Professional Documents
Culture Documents
Pigmentos e Minerais
Índice
Índice...............................................................................1
1. Introdução Teórica ..........................................................2
2. Protocolo........................................................................6
2.1. Material:...................................................................6
2.2. Técnica de Perls.........................................................6
2.2.1. Procedimento:.....................................................6
2.3. Fontana Masson.........................................................7
2.3.1. Procedimento:.....................................................7
2.4. Técnica de redução de sais - Azul Turnbull.....................7
2.4.1. Procedimento:.....................................................7
2.5. Branqueamento do pigmento de melanina.....................8
2.5.1. Procedimento:.....................................................8
2.6. Soluções elaboradas pelo grupo...................................8
3. Resultados obtidos..........................................................9
3.1. Resultado Fontana Masson..........................................9
3.2. Resultado Branqueamento do pigmento de melanina.......9
3.3. Resultados Azul Turnbull...........................................10
3.4. Resultado do Perls....................................................10
4. Discussão de Resultados ................................................11
5. Conclusão.....................................................................12
6. Bibliografia...................................................................12
7. Anexos ........................................................................13
7.1. Soluções:................................................................13
Página 1 de 13
Métodos e Técnicas de Histoquímica
Pigmentos e Minerais
1......................................Introdução Teórica
No organismo humano ocorrem uma série de processos
metabólicos e catabólicos que originam a formação de pigmentos,
sendo estes, substâncias especiais porque dão coloração ao tecido
que os possui, podendo estarem presentes de forma normal ou
patológica.
Os pigmentos podem classificar-se como endógenos, exógenos
ou artefactos, em que os endógenos se devem a um efeito do
metabolismo em situações normais ou patológicas; os exógenos são
depósitos de substâncias que têm origem no exterior do organismo e
os artefactos estão ausentes do tecido vivo e presentes no tecido
fixado.
Dos pigmentos endógenos fazem parte a hemoglobina,
hemossiderina, bilirrubina, lipofucsina, ceróide e cobre, enquanto que
nos exógenos se encontra o pigmento de tatuagem, de melanina, de
malária, de mercúrio e de crómio.
A hemossiderina é um pigmento proteico que contém no seu
interior ferro no estado iónico e que aparece como grânulos
intercelulares de cor amarela e castanha refringentes, que se
agrupam em amontoados. Este pigmento depois da fixação em formol
é insolúvel em soluções básicas, mas solúvel em soluções fortemente
ácidas.
A hemossiderina apresenta 3 características próprias:
Apresenta-se sob a forma de grânulos acastanhados e
isótopos visíveis ao microscópio óptico.
É revelador do ferro férrico.
Aparece no organismo em determinados locais e em
resposta ao metabolismo normal da hemoglobina e
pode aparecer em proporções superiores ou inferiores
ao normal em consequência de determinados estados
patológicos.
Página 2 de 13
Métodos e Técnicas de Histoquímica
Pigmentos e Minerais
H
HCl Cl
3K4[Fe²+(CN)6] + 4Fe³+Cl3 Fe4³+[Fe³+(CN)6]3 + 12KCl
Página 3 de 13
Métodos e Técnicas de Histoquímica
Pigmentos e Minerais
Página 4 de 13
Métodos e Técnicas de Histoquímica
Pigmentos e Minerais
Página 5 de 13
Métodos e Técnicas de Histoquímica
Pigmentos e Minerais
2. Protocolo
2.1.Material:
• Esguicho
• Pipetas de Pasteur
• Tinas de ranhuras baixas e de colo alto
• Gobelés
• Tabuleiro de coloração
• Provetas de 5mL, 10mL e 100mL
• Erlenmayer
• Funis
• Fracos de âmbar
• Papel de celulose
• Balança
• Colheres de plástico para fazer medição de reagentes
• Frascos de recolha de urina
• Estufa a 56ºC
2.2.Técnica de Perls
2.2.1. Procedimento:
(1) Desparafinar as lâminas em xilol – 10 min
(2) Hidratar em soluções decrescentes de álcoois e depois
em água corrente;
(3) Colocar uma solução de partes iguais de Ferrocianeto
Potássio a 2% e de Ácido Hidrocloridrico a 2% durante 25
min.;
(o ácido liberta os iões férricos da hemorriderina e
ferrocianeto potássio reage com os iões, dando origem ao
pigmento Azul de Prússia)
(4) Lavar em água corrente durante 5 min. e de seguida por
água destilada;
(5) Contrastar com solução de kernechtrot durante 3 min.;
(6) Passar rapidamente em água corrente;
(7) Desidratar em álcoois crescentes e depois em xilol;
(8) Montar;
(9) Observar ao M.O. hemossiderina corada de azul, o
citoplasma e núcleos corados de vermelho.
Página 6 de 13
Métodos e Técnicas de Histoquímica
Pigmentos e Minerais
2.3.Fontana Masson
2.3.1. Procedimento:
(1) Desparafinar as lâminas em xilol – 10 min
(2) Hidratar em álcoois decrescentes e depois em água
corrente.
(3) Colocar as lâminas em Nitrato de Prata filtrada a 56ºC
durante 1 hora;
(até o corte ficar com cor castanha devido à precipitação de
prata metálica sobre estruturas do tecido com capacidade
redutora)
(4) Lavar em água destilada
(5) Colocar Cloreto de Ouro a 1% durante 1 min.;
(6) Lavar em água destilada
(7) Colocar Tiossulfato de Sódio a 5% durante 5 min.;
(retira excesso de prata)
(8) Lavar em água;
(9) Contrastar com verde metilo durante 1 min.;
(10) Lavar em água
(11) Desidratar em álcoois crescente e depois em xilol;
(12) Montar;
(13) Observar ao M.O. a melanina e grânulos argentafins
corados de preto.
2.4.1. Procedimento:
(1) Desparafinar as lâminas em xilol – 10 min
(2) Hidratar em álcoois decrescentes e depois em água
corrente.
(3) Colocar sulfato ferroso 2.5% durante 1 hora
(formação de complexos: melanina + iões ferrosos do
sulfato ferrosso)
(4) Tratar o tecido com ferrocianeto de potássio a 1% em
ácido acético a 1% durante 30 min.;
(evidencia o complexo formado anterior)
(5) 1 ou 2 passagens rápidas em acido acético a 1%;
(retirar excesso de reagente)
(6) Contrastar com kernechtrot;
(7) Desidratar em álcoois crescentes e depois em xilol;
(8) Montar;
(9) Observar ao M.O. a melanina corada de azul-escuro ou
verde-escuro.
Página 7 de 13
Métodos e Técnicas de Histoquímica
Pigmentos e Minerais
2.5.1. Procedimento:
(1) Desparafinar as laminas (estas devem ser adesivadas)
em xilol durante 10 min.;
(2) Hidratar em álcoois decrescentes e depois em água
corrente;
(3) Tratar com solução de branqueamento durante 10 min.
(4) Lavar em várias passagens de água destilada;
(5) Colocar ácido oxálico a 1% durante 1 a 2 min.;
(remove o excesso de cor castanho dado pelo permanganato
de potássio acidificado)
(6) Lavar com cuidado em água corrente (para o corte não
descolar da lâmina) – 30 min.;
(7) Contrastar com kernechtrot durante 1 min.;
(8) Lavar em varias passagens de água destilada;
(9) Desidratar em álcoois crescentes e depois em xilol;
(10) Montar;
(11) Observar ao M.O. o corte sem melanina, se existir
alguma coisa marcada são lipopigmentos)
Nitrato de prata
Cloreto de ouro 1%
→ Cloreto de ouro – 1gr
→ Água destilada – 100ml
Tiosulfato de sódio 5 %
→ Tiossulfato de sódio – 5gr
→ Água destilada – 100ml
Ácido acético a 1 %
→ Ácido acético – 1ml
→ Água destilada – 99ml
Página 8 de 13
Métodos e Técnicas de Histoquímica
Pigmentos e Minerais
Ácido oxálico a 1%
→ Ácido oxálico – 1gr
→ Água destilada – 100ml
3. Resultados obtidos
Página 9 de 13
Métodos e Técnicas de Histoquímica
Pigmentos e Minerais
3.4.Resultado do Perls
Página 10 de 13
Métodos e Técnicas de Histoquímica
Pigmentos e Minerais
4. Discussão de Resultados
Página 11 de 13
Métodos e Técnicas de Histoquímica
Pigmentos e Minerais
5. Conclusão
Com a execução das técnicas realizadas na actividade
experimental foi nos possível adquirir conhecimentos mais
aprofundados quanto as técnicas especiais que se podem realizar
para a detecção de alguns pigmentos, nomeadamente a melanina.
Para alem destes factor podemos observar que para a determinação
de pigmentos existem uma enorme diversidade de técnicas que se
podem utilizar e que apenas a execução de uma técnica por vezes
pode induzir em erro quanto ao tipo de pigmento existente no tecido,
daí a necessidade de executar diversas técnicas diferentes para a
pesquisa de um pigmento, de modo a permitir que as conclusões
quanto ao tipo de pigmento sejam exactas.
6. Bibliografia
Página 12 de 13
Métodos e Técnicas de Histoquímica
Pigmentos e Minerais
7. Anexos
7.1.Soluções:
Verde de metilo 1%
Solução de branqueamento:
Página 13 de 13