BIOLO

GIA
CELUL
AR Y
MOLEC
ULAR

TEMA:
EXTRACCIN DE ADN

INTEGRANTES:

ROSA
VILLODAS
BASILIO
ROMERO

CORDOVA
PAPUICO

PROFESOR:

RAFAEL ALVIS

FECHA:

JUEVES: 8:10 10:00 AM

2014 - I
1. Introduccin
Con el fin de aprender la extraccin de ADN, tema de este informe,
realizaremos pasos que nos ayuden a catalizar las clulas en su ms mnima
A. Marco
parte.Terico
Con el uso de un Kit de extraccin de ADN y la presencia de clulas
animales nucleadas (leucocitos) obtendremos los siguientes resultados para
el propsito de este informe.

B. Objetivos
Extraer ADN a partir de muestras biolgicas.
Realizar una comparacin entre dos tcnicas de aislamiento de DNA.

2. Procedimiento experimental
Materiales
Extraccin del ADN

Kit de extraccin de ADN

Micro pipetas de 20 100, 100 1000 uL
Puntas de 10 100 uL y de 100 1000 uL
Tubos ependof de 1,5mL
Microcentrfuga 16000 rpm
Vortex

Procedimiento
Extraccin de ADN de sangre total:

1. Se utiliz un tubo ependorff en el cual se le adicion 20 uL de sangre fresca de

nuestro compaero.
2. Se transfiri la muestra de sangre a un tubo que contena 20 uL de proteinasa K.
3. Se aadi 20 uL de Rnasa a la muestra, sometindola despus a un Vortex por 15
segundos y se incubo a temperatura ambiente durante 2 minutos.
4. Se aadi 100 uL de Buffer Lisis y se volvi a homogenizar en el Vortex durante
15 segundos.
5. Se incub a 55C durante 10 minutos.
6. Se aadi 100 uL de etanol 96-100%. Mezclndolo en el Vortex durante 15
segundos.
7. Finalmente, se incubo la lisis durante 5 minutos a temperatura ambiente.

Proceso de purificacin:
1. Se coloc la lisis (260 uL) en la columna de extraccin.
2. Centrifugando la columna a 8500 rpm por 1 minuto, se descart el filtrado por la
columna y se coloc la columna en un nuevo tubo de lavado.
3. Se lav la columna con 200 uL de buffer de lavado, se centrifug a 8500 rpm
por 1 min y luego se elimin el filtro.

4. Se coloc la columna en un nuevo tubo de lavado, adicionando 200 uL de buffer

de lavado y centrifugando la columna a velocidad mxima por 3 minutos para
poder filtrar cualquier residuo del buffer de lavado.
5. Se coloc la columna en un nuevo tubo de recoleccin (1,5ml).
6. Se aadi 100 uL de Buffer de elucin a la columna.
7. Se incub a temperatura ambiente durante 1 minuto. Centrifugando la columna a
velocidad mxima durante 1 minuto a temperatura ambiente.
8. Para recuperar ADN, se realiz una segunda etapa de elucin utilizando el
mismo volumen de buffer de elucin (opcional).
9. Se incub a temperatura ambiente por 1 minuto. Centrifugando a velocidad
mxima durante 1 minuto.
10. Finalmente se obtuvo el tubo que contena el ADN genmico purificado y se
almacen a -80C para otras aplicaciones.

Resultados:

Primero se observ como el Vortex produca un cambio de color a la muestra, despus

de agregarle buffer lisis, por su alto movimiento de agitacin.
Segundo, se observ como a la muestra le introducan etanol y lo dejaban incubar.
Tercero, se centrifug el ADN y se llev al enfriamiento.
Cuarto, se confirm la presencia de ADN cuantificndolo en un espectrofotmetro.

4. Anlisis y discusin de los resultados

-

Primero, la celula al ser reaccionada por la Proteinasa K , hace que se degraden

las protenas de las cuales podran degradar el ADN e incluso facilita la funcin
de lisis. El Rnasa es una enzima que solo degrada el ARN para separar el ADN y
ser ms simple la muestra. Finalmente el buffer de lisis tipo 2 , est
especializado en degradar todos los tejidos de la clula incluyendo la membrana
celular.
El etanol tiene la propiedad de limpiar o en este caso precipitar limpiando el
ADN de otras biomolculas. Lo deshidrata y lo asla de las impurezas.
El ADN aislado de las impurezas es centrifugado varias veces para ser separada
su sedimentacin y as obtener la muestra, despus se lleva a un refrigerante para
mantenerlo a salvo.
En la cuantificacin de ADN por cada grupo se observ que existan distintas
cantidades, esto es debido a dos posibles causas:
1. Los fluidos que segregamos que pueden o pudieron entrar en contacto con el
ADN y son degradadores de esta misma ADNasas.
2. La cantidad de leucocitos por muestra, en algunas pudo ser mayor y en otras
menor.
Lo ms probable es la segunda, porque se trat de evitar el mas mnimo contacto
con los fluidos segregados por nuestra piel.

5. Conclusiones
-En la extraccin de sangre, se lleg a la conclusin que para poder separar las muestras de
ADN, primero se debe de aislar de todo tipo de amenazas e incluso limpiar y discriminar
selectivamente al cido nucleico.

-Se reconoci el uso detallado de los degradadores y separadores biomoleculares, y su

beneficio para este experimento.
- Se lleg a la conclusin de entender los motivos por el cual en una extraccin de ADN
existen problemas en la cantidad elaborada.
6. Referencias usadas
Gerald Karp. Biologa Celular y Molecular. Mxico, 2009.
De Robertis E. Biologa Celular y Molecular. 15. Ed. Buenos Aires; El ateneo. 2012.
Alberts B. y Johnson A. Biologa Molecular de la Clula. 5ta. Ed. Barcelona; Omega.
2010.