidos