4QM1 SECCION 1

*LOPEZ RAMIREZ STEPHANY

*MENDOZA GARCES DANIA FERNANDA

INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS
DEPARTAMENTO DE BIOQUIMICA
DR. GUILLERMO CARVAJAL SANDOVAL
PRACTICA 7: OBTENCIN DE GLUCGENO A PARTIR DE HGADO DE RATA Y SU CARACTERIZACIN QUMICA

1.-

Sacrificar
*OBJETIVOS
una rata
rata
una
Se realizar el aislamiento y purificacin del glucgeno
a
con eter
partir del hgado de un organismo vivo y se(procurand
identificar la
(procurand
composicin de los productos por medio de hidrlisis
o
no
o no
cida y enzimtica por medio de reacciones excitarla)
qumicas
caractersticas.

2.- Extraer
rapidamente
*INTRODUCCION
el higado
higado y
y
el
El glucgeno es la forma de almacenamiento
lavarlo al
de la glucosa en los tejidos animales.
Se
chorro
de
agua
encuentra principalmente en el hgadoagua
y en el
msculo representando hasta un 10%
un 1- y
3.- ypesar
pesar
3.y
2% de su peso hmedo, respectivamente.
cortar
rapidamente
el
Est formado por unidades de glucosa
unidas
higado en
por enlaces (1-4) y ramificaciones (1-6).
pedazos
pequeos
4.- colocar los
pedazon es un
mortero
mortero
previamete
sumergido en
hielo.
5.- Aadir acido
tricloroacetico
(TCA)
10% en
(TCA) al
al 10%
en
proporcion de
1ml/g
1ml/g de
de tejido
tejido
hepatico,
hepatico, triturar
triturar
El glucgeno acta como reguladoreldehigado
la
hasta
formar
una
formar una
glucosa sangunea, almacenndola como
pasta
pasta
glucgeno durante una buena alimentacin
homogenea.
6.(glucogenognesis) y liberndola por
centrifugar
el
centrifugar
el
fosforolisis (glucogenolisis) durante el ayuno,
homogenizad
ya que en esta situacin no hay absorcin
o
o durante
durante 5
5
a 2000
intestinal. La duracin del glucgeno min
heptico
en ayunas es de aproximadamente 24 h. rpm.
A
7.-Decantar
el
partir de este momento, la concentracin
en
7.-Decantar
el
.un
vaso
de
sangre se mantiene por sntesis de glucosa a
250 ml y
partir de sustancias distintas a los mantenerlo
mantenerlo
carbohidratos
en hielo.

13.- Desechar

el
sobrenadante y
resuspender el
precipitado con
5 ml de agua
destilada

12.-

Centrifugar
a 2000 rpm
durante 5
min.
11.- Aadir 2
volumenes
de
volumenes de
etanol por
volumen de
sobrenadante.
sobrenadante.
agitar esta
mezcla y dejar en
reposo
reposo hasta
hasta que
que
el glucogeno
flocule
10.- Decatar el
liquido
sobrenadante y
reunirlo con el
obteido en el
paso 7.

14.14.- Volver
Volver a
a
precipitar
con 2
volumenes
volumenes
de etanol.
15.15.centrifugar
centrifugar a
a
2000 rpm
durante 3
min.
min.
16.16.- Decantar
Decantar
y suspender
con la menor
cantidad
posible de
alcohol
alcohol
absoluto y
pasarlo a un
vidrio
reloj
vidrio reloj
para que
seque y
cristalice
cristalice

9.- dejar
reposar por
5 min y
centrifugar
a 2000
rpm.
8.- Lavar el
mortero y pisilo
con 10 ml de
TCA al 5% y en
este
liquido
este liquido
reuspender en
el precipitado
de
de
centrifugacion
aterior
aterior

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*LOPEZ RAMIREZ STEPHANY

*MENDOZA GARCES DANIA FERNANDA

*Explicacin de cada paso:

13.- El sobrenadante se desecha pues no contiene
ningn compuesto de inters.

1.- La rata no debe excitarse puesto que si esto sucede

esta empezara a segregar glucgeno lo que ocasionara
que obtengamos menos de lo estimado.

14 y 15.- se repite el procedimiento para que el

precipitado sea el mayor posible y obtengamos mayor
cantidad de glucgeno.

2.- El Hgado debe extraerse de manera rpida puesto

que entre ms nos tardemos se producirn enzimas que
degraden el glucgeno esta se tiene que lavar para
quitar la sangre pues esta es una impureza para nuestra
extraccin de glucgeno.

16.- Se decanta el precipitado en una charolita y se le

agrega etanol para deshidratarlo y este cristalice.
*Caracterizacin qumica del glucgeno.

3.- Se debe pesar el hgado pues necesitamos este dato

para el clculo de rendimiento,
TUBO
1
se cortara en pedazos
Glucgeno (ml)
2
pequeos para que sea ms
HCl
1N
(ml)
2
sencillo triturarlo.
HCl 2N (ml)
HCl 4N (ml)
4 y 5.- El tratamiento posterior
Amilasa con.
con cido tricloroactico (TCA)
(ml)
hace que precipiten las
Amilasa 1:2 (ml)
protenas y cidos nucleicos
de la mezcla.
NaCl al 5%
Agua dest.
Incubar 30min

6.-Se centrifuga para que

todos los componentes que no
necesitas queden en el precipitado que se formara como
protenas, mezcla de clulas y la arena que se utiliz
para triturar.
7.- Se decanta el sobrenadante para que en el
obtengamos el glucgeno, y de igual manera se
encontraran en esta agua y TCA.
8.- Se lava el mortero y el pistilo con el TCA para que
recolectemos la pasta homognea que quedo en ellos.
9.- se centrifuga de nuevo por la misma razn del paso 6.
10.- se decanta el sobrenadante para juntarlo con el
sobrenadante inicial para poder obtener la mayor
cantidad de glucgeno posible.
11.-Se le agrega etanol para que se separe el glucgeno
del sobrenadante y se precipite.

2
2

3
2

4
2

5
2

6
2

a) Preparar 15mL de una

solucin de glucgeno de
5mg/ml.
b) Preparar una serie de tubos
segn la tabla.

2
2
2
2
1got
a

1gota

2
92C

37C

*RESULTADOS
Rendimiento, Porcentaje de
glucgeno presente en la
rata.

Charola= 1.3851g
Charola con Glucgeno= 1.9114g
Glucgeno= (1.9114g-1.3851g)= 0.5263g peso seco
Peso de Hgado= 14g
Peso de hgado
14g
0.5263g

100%
X

% de glucgeno

100%
X

X=

3.75% de glucgeno presente en el hgado de nuestra

rata

Caracterizacin qumica.

12.- Se centrifuga para que el glucogeno quede

precipitado.

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*LOPEZ RAMIREZ STEPHANY

*MENDOZA GARCES DANIA FERNANDA

Prueba
Ninhidrin
a

Biuret

Molish

Acida
Hidrolisis

1
N

2
N

4
N

Fehling
Lugol
Seliwanof
f

+
-

+
-

+
-

Testigo
Glucgeno
sin
hidrolizar
+

Enzimtica

Observaciones
Negativo
Nos indica que nuestro problema no
hay aminocidos, ya que es una
reaccin caracterstica para grupos
amino libres.
Negativo
En nuestro problema no hay
presencia de protenas debido a q la
reaccin es para identificar
protenas y pptidos de cadena
menor a 3 unidades de a.a.
Positivo
Se identifico que nuestro problema
es un carbohidrato. La reaccin de
Molish es general para
carbohidratos.

Imagen

Blanco

Conc.

1:2

Agua

+
-

+
-

*ANALISIS DE RESULTADOS
Prueba de Fehling
En la hidrlisis cida como en la hidrlisis enzimtica se
obtuvieron resultados positivos en los tubos hidrolizados,
esta prueba se realiza para identificar los carbonilos
potencialmente libres que estn involucrados en enlaces
glucosidicos (azucares reductores) gracias a esto
podemos decir que en nuestra muestra probablemente
hay presencia de glucosa, maltosa o fructosa. En el tubo
testigo del glucgeno sin hidrolizar dio negativo, debido a
que sus grupos estn bloqueados debido a los enlaces
alfa-1,4 y alfa-1,6; no posee iones libres par que se lleve
a cabo la reaccin.

Prueba de Seliwanoff
Los resultados fueron positivos para 5 tubos, el tubo
testigo del glucgeno dio negativo debido a que no se
hidrolizo. En esta prueba podemos diferenciar aldosas de
cetosas, las cetosas dan rpido y las aldosas lento, por
lo tanto podemos decir que el azcar presente es una
aldosa (glucosa).
Prueba del lugol

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Cascada del glucgeno

Dio positivo en el tubo testigo del glucgeno, debido a

que al no ser hidrolizado el glucgeno es capaz de
atrapar al lugol por ser un polisacrido lineal, formando
caltratos.
*CONCLUSIONES

-Los seres vivos almacenan glcidos en forma de

polisacridos, que sirven como materiales de reserva
como es el caso del glucgeno en los animales.
-El glucgeno contiene unidades de glucosa unidas por
enlaces glicosdicos alfa-1,4 y alfa-1,6.
-Se caracteriz al problema por reacciones qumicas,
dando como resultado la identificacin del glucgeno.
*PREGUNTA EXTRA

*BIBLIOGRAFIA
*Lehninger, Albert, Nelson, David L. (1993). Principios
de Bioqumica. Segunda Edicin, Ediciones Omega,
Barcelona, Espaa.