Los patrones de bioacumulacin de metales en dos macro-invertebrados

filtradores:
Distribucin de la exposicin, las diferencias entre especies y la variabilidad
de toda
etapas de desarrollo

Este estudio se centr en la bioacumulacin de metales de dos insectos

acuticos (Ephoron virgo y Hydropsyche spp.) Con el fin de evaluar la
distribucin espacial de los metales, las diferencias interespecficas entre
ambos filtradores y la dinmica de bioacumulacin durante las etapas de
desarrollo virgo E.. Hg, Cd, Ni, Cr, As, Pb, Cu, Ti,
Zn y Mn fueron cuantificados en los insectos y en las partculas en
suspensin (SPM) muestreado aguas abajo y aguas arriba de una planta
qumica, donde se depositan ms de 300.000 toneladas de sedimentos
contaminados. Concentraciones de Hg eran de un orden de magnitud mayor
aguas abajo del vertedero de sedimentos, que mostr que la contaminacin
de Hg se origin en la planta qumica. Cd, Ni, Cr, Pb, Ti, Zn y Mn en los
invertebrados revelaron que la contaminacin de metal estuvo presente
aguas arriba en otras partes del ro. No se observaron diferencias
interespecficas para todos los metales, pero Mn; significativamente ms
alta se observaron concentraciones en E. virgo sobre Hydropsyche
exocellata,
a excepcin de Cd, que mostr 10 veces valores ms altos. Hg y Cd
aumentaron hasta E. ninfas virgo llegaron a 11 mm y disminuyeron despus
en estadios finales, cuando las ninfas estaban a punto de emerger. Cr, Pb, Ti
y Mn disminuyeron a lo largo de primeros estados seguido de un estado de
equilibrio en estadios tardos. Valores similares se obtuvieron para Cu, As y
Zn a lo largo de todos los estadios. No se observaron diferencias sexuales
entre machos y hembras de E. virgo de Cd, Cu y Mn. Hg y Cd persistencia
era fuerte a travs de las etapas de desarrollo ya que se encontraron altas
concentraciones en los huevos y adultos emergentes. Debido a que el
comportamiento de los diferentes metales variaba para las dos especies y
durante las etapas de desarrollo de E. virgo, se debe tener cuidado en la
interpretacin de las concentraciones de metales de insectos en el anlisis
de la transferencia de la cadena alimentaria de los metales en los
ecosistemas fluviales.

introduccin
El anlisis de la bioacumulacin de metales en la biota es necesario evaluar
la pertinencia de la contaminacin por metales en los ecosistemas acuticos
(Zhou et al., 2008) y las larvas de insectos han sido ampliamente utilizados
para este propsito, ya sea de la poblacin en la comunidad o al nivel de
especie (Chapman et al ., 2003). Por otra parte, la concentracin de metal
cuerpo en larvas de insectos es til para detectar la biodisponibilidad de
metales (Goodyear y McNeill, 1999), ya que los invertebrados acuticos son

relativamente sedentarios y completa la totalidad o la mayor parte de su

ciclo de vida en el medio ambiente acutico. Los estudios realizados en los
arroyos y ros que utilizan
invertebrados acuticos estn relacionados principalmente con la
contaminacin de minas (Can et al., 2000;. Sola et al, 2004) o las
actividades urbanas / industriales (Beauvais et al., 1995). La mayora de los
estudios con el uso de la contaminacin por metales insectos tolerantes
graves, como las larvas de varias especies de
la frigneas Hydropsyche. Estas especies se utilizan ya que sus poblaciones
son abundantes y generalizadas y pueden estar presentes en zonas
altamente contaminadas de metal (Clements et al., 2000). Por el contrario,
los ros o tramos de un ro con la contaminacin por metales moderado
ofrecen la oportunidad de estudiar la variabilidad de bioacumulacin entre
diferentes taxones (Can et al., 2004), por ejemplo, la sensibilidad de las
distintas especies, comparando los mismos gremios alimentarios, o
contribuir a una mejor comprensin de las respuestas sobre metal y
especficos de especies de insectos acuticos en condiciones de campo. Las
concentraciones de metales en los insectos acuticos tambin cambian con
el tamao y las etapas del ciclo de vida y diferente
patrones de bioacumulacin se han observado dependiendo del metal en
cuestin (Smock, 1983). Sin embargo, el conocimiento actual de estos
patrones es incompleta ya que estos estudios se centraron en slo unos
pocos metales a la vez. El comportamiento especfico del elemento de
metales en todo el ciclo de vida del desarrollo de los insectos sigue siendo
poco clara. Por otra parte, los estudios han demostrado que, para dos
especies (Hexagenia rigida y Stenacron interpunctatum), existe variabilidad
en la bioacumulacin de ciertos metales (cadmio, mercurio, plomo, cromo y
zinc) dentro del cuerpo de un insecto, que ocurre internamente en los
tejidos intestinales o externamente en el exoesqueleto (Smock, 1983;. Hare
et al., 1991; Inza et al, 2001). Sin embargo, este hallazgo no ha sido
ampliamente probada entre otras especies de insectos o a travs de un
grupo ms amplio de los metales.
El bajo del ro Ebro recibe una afluencia permanente de metales pesados,
debido principalmente a la contaminacin de fuente puntual procedente de
una planta qumica ubicada en la localidad de Flix (a 100 km de la
desembocadura del ro). Desde la finalizacin del embalse de Flix, en 1949,
y hasta la dcada de 1980, ms de 300.000 toneladas de residuos slidos
industriales contaminadas de cloro lcalila electrlisis y la produccin de fertilizantes de fosfato se han depositado
en el depsito (Palanques et al., 1996). Estudios previos indican la presencia
de una gran variedad de contaminantes (metales pesados y compuestos
organoclorados) en los sedimentos del yacimiento (Grimalt et al., 2003) y
detectar la bioacumulacin de metales pesados de aguas abajo en la
cadena alimenticia acutica del Delta del Ebro (Schuhmacher et al., 1993;
Maosa

et al., 2001; Snchez-Chardi et al., 2007) y del embalse de Flix (Carrasco et

al., 2008). Sin embargo, hay una falta de informacin sobre la distribucin
de metal y la biodisponibilidad en los primeros 60 km aguas abajo del
vertedero de sedimentos, correspondiente a la parte de agua dulce del ro.
Dado que los metales depositados en el embalse de Flix son muy insoluble
en agua, que estn presentes en los sedimentos finos que puede ser
liberada aguas abajo como partculas en suspensin (SPM). Nuestro
principal objetivo fue evaluar si los sedimentos contaminados en el embalse
de Flix se transportan aguas abajo y se transfieren a la cadena alimentaria
acutica.
Dos insectos acuticos, Ephoron virgo (Ephemeroptera: Polymitarcyidae) y
Hydropsyche spp. (Trichoptera: Hydropsychidae) fueron seleccionados como
especies indicadoras, porque ambos son representativos de nuestra rea de
estudio (el ro Ebro), tienen el mismo gremio de alimentacin como
filtradores y habitan zonas de agua corriente (Tachet et al., 2000). Por lo
tanto, su seleccin evita la variabilidad en la bioacumulacin debido a las
limitaciones de hbitat oa diferentes hbitos de alimentacin. Mientras
Hydropsychids se consideran tolerantes a los metales pesados (Can et al.,
2004;. Sola et al, 2004), E. virgo se considera metal sensible (De Haas et al.,
2002).
En este contexto, los patrones espaciales de la contaminacin por metales
en los dos organismos deben reflejar las concentraciones ms altas de
metal aguas abajo de la fbrica, al menos para los metales detectados a
altas concentraciones por Grimalt et al. (2003) (es decir, Hg, Cd, Ni Cr y Zn).
Adems, nuestro objetivo fue evaluar las diferencias interespecficas de
bioacumulacin de metales en dos especies de invertebrados del mismo
grupo de alimentacin funcional. Por ltimo, se midieron los metales
bioacumulado durante la etapa de crecimiento de la ninfa de E. virgo ya lo
largo de todas las etapas de su ciclo de vida, incluyendo mudas adultos,
machos adultos, hembras adultas y los huevos.

Materiales y mtodos
2.1. Descripcin Sitio de estudio
El ro Ebro se encuentra en el NE de la Pennsula Ibrica y tiene una cuenca
de drenaje de 85.550 km2, con una longitud de 928 kilmetros. La parte
baja del ro (a 100 km de la desembocadura del ro) tiene un caudal medio
anual de 426 m3 s- 1 y est regulada por dos presas hidroelctricas
principales (Mequinena y Riba-roja) construidos a finales de 1960. La
cuenca del Ebro se ve afectada por las actividades industriales, urbanas y
agrcolas de
sus nacientes hasta su desembocadura y la presencia de metales y
compuestos orgnicos han sido reportados en muchos sitios a lo largo del
ro (Lacorte
et al. 2006; Terrado et al., 2006).

A medida que nuestro estudio se centra en el posible transporte de metales

pesados aguas abajo de Flix, los macroinvertebrados se muestrearon en tres
sitios a lo largo del ro aguas abajo de la planta qumica (Estacin A: Asc,
Estacin M: Mra; la estacin T: Tortosa). Una estacin se encuentra a 8 km
aguas abajo del vertedero de residuos en Flix y Estaciones M y T son 21
kilometros y 68 km aguas abajo, respectivamente. Estas estaciones se
encuentran en la parte de agua dulce del ro, sin la influencia de la cua
salina presente aguas abajo (ver Guilln y Palanques, 1992; Ibez et al,
1997 para una descripcin detallada de la zona y sus caractersticas
hidrolgicas.).
Sitios de referencia verdaderos sin ningn metal pesado contaminacin
aguas arriba de Flix son difciles de encontrar en la cuenca del Ebro. Aunque
las medidas de metales pesados disueltos en el agua son bajos para todos
los sitios de acuerdo a los informes de la Autoridad del Agua del Ebro (anexo
1, los datos de apoyo), no o existe escasa informacin sobre los sedimentos
en suspensin. Seleccionamos el control de tres
estaciones para las concentraciones de metales pesados de aguas arriba de
Flix. La primera estacin de control se encuentra en la parte media del ro
Matarranya, un afluente del ro Ebro (Estacin MAT). Mientras que esta
estacin es probablemente el ms cercano a las condiciones de referencia
verdaderos, slo Hydropsyche larvas pueden encontrarse aqu.
La segunda estacin de control (Estacin MZ) se encuentra en el principal
ro Ebro en la ciudad de Monzalbarba. Seleccionamos Monzalbarba debido a
su localizacin 12 km aguas arriba de la zona industrial de Zaragoza,
evitando as los insumos de contaminacin de esta gran ciudad en la
estacin de control. Reconocemos que bajo a moderado industrial y urbano
insumos de contaminacin de la parte superior del ro se pueden producir
en la estacin. Sin embargo, este fue el nico sitio aguas arriba del embalse
de Flix que contena una poblacin suficientemente grande de E. virgo para
comparaciones de muestras de larvas con la estacin de T.
Por ltimo, se seleccion una tercera estacin en la confluencia de los ros
Segre y Cinca en la zona Aiguabarreig (Estacin AB). Estos dos afluentes del
ro Ebro se ven afectados por las zonas agrcolas de gran escala. El ro Cinca
tambin se ve afectada por la zona industrializada de Monzn (situado a 80
km aguas arriba). La seleccin de MZ y AB
estaciones aguas arriba permitiran distinguir qu metales provienen de
otras fuentes en otras partes de la cuenca y cules provienen del embalse
de Flix.
El material particulado se tomaron muestras en tres estaciones (Estacin F:
Flix; Estacin M: Mra; Estacin R: Riba-roja). Estacin F est situado en el
embalse de Flix, cerca de la fbrica de productos qumicos; Estacin M
coincidi con uno de nuestros sitios anteriores afectadas para invertebrados
de aguas abajo de Flix; y la estacin R es un sitio de control situado en el
depsito aguas arriba de la planta qumica. Los dos invertebrados en la
muestra no estaban presentes en

Estaciones de R y F debido a las limitaciones de hbitat (que no estn

presentes en las profundidades bajas reas velocidad del agua de los
embalses). La calidad del agua y la concentracin de metales en el agua de
varias de las estaciones en la Fig. 1 se muestran en el Anexo 1 (datos de
apoyo).
2.2. El muestreo de muestras de agua de material particulado y
macroinvertebrados suspendidas desde el ro se tomaron durante la
primavera y el verano de 2006 y 2007. Ellos fueron filtradas a travs de
0,22 micras filtros de celulosa poro previamente pesados, donde fue
retenido SPM. El volumen de agua tomada dependa de la muestra y de la
saturacin del filtro utilizado.
Ninfas E. virgo y larvas de los gneros Hydropsyche fueron recogidos
durante junio de 2006 y 2007, utilizando una red de Tiro (red de malla de
250 micras). Desde ms de una especie de Hydropsyche pudo encontrar
aguas arriba, todos se agruparon las especies a nivel de gnero cuando se
menciona en el texto, a excepcin de los sitios donde slo una especie se
puede encontrar. Las especies que se encuentran en el ro Ebro es
exocellata Hydropsyche (Muoz y Prat, 1994), correspondiente a los sitios
afectados aguas abajo del vertedero de sedimentos y de la estacin de
control de MZ. En la estacin de AB, H. exocellata fue tambin la nica
especie Hydropsychid encontrados. Sin embargo, en el control de la
estacin de MAT, tres especies de Hydropsychids vivan con su pareja: H.
exocellata, la especie dominante (50%
de todos Hydropsychids encontrados), H. incognita y H. bulbifera. Las
especies fueron clasificadas a partir de muestras de la comunidad de
macroinvertebrados en cada sitio muestreado. Aunque la mayora de la
Hydropsychids examinados eran H. exocellata, les agrupamos como
Hydropsyche spp. en la estacin de MAT desde que se encontr ms de una
especie. Asumimos que agrupndolos como Hydropsyche spp. en la
estacin de MAT no generara ningn sesgo significativo en los resultados.
Basamos esta suposicin.

Fig. 1. sitios de muestreo y rea de estudio en la cuenca del ro Ebro (NE de

la Pennsula Ibrica). Crculos muestran lugares de muestreo de
invertebrados y flechas para la materia particulada en suspensin. (MZ:
Monzalbarba; AB: Aiguabarreig; MAT: Matarranya; R: Riba-roja; F: Flix; A:
Asc; M: Mra; T: Tortosa).

en las concentraciones de Cu similares obtenidos en tres especies

Hydropsyche por Can et al. (1992) (Hydropsyche sp., H. occidentalis y H.
cockerelli) y en los resultados de Buchwalter et al. (2008), quienes
obtuvieron tasas de eflujo similares de metales para H. californica en
comparacin con los de H. betteni (Evans et al., 2002).
El lecho del ro estaba perturbado y la muestra posterior se lav en la red y
se deposita en una bandeja para recoger individuos de ambos
macroinvertebrados. Una vez ordenados los organismos, que se limpiaron
con agua doblemente destilada, se colocaron en viales Eppendorf lavada
con cido y se almacena con hielo, siguiendo la metodologa desarrollada
por
Sola et al. (2004). Debido a la baja abundancia de E. virgo en algunas zonas
del ro, esta especie podra ser muestreados slo en una estacin de control
(MZ) y una estacin afectada (T).
Con el fin de comparar las diferencias interespecficas en la bioacumulacin,
se eligieron slo las muestras de la misma estacin afectada (T) en el
mismo periodo de muestreo (2007) para evitar posibles diferencias
espaciales e interanuales. De este modo, las especies comparadas fueron E.
virgo y H. exocellata.

Con el fin de estudiar los patrones de bioacumulacin de metales durante

las etapas de crecimiento de la ninfa y de ciclo de vida, las muestras de E.
virgo se tomaron de la estacin de T, donde las caractersticas del ciclo de
vida y la produccin secundaria de esta especie son bien conocidos (Ibez
et al., 1991; Cid et . al, 2008). Ninfas en diferentes etapas de desarrollo se
muestrearon a finales de
Mayo, junio, julio y agosto de 2005, y en junio de 2006 y 2007 con los
mismos mtodos explicados anteriormente. Cuando las emergencias de
adultos comenzaron (principios de agosto), los adultos tambin se tomaron
muestras de retencin de la luz.
Las hembras adultas y machos, mudas masculinos y huevos extrados de
hembras fueron recogidos por separado. Muestras por triplicado fueron
compuestas por aproximadamente 7-8 individuos cada uno a fin de obtener
un peso mnimo para analizar (valores de rango desde 5 mg a 150 mg). En
el laboratorio, todas las muestras se congelaron a -20 C hasta que se
llevaron a cabo los anlisis.
2.3. anlisis de metal
Para las muestras de SPM, un mtodo de digestin de la muestra a granel
de dos pasos se utiliz de acuerdo a Querol et al. (1996). Se compone de la
digestin de los elementos voltiles en un sistema cerrado con HNO3
concentrado (MERK supra-pura) a 90 C durante 2 h y la digestin de los
elementos no voltiles con HF-supra pura y calentamiento a 90 C durante
3 h y la adicin de supra-pura HClO4 y HNO3. Muestras de
macroinvertebrados se liofilizaron, ponderada para el 0,001 mg ms
cercano y horno digerido en viales de tefln cerrados con HNO3 y H2O2
(reactivos de alta pureza) de acuerdo con el procedimiento descrito por Sola
et al. (2004)). Los viales se colocaron en un horno a 90 C durante 10 h
para obtener la solucin de muestra y la solucin de digestin se diluy con
(Milli Q) agua doblemente destilada.
Hg, Cd, Ni, Cr, As, Pb, Cu, Ti, Zn y Mn fueron seleccionados para el anlisis
debido a que estos metales se detectaron por Grimalt et al. (2003) en
sedimentos del embalse de Flix y la parte baja del ro Ebro. Para SPM, Ti, Zn
y se analizaron por plasma acoplado inductivamente espectroscopia de
emisin atmica (ICP-AES), y Cd, Ni, Cr, As, Pb, Cu, Mn y por ICP-MS (ICPMS). La concentracin de Hg en SPM se midi usando un analizador Leco
AMA 254. El anlisis de macroinvertebrados de metal se llev a cabo
utilizando ICP-MS con Rh como patrn interno. El control de calidad de todos
los procesos incluye espacios en blanco y el anlisis de referencia estndar
material. Para SPM, se utilizaron digestiones de MESS-3 y materiales de
referencia PACS-2 por parte del Consejo Nacional de Investigacin de
Canad.
Dentro de estas muestras, el porcentaje de recuperacin de este material
de referencia fue b10% para todos los elementos analizados. Para los
invertebrados, el material de referencia fue GBW08572-gamba por E. virgo
en 2005 y el tejido ERM-CE278-mejilln para todas las muestras en 2006 y
2007. Para comparar la medicin con el valor certificado, se utiliz una gua

de los Materiales de Referencia Europeo , que tiene en cuenta las

incertidumbres y compara la incertidumbre expandida para obtener el

Tabla 1
Concentracin de metales (mg g-1 SL) a las partculas en suspensin (SPM)
desde el ro Ebro. km indica la distancia desde la fuente de contaminacin
de las estaciones afectadas. Para la estacin de cdigos ver fig. 1.

diferencia (Linsinger, 2005). Segn esta gua, el tejido de mejilln-MTC

CE278- no mostr diferencias significativas entre los valores certificados y
medidos para Hg, Cd, As, Pb, Cu, Zn y Mn; para Cr, hubo una
sobreestimacin significativa, con un valor de medicin del doble del valor
certificado. Para GBW08572-Gamba, Cr y Pb fueron
significativamente diferente al valor certificado; Pb fue infravalorada y Cr
estaba sobrevaluado, como ocurri en el tejido ERM-CE278-mejilln. Esto
lleva a la cuestin de si el Cr es un metal adecuado para ser analizados por
los mtodos anteriores o no. Ningn material de referencia estaba
disponible para los valores de Ni y Ti, as que no pudimos probar el control
de calidad de los anlisis de estos metales.
2.4. El anlisis estadstico
En las muestras donde la concentracin de metal estaba por debajo del
lmite de deteccin, los valores utilizados para los anlisis estadsticos
fueron la mitad del valor del lmite de deteccin (Karouna-Renier y Sparling,
2001).
Con el fin de probar las diferencias entre los sitios para ambas especies de
macroinvertebrados, para evaluar las posibles diferencias en las
concentraciones de metales interespecficas y determinar los diferentes
patrones de bioacumulacin ciclo de vida de E. virgo un anlisis de varianza
(ANOVA) se realiz.
Cuando sea necesario, (en lo sucesivo, las pruebas de GH) se llev a cabo
una prueba post-hoc de Games-Howell. Pruebas de GH son pruebas de
comparacin mltiple post hoc que se encuentran entre la ms potente y
robusta para varianzas desiguales (Da y Quinn, 1989). Variables se
transformaron para los anlisis paramtricos porque homocedasticidad y
linealidad fueron claramente mejoradas. Los anlisis estadsticos se
realizaron con SPSS 16.0.

3. Resultados
3.1. Distribucin de contaminacin por metales pesados

Concentracin de Hg en SPM en la estacin de F fue ms de dos rdenes de

magnitud mayor que en la estacin de control R, mientras que las
concentraciones de Cd fue 10 veces mayor en la estacin de F y dos veces
mayor en la estacin M (Tabla 1). Concentraciones de Ni, Cr, As, Pb, Cu, Ti,
Zn y Mn no mostraron ningn tipo de enriquecimiento de metal relevante en
las Estaciones F y M, en relacin con la estacin aguas arriba R.
Distribucin espacial de las concentraciones de metales en SPM refleja
generalmente los de los invertebrados para Hg y Cd. Las concentraciones de
Hg y Cd en E. virgo ninfas aguas abajo de la planta qumica fueron
significativamente mayores que aguas arriba en la estacin de control de
MZ (Fig. 2). Concentracin de Hg de este mayfly aguas abajo del vertedero
de sedimento en el sitio de la estacin de T fueron ms de 10 veces mayor
que en la estacin de MZ,
seguido de Cd, con una concentracin media de cuatro veces mayor. En
Hydropsyche, las concentraciones de Hg y Cd mostraron una tendencia
general a ser ms alto aguas abajo de la planta qumica de Flix en
estaciones A, M y T (Fig. 3). Concentraciones de Hg aguas abajo de Flix
fueron significativamente mayores que todos los sitios aguas arriba
(Pb0.05). La concentracin ms alta se encontr en la estacin A, donde los
valores medios fueron hasta
10 veces ms alta que aguas arriba, similar a los resultados encontrados
para E. virgo. Cd fue mayor que todos los sitios de control slo en la
estacin de M (Pb0.01); niveles encontrados en la estacin de control de MZ
fueron comparables a los de las estaciones A y T.
Los otros metales presentan resultados diferentes dependiendo de si E.
virgo o Hydropsyche fueron analizados en las estaciones de muestreo. Pb,
Zn y Mn en muestras de E. virgo aguas abajo en la estacin de T fueron
significativamente mayores que aguas arriba en la estacin de control de
MZ (Fig. 2), y el mismo patrn se observ para Hg y Cd. Sin embargo, se
encontraron valores similares de Ni, Cr, As, Cu y concentraciones de Ti en
este
organismo (Anexo 2, los datos de apoyo).
Por el contrario, Pb y Zn en Hydropsyche en la estacin de control de MZ
present resultados similares a los lugares afectados por debajo de Flix
(Anexo 3, los datos de apoyo), a excepcin de Mn, que mostraron valores
ms altos que los de las estaciones de control de MZ y MAT (Pb0.05) .
Aunque se encontraron concentraciones similares de Ni, Cr, Pb, Ti y Zn
aguas arriba en el control de
Estaciones MZ y AB en comparacin con los sitios aguas abajo, las
concentraciones ms altas

relacin con el control Estacin MAT fueron reportados (Pb0.05). Como se

seal anteriormente, el control de la estacin de prueba se interpret como
ms cercano a las condiciones de referencia. Por lo tanto, como
sospechbamos, la distribucin espacial de la contaminacin por metales se
refleja en las concentraciones de metales Hydropsyche indic que el sitio
slo muestra no afectados por metales era
control de la estacin de MAT. Por el contrario, no se observaron diferencias
significativas en As y Cu entre cualquiera de las estaciones.
3.2. Diferencias interespecficas en concentraciones de metales
bioacumulacin en la misma estacin de muestreo (T) entre los dos
organismos del mismo gremio de alimentacin fueron significativamente
mayores en la mosca de mayo E. virgo que en el frigneas H. exocellata, a
excepcin de Mn (Fig. 4). La mayora de los metales bioacumulado por E.
virgo eran doble
las concentraciones de H. exocellata, pero la diferencia ms marcada se
observ para Cd, con E. virgo valores de un orden de magnitud mayor
(Anexo 4, los datos de apoyo). Por lo tanto, las diferencias de
bioacumulacin de metales entre E. virgo y H. exocellata parecen ser ms
fuertes para el Cd que para otros metales.
3.3. Patrones de bioacumulacin de metales a lo largo de E. crecimiento
ninfa virgo Aunque diferencias estadsticas no se encontraron resultados
para concentraciones de metales en ninfas en diferentes estadios, se
observaron varias tendencias para los metales estudiados. Un patrn estaba
relacionada con el grupo de Hg y Cd, en el que la concentracin media de
metal mostr un aumento constante en
2005 hasta ninfas alcanzaron una longitud corporal medio de 11 mm y la
disminucin despus, cuando su tamao era de 16 mm (Fig. 5). Esto
coincide con el perodo en que los estadios finales estaban a punto de
emerger.
Otro patrn estaba relacionado con Pb, que mostr una disminucin en la
concentracin durante los primeros estadios seguido de un estado de
equilibrio hasta que las ninfas completado su crecimiento. Metales siguiendo
un patrn similar al Pb fueron Cr, Ti y Mn (anexo 5, datos de apoyo). Por
ltimo, valores similares se obtuvieron para Cu, As y Zn lo largo de todos los
estadios de ninfa. Para Ni, hay patrones fueron capaces de deducir desde Ni
no se analiz en 2005.
En los dos eventos de muestreo realizadas en 2006 y 2007, los datos slo
mostr un ligero aumento de Hg y Cd en ninfas en 2007

(0.55 0.06 to 0.73 0.01 g g1 for Hg and 1.35 0.11

to 2.18 0.11 g g1
for Cd), corroborating the pattern observed in 2005, while
in 2006 similar values were observed. In 2006 and 2007,
Cr, Pb, Ti and Mn again showed a concentration decrease
in growing nymphs, and similar values were also obtained
for Ni, As, Cu and Zn.
3.4. Metal bioaccumulation patterns along E. virgo life
cycle stages
When comparing metal concentrations throughout the
different stages of the life cycle, nymphs always had the
highest values (Pb0.05), except for Pb and Cu values,
which were highest in the male moult (Fig. 6). Nymphs
had significantly higher concentrations than eggs for all
metals but Ni (Pb0.001). When emergence occurs,
females and males emerge as subimago (prior stage to
become an adult),
however males moult to an imago (adult) in the shore
vegetation for mating while females mate and ovoposit as
subimago. Therefore, we compared the metal
concentrations from the male moult and the adult male in
order to test the metal lost through moulting. Cd
concentration in adult males was significantly higher than
in moults (Pb0.01), while for Ni, Cr, Pb and Mn, moults
had higher concentrations
than adult males (Pb0.01). No significant differences were
observed for Hg, As, Cu, Ti and Zn, although Hg was near
the significance limit (P= 0.08) to have a higher
concentration in adult males than in the moult.
Sexual differences in metal concentration were tested,
and statistical differences were obtained only for Cu and Mn concentrations,
with higher levels of Cu in adult males than in females (Pb0.05), and higher
concentrations of Mn (Pb0.01) in females than in males.
Although no significant differences in Cd concentration were observed
between adult males and females, females had half the value of males.
Metal concentrations in eggs and in the whole female (including eggs in the
abdomen) were compared and several differences in metal bioaccumulation
were obtained. Hg (Pb0.05), Cd (Pb0.001), Cu (Pb0.001) and Zn (Pb0.01) in
eggs were significantly lower than in
females, while for Cr, Ni, As, Pb, Ti and Mn similar values were obtained.
However, Hg concentrations in eggs were not as low as other metals since
eggs had half the value of adults.
The metal concentrations of nymphs and adults were compared in order to
evaluate whether the risk of metal transfer to higher trophic levels during
emergence was similar to the nymph period. Hg was the only metal showing

adult male and female concentrations similar to nymphs. Adult females had
significantly lower concentrations of Cd than nymphs (Pb0.001), but not
adult males. For the other metals analyzed (Ni, Cr, As, Pb, Ti, Zn and Mn),
nymphs had always greater concentrations than adults (Pb0.05).

4. Discussion
4.1. Distribution of heavy metal pollution

The metal concentrations found in SPM and in macroinvertebrates reflect

the transport of Hg and Cd in the lower Ebro to approximately 60 km
downstream of the Flix dam. The SPM in the Flix Reservoir had very high Hg
and Cd concentrations and their levels were still elevated in SPM samples at
Station M downstream of the Flix dam, exceeding the concentrations at the
upstream Station R (Table 1) and those of
natural unpolluted sediments (see Palanques et al. (1990) for levels of
unpolluted fine sediment transported by the Ebro River). As a result, high Hg
and Cd exposures were detected in macroinvertebrate samples downstream
of Flix, indicating an impact from the reservoir. Ni, Cr and Zn concentrations
in SPM at Station M were also high compared to natural Ebro River
sediments and showed similar

Fig. 3. Concentracin de metales de Hydropsyche en los sitios afectados y

de control (smbolo: medias; caja: SE; bigotes: SD). Para la estacin de
cdigos ver Fig. 1.
concentraciones relativas a la estacin R aguas arriba, lo que indica que la
GDS en la estacin R estaba contaminada con estos metales. Junto con el
hecho de que la exposicin a Cd, Ni, Cr y Zn por los invertebrados no
excedieron los de algunos sitios de control aguas arriba (por ejemplo, la
estacin de MZ), estos resultados confirman que estos metales estn
presentes en muchas partes de la cuenca, derivada de otras actividades
antropognicas (Terrado et al., 2006,
Ramos et al., 1999). As, las concentraciones especficas de sitio en los
organismos indican que el origen de la contaminacin de Hg provena
principalmente de transporte de los residuos slidos de la industria qumica
en Flix, que utiliza Hg como una clula de ctodo en los procesos de
electrlisis, mientras Cd, Cr y Zn vienen tanto de la industria qumica en Flix
(atribuido a la
fosforita utilizado como materia prima) y de aguas arriba.

Aunque se necesitan estudios experimentales para describir los procesos

que implican la bioacumulacin de metales en los insectos acuticos, las
altas concentraciones de Hg y Cd en los organismos y en el SPM sugirieron
que la exposicin de metal en la parte baja ecosistema del ro Ebro se
puede producir a travs de la SPM ingerido transportado aguas abajo de Flix
porque
SPM es la fuente principal de alimentos para estos organismos. Dado que el
hbitat bentnico de E. virgo y H. exocellata no es probable que estn
contaminados, porque las velocidades altas del agua no permiten SPM a
depositar, la hiptesis de que los metales son incorporados desde la SPM
transportado se puede apoyar. Por otra parte, la contaminacin de metales
se ha informado antes en los sedimentos inferiores Ebro y red alimentaria.
En estudios previos de contaminacin de sedimentos (Palanques et al.,
1996;. Grimalt et al, 2003),

Fig. 4. concentracin de metales (mg g-1 DW) de Hydropsyche exocellata. y

Ephoron virgo. Los datos fueron recolectados en el mismo sitio afectado (T)
y el mismo da en 2007. (* ANOVA, Pb0.05; ** ANOVA, Pb0.01; *** ANOVA,
Pb0.001).

Fig. 5. concentracin de metal de Ephoron virgo junto crecimiento ninfa en

la T afectada sitio.

Los valores son medias de 2005 (smbolo: media y las barras: SD).
concentraciones de Hg, Cd, Cr, Ni y Zn en el embalse de Flix superaron a las
de los sedimentos fluviales naturales y algunos metales (principalmente Hg
y Cd) tambin se detectaron aguas abajo en algunas reas de deposicin
del ro. Hg tambin apareci en los moluscos del Delta del Ebro marinas y
algas (Schuhmacher et al., 1993), en las aves que se alimentan de peces
(Maosa et al., 2001), y en los mamferos insectvoros (Snchez-Chardi et
al., 2007).
Recientemente, en el contexto del proyecto, donde se llev a cabo el
presente estudio, se detectaron altas concentraciones de Hg en el mejilln
cebra (Dreissena polymorpha) desde el embalse de Flix (Carrasco et al.,

2008), y los niveles de Hg y Cd en siluro (Silurus glanis) y la carpa (Cyprinus

carpio) mide ms alto aguas abajo de
Flix que (datos no publicados) aguas arriba.
Como, las concentraciones de Pb, Cu, Ti y Mn en SPM fueron similares a las
de los sedimentos no contaminados naturales en todos los sitios de
muestreo, sin mostrar evidencia de contaminacin por metales. Estos
niveles se ajustan a las muestras de sedimentos del embalse de Flix
(Palanques et al., 1996;. Grimalt et al, 2003), en la que las concentraciones
de As y Cu fueron ligeramente ms altos que en los sedimentos naturales y
Pb, Mn y Ti no se considera que est en polucin
los niveles. As y Cu en E. virgo y Hydropsyche refleja estas concentraciones
en SPM y sedimentos ya no se observaron diferencias significativas en
ninguno de los sitios de muestreo. Sin embargo, las altas concentraciones
de Pb, Ti y Mn en los macroinvertebrados aguas abajo de Flix no reflejaban
los del SPM, lo que sugiere que la exposicin podra ser de metales
disueltos, y que estos metales se producen localmente en diferentes puntos
aguas arriba y aguas abajo de Flix. La variabilidad en el Mn
macroinvertebrados podran atribuirse a otras causas, ya que tambin es un
elemento diagenticamente mvil (Van Cappellen y Wang, 1996) y puede
ser afectada por los procesos de oxidacin-reduccin en la parte inferior de
Riba-roja Reservoir.

Al comparar nuestros resultados con otras reas impactadas contaminacin

metlica, Hg concentraciones en todo el cuerpo en E. virgo eran siete veces
ms alta que la concentracin media en Mississippi Ro efmeras Hexagenia
sp. (Ephemeroptera: Ephemeridae) afectados por la contaminacin urbana /
industrial (Beauvais et al., 1995). En contraste, las efmeras y tricpteros del
ro Idrija (Eslovenia) tenan concentraciones muy elevadas de Hg, hasta dos
rdenes de magnitud superiores a las del ro Ebro, debido al grave
contaminacin causada por una mina de mercurio (Zizek et al., 2007) . Cd
concentraciones medias en E. virgo en nuestro estudio fueron mucho ms
altos que en el ro Misisipi Hexagenia sp. (Beauvais et al., 1995).
Sin embargo, en comparacin con los ros impactados metal mineras,
nuestros resultados Cd fueron mucho menores que las que se encuentran
en el ro Tenedor Clark, EE.UU., por las efmeras Epeorus albertae y
Serratella tibial (Cain et al., 2004). Adems, las concentraciones de Cd en
Hydropsyche de los sitios afectados en el Ebro eran mucho ms bajos que
los reportados para Hydropsychids en ros afectadas por minas (Can et al
1992, 2000, 2004;.. Maret et al,
2003; Sola et al., 2004). Hydropsychids del ro Ebro tenan niveles de Zn y
Pb inferiores en comparacin con los de Maret et al. (2003).
Sin embargo, los valores que reportamos estn cerca de los rangos
obtenidos para Hydropsychids de la Clark Tenedor ro contaminado de metal
con la minera (Can et al., 1992) y el ro Sacramento, EE.UU. (Can et al.,
2000), lo que indica un alto nivel de Zn y Pb contaminacin en el Ebro.

4.2. Diferencias interespecficas en la bioacumulacin

Es ampliamente conocido que las diferentes especies que viven y se
alimentan en el mismo hbitat pueden bioacumularse diferentes cantidades
de metal (Luoma y arco iris, 2005), debido a su diferente fisiologa y
mecanismos de desintoxicacin de cationes (Hare, 1992). Varios estudios
experimentales han puesto de manifiesto que las diferentes especies de
macroinvertebrados acuticos tienen diferentes tasas de eliminacin de
metal. Las tasas de eliminacin de alta Cd han sido reportados en especies
tolerantes de metal, como Hydropsyche californica
(Buchwalter et al. 2008) y Hydropsyche betenni (Evans et al. 2002), por lo
que sera de esperar resultados similares para H. exocellata. Por el contrario,
se observaron como bajas tasas de eliminacin en las efmeras sensibles,
como Maccaffertium Ithaca y Rhithrogena morrisoni (Buchwalter et al.,
2008), excrucians Ephemerella (Buchwalter et al. 2007) y H. rigida (Hare et
al 1991), E . virgo podra tener una respuesta similar a los metales. como
explicado por Buchwalter et al. (2008), estas tasas de eliminacin son
filogenticamente relacionadas. Sin embargo, ya que en nuestro estudio de
campo ms de un metal estaba presente y las condiciones ambientales no
fueron controlados, los datos resultantes es ms complejo de interpretar.
Desde dieta es probablemente la va de exposicin predominante para estos
organismos, otros factores determinantes que pueden influir en la
variabilidad bioacumulacin plazo de dos especies del mismo gremio de
alimentacin incluyen la alimentacin tasa, la concentracin y la eficiencia
de asimilacin (Luoma y Fisher, 1997). Por ejemplo, las concentraciones
muy altas de metal han sido reportados en los invertebrados marinos con
tasas de ingestin rpida, alta asimilacin
eficiencias y las tasas de eliminacin lenta (Luoma y arco iris, 2005).
As, cuanto mayor bioacumulacin de metal observ en E. virgo en
comparacin con H. exocellata podra ser un resultado de una
particularmente bajas tasas de eliminacin, de acuerdo a su posicin
phylogenetical, junto con una tasa de alimentacin diferencial. El tamao de
partcula del material ingerido por cada especie, el efecto especfico el
tamao del cuerpo y la absorcin en el intestino (McLachlan, 1996) pueden
haber otros factores a considerar para futuros estudios, junto con el uso de
ms de una especie tolerantes y sensibles en varios sitios de muestreo.
4.3. Patrones especficos de elementos de bioacumulacin en E. virgo
Este estudio mostr tres patrones diferentes de bioacumulacin de metal
como E. ninfas virgo estaban creciendo, dependiendo del metal en cuestin.
En primer lugar, las concentraciones de Hg y Cd aumentaron ligeramente
desde principios de estadios finales, salvo en ninfas a punto de emerger,
cuando el

Fig. 6. concentracin de metal de Ephoron virgo en diferentes etapas de

desarrollo en la zona afectada T. Los valores son medias de 2005, 2006 y
2007 (smbolo: media; caja: SE; bigotes: SD).

concentraciones disminuyeron. El ligero aumento de Hg y Cd en E. virgo

ninfas en desarrollo podra estar relacionada con el sitio de metal de
almacenamiento, el camino de la exposicin y la respuesta fisiolgica a
estos metales.
Estudios sobre la bioacumulacin de metal de la dieta en el mayfly H. rigida
mostraron que Hg, Cd y Zn se encuentran principalmente en los tejidos
intestinales (Hare et al., 1991; Saouter et al, 1993;.. Inza et al, 2001), por lo
un patrn similar se podra esperar en E. virgo. Como se sugiri
anteriormente, si Hg y Cd son ingeridos de SPM, la disminucin en el ltimo
estadio podra ser debido a un cambio en la dieta durante este perodo, es
decir, las ninfas se ingieren
las partculas ms grandes con menores concentraciones de metal en
comparacin con las partculas ingeridas por los primeros estadios, que
podran ser de metal enriquecido, como se describe por Smock (1983). Una
hiptesis es que no hay prdida relevante Hg y Cd produjo en relacin con
instar cambio (muda) porque los metales no estaban presentes en el
exoesqueleto. Por estas razones, la relacin de concentracin "muda
subimago macho / macho imago" se utiliza como un indicador de metal de
perdida por la muda. Se espera que cerca de Ratios cero cuando se produjo
ninguna prdida de metal a travs de exoesqueleto. La muda masculina
menor ratio / hombre se obtuvo para Cd, seguido de Hg (Tabla 2). La menor
concentracin de estos metales exhibido en el
Muda subimago sugiere que la mayora de Hg y Cd en E. virgo era presentes
internamente (componentes de la tripa).
En segundo lugar, las concentraciones de Cr, Pb, Ti y Mn en ninfas tendieron
a disminuir con el tamao del organismo, como tambin se observ en las
efmeras Stenodesma modestum y S. interpunctatum para Cr (Smock,
1983), lo que sugiere que estos metales pueden estar presentes en el
exoesqueleto y en consecuencia pierde en cada muda instar. En nuestro
estudio debemos tener en cuenta que la concentracin de Cr estaba
sobrevalorado en comparacin con el material de referencia, sin embargo, a
pesar de que las concentraciones medidas estn sobrevaloradas, los
patrones de bioacumulacin como ninfas crecen tambin pueden ser
comparados. Cr, Pb, Ti y Mn se asociaron con una relacin de muda
subimago macho / macho imago mayor que 2 (Tabla 2), lo que significa que
la concentracin de estos metales fue mucho mayor en
la muda que en el varn adulto. Esta relacin proporciona evidencia de
prdida de metal a travs de exoesqueleto, al menos en el paso de
subimago a imago. Algunos estudios sobre el crecimiento efmera y la
bioacumulacin de metales sugieren que el cambio instar podra estar
involucrado en el proceso de descontaminacin (Jop y Wojtan, 1982; Smock,
1983; Jop, 1991), aunque esto depender de que el metal analizado y la va
de exposicin (dieta o solucin). La adsorcin de metales al exoesqueleto
tambin se ha informado anteriormente en efmeras, si el metal se disolvi
en agua, como Cr (Smock, 1983), o en los sedimentos, como Pb (Hare et al.,
1991). Tambin hay evidencia de que las vas estn presentes para mover
metales bioacumulables en el exoesqueleto para que los insectos a

utilizar los metales en sus herramientas cuticulares (Schofield et al., 2003).

Por lo tanto, existe variabilidad en la forma en que los metales pueden ser
transferidos a la exoesqueleto en E. virgo, dependiendo de la ruta de la
exposicin y los procesos internos durante el desarrollo.
Por ltimo, Ni, As, Cu y Zn mostraron valores similares para los diferentes
estadios de ninfa y no hay patrones claros podran describirse. Cu y Zn
tenan un subimago macho muda / imago proporcin de hombres a cerca de
1, lo que sugiere que estos metales pueden acumulan parcialmente en el
exoesqueleto sino tambin estar presente en otras partes del cuerpo. Sin
embargo, Ni pareca estar
ubicados principalmente en el exoesqueleto porque se observaron valores
ms altos en la muda que en el masculino (relacin = 4 muda subimago
masculino / imago macho).
Dado que este estudio se realiz en condiciones de campo, debemos tener
en cuenta la variacin atribuida a la SPM liberada del embalse de Flix, ya
que el SPM disponible depende de la fraccin que se escapa del depsito y
la dilucin y dispersin de aguas abajo. En otras palabras, la cantidad de
metal disponible en cada momento, mientras ninfas estn creciendo puede
afectar nuestros resultados. Por esta razn, se necesitan ms estudios en
condiciones controladas de laboratorio para describir con ms detalle los
patrones de bioacumulacin durante el crecimiento virgo E..

4.4. Variabilidad sexual de E. virgo adultos emergentes de bioacumulacin

Diferencias sexuales en Hg y Cd bioacumulacin en las efmeras
emergentes han sido descritos por Dukerschein et al. (1992). Sealaron que
las bajas concentraciones encontradas en las mujeres puede ser debido a
las grandes masas de huevos que contribuyen a la dilucin de la
concentracin de metal, lo que implica que la concentracin en los huevos
debe ser
muy bajo en comparacin con las mujeres. Esto significa que las hembras
apenas transfieren los metales a los huevos y que los huevos pueden ser un
compartimiento protegido que no est en equilibrio con las concentraciones
de metal en el cuerpo femenino. En nuestro estudio, la relacin hembra
huevo / subimago se utiliz como indicador de la contribucin de huevo a la
dilucin hembra adulta de los metales. En general, cuanto menor sea la
relacin, mayor debe ser la dilucin por los huevos.
En el presente estudio, la variabilidad sexual en la bioacumulacin slo se
consider para Cu, Mn y Cd. Las bajas concentraciones de Cd en las
hembras podran explicarse por el huevo / mujer subimago muy baja (Tabla
2), lo que indica una posible dilucin de los huevos. La baja concentracin
de Cu en las mujeres puede ser parcialmente atribuido a la dilucin de
huevo desde Cu
Tena una relacin de 10 veces mayor que Cd. Sin embargo, las diferencias
sexuales en la bioacumulacin tambin pueden ser causados por otros
factores, como un proceso diferencial muda. Teniendo en cuenta la biologa

de E. virgo, en el que las hembras emergen como subimagos y machos

como imagos, los machos podran haber perdido metales por su ltima
muda cuando el metal se encuentra principalmente en el exoesqueleto y
tienen menores concentraciones finales que las mujeres (por ejemplo, en las
concentraciones de Mn ).

4.5. Otras implicaciones ecolgicas relacionadas con el ciclo de vida de E.

virgo y
bioacumulacin de metales
E. virgo tiene un ciclo de vida sincronizada (Kureck y Fontes., 1996; Cid et al
2008) y las emergencias masivas se producen durante el verano en la parte
baja del ro Ebro. Cuando esto ocurre, la cantidad de biomasa que est
presente en el sedimento emerge y se convierte fcilmente disponible para
niveles trficos superiores, incluyendo depredadores que viven en el ro o en
los ecosistemas de ribera y terrestres. Dado que las concentraciones de Hg
y Cd en emergentes
adultos fueron similares a los de las ninfas, la exposicin a estos metales a
travs de los insectvoros que se alimentan de los adultos (como peces,
anfibios, murcilagos, etc.) podra ser importante durante el corto perodo
de emergencia E. virgo, como se ha visto en otros estudios de insectos
emergentes (Dukerschein et al., 1992; Currie et al, 1997).. Otros metales
que pueden ser un riesgo en el menor ecosistema Ebro debido a las altas
concentraciones encontradas en ninfas (Ni,
Cr, Pb, Ti y Zn) tenan concentraciones de metales adultos mucho ms bajas
que las ninfas, por lo que la exposicin a estos metales durante la
emergencia seran menores.

Hg y Ni presentar un riesgo mayor que otros metales debido a su

persistencia en E. virgo huevos, ya que la prxima generacin podra tener
una concentracin inicial originado por la transferencia de la madre y los
metales podra ser acumulado durante generaciones, segn ha informado a
los contaminantes orgnicos (Standley et al., 1994). La importancia de este
metal
la contaminacin de los huevos en relacin con el xito de eclosin no se
conoce, aunque los estudios comparativos sobre el ciclo de vida de esta
especie en el rea de estudio (Cid et al., 2008) no detectaron grandes
diferencias en sus abundancias poblacionales. Esta variabilidad en la
dinmica de metal descritos en todo el ciclo de vida tiene consecuencias
importantes para la ruta de transferencia de cadena alimentaria de los
metales en los ecosistemas acuticos, ya que no slo la
ninfas pueden llevar a los metales a niveles trficos superiores.

Tabla 2

"Huevo / mujer subimago" y "subimago macho muda / imago masculinas"

relaciones de media
valores de concentracin de metales en Ephoron virgo.

5. Conclusiones
Las altas concentraciones de metales que se encuentran en SPM y en los
insectos acuticos reflejan el transporte de Hg y Cd en la parte baja del ro
Ebro a unos 60 km aguas abajo de la industria qumica de Flix y sugirieron
que una va de transferencia de metal a travs de la SPM se ingiere puede
ocurrir desde SPM es el principal suministro de alimentos de estos
filtradores. Mientras que la contaminacin de Hg se origin principalmente
en la planta qumica, los otros metales
analizados mostraron entradas aguas arriba de otras partes de la cuenca.
Diferencias interespecficas en la bioacumulacin se demostraron por las
concentraciones de los metales bioacumulado por E. virgo en comparacin
con H. exocellata, lo que sugiere que la tasa de alimentacin rpida y mala
eliminacin de metal de E. virgo podran ser las principales razones. El
anlisis de hasta 10 elementos a la vez y el anlisis a lo largo
el ciclo de vida de un insecto acutico ilustra la alta variabilidad de la
dinmica de metal, que podran estar relacionados con la va de exposicin,
el sitio de metal de almacenamiento y los procesos internos durante el
desarrollo. Con esto en mente, se necesitan ms estudios experimentales en
condiciones controladas para describir con mayor precisin los patrones de
bioacumulacin durante el crecimiento. Sin embargo, este estudio confirma
que la evaluacin de la presencia de metales en diferentes etapas del ciclo
de vida demuestra el aumento de la complejidad de las vas en el anlisis de
la transferencia de la cadena alimentaria de los metales en los ecosistemas
fluviales.