Environmental Pollution 138 (2005) 86e91

Fitorremediacin en los trpicos Influencia del

crudo pesado en las caractersticas morfolgicas
de las races de gramneas
Nicole Merkla,b,*, Rainer Schultze-Kraft a, Carmen
Infanteb,c
Institute of Plant Production and Agroecology in the Tropics and Subtropics, Department of
Biodiversity and Land Rehabilitation,
University of Hohenheim, D-70593 Stuttgart, Germany
b
PDVSA-Intevep (Centro de Investigacin y Apoyo Tecnolgico de Petrleos de Venezuela S.A.),
Departamento de Ecologa y Ambiente, P.O. Box 76343, Caracas 1070-A, Venezuela
c
Universidad Simn Bolvar (USB), FUNINDES, Unidad de Gestin Ambiental, Caracas, Venezuela
a

Received 2 October 2004; accepted 21 February 2005

Describiendo el efecto del crudo de petrleo en la morfologa de las races de

gramneas tropicales este trabajo ayuda en la seleccin de especies vegetales
para la Fitorremediacin de suelos leo contaminados.
Resumen
Durante el estudio de especies para la Fitorremediacin de suelos contaminados por
petrleo, una de las caractersticas principales es la zona de la raz donde mejora de la
degradacin del petrleo toma lugar. Fueron estudiadas las caractersticas morfolgicas
radicales de tres gramneas tropicales. La longitud radical especfica (LRE), el rea
superficial, volumen y dimetro radical promedio (DRP) de las plantas que crecen en
suelos contaminados y no contaminados por crudo pesado fueron comparadas.
Comparadas con el control La Brachiaria brizantha y la Cyperus aggregatus mostraron
races ms gruesas en suelos polucionados, segn lo demuestra un incremento del
DRP. La B. brizantha tuvo un rea superficial especfica significativamente mayor en
suelo contaminado. Adicionalmente, fue encontrado un cambio de LRE y rea
superficial por clase de dimetro hacia dimetros mayores. La contaminacin por
petrleo tambin caus unas LRE y rea superficial significativamente menores en las
clases ms finas de dimetro de C. aggregatus.
2005 Elsevier Ltd. Todos los derechos reservados
1. Introduccin.
2. En Fitorremediacin, es
decir en el uso de plantas para
remover degradar o inactivar
contaminantes en el suelo, la
zona de la raz posee un inters
especial. Aqu los contaminantes

pueden ser absorbidos por la

raz para luego ser almacenados
o metabolizados por la planta,
en un proceso conocido por el
nombre de Fitoextraccin y
fitodegradacin, (U.S EPA, 1999;
Wenzel
et.
al
1999),
la
degradacin de contaminantes

en el suelo por parte de las

enzimas que desprenden las
races es otro tipo de mecanismo
fitorrecuperador (Kruger et al.,
1996). En casos de suelos leo
contaminados, se asume que el
efecto
fitorrecuperador
est
basado en una estimulacin de
microorganismos
degradantes
en
la
rizosfera
llamada
fitoestimulacin
o
rizo
biodegradacin. (Anderson
3. et al., 1993). Lin y
Mendelssohn (1998) por ejemplo
demostraron
una
mejor
degradacin de petrleo en
suelos
plantados
con
dos
especies de pastos de pantano,
en comparacin con suelos no
cultivados. En cualquiera de los
dos
mecanismos
fitorrecuperadores mencionados
anteriormente la raz juega un
papel central.
4.

5.
6. Mientras el efecto de las races
sobre la degradacin
de
contaminantes
es
estudiado
dentro del enfoque de la
fitoestimulacin, el conocimiento
acerca de la influencia de los
contaminantes en el crecimiento
de la raz escasea. La mayor
parte del trabajo se ve limitada
al estudio del efecto txico de
una sustancia qumica sobre
toda la planta, mientras que las
races no son consideradas de
manera particular (Hock and
Elstner,1995). Una excepcin es
el rea de la fitoextraccin de
metales pesados, la cual cuenta
con un buen nmero de estudios
enfocados al efecto inhibidor del
crecimiento de la raz haciendo
nfasis en el largo de la raz
(Misra et al., 1994; Gorsuch et
al., 1995; Samantaray et al.,
1996).
En
cambio,
para
productos qumicos orgnicos,
como hidrocarburos del petrleo,
los estudios se concentran
principalmente en el efecto
fitotxico general que resulta en

un decrecimiento general de la
produccin de biomasa en la
planta (Chaneau et al., 1997;
Salanitro et al., 1997). Los datos
acerca de los efectos txicos de
contaminantes orgnicos sobre
las races estn en su mayora
limitados a la biomasa radical.
Por ejemplo, Xu y Johnson (1995)
encontraron un efecto inhibidor
del crecimiento de la planta por
parte
de
suelos
leo
contaminados sobre cebada y
arveja.
7. Al estudiar la Fitorremediacin
no solo se debera considerar
parmetros cuantitativos de la
raz (biomasa) sino tambin
caractersticas cualitativas de la
raz (Johnson et al., 1996; Wiltse
et al., 1998), por ejemplo, la
capacidad de absorcin de
nutrientes est relacionada ms
fuertemente al largo de la raz
que al peso de sta (Boot y
Mensink, 1990). La informacin
acerca
del
efecto
leo
contaminante
sobre
las
caractersticas morfolgicas de
la raz como el dimetro y el
rea superficial es escasa.
Mientras que los datos de
biomasa radical expresan la
contribucin de la planta en la
construccin y mantenimiento
de la raz, la longitud radical de
alguna manera determina la
capacidad de adquisicin de
agua
y
nutrientes.
Bouma
consider la longitud radical, la
distribucin diamtrica y el
volumen de la raz como
caractersticas importantes al
momento
de
describir
y
comparar sistemas de races en
general.
8. Dentro del enfoque de la
evaluacin de plantas tropicales
para la Fitorremediacin de
suelos
contaminados
por
petrleo en Venezuela fueron
estudiadas las caractersticas
morfolgicas de las races de
tres gramneas (dos pastos y una
juncia).las
gramneas

usualmente son escogidas para

la Fitorremediacin debido a su
crecimiento intensivo y a sus
races ampliamente ramificadas
ofreciendo
una
superficie
extensa que beneficia a la
poblacin microbiana y a la
interaccin planta-microbio, pero
estas
ventajas pueden ser
anuladas o neutralizadas debido
al
efecto
txico
del
contaminante al alterar no solo
la biomasa de la raz sino
tambin su morfologa. Una
morfologa
radical
alterada
influye
directamente
en la
absorcin de agua y nutrientes,
de ah que afecta de manera
adicional al crecimiento de la
planta y al xito de
la
Fitorremediacin.
Merkl
demostr un decrecimiento de
biomasa radical (materia seca)
de las especies de gramneas
aqu estudiadas que estuvieron
presentes en suelo contaminado
por crudo.
9. En el presente trabajo, fueron
evaluados
parmetros
cualitativos como la longitud
radical
especfica,
rea
superficial especfica, volumen
radical especfico, distribucin
de
clases
diamtricas,
y
dimetro radical promedio de
plantas cultivadas en suelos
leo-contaminados. De manera
adicional, se intent llegar a una
conclusin
acerca
de
la
correlacin entre la morfologa
de la raz y mejor degradacin
de petrleo expuesta por Merkl.
Se espera que los resultados
ayuden en la evaluacin de
plantas adecuadas para la
Fitorremediacin en los trpicos.
10.
11.
12.
13.
14.

15.
16.
17.
18.Materiales y mtodos
19.Muestras
de
suelo
erosionado por la accin del
viento en la sabana oriental de
Venezuela
(Santa Brbara,
Estado Monaga) fueron pasadas
por un tamiz de 2-mm y
mezcladas a mano con crudo
pesado
al
5%
peso/peso
(Gravedad API, 10; Punto de
fluidez, 15.5C; Azufre, 5.6%;
saturados,13.4%;
aromticos,
40%; fraccin polar, 46.6%),
resultando en un contenido
inicial de petrleo y grasa del
4.8% (extraccin soxhlet con
diclorometano).
Se
llenaron
contenedores cilndricos (7cm de
radio, 21 cm de altura) con
muestras de 1 kg de la mezcla
suelo-petrleo o con slo suelo
(control), se plantaron Brachiaria
brizantha
(Pocea),
Cyperus
aggregatus
(Cipercea),
y
Eleusine indica (Pocea) una
semana
despus
de
la
preparacin del suelo. Hubo tres
repeticiones
de
cada
tratamiento. La B. brizantha, una
hierba de pastoreo, fue plantada
de semillas comerciales, las C.
aggregatus y E. indica, ambas
especies salvajes, se plantaron
en
forma
de
propgulos
vegetativos derivados de plantas
recolectadas originalmente en la
sabana oriental de Venezuela.
Las plantas se guardaron en un
invernadero abierto, con 12
horas, aproximadamente, de luz
solar. La temperatura mensual
promedio estuvo entre 19 y 25
C (Mnima 9 C, Mxima 47 C),
la humedad mensual promedio
estuvo entre 55% y 66% (Mnima
28%
,
mxima
90%).
El
contenido de auga en el suelo
fue ajustado tres veces por

semana a una concentracin

entre 15% y 20% de peso a
peso. Fue aplicado fertilizante
(NPK 20:20:20) cada 2 semanas
hasta lograr un total de 600 mg
de Nitrgeno, Fsforo y Potasio,
respectivamente por kilogramo
de suelo. Para ms detalles
remtase a Merkl. Despus de 90
das los brotes de cada planta
fueron extirpados de la base y
las races fueron removidas del
suelo y se lavaron. Las races
fueron almacenadas en alcohol
isoproplico a 4C antes de
tratamientos
posteriores.
El
Mac/WinRhizo
2000
(Regent
Instruments Inc) es un software
que
reconoce
imgenes
digitalizadas de races y analiza
los parmetros de la raz
(longitud, rea superficial y
volumen) para determinados
dimetros
radicales.
Para
mejorar el contraste, las races
fueron teidas en violeta de
metilo durante 5 minutos (1
gramo por 100 ml de Agua) a
50C como fue recomendado por
Ewing (1998). Segmentos de raz
fueron ubicados en un escner
(Lide 30, Canon) en una bandeja
plstica transparente llena con
una solucin 0.01 M de NaOH
para evitar la desorcin del tinte.
Un plato blanco de plstico sirvi
como imagen de fondo. La
grabacin de las imgenes fue
realizada a una resolucin de
900 ppp y fueron guardads en
formato TIFF (Tagged Image File
Format). Las clases diamtricas
radicales fueron definidas para
cada especie (Tabla 1) y la
longitud radical, rea superficial,
volumen y dimetro radical
promedio
(DRP)
fueron
analizados para cada clase
diamtrica. La longitud radical
especfica (LRE, longitud de raz
por unidad de peso seco de la
raz, en m g-1), rea radical
especfica (ARE, rea superficial
de la raz por unidad de peso
seco de la raz, en m 2 kg-1) y

volumen radical especfico (VRE,

volumen radical por unidad de
peso seco, en dm3 g-1) fueron
calculados basndose en el peso
seco de la raz.

20.
21.Resultados

26.
27.
28.
29.
30.

22.Los datos de la longitud

radical especfica (LRE), rea
radical
especfica
(ARE),
volumen radical especfico (VRE)
y dimetro radical promedio
(DRP) se presentan en la Tabla 2.
Para el crecimiento de la B.
brizantha en suelo con 5% de
crudo de petrleo. LRE tiende a
reducirse ligeramente mientras
que los ARE, DRP y VRE son
mayores en comparacin al
control. Las diferencias son
significantes para DRP y ARE (p
0.05), VRE tiene un valor P
de 0.056. La C. aggregatus tiene
un DRP menor en suelos no
contaminados que en suelos
contaminados. Sin embargo las
diferencias
no
son
muy
significativas, LRE y ARE tienen a
ser reducidas debido a la
contaminacin por petrleo.
23.
24.
25. Para la E. indica, en
absoluto no hay una diferencia
significativa para las races que
crecen en suelos contaminados
en comparacin con aquellas
races que crecen en suelos sin
contaminar.
De
cualquier
manera, todos los parmetros
tienden a verse reducidos en
suelo contaminado, excepto por
el DRP el cual es igual en ambas
situaciones. La E. indica tiene
unos
ARE,
DRP
y
VRE
significativamente menores que
las otras dos especies, y una LRE
significativamente menor que la
C. aggregatus.

31. La fig. 1 muestra las LRE y ARE

para cada clase diamtrica. Para
la B. brizantha, las primeras dos
clases diamtricas (0-0.5mm y
0.5-1mm) se caracterizan por
una
LRE
significativamente
menor en suelo contaminado
que en suelo no contaminado, y,
en contraste, por LRE mayor en
las clases diamtricas 4 y 5 (1.02.0mm
y
2.0-2.5
mm,
respectivamente). Un patrn

parecido puede ser observado

para el ARE. Para la C.
aggregatus la diferencia es
significante
para
ambos
parmetros solamente para las
clases
diamtricas
ms
pequeas.
En
el
rango
diamtrico medio 3 a 6, los
valores de ARE son algo mayores
en suelo contaminado que en
suelo no contaminado; pero en
las clases que quedan, la
contaminacin
por
petrleo
afecto el ARE de manera
negativa. Los patrones de la
distribucin diamtrica de la E.
indica no vara de forma
significativa.
32.Discusin
33.Un efecto inhibidor de los
hidrocarburos del petrleo sobre
el crecimiento de la planta,
particularmente,
sobre
el
crecimiento de la raz es

registrado por varios autores.

Ms all del efecto del curdo de
petrleo sobre la produccin de
biomasa
radical,
incluso
podramos mostrar un cambio de
la estructura radical en algunas
especies.
34.Resultados indican que el
crudo de petrleo puede causar
crecimiento general de races
ms gruesas (B. brizantha y C.
aggregatus). Las races crecen
ms cortas y ms espesas como
lo expresa un decrecimiento de
LRE y un incremento de DRP
(Tabla 2). Mientas que en la B.
brizanta
el
rea
radical
especfica
se
incrementa
significativamente
con
el
aumento del dimetro radical, en
la C. aggregatus se presenta un
rea
radical
especfica
ligeramente reducida en suelo
contaminado. Un cambio en la
estructura radical para estas
especies tambin se vuelve
evidente en la distribucin de
clases diamtricas de LRE y ARE
(Fig. 1). Para la B. brizantha se
puede ver que la longitud radical
especfica se caracteriza por
races ms gruesas (dimetro >
1.5 mm) mientras que las races
finas (dimetro 1 mm)
contribuyen menos al rea
superficial.
35. En
comparacin,
las
C.
aggregatus cultivadas en suelos
no contaminados tuvieron races
finas considerablemente ms
largas (clase diamtrica 1) que
aquellas cultivadas en suelos
contaminados. Efectos similares
fueron informados por Brandt et
al.
(Presentado
para
su
publicacin) para la Vetiveria
Zizanioides. La E. indica es
bastante consistente en su
estructura radical y es poco
afectada por los hidrocarburos
del petrleo.
36.
Junto al efecto txico de
los hidrocarburos del petrleo
hay varios factores relacionados
que influencian en la estructura

radical.
Bengough
(2003)
encontr que la impedancia
mecnica
ralentiza
el
alargamiento de la raz. Debido
al alto contenido de asfaltenos
en crudo pesado, los suelos
contaminados
tienen
una
resistencia mecnica mayor que
suelos no contaminados como
fue
evidenciado
en
los
experimentos del campo y el
invernadero (la informacin no
fue mostrada). Esto puede
traducirse en races ms gruesas
como se pudo ver en las B.
brizantha y C. aggregatus.
37.
Adems, las condiciones
de humedad del suelo son
alteradas bajo la contaminacin
por petrleo. Debido a la
naturaleza
hidrofbica
del
petrleo, el agua se esparce de
manera no homognea en suelo
contaminado y la deficiencia de
agua
puede
ser
una
consecuencia. Una adaptacin
morfolgica contra el estrs
hdrico es un incremento del
dimetro radical y la reduccin
de la elongacin radical como
una
respuesta
a
una
permeabilidad menor en suelo
seco (Davies and Bacon, 2003).
38.
Otro factor fsico que
influye en la morfologa de la
raz y podra contribuir a la
explicacin
de
nuestros
resultados es la temperatura. La
temperatura del suelos puede
ser considerablemente ms alta
en suelos leo-contaminados
que en suelos no contaminados,
debido a sus propiedades de
absorcin de radiacin solar, al
ser ms oscuros. Bowen (1996)
hall que la temperatura afecta
las sustancias de crecimiento y
en consecuencia la longitud
radical.

39. La temperatura mxima para el

crecimiento de la raz se da en
40 C la cual puede ser superada
en los 15 cm superiores del
suelo en los trpicos y ms an
en suelos leo-contaminados o
en macetas de invernadero no
aisladas de pequeo volumen.
La
estructura
radical
bajo
condiciones de campo donde la
cobertura
vegetal
ofrece
proteccin
del
exceso
de
irradiacin y sobrecalentamiento
del suelo podra por tanto diferir
de lo que fue hallado en el
invernadero.
40.
La estructura radical es
adems
afectada
por
la
disponibilidad
de
nutrientes

como fue reportado por Zhang et

al. (2003) para la Arabidopsis
thaliana produciendo mayores
dimetros radicales en suelo
deficiente de fsforo. Un caso
comparable puede ser asumido
para el crecimiento de la planta
en
suelo
contaminado
por
petrleo. Durante la degradacin
microbiana de los hidrocarburos,
el consumo de nutrientes se
incrementa y la planta debe
competir contra los organismos
por nutrientes. La consecuente
deficiencia de nutrientes puede
resultar en un dimetro radical
incrementado.
41.
Considerando
el
uso
potencial en la Fitorremediacin

de las especies aqu estudiadas,

Cules son las consecuencias
de los cambios morfolgicos?
Las races son capaces de
producir hormonas en la planta y
en
consecuencia
produce
perturbaciones en el ambiente y
por tanto el crecimiento de la
raz puede influir en el desarrollo
de la planta (Itai y Birnbaum,
1996). En consecuencia, los
cambios en la morfologa radical
pueden influir en la estimulacin
y por tanto en la degradacin de
microorganismos en la rizosfera.
El hecho de que la morfologa
radical de una planta no cambie
debido a la presencia de un
contaminante, es el caso de la E.
indica, puede interpretarse como
una ventaja y una desventaja
para la Fitorremediacin. En una
mano, la E. indica parece ser
menos susceptible al efecto
txico de los hidrocarburos del
petrleo. Un criterio para la
seleccin de especies vegetales
para Fitorremediacin es un
buen y ampliamente ramificado
sistema radical (Glick, 2003).
Esta
caracterstica
debera
mantenerse
invariable
bajo
condiciones de contaminacin
como puede esperarse de la E.
indica. En la otra mano, la E.
indica muestra poca plasticidad,
es decir, la planta no responde a
cambios en las condiciones
ambientales, en contraste a la B.
brizantha y la C. aggregatus, lo
cual puede ser una desventaja
considerando la adopcin de una
especie
a
condiciones
ambientales desfavorables, p.ej.
deficiencia de nutrientes en
suelos
contaminados
por
petrleo.
42.
El hecho de que la
morfologa
radical
de
una
especie
cambie
debido
a
caractersticas fsicas y qumicas
alteradas
de
suelos
leocontaminados o debido a los
efectos
txicos
de
los
hidrocarburos del petrleo, no

disminuye obligatoriamente el
uso potencial de dicha especie
para Fitorremediacin. Suelos
cultivados con B. brizantha y C.
aggregatus, ambos mostraron
divergencia
morfolgica
en
suelos
contaminados
en
comparacin con suelos no
contaminados, adems tuvieron
mayor degradacin de petrleo
que suelos sin vegetacin,
mientras que no hubo diferencia
significativa
entre
suelo
cultivado con E. indica y su
control (Merkl et al., 2005). Esto
no es atribuido a los cambios
morfolgicos de la raz sino ms
bien
al
ARE
que
es,
independientemente
de
la
presencia del crudo de petrleo,
significativamente mayor para la
B. brizantha y la C. aggregatus
que para la la E. indica, y para
LRE que es significativamente
mayor para la C. aggregatus.
Esto significa que, a pesar de
que estos valores se ven
reducidos bajo influencia del
petrleo, siguen siendo mayores
que para la E. indica, ello puede
ser
decisivo
para
la
Fitorremediacin
ya
que
superficies radicales especficas
mayores ofrecen ms espacio
para la poblacin microbiana.
43.
El
presente
estudio
demuestra que los hidrocarburos
del petrleo pueden cambiar no
solo la biomasa radical sino
tambin la estructura radical.
Aunque
para
una
especie
individual, la relacin entre
estructura radical y un xito
predecible de esta especie en la
Fitorremediacin no podra ser
aclarada, los resultados ayudan
en la seleccin de especies para
Fitorremediacin ya que una
comparacin
entre
especies
mostr un incremento en la
degradacin con p. ej. ARE. De
cualquier forma, los resultados
pueden variar con otras fuentes
de petrleo. Las investigaciones
acerca de la estructura radical

en combinacin con anlisis de

degradacin
mejorada
de
hidrocarburos de petrleo en
suelo pueden, por tanto, ayudar
a realizar evaluaciones ms
rigurosas
de
plantas
para
Fitorremediacin.

64.
65.

44.
45.Reconocimiento
46.
47.
El trabajo fue respaldado
por una donacin de la Gottlieb
Daimlerund
Carl
BenzFoundation, nmero de proyecto
02-07/01
48.

66.

49.

70.

67.
68.

69.

50.
51.
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