Replicacin de la informacin

gentica

Bibliografa:
Mathews, Van Holde,
Ahern, Bioquimica, 3 Ed
Lenhinger
Lewin
Voet & Voet

Principales procesos:
Replicacin

Transcripcin

Traduccin

ADN
ARN
ARN

Polipptido

Replicacin del ADN:

Sencillo, conceptualmente
Complejo, su mecanismo

Modelo de Watson y Crick

Mapa gentico de E. coli:

genes que intervienen en la replicacin

Modelos de
replicacin:
conservativo

semi-conservativo

disperso

Otras preguntas...
Cmo es el mecanismo de biosntesis del
ADN?
Cmo se logra que la fidelidad de la replicacin
sea tanto mayor a la estimada por Watson y
Crick?
Cmo son los puntos de origen de la
replicacin en el ADN?
Cmo se regula la sntesis del ADN?
Cmo se coordina la replicacin del ADN con la
divisin celular?

Generalidades de la replicacin del ADN

semiconservativa
ordenada y secuencial
requiere molde y un cebador
discontinua
utiliza sustratos activados dNTPs
es el proceso enzimtico mas exacto
que se conoce

Direccionalidad de
la replicacin:
unidireccional /
bidireccional ?

Existen las dos formas de replicacin:

En general, es Bidireccional:

genomas bacterianos

cromosomas de clulas eucariotas

En algunos casos es Unidireccional, ej:

en el ADN mitocondrial

en algunos virus

La reaccin :
catalizada por la ADN polimerasa
reaccin de elongacin
5

3
Ataque nucleoflico
sobre fosfato alfa
del dNTP entrante

PPi

2Pi

Favorece la reaccin de
polimerizacin, desde punto de
vista energtico.

La sntesis es un
proceso discontinuo

Fragmentos de Okazaki

Como se inicia la sntesis de

cada fragmento de Okazaki?

Inicio de los fragmentos de Okazaki:

el cebador es ARN

La Enzima que sintetiza cada cebador de ARN:

Es una ARN polimerasa especfica, la Primasa

cul es la enzima ADN polimerasa

responsable de la replicacin
en E. coli?
La primer ADN pol identificada fue la ADN pol I
(Kornberg, en los aos 70)

ADN polimerasas de E. coli

Pol I

Pol II

pol III

gen

pol A

polB

polC

PM (kDa)

103

90

130

mol/cl.

400

100

10

Vmax

20 nt/s

3 nt/s

750 nt/s

3' exonucl.

no

5' exonucl

no

no

10000

500000

procesiv.

3-200

Horquilla de replicacin

ADN polimerasa III de E. coli

D. R. Herendeen and T. J. Kelly, Cell (1996) 84:5-8.

Otras protenas involucradas en la replicacin

(elongacin):
Topoisomerasas
Helicasas
SSB
Primasa
ADN pol I
ADN pol III
DNA ligasa

ADN polimerasas de E. coli

Pol I

Pol II

pol III

gen

pol A

polB

polC

PM (kDa)

103

90

130

mol/cl.

400

100

10

Vmax

20 nt/s

3 nt/s

750 nt/s

3' exonucl.

no

5' exonucl

no

no

10000

500000

procesiv.

3-200

ADN pol I
Reaccin de
corrimiento del corte,
desplazamiento de la
mella,
o de nick translation

DNA pol I: en la replicacin, sustituye el ARN

(cebador) por ADN
A
U

ARN
H20
UMP

ADN

dTTP
PPi

Reaccin catalizada por la ADN ligasa

DNA ligasa: la reaccin

Helicasas:
catalizan el desenrollamiento de la doble hlice, rompen los
puentes de hidrgeno

Modelo de accin de las helicasas

G. Waksman from S. Korolev et al., Cell (1997) 90:635-647.

ADN superenrollado.

Microscopa electrnica

El avance de la replicacin a 100 000 pb / min

genera problemas topolgicos en el ADN

Las topoisomerasas
Descubiertas en los aos 70
Enzimas que catalizan la
interconversin de topoismeros
Eliminan el estrs torsional generado
por el avance de la replicacin

Topoisomerasas de tipo I : cortan 1 sola hebra

La enzima se une covalentemente al extremo 5

del corte formando un enlace fosfodiester con
el OH- de la Tyr en el sitio activo.

Topoisomerasas de tipo II:

corte de las 2 hebras

ADN girasa, la mas importante en la replicacin de

E. coli, adelante y atrs de la horquilla. Es un tetrmero.

Inhibidores especficos de topoisomerasas :

son eficaces compuestos antibacterianos
Ejemplos:
El cido nalidxico- antibitico utilizado en
infecciones de las vias urinarias. Se une a la
subunidad A de la girasa

Novobiocina : se une a la subunidad B

Topoisomerasas
participan en la terminacin de
la replicacin de molculas
circulares.

El origen de replicacin
cmo es la seal en el ADN que marca el
origen?
qu protenas reconocen esa seal?
es un sitio nico?
cmo se regula el inicio de la sntesis de
ADN a partir del origen?

El replicn: unidad de replicacin

Plsmidos: replicacin autnoma
Episoma: elemento extracromosmico que
puede integrarse al cromosoma
Identificacin de los orgenes de replicacin
en bacterias

Con la misma aproximacin experimental,

cmo se podra aislar un fragmento de
ADN que contenga un origen de
replicacin?

Qu particularidad tiene el ADN en el sitio

de inicio de la replicacin?

OriC

3 secuencias
repetidos
directos, de 13
pb, ricas en AT

4 repetidos inversos, de 9 pb

Modelo de la iniciacin de la replicacin

en oriC, en E. coli

Protenas que interactan

con el ADN en el sitio de
inicio de la replicacin:
HU
IHF
DnaA (relacin c/lpidos)
DnaB helicasa,
DnaC
DnaG primasa
SSB
ATP

Origen de replicacin en eucariotas

Fidelidad de la replicacin
(tasa de error: 10 )
-10

Verificacin y correccin del apareamiento de

bases, a diferentes niveles:
1) durante la polimerizacin (10-5 - 10-6)
2) prueba de lectura : exonucleasa 3
3) reparacin de ADN nuevo, de bases mal
apareadas
Otros mecanismos reparan el ADN daado.
Es independiente de la replicacin (radiacin
uv, por ej.)

Genomas de ARN
Replicacin del ARN
Transcriptasa reversa

ARN

ADN

3'-Azido-2'3'-Dideoxythymidine
(AZT)

AZT, 1ra compuesto aprobado para el

tratamiento de infecciones por HIV.

Otros inhibidores de la transcriptasa reversa.

Errores en la replicacin
pueden ser una ventaja
Errores de la transcriptasa reversa
en la replicacin de retrovirus

Regulacin de la replicacin:
velocidad o frecuencia?
Bacterias:
tiempo de duplicacin celular: 20 minutos
tiempo de replicacin del genoma: 40 minutos

ADN polimerasas en clulas

eucariotas

Replicacin del ADN:

en E. coli vs. en clulas humanas
Cantidad de ADN, pb/ cl.

E. coli 6
3.9 10

Cl humanas

109

Velocidad avance horquilla m/min

30

Velocidad de replicacin, nt / seg

850

60-90

Nmero de orgenes de replicacin

/ clula

103-104

Tiempo 1 replicacin genmica (hs)

0.67

Tiempo 1 divisin celular (hs)

0.33

24

ADN polimerasas en clulas eucariotas

Cmo completar la replicacin de genomas lineales?

Replicacin de ADN mitocondrial: unidireccional