Instituto Federal de Educao, Cincia e Tecnologia do Cear.

Graduao Tecnolgica em Gesto Ambiental.

Disciplina: Microbiologia Bsica
Professora: Smara Sales

Relatrio de Prticas Microbiolgicas 03

Alunos:

Fortaleza - CE
31/Maro/2015

SUMRIO

1 Introduo

........3

......4

2 Objetivos

3 Materiais ......4

4 Mtodos

......5

5 Resultados e Discusses .....6

6 Concluses

Referncias

......10

.....11

1 Introduo
O procedimento consistiu na preparao de meios, inoculao de
microrganismos (bactrias) e por fim anlise de testes bioqumicos, por
exemplo, TSI, contudo na realizao prtica fica subentendido conhecimentos
tericos sobre as necessidades nutricionais, os meios microbiolgicos e os
fatores limitantes (controle dos microrganismos).
Cientes disso quando se preparou os meios sabia-se que os
microrganismos como monstra Pelczar Jr (1997) necessitam dos elementos
bsicos como o carbono, nitrognio, oxignio, enxofre, fosforo hidrognio, alm
de outros em pequenas quantidades.
A Classificao metablica dos microrganismos em relao nutrio
Tortora, Funke e Case (2012) explica que quanto a aquisio de carbono os
usurios de fontes inorgnicas so auttrofos, ao passo que o necessitam de
carbonos provenientes de cadeias orgnicas so hetertrofos. J o que tange
a obteno de energia os fototrficos usufruem da energia radiante, ao passo
que os quimiotrficos utilizam energia advinda das reaes de oxidaoreduo.
Finalizando os conceitos, as provas bioqumicas Vermelho, Pereira e
Coelho (2006) defendem so respostas metablicas e ou enzimticas que so
singulares a determinadas espcies de microrganismos, sobretudo de
bactrias, frente ao consumo des meios controlados, que Pelczar Jr (1997)
acrescenta podem favorecer um crescimento de um espcie de bactrias
(seletivo) ou destacar com uma colorao um determinado grupo (diferencial) e
ainda ambos em um nico meio (seletivo/diferencial).
Sintetizando, no adequado, e no ocorreu, o desconhecimento do
referencial terico necessrio para a prtica das provas bioqumicas, porm
acrescenta-se que os detalhes dos testes sero detalhados nas prximas
sees.

2 Objetivos
Produzir e avaliar provas bioqumicas em microrganismos cultivados em meios
seletivos e/ou diferencias.
3 Materiais
3.1 Micro-organismos
Escherichia coli, Samonella sp, Klebsiella sp, Shigella SP, Enterobacter sp. e
Serratia sp.
.
3.2 Meios de cultura e reagentes
gua destilada, gar, Citrato de simons, meio SIM, A1 medium, Reativo de
Kovacs, Soluo vermelho de metila, Reativo de Barrit, Triple Sugar Iron, Eosin
Methylene Blue EMB e MacConkey.

3.3 Equipamentos
Micro-ondas, Bico de Bunsen, Balana de Preciso e Estufa bacteriolgica a
35C.

3.4 Diversos
Tubos de ensaio
Placas de Petri
Pipeta
Becker
Proveta
Baqueta,

4 Mtodos
Produziu-se o meio Triple Sugar Iron Agar TSI1 na proporo de
6,46g do meio, medido na balana de preciso, logo aps foi diludo com 100
ml de gua destilada, em seguida posta no micro-ondas em um becker. Logo
aps com auxilio da pipeta o meio foi posto nos tubos de ensaio.
Salienta-se que cada equipe preparou vrios tubos de ensaio com
um meio especifico e depois os entregou para cada equipe um tubo de ensaio,
desse modo cada equipe tinha todos os meios (TSI, SIM, A1 Medium, EMB,
MacConkey). Logo aps ocorreu a inoculao dos meios com as bactrias e
guardou-se em estufa bacteriolgica a 35C por tempo superior ao
recomendado que 24h.
No entanto, aps 48 horas alguns micro-organismos no reagiram e
foram novamente inoculados e aguardaram-se mais 48 horas e novamente no
tiveram sucesso, por fim analisaram-se os tubos que reagiram segundo os
possveis resultados que sero expostos no prximo capitulo juntamente com a
relao dos tubos que no reagiram.

Cada equipe ficou responsvel pelo preparo de um meio, por isso, discriminou-se apenas o meio TSI.

5 Resultados e Discusses
5.1 Meio EMB
O teste veste visa diferenciar microrganismo que fermentam a
sacarose mais rpido que a lactose, caractersticas dos organismos entricos
e os corantes indicam exatamente essa interao com os aucares sacarose
e/ou lactose.
O resultado indicou que o meio fermentou a Sacarose e/ou a
Lactose tambm pontos pretos- azulados indicam supostamente colnias de
coliformes como ilustra a Figura 1.
Figura 1 Tubo de Ensaio com o Meio EMB..

Fonte: MENEZES, 2015.

5.2 MacConkey
O meio seletivo de bactrias Gram negativas e diferencial pela
presena da lactose, pois tinge os microrganismo que fermentam esse acar.
O meio apresentou carter cido e fermentou a lactose indicado pela cor rosa,
Figura 2.
Figura 2 Tubo de Ensaio com o Meio MacConkey.

Fonte: MENEZES, 2015.

5.4 Meio TSI (Triple Sugar Iron)

O meio testa que aucares (lactose, glicose e sacarose) os microrganismo
fermentam. O resultado (base: amarelo e pice: vermelha) indica fermentao
de lactose e glicose, mas no de sacarose como mostrado na Figura 3.

Figura 3 Tubo de Ensaio com o Meio TSI.

Fonte: MENEZES, 2015.

5.5 A1 Medium , Citrato de Simmons e SIM

Os meios no reagiram, logo no apresentaram as respostas
esperadas, concluiu-se que aps duas tentativas de inoculao das bactrias
sem sucesso o problema possivelmente estava relacionado a qualidade dos
meios, contudo cabe citar os possveis resultados destes trs meios.
5.5.1 A1 Medium
Divide-se em duas amostras VM e VP que se subdividem em
respetivamente VM positivo e negativo; VP positivo e VP negativo. O teste VM
verifica se o microrganismo fermenta a glicose pela via cida se o tubo tiver
colorao vermelha (VM positivo) apresenta pH inferior a 4,4, porm se
apresentar a colorao amarela ter acidez superior a 6, ser VM negativo.
O teste VP analisa se a bactria realiza fermentao tendo como
produto a acetona ,butilenoglicol e pequenas quantidades de cidos. Caso VP

positivo ter colorao rosa/vermelho, j VP negativo ocorre na ausncia dessa

cor.

5.5.2 Citrato de Simmons

Avalia a capacidade de o microrganismo nutrir-se do citrato de sdio
para seu desenvolvimento e atividades metablicas, possui a composio:
citrato de sdio, fosfato de amnia e azul bromotimol. Caso o teste seja positivo
ocorre a produo de hidrxido de amnia, com elevao do pH e
exteriorizando a cor azulada.
5.5.3 SIM
O meio prope a trs anlises: Motilidade, Produo de HS e Indol.
A primeira pode ter dois resultados: se o meio ficar turvo h motilidade, caso o
crescimento ocorra ao redor da picada no h motilidade.
O indol um verificador da degradao do aminocido triptofano
pela enzima triptofanase, o teste fundamenta-se na observao de um anel
rosa, aps a adio de 0,2 ml do reativo de kovacs ao meio, o que indica o
resultado positivo, logo a ausncia do anel resulta na no degradao do
aminocido triptofano pela enzima triptofanase.

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6 Concluses
A partir da prtica realizada conclui-se a relevncia de conhecer a
necessidades nutricionais das bactrias e das provas bioqumicas como
recurso

para

identificao

classificao

(metablica,

enzimtica

morfolgica) dos microrganismos. Por fim, notrio a necessidade do

conhecimento terico para que o discente compreenda que as prticas em
laboratrio no so meras sequncias e procedimentos simplrios, e sim uma
gama

de

conceitos

microrganismos.

tcnicas

orientado

anlise

adequada

dos

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Referncias
PELCZAR Jr, J.M., et al. Microbiologia; conceitos e aplicaes. 2. ed., So
Paulo: Makron Books, 1997.
TORTORA, G.J.; FUNKE, B.R. & CASE, C.L. Microbiologia. 10 Ed., Editora
Artmed. 2012.
VERMELHO A. B.; PEREIRA, A. F.; COELHO, R. R.; Prticas de
Microbiologia. Rio de janeiro: Guanabara Koogan, 2006.