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-2014ELECTROFORESIS
LA EDUCACIN
SECUNDARIA EN
QUIMICA
filtro,
el
acetato
de
celulosa
o,
ms
menudo,
un
gel.
Esto elimina en gran medida la mezcla por convexin de la muestra que limita la
resolucin en la electroforesis de entorno mvil. Adems, en la modalidad zonal los
componentes de la muestra migran como bandas discretas (zonas), por lo que solo se
requieren pequeas cantidades de material.
A. Electroforesis en papel
En la electroforesis en papel la muestra se coloca en un punto sobre una tira de papel
de filtro o de acetato de celulosa embebida en buffer. Los extremos de la tira se
sumergen en reservorios separados de buffer en los que se colocan los electrodos (fig.
1). Al aplicar una corriente directa los iones de la muestra migran hacia los electrodos
de
polaridad
opuesta
velocidades
caractersticas.
Al
completarse
el
B. Electroforesis en gel
Fig. 2
aniones
macromoleculares
migran
con
rapidez
hasta
alcanzar
la regin que contiene los iones del buffer del gel espaciador, donde se frenan por no
haber all deficiencia de iones. Este efecto hacen que los iones macromoleculares se
Que es el colorante ms usado para este propsito, se aplica al sumergir al gel con
solucin alcohlica acdica del colorante. Esto fija a la protena en el gel al
desnaturalizarla y forma un complejo con el colorante. El exceso de colorante se retira
mediante el lavado repetido del gel con una solucin acdica o por decoloracin
electrofortica. Con este procedimiento pueden detectarse bandas que contienen 0,1
g de protena.
Si Se dispone de un anticuerpo contra la protena de inters es posible detectar de
manera especfica esa protena en el gel entre medio de otras protenas mediante una
tcnica de inmunotransferencia (tambin conocida como Western blot). Este
procedimiento es una variante del Southern blot y utiliza una tcnica similar al ELISA
para detectar la protena de inters (fig.):
1. Se transfiere un electroforetograma en gel a una hoja de nitrocelulosa, que une
protenas con firmeza y en forma no especfica (tambin pueden utilizarse membranas
de nailon o difluoruro de polivinilidina (PVDF).
2. Los sitios de adsorcin de la nitrocelulosa no ocupados por protenas del gel se
bloquean con una protena no especfica como casena (protena de la leche; en
general se emplea leche descremada) para prevenir la adsorcin no especfica de los
anticuerpos
usados
en
los
pasos
(que
tambin
son
protenas.
que
por
lo
general
se
obtiene
en
el
conejo.
D. Isoelectroenfoque
Una protena tiene grupos cargados de ambas polaridades, por lo que presenta un
punto isoelctrico, pI, el pH al que es inmvil en un campo elctrico. Si se somete a
electroforesis una mezcla de protenas a travs de una solucin que tenga un
gradiente estable de pH en el que ste se incrementa en forma paulatina desde el
nodo hacia el ctodo, cada protena migrara a la posicin en el gradiente de pH que
corresponda a su punto isoelctrico. Si una protena se difunde fuera de esa posicin,
su carga neta cambiar medida que Se mueve a una regin de distinto pH, y las
fuerzas electroforticas resultantes la forzaran a moverse de nuevo a la posicin
isoelctrica.
alrededor de su punto isoelctrico, que puede ser tan delgada como 0,01 unidades de
pH. Este proceso se denomina isoelectroenfoque (IEF).
La capacidad del IEF de separar las protenas en bandas definidas lo hace til como
herramienta analtica y preparativa. De hecho, varias preparaciones proteicas que se
crean homogneas se separaron en varios componentes mediante IEF. ste puede
E. Electroforesis capilar
Aunque la electroforesis en gel en sus distintos formatos es un mtodo comn y muy
eficaz para la separacin de molculas cargadas, suele requerir corridas de 1 hora o
ms y es difcil de cuantificar o automatizar. Estas desventajas Se superan en gran
medida por el uso de la electroforesis capilar (EC), una tcnica en la que la
electroforesis se realiza en tubos capilares muy delgados (20 a 100 m de dimetro
interno) hechos de cuarzo, vidrio o plstico. Estos tubos capilares disipan el calor con
rapidez y por lo tanto permiten el uso de grandes campos elctricos (por lo general
100 a 300 V/ cm unas 10 veces superior al de la mayora de las otras tcnicas
electroforticas), lo que reduce los tiempos de separacin a unos pocos minutos.
Estas separaciones rpidas, a su vez, minimizan el ensanchamiento de las bandas
debido a la difusin, con lo que se logran separaciones en extremo definidas.
Estas tcnicas de EC tienen una resolucin en extremo elevada y pueden
automatizarse de manera similar a la CLAR, esto es con carga automtica de la
muestra y deteccin de la muestra en lnea. Dado que la EC solo puede separar
pequeas cantidades de material, se la utiliza nicamente con tcnica analtica.
Bibliografa
Voet, D. y Voet, J.bioquimica. Tercera edicin. Editorial medica panamericana. Bs. As.
2006.
http://books.google.com.ar/books?
id=r5bedH_aST0C&pg=PA152&dq=electroforesis&hl=es&sa=X&ei=6qVjVIDMLub
vigLE84GIAQ&ved=0CCYQ6AEwAg#v=onepage&q=electroforesis&f=false [visto
el 9/11/2014]