Lecturas suplementarias

Preguntas para razonar y repasar

1. Por qu podra ser deseable para un
microorganismo que tiene la va de
Embden-Meyerhof y el ciclo de los ATC
poseer tambin la va de las pentosas
fosfato?
2. Qu ventaja supondra para un
microorganismo tener una cadena
transportadora de electrones y la
fosforilacin oxidativa?
3. Describa dos formas en que un
microorganismo puede continuar
produciendo energa cuando no dispone
deO2.
4. Por qu supondra un derroche para los
microorganismos anaerobios operar el ciclo
completo de los ATC?
5. En qu se diferencian la fosforilacin a nivel
de sustrato y la fosforilacin oxidativa?
6. Pueden usarse los productos de la
fermentacin para identificar bacterias? En
caso afirmativo, indique algunos ejemplos.

7. Describa qu le sucedera al metabolismo

microbiano si se inhibiera la enzima lactato
deshidrogenasa en un microorganismo
fermentador homolctico que crece de forma
anaerobia en un medio que contiene glucosa
como fuente de carbono. Qu efectos
tendra un inhibidor de la ATP sintetasa sobre
un microorganismo con respiracin aerobia?
Y un desacoplante?

217

Cuestiones para reflexionar

1. Sin consultar el Captulo 21, prediga algunas
condiciones que describiran habitat
ocupados por bacterias fotosintticas verdes
y prpuras.
2. Discuta, desde una perspectiva evolutiva, por
qu los microorganismos (con raras
excepciones) utilizan la respiracin aerobia
para generar ATP.

8. Cmo aislara un quimiolitotrofo termfilo

que utiliza compuestos de azufre como fuente
de electrones? Qu cambios se necesitaran
en el sistema de incubacin para aislar
bacterias que utilizan compuestos de azufre
en la respiracin anaerobia? Cmo puede
saberse qu proceso est teniendo lugar
mediante un anlisis de las molculas de
azufre presentes en el medio?
9. Supongamos que has aislado una cepa
bacteriana que realiza la fotosntesis oxignica.
Qu fotosistemas poseera y a qu grupo de
bacterias podra pertenecer dicha cepa?

Lecturas suplementarias
General
Caldwell, D. R. 2000. Microbial physiology and
metabolism, 2d ed. Belmont, Calif.: Star
Publishing. Cramer, W. A., and Knaff, D. B.
1991. Energy
transduction in biolgica! membranes. A
textbook ofbioenergtica. New York:
SpringerVerlag. Dawes, E. A. 1986. Microbial
energetics. New York:
Chapman. Dawes, I. W., and Sutherland, I. W.
1992. Microbial
physiology, 2d ed. London: Blackwell Scientific
Publications. Ferguson, S. J. 2000. Energy
transduction processes:
From respiration to photosynthesis. In
Encyclopedia of microbiology, 2d ed., vol. 2,
J. Lederberg, editor-in-chief, 177-86. San Diego:
Academic Press. Garrett, R. H., and
Grishman, C. M. 1999.
Biochemistry, 2d ed. New York: Saunders.
Gottschalk, G. 1986. Bacterial metabolism, 2d ed.
New York: Springcr-Verlag. Jones, C. W.
1982. Bacterial respiration and
photosynthesis. Washington, D.C.: American
Society for Microbiology. Mandelstam, J.;
McQuillen, K.; and Dawes, I. 1982.
Biochemistry of bacterial growth, 3d ed.
London: Blackwell Scientific Publications.
Mathews, C. K., and van Holde, K. E. 1996.
Biochemistry, 2d ed. Redwood City, Calif.:
Benjamin/Cummings. Miles, R. J. 1992.
Catabolism in mollicutes. /. Gen.
Microbio!. 138:1773-83. Moat, A. G., and
Foster, J. W. 1995. Microbial
physiology, 3d ed. New York: John Wiley and
Sons. Neidhardt, F. C; Ingraham, J. L.; and
Schaechter, M.
1990. Physiology ofthe bacterial cell: A
molecular approach. Sunderland, Mass.: Sinauer
Associates. Neidhardt, F. C, editor-in-chief.
1996. Escherichia
col i and Salmonella: Cellular and molecular

biology, 2d ed., vol. 1. Washington, D.C.: ASM

Press. Nicholls, D. G., and Ferguson, S.
J. 1992.
Bioenergetics, 2d ed. San Diego: Academic
Press. Voet, D., and Voet, J. G. 1995.
Biochemistry, 2d ed.
New York: John Wiley and Sons. White, D.
1995. The physiology and biochemistry of
prokaryotcs. New York: Oxford University
Press. Zubay, G. 1998. Biochemistry, 4th ed.
Dubuque,
Iowa: WCB/McGraw-Hill.

9.5 Transporte de electrones' y

fosforilacin oxidativa
Anraku, Y. 1988. Bacterial electrn transport chains.
Annu. Rev. Biochem. 57:101-32. Baker,
S. C; Ferguson, S. J.; Ludwig, B.;
Page, M. D.; Richter, O.-M. H.; and
van Spanning, R. J. M. 1998. Molecular
genetics ofthe genus Paracoccus:
Metabolically versatile bacteria with
bioenergetic exibility. Microbiol. Mol. Biol.
Rev. 62(4): 1046-78. Boyer, P. D. 1997. The ATP
synthaseA splendid
molecular machine. Annu. Rev. Biochem.
66:717-49. Capaldi, R. A.; Aggeler, R.;
Turina, P; and
Wilkens, S. 1994. Coupling between
catalytic sites and the protn channel in
F,F0-type ATPases. Trends Biochem. Sci.
19:284-89. Deckers-Hebestreit, G., and
Altendorf, K. 1996. The
FoFi-type ATP synthases of bacteria: Structure
and function of the Fn complex. Annu. Rev.
Microbiol. 50:791-824. Grant, W. D. 1987. The
enigma ofthe alkaliphile.
Microbiol. Sci. 4(8):251-55. Hatefi, Y.
1985. The mitochondrial electrn
transport and oxidative phosphorylation system.
Annu. Rev. Biochem. 54:1015-69.

Ingledew, W. J., and Poole, R. K. 1984. The

respiratory chains of Escherichia coli.
Microbiol. Rev. 48(3):222-71.
Kinosita, Jr., K.; Yasuda, R.; Noji, H.; Tshiwata, S.;
and Yoshida, M. 1998. F,-ATPase: A rotary
motor made of a single molecule. Cell 93:21-4.
Poole, R. K. 2000. Aerobic respiration:
Oxidases and globins. In Encyclopedia of
microbiology, 2d ed., vol. 1, J. Lederberg,
editor-in-chief, 53-68. San Diego: Academic
Press.
Saraste, M. 1999. Oxidative phosphorylation at the
fin de sicle. Science 283:1488-93.
Trumpower, B. L., and Gennis, R. B. 1994. Energy
transduction by cytochrome complexes in
mitochondrial and bacterial respiration: The
enzymology of coupling electrn transfer
reactions to transmembrane protn
translocation. Annu. Rev. Biochem. 63:675-716.
Zhou, Y; Duncan, T. M.; and Cross, R. L. 1997.
Subunit rotation in Escherichia coli F0F|-ATP
synthase during oxidative phosphorylation.
Proc. Nati. Acad. Sci. 94:10583-87.

9.6 Respiracin anaerobia

Ferguson, S. J. 1987. Denitrification: A question
of the control and organization of electrn and
ion transport. Trends Biochem. Sci.
12(9):354-57. Gunsalus, R. P. 2000. Anaerobic
respiration. In
Encyclopedia of microbiology, 2d ed., vol. 1,
J. Lederberg, editor-in-chief, 180-88. San Diego:
Academic Press. Hochstein, L. I., and
Tomlinson, G. A. 1988. The
enzymes associated with denitrification. Annu.
Rev. Microbiol. 42:231-61. Lovley, D. R. 1993.
Dissimilatory metal reduction.
Annu. Rev. Microbiol. 47:263-90.

218

Captulo 9 Metabolismo: liberacin y conservacin de la energa

Postgate, J. R. 1984. The sulphate-reducing

bacteria, 2d ed. New York: Cambridge
University Press. Zumft, W. G. 1993. The
biological role of nitric
oxide in bacteria. Arch. Microbio!.
160:253-64.

9.7 Catabolismo de hidratos

de carbono y polmeros de reserva
intracelulares
Warren, R. A. J. 1996. Microbial hydrolysis of
polysaccharides. Amni. Rev. Microbio!.
50:183-212.

9.10 Oxidacin de molculas

inorgnicas
Friedrich, B., and Schwartz, E. 1993. Molecular
biology of hydrogen utilization in aerobic

chemolithotrophs. Annu. Rev. Microbiol.

47:351-83. Kelly, D. P. 1985. Physiology of
the fhiobacilli:
Elucidating the sulphur oxidation pathway.
Microbiol. Sci. 2(4): 105-9. Smith,
A. J., and Hoare, D. S. 1977.
Specialist phototrophs, lithotrophs, and
methylotrophs: A unity among a diversity
of procaryotes? Bacterial. Rev. 41(1):
419-48.

9.11

Fotosntesis

Deisenhofer, J.; Michel, H.; and Huber, R. 1985.

The structural basis of photosynthetic light
reactions in bacteria. Trends Biochem. Sci.
10(6):243-48. Govindjee, and Coleman, W. J.
1990. How plants
make oxygen. Sci. Am. 262(2):50-58.

Grossman, A. R.; Schaefer, M. R.; Chiang, G. G.:

and Collier, J. L. 1993. The phycobilisome, a
light-harvesting complex rcsponsive to
environmental conditions. Microbiol. Rev.
57(3):725-49.
Quayle, J. R., and Ferenci, T. 1978. Evolutionary
aspects of autotrophy. Microbiol. Rev.
42(2):251-73.
Schlegel, H. G., and Bowien, B., editors. 1989.
Autotrophic bacteria. Madison, Wis.: Science
Tech Publishers.
Staehelin, L. A., and Arntzen, C. 1, editors. 1986.
Photosynthesis III: Photosynthetic membranes
and light harvesting systems. Encyclopedia of
plantphysiology. New Series, vol. 19. New
York: Springer-Verlag.
Youvan, D. C, and Marrs, B. L. 1987. Molecular
mechanisms of photosynthesis. Sci. Am.
256(6):42-48.

CAPITULO

10

Metabolismo:
uso de la energa en
la biosntesis

Las subunidades ferroproteicas de la

nitrogenasa estn
organizadas como un par
de alas de mariposa. La
nitrogenasa est
conformada por Feprotenas y Moprotenas; es quien
cataliza la reduccin del
nitrgeno atmosfrico en
el proceso de fijacin del
nitrgeno.

ndice
10.1
10.2

Principios que regulan

la biosntesis 220
Fijacin fotosinttica
delCO 2 223

10.5
10.6
10.7

Fase de carboxilacin 223

Fase de reduccin 223
Fase de regeneracin 223

10.3
10.4

Sntesis de azcares y
polisacridos 224
Asimilacin de fsforo,
azufre y nitrgeno
inorgnicos 225
Asimilacin de fsforo 225
Asimilacin de azufre 226
Asimilacin de
-.
nitrgeno 226 Fijacin
de nitrgeno 228

Sntesis de aminocidos 230

Reacciones
anaplerticas 230
Sntesis de purinas,
pirimidinas y
nucletidos 232
Biosntesis de purina 233
Biosntesis de pirimidina 234

10.8
10.9

Sntesis de lpidos 234

Sntesis del
peptidoglicano 237
10.10 Patrones de formacin
de la pared celular 239

Captulo 10 Metabolismo: uso de la energa en la biosntesis

220
Ejemplos

Conceptos
1. En el anabolismo, o biosntesis, las clulas utilizan energa libre para
construir molculas y estructuras ms complejas a partir de precursores ms
pequeos y sencillos.
2. Las vas biosintlicas estn organizadas para optimizar la eficacia
conservando la energa y las materias primas biosintticas.
3. Los autotrofos utilizan ATP y NADPH procedentes de la fotosntesis o de la
oxidacin de molculas inorgnicas para reducir el CO2 e incorporarlo a la
materia orgnica.
4. Las rutas catablicas y anablicas pueden diferenciarse en las enzimas, la
regulacin, la local izacin intracelular y el uso de cofactores y
transportadores nuclesido difosfato. Aunque muchas enzimas de las rutas
anfiblicas participan en el catabolismo y en el anabolismo, algunas enzimas
slo participan en uno de los dos procesos.
5. El fsforo, en forma de fosfato, puede asimilarse directamente, en tanto que
los compuestos de azufre y de nitrgeno inorgnicos a menudo tienen que
reducirse antes de su incorporacin a la materia orgnica.
6. El ciclo de los cidos tricarboxlicos (ATC) acta como una ruta anfiblica y
necesita reacciones anaplerticas para mantener niveles suficientes de los
productos intermedios del ciclo.

Bacterias
Algas
Hongos
Protozoos
Ncleos
Mitocondrias
Ribosomas
Flagelos
Membranas Complejos
enzimticos

cidos nucleicos
Protenas
Polisacridos
Lpidos

7. La mayora de las enzimas glucolticas participan tanto en la sntesis como

en el catabolismo de la glucosa. Por el contrario, los cidos grasos se
sintetizan a partir de acetil-CoA y malonil-CoA mediante una va bastante
diferente a la de la p-oxidacin de los cidos grasos.

Nucletidos
Aminocidos
Azcares cidos
grasos

8. La sntesis de peptidoglicanos es un proceso complejo de varios pasos que se

inicia en el citoplasma y se completa en la pared celular, despus de que la
unidad de repeticin del peptidoglicano ha sido transportada a travs de la
membrana plasmtica.

CCv NH3, H2O, PO4 "

Las estructuras biolgicas casi siempre se construyen de una

forma jerrquica, con subensamblajcs que actan como
productos intermedios importantes en la transicin entre
molculas inicales sencillas y los productos finales de los
organillos, las clulas y los organismos.
W. M. Bccker y D. W. Deamer.

^al y como qued claro en el ltimo captulo, los

microorganismos pueden obtener energa de muchas
formas. Gran parte de esta energa se utiliza en la biosntesis
o anabolismo. Durante la biosntesis, un microorganismo
parte de precursores sencillos, tales como molculas y
monmeros inorgnicos, y construye molculas cada vez
ms complejas hasta que surgen orgnulos y clulas
nuevas (Figura 10.1). Una clula microbiana tiene que
fabricar muchos tipos diferentes de molculas; sin embargo,
slo es posible analizar la sntesis de los tipos ms importantes de los componentes celulares.
Este captulo se inicia con una introduccin general al
anabolismo y, a continuacin, se centra en la sntesis de
hidratos de carbono, aminocidos, purinas y pirimidinas, y
lpidos. Tambin describe la asimilacin de CO2, fsforo,
azufre y nitrgeno. El captulo finaliza con una seccin
dedicada a la sntesis de peptidoglicanos y de las paredes
celulares bacterianas. La sntesis de protenas y de cidos
nucleicos es tan importante y compleja que se describe de
forma separada en los Captulos 11 y 12.

Figura 10.1 Construccin de las clulas. Biosntesis de los

componentes de las clulas procariotas y eucariotas. La biosntesis est
organizada en niveles cada vez ms complejos.

Dado que el anabolismo consiste en la creacin de orden y

que una clula est muy ordenada y es enormemente compleja, la biosntesis requiere una gran cantidad de energa. Esto
se pone en seguida de manifiesto al valorar la capacidad biosinttica de Escherichia coli, cuyo crecimiento es rpido
(Tabla 10.1). Aunque la mayor parte del ATP dedicado a la
biosntesis se utiliza en la sntesis de protenas, el ATP tambin se emplea para fabricar otros componentes celulares.
La biosntesis en las clulas maduras de tamao constante
requiere energa libre, ya que las molculas celulares se
degradan y se sintetizan de nuevo continuamente, en un proceso conocido como recambio. Las clulas estn cambiando
constantemente. A pesar del recambio continuo de los componentes celulares, el metabolismo est regulado de manera
estricta con el fin de que las tasas de biosntesis y de catabolismo estn aproximadamente equilibradas. Adems de la
energa gastada en el recambio de molculas, muchas clulas
que no se encuentran en fase de crecimiento tambin utilizan
energa para sintetizar enzimas y otras sustancias para liberarlas a su entorno. Regulacin del metabolismo (Captulos 8 y 12).

10.1 Principios que regulan la biosntesis

El metabolismo biosinttico parace seguir ciertos patrones o
estar basado en unos pocos principios generales. Seis de
estos principios se discuten brevemente a continuacin:

10.1 Principios que regulan la biosntesis

221

Datos obtenidos de Bioenergetics, Albert Lehninger. Copyright 1971 de Benjamin/Cummings Publishing Company. Reimpreso con permiso.
Estimaciones para una clula con un volumen de 2.25 |im\ un peso total de 1 x 1(TU g, un peso seco de 2.5 x 1(T'3 g, y un ciclo de divisin celular de 20 minutos. h Debe
sealarse que las bacterias pueden contener mltiples copias de su DNA genmico.

1. Una clula microbiana contiene grandes cantidades de

protenas, cidos nucleicos y polisacridos, las cuales
son macromolculas o molculas de gran tamao,
polmeros de unidades ms pequeas unidas entre s. La
construccin de molculas grandes y complejas a partir
de unidades estructurales sencillas o monmeros
economiza una gran cantidad de capacidad de
almacenamiento gentico, materias primas biosintticas
y energa. Sirva como ejemplo el estudio de la sntesis
de protenas. Las protenas, con independencia de su
tamao, forma o funcin, estn constituidas por slo 20
aminocidos comunes unidos mediante enlaces
peptdicos (vase el Apndice I). Las distintas protenas,
simplemente tienen secuencias diferentes de
aminocidos, pero no aminocidos nuevos ni diferentes.
Supongamos que las protenas estuvieran formadas por
40 aminocidos distintos en lugar de 20; en ese caso, la
clula necesitara enzimas para fabricar el doble de
aminocidos (o tendra que obtener los dems
aminocidos de su dieta). Seran necesarios genes para
tales enzimas y la clula tendra que invertir materias
primas y energa en la sntesis de estos genes, enzimas y
aminocidos adicionales. Evidentemente, la utilizacin
de unos pocos monmeros unidos entre s por un nico
tipo de enlace covalente hace que la sntesis de
macromolculas sea un proceso muy eficaz. Casi todas
las estructuras celulares estn construidas
principalmente por unos 30 precursores pequeos.
2. A menudo, la clula economiza materias y energa
adicionales mediante la utilizacin de muchas de las
mismas enzimas para el catabolismo y el anabolismo.
Por ejemplo, la mayora de las enzimas glucolticas
participan en la sntesis y en la degradacin de la
glucosa.
3. Aunque muchas enzimas de las rutas antiblicas {vase
la seccin 9.1) participan en actividades catablicas y
anablicas, algunos pasos estn catalizados por dos
enzimas diferentes. Una enzima cataliza la reaccin en la
direccin cataltica y la otra invierte esta transformacin
(Figura 10.2). De este modo, las vas catablica y

anablica nunca son idnticas, aunque comparten muchas

enzimas. El uso de enzimas distintas para las dos
direcciones de un paso permite regular de forma
independiente el catabolismo y el anabolismo. Aunque
esto se trata con ms detalle en las secciones 8.7-8.9,
obsrvese que la regulacin del anabolismo es algo
diferente de la del catabolismo. Las dos vas pueden estar
reguladas por sus productos finales as como por la
concentracin de ATP, ADP, AMP y NAD+. No obstante,
la regulacin por el producto final generalmente tiene
ms importancia en las vas anablicas.

Figura 10.2 Una hipottica va biosinttica. Las rutas que conectan

G con X, Y y Z son exclusivamente anablicas, ya que slo se utilizan
para la sntesis de los productos finales. La va de A a G es anfiblica,
es decir, tiene funciones catablica y anablica. La mayora de las
reacciones se utilizan con ambas funciones; sin embargo, la
interconversin de C y D est catalizada por dos enzimas diferentes, E,
(catablica) y E2 (anablica).

222

Captulo 10 Metabolismo: uso de la energa en la biosntesis

4. Para sintetizar molculas de forma eficaz, las vas

anablicas deben operar de forma irreversible en la
direccin de la biosntesis. Las clulas pueden lograr
esto conectando algunas reacciones biosintticas a la
degradacin del ATP y de otros nuclesidos trifosfato.
Cuando estos dos procesos se acoplan, la energa libre
que queda disponible durante la degradacin del
nuclesido trifosfato impulsa la reaccin biosinttica
hasta su conclusin (vanse las secciones 8.3 y 8.4).
5. En los organismos eucariticos, las rutas biosintticas se
localizan a menudo en compartimientos celulares
distintos de los compartimientos de las rutas catablicas
correspondientes (Recuadro 10.1). Por ejemplo, la
sntesis de cidos grasos se produce en la matriz
citoplasmtica, en tanto que la oxidacin de los mismos
tiene lugar en el interior de la mitocondria. La
compartimentacin facilita que las rutas acten
simultneamente pero de manera independiente.
6. Por ltimo, las rutas anablica y catablica a menudo
utilizan cofactores diferentes. Las oxidaciones
catablicas suelen producir NADH, un sustrato del
transporte de electrones. Por el contrario, si durante la
biosntesis se necesita un reductor, el dador suele ser

NADPH en lugar de NADH. Un segundo ejemplo lo

proporciona el metabolismo de los cidos grasos. Las
molculas de acil(graso)-CoA se oxidan para generar
energa, mientras que la sntesis de cidos grasos requiere
tiosteres de protenas transportadoras de acilo (p. 236).
Una vez construidas las macromolculas a partir de precursores sencillos, se ensamblan en estructuras ms grandes
y complejas, tales como sistemas supramoleculares y orgnulos (Figura 10.1). Las macromolculas habitualmente
contienen la informacin necesaria para formarse de manera
espontnea en un proceso conocido como autoensamblaje.
Por ejemplo, aunque los ribosomas son grandes estructuras
ensambladas compuestas de muchas molculas de protenas
y de cido ribonucleico, se originan por el autoensamblaje
de sus componentes sin la participacin de factores adicionales.

1. Defina biosntesis o anabolismo, y recambio.

2. Enumere seis principios por los que se organizan las vas
biosintticas.

Identificacin de rutas anablicas

xisten tres formas de abordar el estudio de la organizacin
~H de las rutas: 1) estudio de la ruta in vitro, 2) uso de mutan^tes nutricionales, y 3) incubacin de clulas con precursores marcados con radioistopos. Los estudios in vitro [del latn,
en vidrio] utilizan extractos libres de clulas para determinar las
enzimas y los productos intermedios metablicos que podran
pertenecer a una ruta. Aunque este mtodo directo se utiliz para
estudiar la organizacin de muchas vas catablicas, las investigaciones sobre biosntesis progresaron lentamente hasta que se
desarrollaron las otras dos tcnicas entre principios y mediados
de la dcada de 1940.
Las tcnicas que emplean mutantes nutricionales se desarrollaron con los trabajos de Beadle y Tatum sobre la gentica del
moho rosado del pan, Neurospora. Este mtodo se explica mejor
mediante un ejemplo hipottico. Supongamos que una ruta para
la sntesis del producto final Z est organizada con E,, E2 y as
sucesivamente, que representan las enzimas de la ruta.

El prototrofo (vase a seccin 11.6), que crecer en un medio

que carece de Z, puede tratarse con agentes mutgenos tales
como la luz ultravioleta, los rayos X o mutgenos qumicos.
Algunos de los mutantes resultantes sern auxotrofos que requieren la presencia de Z para crecer, ya que una de sus enzimas biosintticas ahora est inactiva. Cuando E3 est inactiva, el microorganismo crecer solamente en presencia de Z, aunque puede
fabricar C a partir del precursor A. Cuando crece en presencia de

una pequea cantidad de Z, el producto intermedio C (el producto

intermedio inmediatamente anterior al paso bloqueado) se
acumular en el medio. De esta forma, pueden utilizarse diversos
mutantes para establecer la identidad de los productos intermedios de la va. El orden de los productos intermedios puede
determinarse mediante experimentos de nutricin cruzada. Si E2
se ha inactivado por una mutacin, el mutante solamente crecer
cuando se aporte C o Z. Dado que el medio en el que se ha cultivado el mutante E3 contiene el producto intermedio C, sostendr
el crecimiento del mutante E2 (otros mutantes no produciran
suficiente C como para sostener el crecimiento). Si se realizan
experimentos de nutricin cruzada con mutantes de cada paso de
la ruta, podr determinarse el orden correcto de los pasos. La
aplicacin de esta tcnica condujo rpidamente a la elucidacin
de las rutas para la sntesis del triptfano, cido flico y otras
molculas.
En el tercer mtodo de estudio de la organizacin de la ruta
se utilizan radioistopos como I4C. Los posibles precursores biosintticos se sintetizan en el laboratorio con tomos especficos a
los que se ha hecho radioactivos. A continuacin, se incuba el
microorganismo con un medio de cultivo que contiene la molcula radioactiva y se aisla y analiza el producto final biosinttico.
Si la molcula es verdaderamente un precursor del producto
final, ste debe ser radioactivo. La localizacin del tomo radioactivo determinar qu parte del producto proviene del precursor
marcado radioactivamente. Puede utilizarse este mismo mtodo
con tomos no radioactivos como 15N. Esta tcnica aport parte
de los primeros conocimientos acerca de la naturaleza de la ruta
biosinttica de las purinas.

10.2 Fijacin fotosinttica del CO2

223

10.2 Fijacin fotosinttica del CO2

Aunque la mayora de los microorganismos puede incorporar o fijar COi, al menos en las reacciones anaplerticas
(pp. 230-232), slo los autotrofos utilizan CO2 como fuente
de carbono exclusiva o principal. La reduccin e incorporacin del CO2 requiere una gran cantidad de energa.
Los autotrofos generalmente obtienen la energa mediante
la absorcin de luz durante la fotosntesis, pero algunos la
obtienen de la oxidacin de dadores de electrones inorgnicos reducidos. La fijacin de CO2 autotrfica es fundamental para la vida sobre la tierra ya que aporta la materia
orgnica de la que dependen los organismos heterotrofos.
Reacciones luminosas fotosintticas y quimilitotrofia (pp. 2062J5).
Algunos microorganismos pueden fijar CO2 o convertir
esta molcula inorgnica en carbono orgnico y asimilarlo
en tres rutas principales. Casi todos los autotrofos microbianos incorporan CO2 mediante una ruta metablica especial
que recibe diversos nombres: ciclo de Calvin, ciclo de Calvin-Benson o ciclo reductor de las pentosas fosfato. Aunque
el ciclo de Calvin se encuentra en eucariotas fotosintticos y
en la mayora de los procariotas fotosintticos, est ausente
en Archaea, en algunas bacterias anaerobias obligadas, y en
algunas bacterias microaeroflicas. Estros microorganismos
normalmente emplean una de las siguientes rutas. Una ruta
reducida del cido tricarboxflico (vase la Figura 20.6a) es
utilizada por algunas Archaea (Thermoproteus, Sulfolobus)
y por bacterias como Chlorobium y Desulfobacter. La ruta
del acetil-CoA (vase la Figura 20.6b) se encuentra en
metangenos, sulfato-reductores, y en bacterias que pueden
formar acetato a partir de CO2 durante la fermentacin (acetgenos). Debido a su gran importancia, nos centraremos
aqu en el ciclo de Calvin. Rutas alternativas para la fijacin
de CO2(pp. 491-492).
El ciclo de Calvin tiene lugar en el estroma del cloroplasto de autotrofos microbianos eucariticos. Las cianobacterias, algunas bacterias nitrificantes y tiobacilos poseen
carboxisomas, cuerpos de inclusin polidricos que contienen la enzima ribulosa-l,5-bisfosfato carboxilasa (vase la
seccin siguiente) y que podran constituir el sitio donde se
fija el CO2 o almacena la carboxilasa y otras protenas.
Resulta ms fcil comprender el ciclo si se divide en tres
fases: carboxilacin, reduccin y regeneracin. Un resumen
del ciclo se presenta en la Figura 10.4, y los detalles en el
Apndice II.

Figura 10.3 Reaccin de la ribulosa-l,5-bisfosfato carboxilasa.

Esta enzima cataliza la adicin de dixido de carbono a la ribulosa
1,5-bisfosfato, formando un producto intermedio inestable que a
continuacin se degrada dando origen a dos molculas de 3fosfoglicerato.

Fase de reduccin
Una vez que se ha formado el PGA mediante carboxilacin,
es reducido a gliceraldehdo 3-fosfato. La reduccin, llevada
a cabo por dos enzimas, es bsicamente la inversin de una
parte de la ruta glucoltica, aunque la gliceraldehdo 3-fosfato deshidrogenasa se diferencia de la enzima glucoltica en
que utiliza NADH+ en lugar de NAD+ (Figura 10.4).

Fase de regeneracin
La tercera fase del ciclo de Calvin regenera RuBP y produce
hidratos de carbono tales como gliceraldehdo 3-fosfato, fructosa y glucosa (Figura 10.4). Esta parte del ciclo es similar a
la ruta de las pentosas fosfato y en ella participan las reacciones de la transcetolasa y la transaldolasa. El ciclo se completa
cuando la fosforribuloquinasa forma de nuevo RuBP.
Para sintetizar fructosa 6-fosfato o glucosa 6-fosfato a partir de CO2, el ciclo debe operar seis veces para producir la
hexosa deseada y formar de nuevo las seis molculas de RuBP.

Para incorporar una molcula de CO2 a la materia orgnica

son necesarias tres molculas de ATP y dos de NADPH. La
formacin de glucosa a partir del CO2 puede resumirse
mediante la siguiente ecuacin:

Fase de carboxilacin
La fijacin del dixido de carbono la realiza la enzima ribulosa 1,5-bisfosfato carboxilasa o ribulosabisfosfato carboxilasa/oxigenasa (rubisco) (Figura 10.3), la cual cataliza la
adicin de CO2 a la ribulosa 1,5-bisfosfato (RuBP), formando
dos molculas de 3-fosfoglicerato (PGA).

En los quimioautotrofos, el ATP y el NADPH son aportados

por las reacciones luminosas fotosintticas o por la oxidacin
de molculas inorgnicas. Los azcares formados en el ciclo
de Calvin pueden utilizarse posteriormente para sintetizar
otras molculas esenciales.

224

Captulo 10 Metabolismo: uso de la energa en la biosntesis

cas, comparten siete enzimas (Figura 10.5). Tres pasos glucolticos son irreversibles en la clula: 1) la conversin de
fosfoenolpiruvato en piruvato, 2) la formacin de fructosa
1,6-bisfosfato a partir de fructosa 6-fosfato, y 3) la fosforilacin de la glucosa. Estos pasos deben eludirse cuando la ruta
opera en sentido biosinttico. Por ejemplo, la formacin de
fructosa 1,6-bisfosfato por la fosfofructoquinasa se invierte
por la enzima fructosa bisfosfatasa que elimina mediante
hidrlisis un fosfato de la fructosa bisfosfato. Generalmente,
participan al menos dos enzimas en la conversin de piruvato
en fosfoenolpiruvato (el paso inverso al de la piruvato
quinasa).
Tal y como puede verse en la Figura 10.5, la ruta sintetiza tanto fructosa como glucosa. Una vez formadas la glucoFigura 10.5 Gluconeognesis. Ruta gluconeognica utilizada en
muchos microorganismos. En los recuadros sombreados se muestran

Figura 10.4 Ciclo de Calvin. ste es un resumen general del ciclo

mostrando en detalle nicamente las fases de carboxilacin y
reduccin. Tres ribulosa 1,5-bisfosfatos son carboxiladas para producir
seis 3-fosfogIiceratos en la fase de carboxilacin. stos son
convertidos en seis gliceraldehdo 3-fosfatos, que pueden ser
convertidos en dihidroxiacetona fosfato (DHAP). Cinco de las seis
triosas (gliceraldehdo fosfato y dihidroxiacetona fosfato) se utilizan
para volver a producir tres ribulosa 1,5-bisfosfatos en la fase de
reseneracin. La restante triosa ser utilizada en la biosntesis.

10.3 Sntesis de azcares y polisacridos

Muchos microorganismos no pueden llevar1 a cabo la fotosntesis y son heterotrofos que tienen que sintetizar los azcares a partir de molculas reducidas en lugar de CO2. La
sntesis de glucosa a partir de precursores diferentes de los
hidratos de carbono recibe el nombre de gluconeognesis.
Aunque las rutas gluconeognica y glucoltica no son idnti-

los nombres de las cuatro enzimas que catalizan reacciones diferentes

a las encontradas en la gluclisis. Los pasos glucolticos se muestran
en azul con fines comparativos.

10.4 Asimilacin de fsforo, azufre y nitrgeno inorgnicos

225

sa y la fructosa, pueden fabricarse otros azcares comunes.

Por ejemplo, la maosa proviene directamente de la fructosa
por medio de una simple reordenacin.
Fructosa 6-fosfato ^^ maosa 6-fosfato
Varios azcares se sintetizan unidos a un nuclesido difosfato.
El azcar nuclesido difosfato ms importante es la uridina
difosfato glucosa (UDPG). La glucosa se activa mediante la
unin de la uridina difosfato al pirofosfato mediante una
reaccin con uridina trifosfato (Figura 10.6). La porcin
UDP de la UDPG es reconocida por enzimas y transporta
glucosa por toda la clula para su participacin en reacciones enzimticas de forma muy similar a como el ADP transporta fosfato en la formacin del ATP. La UDP-galactosa se
sintetiza a partir del UDPG mediante una reordenacin de
un grupo hidroxilo. Una enzima diferente cataliza la sntesis
del cido UDP-glucurnico mediante la oxidacin de UDPG
(Figura 10.7).
Los azcares nuclesido difosfato tambin desempean
un papel principal en la sntesis de polisacridos tales como
el almidn y el glucgeno. De nuevo, la biosntesis no es
slo una inversin de la direccin del catabolismo. El catabolismo del glucgeno y del almidn (vase la seccin 9.7)
tiene lugar mediante hidrlisis para formar azcares libres o
mediante la adicin de fosfato a estos polmeros con la produccin de glucosa 1-fosfato. Los azcares nuclesido
difosfato no intervienen. Por el contrario, durante la sntesis
de glucgeno y de almidn en las bacterias y en las algas, se
forma adenosina difosfato glucosa a partir de glucosa 1-fosfato que, a continuacin, cede la glucosa al extremo de las
cadenas de glucgeno y almidn en crecimiento.

Los azcares nuclesido difosfato tambin participan en la

sntesis de molculas complejas como las paredes celulares
bacterianas (pp. 237-240).

Figura 10.7 Sntesis de uridina difosfato galactosa y glucuronato.

Sntesis de UDP-galactosa y de UDP-cido glucurnico a partir de
UDP-glucosa. Los cambios estructurales estn indicados mediante
recuadros de color.

1. Describa brevemente las tres etapas del ciclo de Calvin.

2. Qu es la gluconeognesis y cmo suele producirse?
Describa la formacin de maosa, galactosa, almidn y
glucgeno. Por qu son importantes los azcares
nuclesido difosfato?

10.4 Asimilacin ele fsforo, azufre y

nitrgeno inorgnicos
Adems de carbono y oxgeno, los microorganismos tambin necesitan grandes cantidades de fsforo, azufre y nitrgeno para la biosntesis. Estos elementos son asimilados, o
incorporados a molculas inorgnicas, por vas diferentes.
Nutricin microbiana (Captulo 5); Participacin microbiana en los
ciclos biogeoqumicos (seccin 28.4).

Asimilacin de fsforo
El fsforo est presente en cidos nucleicos, protenas, fosfolpidos, ATP y coenzimas tales como el NADP. Las fuentes de fsforo ms frecuentes son los esteres de fosfato inorgnico y orgnico. El fosfato inorgnico se incorpora
mediante la formacin de ATP por una de tres formas posibles: 1) fotofosforilacin (vanse las pp. 209-214), 2) fosforilacin oxidativa (vanse las pp. 198-199), y 3) fosforilacin a nivel de sustrato. La gluclisis constituye un ejemplo
del ltimo proceso. El fosfato se une a gliceraldehdo 3-fosfato para formar 1,3-bisfosfoglicerato, el cual se utiliza a
continuacin en la sntesis de ATP.
Figura 10.6
color.

Uridina difosfato glucosa. La glucosa se muestra en

226

Captulo 10 Metabolismo: uso de la energa en la biosntesis

Los microorganismos pueden obtener fosfatos orgnicos de su entorno en forma disuelta o particulada. Con
mucha frecuencia, las fosfatasas hidrolizan esteres de fosfato orgnico para liberar fosfato inorgnico. Las bacterias
Gram negativas tienen fosfatasas en el espacio periplsmico
situado entre la pared celular y la membrana plasmtica que
permiten la captacin del fosfato inmediatamente despus
de ser liberado. Por otro lado, los protozoos pueden utilizar
fosfatos orgnicos directamente despus de ingerirlos o
hidrolizarlos en lisosomas e incorporar el fosfato.

Asimilacin de azufre
El azufre es necesario para la sntesis de aminocidos (cistena y metionina) y de diversas coenzimas (p. ej., coenzima A y biotina), y puede obtenerse a partir de dos fuentes.
Muchos microorganismos utilizan cistena y metionina, que
se obtienen de fuentes externas o de reservas intracelulares
de aminocidos. Adems, el sulfato puede aportar azufre
para los procesos de biosntesis. El tomo de azufre est ms
oxidado en el sulfato que en la cistena y en otras molculas
orgnicas; por este motivo, el sulfato debe ser reducido para
que pueda asimilarse. Este proceso se conoce como reduccin asimilatoria de sulfato para distinguirla de la reduccin desasimilatoria de sulfato que se produce cuando el
sulfato acta como aceptor de electrones durante la respiracin anaerobia (vase la Figura 28.21). Respiracin anaerobia (pp. 203-204).
La reduccin asimilatoria de sulfato consiste en la activacin de sulfato mediante la formacin de fosfoadenosina 5'fosfosulfato (Figura 10.8), seguida de la reduccin del sulfato. Se trata de un proceso complejo (Figura 10.9) en el que el
sulfato se reduce primero a sulfito (SCV") y despus a sulfuro
de hidrgeno. La cistena puede sintetizarse a partir del sulfuro de hidrgeno de dos formas. Parece que los hongos combinan el sulfuro de hidrgeno con serina para formar cistena
(proceso 1), mientras que muchas bacterias unen en su lugar
el sulfuro de hidrgeno con O-acetilserina (proceso 2).
o = p-o~

Una vez formada, la cistena puede utilizarse en la sntesis

de otros compuestos orgnicos que contienen azufre.

Asimilacin de nitrgeno
Dado que el nitrgeno es un componente principal de las
protenas, los cidos nucleicos, las coenzimas y muchos
otros componentes celulares, la capacidad de la clula para
asimilar el nitrgeno inorgnico es extraordinariamente
importante. Aunque el gas nitrgeno abunda en la atmsfera, pocos microorganismos pueden reducir este gas y utilizarlo como fuente de nitrgeno; la mayora tienen que incorporarlo en forma de amonio o nitrato.
Incorporacin de amonio

O"

Figura 10.8 Fosfoadenosina 5'-fosfosulfato (PAPS). El grupo

sulfato se muestra en color.

El nitrgeno del amonio se puede incorporar a la materia

orgnica de una forma relativamente sencilla y directa, ya
que est ms reducido que otras formas de nitrgeno inorg-

10.4 Asimilacin de fsforo, azufre y nitrgeno inorgnicos

227

cc-cetoglutarato + NH4+ + NADPH (NADH) + H+ ^

glutamato + NADP+ (NAD+) + H2O

Figura 10.10 Ruta de asimilacin del amonio. Asimilacin de

amonio mediante el uso de la glutamato deshidrogenasa (GDH) y
transaminasas. Pueden participar tanto NADP- como NAD-glutamato
deshidrogenasas. Esta ruta es ms activa a altas concentraciones de
amonio.

nico. Algunos microorganismos forman el aminocido alanina en una reaccin de aminacin reductora catalizada por
la alanina deshidrogenasa.
Piruvato + NH4+ + NADH (NADPH) + H+ ^ Lalanina + NAD+ (NADP+) + H2O
Con frecuencia, la ruta principal para la incorporacin del
amonio es la formacin de glutamato a partir de oc-cetoglutarato (un producto intermedio del ciclo de los ATC). En este caso,
muchas bacterias y hongos utilizan la glutamato deshidrogenasa, al menos cuando la concentracin de amonio es elevada.

La capacidad para utilizar NADPH y NADH como agente

reductor en la sntesis de glutamato vara en las distintas
especies.
Una vez sintetizada la alanina o el glutamato, el grupo
a-amino recin formado puede transferirse a otros esqueletos carbonados mediante reacciones de transaminacin
(vase la seccin 9.9) para formar distintos aminocidos.
Las transaminasas poseen la coenzima piridoxal fosfato,
que es responsable de la transferencia del grupo amino. Los
microorganismos tienen diversas transaminasas, cada una de
las cuales cataliza la formacin de varios aminocidos utilizando el mismo aminocido como dador del grupo amino.
Cuando la glutamato deshidrogenasa trabaja en cooperacin
con las transaminasas, el amonio puede incorporarse a
diversos aminocidos (Figura 10.10).
En una segunda ruta de incorporacin del amonio intervienen dos enzimas que actan de manera secuencial, la glutamina sintetasa y la glutamato sintetasa (Figura 10.11).
El amonio se utiliza para sintetizar glutamina a partir de glutamato, y a continuacin el nitrgeno del grupo amino de la
glutamina se transfiere al a-cetoglutarato para generar una
nueva molcula de glutamato. Debido a que el glutamato
acta como dador de grupos amino en las reacciones de las
transaminasas, el amonio puede utilizarse para sintetizar
todos los aminocidos comunes cuando estn presentes las

Figura 10.11 Glutamina sintetasa y glutamato sintetasa. Intervencin de las reacciones de la glutamina sintetasa y de la glutamato sintetasa en la
asimilacin de amonaco. Algunas glutamina sintetasas utilizan NADPH como fuente de electrones; otras utilizan ferredoxina reducida (Fd). El
nitrgeno que se incorpora y transfiere se muestra en color verde.

228

Capitullo Metabolismo: uso de la energa en la biosntesis

Figura 10.12
amonaco.

Incorporacin de amonaco utilizando glutamina sintetasa y glutamato sintetasa. Esta ruta es efectiva a bajas concentraciones de

transaminasas adecuadas (Figura 10.12). Se requieren ATP

y una fuente de electrones, como NADPH o ferredoxina
reducida. Esta ruta est presente en Escherichia coli, Bacillits megaterium y otras bacterias. Las dos enzimas que actan de manera secuencial operan con gran eficacia con concentraciones de amonio bajas, a diferencia de la ruta de la
glutamato deshidrogenasa. Como se vio con anterioridad, la
glutamina sintetasa est fuertemente regulada por modificaciones covalentes reversibles y efectores alostricos {vanse
pp. 179-180).
Reduccin asimilatoria de nitrato
El nitrgeno est mucho ms oxidado en el nitrato (N(>r)
que en el amonio (NH4+). El nitrato tiene que reducirse a
amonio para que su nitrgeno pueda convertirse en una
forma orgnica. Esta reduccin del nitrato se denomina
reduccin asimilatoria de nitrato, que es distinta de la que
se produce durante la respiracin anaerobia y la reduccin
desasimilatoria de nitrato {vanse las secciones 9.6 y 28.4).
En la reduccin asimilatoria de nitrato, el nitrato se incorpora
a la materia orgnica y no participa en la produccin de
energa. El proceso est muy extendido entre las bacterias,
hongos y algas.
La reduccin asimilatoria de nitrato tiene lugar en el
citoplasma de las bacterias. El primer paso en la asimilacin de nitrato es su reduccin a nitrito por accin de
la nitrato reductasa, una enzima que contiene FAD y
molibdeno (Figura 10.13). La fuente de electrones es el
NADPH.

Posteriormente, el nitrito se reduce a amonio mediante una

serie de adiciones de dos electrones catalizada por la nitrito
reductasa y, posiblemente, por otras enzimas. La hidroxilamina podra ser un producto intermedio. A continuacin, el
amonio se incorpora a aminocidos por las rutas anteriormente descritas.

Fijacin de nitrgeno
Se denomina fijacin de nitrgeno a la reduccin del nitrgeno gaseoso de la atmsfera a amonio. Frecuentemente, los
niveles de amonio y nitrato son muy bajos, y slo algunos
procariotas pueden llevar a cabo la fijacin del nitrgeno
atmosfrico. Las clulas eucariotas carecen por completo de
esta capacidad, limitando el crecimiento de las plantas. La
fijacin de nitrgeno se produce en: 1) bacterias de vida
libre (p. ej., Azotobacter, Klebsiella, Clostridium y Methanococcus), 2) bacterias que viven en asociacin simbitica
con plantas tales como las leguminosas {Rhizobium), y 3) cianobacterias {Nostoc y Anabaena). En el Captulo 30 se
comentan los aspectos biolgicos de la fijacin de nitrgeno. Esta seccin se centra en la bioqumica de la fijacin de
nitrgeno. Biologa de los microorganismos fijadores de nitrgeno (pp. 531, 664, 727-730).
La reduccin de nitrgeno a amonio est catalizada por
la enzima nitrogenasa. Aunque an se desconocen los pro-

Figura 10.13 Reduccin asimilatoria de nitrato. Se cree que esta

secuencia opera en bacterias que pueden reducir y asimilar el nitrgeno
del nitrato. Vase el texto para ms informacin.