Fundao Centro de Cincias e Educao Superior a Distncia do Estado do Rio de Janeiro

Centro de Educao Superior a Distncia do Estado do Rio de Janeiro

Alexandre de Abreu Rodrigues

Bioqumica I
Relatrio de Aula Pratica - 2
Cintica Enzimtica

2015/1

SUMRIO

Enzimas

1.1 Introduo
1.2 Experimento I
- Material
- Objetivo
- Procedimentos
- Resultado
1.3 Experimento II
- Material
- Objetivo
- Procedimentos
- Resultado
1.4 Experimento III
- Material
- Objetivo
- Procedimentos
- Resultado
1.5 Experimento IV
- Material
- Objetivo
- Procedimentos
- Resultado

1.1 Introduo
Enzimas
Biomolculas de origem proteica que interferem na velocidade de reaes orgnicas.
Funcionam como catalizadores, diminuindo a energia necessria para que uma reao comece.
Divide-se em duas partes: no proteica cofator e proteica apoenzima , se o cofator for
uma molcula orgnica chama-se coenzima.
A enzima se liga ao substrato atravs de seu sitio ativo, este encaixe, que promove a
especificidade da enzima. Quando se forma o complexo enzima substrato a enzima inicia sua
atividade, este complexo instvel, e quando se desfaz so liberados os produtos e a enzima que na
presena de outro substrato continuar agindo.
Existem alguns fatores que interferem diretamente nas reaes enzimticas, podendo
favorecer ou prejudicar as reaes. Assim como so especificas para substratos, as enzimas tem um
pH e temperatura ideais para que atuem com mxima eficincia, alm disto, algumas substancias
quando presentes no meio podem inibir a ao enzimtica solventes orgnicos, detergentes, ureia
e guandina.
1.2 Experimento I Tempo de Reao

Material

1 pacote de gelatina sem sabor

700 ml de gua
10 ml de Suco de abacaxi
4 tubos cnicos (falcon) de 50 ml
Bquer (600 ml)
Caneta de retroprojetor
Estante para tubos
Proveta de 10 ml
Pipeta de 5 ml
1 cronmetro ou relgio
Bico de Bunsen ou placa de aquecimento
Banho-maria
Geladeira

Objetivo

Calcular o volume da gelatina hidrolisada. Representar os resultados em um grfico que

correlacione o volume de gelatina hidrolisada com o tempo de reao.

Procedimento
1. Preparo da gelatina sem sabor: Dissolva um pacote de gelatina sem sabor em 250 ml
de gua fervente. Aps dissolver a gelatina adicione 250 ml de gua gelada. Essa
gelatina estar numa temperatura ideal para iniciar o experimento (cerca de 30 C).

2. Rotule 4 tubos falcon de 50 ml:

C (controle)
S30 (suco de abacaxi, com 30 min de reao)
S60 (suco de abacaxi, com 60 min de reao)
S90 (suco de abacaxi, com 90 min de reao)
3. Adicione 10 ml de gelatina nos 4 tubos. Leve geladeira por 30 minutos. Retirar da
geladeira quando a gelatina estiver no estado gel e esperar at que as amostras se
equilibrem temperatura ambiente.
4. Adicione 3 ml de gua (temperatura ambiente) ao tubo C e mantenha-o em uma
estante temperatura ambiente.
5. Adicione 3 ml de suco de abacaxi (temperatura ambiente) aos tubos restantes e
mantenha-os em uma estante temperatura ambiente.
6. Aps 30 min, descarte a parte lquida do tubo S30, lave a superfcie da gelatina com o
auxlio de um piscete de gua e deixe-o secando, emborcado sobre um pedao de papel
toalha.
7. Aps 60 min, repita o procedimento descrito na etapa 6 para a amostra no tubo S60
8. Aps 90 min, repita o procedimento descrito na etapa 6 para as amostras nos tubos
S90 e C.
9. Aquea a gelatina em um banho-maria a 40 C e transfira o lquido para uma proveta
de 10 ml anote o volume da gelatina remanescente.

Resultado

O experimento no ocorreu de acordo com o esperado, pois a temperatura e outros fatores

no conhecidos influenciaram na textura do substrato, no podendo ser quantificado o volume
de produto produzido, em consequncia no fornecendo dados para confeco do grfico.
A proposta do experimento teria como ponto de partida a avaliao da maneira de como os
volumes iniciais de produto, variam com o tempo na presena de uma quantidade fixa de
enzima. Medindo-se a quantidade de produto formado durante trs perodos de tempo total de
reao (30, 60 e 90 min) e lanando-se os valores aferidos, na tabela fornecida pelo roteiro e
posteriormente representando os valores em um grfico.
Portanto teoricamente, deveramos observar nesse experimento que as enzimas se regeneram
ao fim de cada ciclo de reao, de forma que no importa quantidade de substrato, a enzima
continuara atuando na transformao do substrato em produto, ou seja, uma pequena quantidade
de enzima pode transformar qualquer quantidade de substrato em produto, demandando apenas
de mais ou menos tempo para que seja formada uma quantidade maior ou menor de produto.

1.3 Experimento II Efeito do pH na atividade da Amilase Salivar

Material

4 biscoitos cream-cracker,
4 pipetas Pasteur,
Saliva,
Soluo de iodo,
gua,
Vinagre,
Soluo de bicarbonato de sdio, (Soluo de bicarbonato de sdio: adicione 1 colher de
caf de NaHCO3 em 10 ml de gua, misture, deixe decantar e utilize a soluo).
4 placas de Petri,
Almofariz,
4 mexedores de caf,
1 cronmetro.

Objetivos

Comparar a cor obtida nas amostras, no incio e no final do experimento. Verificar se houve
ou no mudana de cor. (A soluo de iodo mudou de cor em todas as amostras? Por qu?).

Procedimentos

1. Identifique as placas de Petri de acordo com a condio experimental: controle,

gua, vinagre e bicarbonato.
2. Triture 1 biscoito com o almofariz e deposite na placa identificada como controle.
3. Mastigue 1 biscoito e deposite em uma das placas, com cuidado para que se forme uma
massa homognea a mida; repita o procedimento com outros dois biscoitos.
4. Adicione gua na amostra de biscoito triturado (controle), aos poucos, at obter uma
pasta de consistncia semelhante dos biscoitos que foram mastigados. Anote o tempo
do cronmetro.
5. Em cada placa, adicione e misture bem:
Placa A: 1 ml de gua
Placa B: 1 ml de vinagre e
Placa C: 1 ml de soluo de bicarbonato de sdio
6. Aps 30 min, pingue de 3 a 5 gotas de soluo de iodo em cada placa e anote a cor.

Resultado

Sabemos que a Amilase Salivar ou Ptialina atua na boca em meio com pH 6,7, prximo do
bsico. Trata-se de uma enzima que atua em polissacardeos degradando em molculas de maltose.
5

O Iodo, em nosso experimento, por reagir com amido, foi utilizado como indicador da
presena deste, desta forma tambm indicara a atividade enzimtica em cada amostra.
Assim podemos observar o iodo nas amostras:
1. Controle: nesta amostra o iodo ficou bem escuro, por no ter nenhum tipo de enzima
agindo, ele indica uma grande quantidade de amido;
2. gua: a gua adicionada no altera muito o pH da amostra, desta forma a amilase
continua atuando, porm o iodo encontra-se escuro (um pouco menos que a amostra 1),
indicando que ainda existe uma grande quantidade de amido na amostra, ou seja, a
amilase atua mas no em sua atividade mxima ou tima;
3. Vinagre: o vinagre acidifica (protona) o meio, sabemos que a amilase salivar atua em pH
6,7, e que o pH um fator limitante para a atuao das enzimas, o iodo desta amostra
esta bem escuro demonstrando que h uma grande quantidade de amido, ou seja, a
amilase no realizou a quebra do amido.
4. Bicarbonato de sdio: o bicarbonato de sdio tem um pH alto, bsico, nesta amostra o
iodo ficou bem claro (castanho), indicando a pouca quantidade de amido, ou seja, a
amilase atuou bem, degradando o amido em maltoses.

1.3 Experimento III Efeito da concentrao de substrato na reao da Bromelina

Material

Leite em p,
10 ml de suco natural de abacaxi,
100 ml de gua,
5 placas de Petri,
5 tubos de ensaio,
5 mexedores de caf,
1 pazinha de plstico grande,
1 esptula,
Caneta de retroprojetor,
Estante para tubos,
Proveta de 10 ml,
1 pipeta automtica 1ml,
1 cronometro ou relgio,
Balana.

Objetivo

Verificar o quanto a concentrao de enzimas pode alterar a velocidade das reaes

enzimticas.

Procedimentos

1. Anote nas tampas das placas de petri as condies experimentais com os seguintes
cdigos: use nmeros para identificar a quantidade de leite utilizada (ver item 2) e a letra C para as
amostras Controle (onde ser adicionado apenas gua) e E para as amostras que tero Enzimas
(onde ser adicionado o suco de abacaxi):
6C e 6E

8C e 8E

10C e 10E

2. Utilizando as placas de petri (cuidado para no usar a tampa), pese o leite em p: 6, 8 e 10

gramas nas respectivas placas. As placas 6C e 6E contero 6 gramas de leite cada; 8C e 8E, tero 8
gramas, e as placas 10C e 10E tero 10 gramas de leite.
3. Com o auxlio de uma proveta, coloque 9 ml de gua em cada placa. Misture bem, com
cuidado para no derramar o leite ou a gua, utilizando a esptula de plstico mais larga, at que se
forme uma massa homognea. Tampe a placa. Ateno: As placas devem ficar tampadas durante
todas as etapas do experimento para evitar evaporao de gua.
4. Adicione 1 ml de gua nas placas identificadas como controle (C) e misture bem. Acione o
cronmetro na primeira adio e anote o tempo no qual foi feita cada adio.
5. Adicione 1 ml de suco de abacaxi nas placas identificadas como enzimas (E), misture bem
e anote o tempo inicial de cada adio.
6. A cada 5 minutos, passe a pazinha de plstico pequena no fundo de cada uma das placas e
observe a consistncia do leite. Se voc perceber que a linha de separao feita no meio da placa
demora a voltar a fechar, passe a medir o tempo a cada 1 minuto!
7. Quando formar uma canaleta na massa de leite, que no retorna sua posio inicial
vamos considerar como o fim da reao. Anote o tempo necessrio para isso ocorrer em cada uma
das placas. Ateno: o padro de separao da massa deve ser o mesmo para todas as amostras.

Resultado

A bromelina atua nas ligaes peptdicas da casena do leite, hidrolisando, provocando uma
tendncia solidificao da mistura.
O experimento no ocorreu de acordo com o esperado, pois a temperatura e outros fatores
no conhecidos influenciaram no resultado.
Era esperado do experimento que, devido concentrao da enzima ter sido constante, seria
observado que ao aumentarmos a concentrao dos substratos na reao, maior seria a atividade da
enzima. Ou seja, a placa 10E, que tinha 10gr de substrato, tem um tempo de reao mais rpido que
a placa 8E, que tem 8gr de substrato, e esta consequentemente mais rpido do que a 6E, que tem 6gr
de substrato, assim sendo, a velocidade da reao se demonstrou crescente com adio de substrato
at a saturao da enzima.

1.4 Experimento IV Desnaturao trmica da Bromelina

Material

10 ml de Suco de abacaxi
10 tubos de ensaio ou tubos falcon
Bquer (250 ml)
Caneta de retroprojetor
Estante para tubos
1 pregador para tubos
Proveta de 10 ml
Pipeta de 2 ml
1 cronmetro ou relgio
Bico de Bunsen ou placa de aquecimento
Banho-maria
Geladeira

Objetivo
O que aconteceu com a gelatina nos tubos com gua? E com os tubos com suco de abacaxi?
Por que a consistncia da gelatina mudou em alguns tubos e em outros, no?

Procedimentos

1. Ferva 100 ml de gua em um bquer de 250 ml e coloque um tubo contendo 5 ml de suco de

abacaxi dentro do bquer, com o auxlio de um pregador para tubos, por 5 minutos. Coloque o tubo
em uma estante sobre a bancada e espere atingir a temperatura ambiente (se quiser, coloque o tubo
na geladeira para acelerar o processo de resfriamento, mas espere esfriar um pouco para que no
quebre com o choque trmico).
2. Numere os tubos, colocando a letra C para o controle e a letra E para as amostras que tero
enzima:
C, 1E e 2E.
3. Coloque 2 ml de gua no tubo C (controle).
4. Coloque 2 ml de suco de abacaxi (no fervido) no tubo 1E.
5. Coloque 2 ml de suco de abacaxi fervido no tubo 2E.
6. Utilizando a proveta, coloque 10 ml de gelatina em cada tubo.
7. Agite os tubos com cuidado para que a gelatina se misture de forma homognea soluo contida
no tubo.
8. Leve os tubos geladeira e aguarde cerca de 30 min*.
*O tempo exato no possvel prever porque depende da temperatura de cada geladeira; o tempo do
experimento ser aquele necessrio para a amostra 1C endurecer.
Retire os tubos da geladeira e observe o aspecto da gelatina em cada tubo.

Resultado
Atravs do experimento foi observado que o tubo contendo suco de abacaxi fervido
8

(2E), a bromelina no teve uma reao efetiva sobre a gelatina, pois foi desnaturada pela
fervura e teve suas ligaes rompidas, permitindo que a gelatina assumisse o estado (gel),
enquanto o tubo contendo suco de abacaxi no fervido (1E) assumiu o estado (Sol),
demostrado que a bromelina efetivou sua catalise, pois se encontrava em condies timas
para executar suas funes, hidrolisando a gelatina (substrato). O tubo (C) assumiu o estado
(gel), pois no possua nenhuma enzima para catalisar a reao, atuando na funo de
controle.

Discusso:
Atravs dos experimentos realizados podemos observar que as enzimas devem estar em
condies apropriadas para que efetivem suas funes, pois as alteraes de tempo,
temperatura, concentraes e pH influenciam diretamente a velocidade das reaes e em
alguns casos deixando a reao de ser efetiva.

Bibliografia:

LEHNINGER, Albert L. Princpios de bioqumica. 4ed: So Paulo. Sarvier,

2006;

MARIOTO, Juliana Ribeiro; ESTGIO DE DOCNCIA Cintica

Enzimtica. Julho 2006;

DA POIAN, Andreia. Bioquimica I. v. 2/ Andreia Da Poian; Debora Foguel;

Marlvia Dansa-Petretski; Olga Tavares Machado; Ana Paula Abreu-Fialho. 5 ed. Ver.
Rio de Janeiro: Fundao CECIERJ, 2007.