FACULTADTtulo:

DE CIENCIAS FARMACEUTICAS Y
BIOQUIMICAS

MANEJO DE LOS PRINCIPALES EQUIPOS E

INSTRUMENTOS, PREPARACIN DE MATERIAL
DE VIDRIO, MATERIAL AUXILIAR Y SU FORMA
DE ESTERILIZACION

Asignatura: Microbiologa
Docente responsable: Jacinto Hervias, Pedro
Grupo de laboratorio: G1
Integrantes:

Ajahuana Villafan, Teresa Mnica

Cruzat Campos, Alexandra
Echeverra Vega, Patricia
Huaman Pashanasi, Gisela
Quintana Blas, Paola
Silva Villacrez, Jhuliana
Vargas Huyhua, Milagro

Semestre acadmico: 2015 2

Ciclo acadmico: VIII

LIMA PER
2015
INTRODUCCIN

INTRODUCCIN
Un laboratorio de microbiologa es un lugar convenientemente habilitado donde se
puede habilitar, manejar y examinar microorganismos. Este tipo de trabajo debe
ser llevado a cabo con una buena tcnica asptica y por tanto se requiere un
ambiente limpio y ordenado. Cuando manejamos cualquier tipo de muestra
debemos evitar que microorganismos ajenos a nuestros cultivos y presentes en el
ambiente se introduzcan en ellos contaminndolos, o que los microorganismos de
la muestra nos contaminen a nosotros. Por ello se debe trabajar en condiciones de
estabilidad. En el laboratorio de microbiologa encontraremos estas condiciones
bien en campanas de seguridad biolgica o bien en la proximidad de la llama de
un mechero de alcohol o de gas. Aunque los microorganismos que se manipulan
no se han considerados patgenos todos los cultivos de todos los microorganismos
deben ser manejados con precaucin por su potencial patogenicidad Las bacterias
y otros microbios crecen mejor cuando se mantiene a temperaturas ptimas. Por lo
tanto, los laboratorios son generalmente equipados con una incubadora. Una
incubadora es similar a un horno y ms capaz de mantener una temperatura
bastante constante. Muchas especies de bacterias crecen ptimamente a 37
grados centgrados, 98.6 grados Fahrenheit. Esta es la misma que la temperatura
del cuerpo se encuentra en los seres humanos normales. Las especies bacterianas
encontradas en muestras de suelo en general, prefieren una temperatura ms fra
de crecimiento de alrededor de 25 grados Celsius. Es importante mantener un
ambiente libre de contaminantes dentro de la incubadora con una limpieza
asptica despus de cada uso, Por eso se debe existir un procedimiento de control
de calidad, como lugar en el que se cultivan y manipulan microorganismos
patgenos, requiere medidas especiales de seguridad y control, para proteger del
contagio al personal que trabaja en l y evitar el paso de microorganismos al
medio externo.
La esterilizacin es la completa eliminacin de microorganismos y sus formas de
resistencia (esporas).
En esta prctica aprenderemos los materiales, equipos y esterilizacin de los
instrumentos que se usa en un laboratorio de Microbiologa.

I.

II.

OBJETIVOS

MARCO TEORICO
a) EQUIPOS E INSTRUMENTOS

a) Materiales de vidrio

Placa Petri: sirve para crear cultivos microbianos

Asa de siembra : asa para siembra por diseminacin en
superficie
Pipeta: traspaso de lquidos en volmenes exactos
Embudo: permite filtrar sustancias
Matraz: permite preparar las soluciones liquidas
Cubre objetos: cubre las preparaciones microscpicas sobre
el porta objetos
Porta objetos: lamina donde se coloca el objeto para poder
ser observado en la microscopia
Luna de reloj: utensilio que permite contener sustancias
corrosivas

b) Materiales de metal

Mechero: utensilio metlico que permite calentar sustancias

c) Equipos

Centrifuga : Se utiliza en la separacin de slidos suspendidos en

lquidos. Hay centrfugas de tamao y velocidades variables, la
velocidad, se mide en revoluciones por minuto, La velocidad a la
cual sedimentaran las partculas en un lquido dependen de varios
factores :Tamao de la partcula. El peso de la partcula. La
viscosidad del lquido. La fuerza gravitacional. Ultra centrifugacin;
para obtener alteraciones elevadas (mayor o igual a 100000 g),
pueden ser: Ultra centrifugacin analtica: para determinacin de
caractersticas fsicas de protenas o de cido nucleicos. Ultra
centrifugacin preparativa: permite la separacin de organelo
Incubadora: una incubadora es un dispositivo que sirve para
mantener y hacer crecer cultivos microbiolgicos o cultivos
celulares. La incubadora mantiene la temperatura, la humedad y

otras condiciones en grado ptimo, tales como el contenido de

dixido de carbono (CO2) y de oxgeno en su atmsfera interior.
Las incubadoras son esenciales para una gran cantidad de
trabajos experimentales en biologa celular, la microbiologa y en
biologa molecular y se utilizan para cultivos celulares, tanto
bacterianos como de clulas eucariotas.
Autoclave: Una autoclave es un recipiente de presin metlico de
paredes gruesas con un cierre hermtico que permite trabajar a
alta presin para realizar una reaccin industrial, una coccin o
una esterilizacin con vapor de agua. Su construccin debe ser tal
que resista la presin y temperatura desarrollada en su interior. La
presin elevada permite que el agua alcance temperaturas
superiores a los 100 C. La accin conjunta de la temperatura y el
vapor produce la coagulacin de las protenas de los
microorganismos, entre ellas las esenciales para la vida y la
reproduccin de stos, hecho que lleva a su destruccin.
Horno estabilizador: Los hornos de aire caliente, tambin
llamados hornos de calor seco, son dispositivos elctricos
utilizados para esterilizacin que forman parte del equipamiento
de laboratorio. El horno utiliza calor seco para esterilizar los
objetos que se introducen en l. En general, pueden funcionar con
temperaturas comprendidas entre 50 y 300 C (de 122 a 572 F).
Bao mara: El bao de mara o bao serolgico para laboratorio
es un equipo que se utiliza en laboratorios de qumica, este equipo
se utiliza para el calentamiento indirecto, por conveccin trmica
del medio y de sustancia, se basa en un mtodo empleado para
conferir la temperatura uniforme a una sustancia liquida o solida,
sumergiendo el recipiente que lo contiene en otro mayor con agua
que se lleva hasta la ebullicin.

b) FORMAS DE ESTERILIZACION
Limpieza, desinfeccin y esterilizacin El material que se utiliza en el
laboratorio de microbiologa se contamina y se contamina con grmenes.
Al reutilizarlo, este material puede transmitir los grmenes a otras
personas o a la muestra que se est analizando, contaminndola y
afectando a los resultados de los anlisis que se lleven a cabo con ella.
Ambos problemas conducen a enfermedades, a repeticin de anlisis, a
errores en el diagnstico, etc. Para evitar esos riesgos tenemos dos
opciones:

Utilizar material desechable, que se elimina despus de un solo uso.

Lavar el material utilizado, desinfectarlo y, si es necesario,
esterilizarlo antes de su reutilizacin.

La esterilizacin es un procedimiento fsico, qumico o combinado, que

destruye todos los microorganismos y las esporas de una superficie o de
un material. Podemos clasificar en tres grupos los objetos que se
esterilizan en un laboratorio:

Aquellos que utilizars para tomar muestra, siempre que haya de

hacerse con material estril: frascos contenedores, esptulas,
bisturs, pinzas, etc.
Los objetos de vidrio o de acero inoxidable que usars en los distintos
anlisis microbiolgicos: los tubos de vidrio en los que se han
realizado las diluciones decimales, las pipetas.
Mtodos fsicos de esterilizacin: del mismo modo que la desinfeccin, la
esterilizacin se puede llevar a cabo usando mtodos fsicos o qumicos.
Los mtodos fsicos se basan en aplicar a un objeto una energa tan
intensa que elimine los seres vivos. Esta energa puede producirse
mediante calor seco, calor hmedo o irradiacin con rayos gamma,
aunque tambin se puede esterilizar utilizando filtros que impidan el
paso de los microorganismos.
c) La esterilizacin mediante calor seco: El calor seco oxida las
protenas o incluso carboniza la materia orgnica. Puede aplicarse
mediante incineracin, flameado o calor seco. - La incineracin Los
objetos o los productos de desecho se introducen en un horno, que se
calienta a una temperatura muy alta, de modo que elimina los
microorganismos al mismo tiempo que destruye el objeto. En ellos se
incineran los residuos clnicos infecciosos o los cadveres de animales de
experimentacin o sus rganos. En empresas especializadas se incineran
residuos qumicos, como frmacos citostticos, medicamentos
caducados, productos del revelado de radiografas, envases vacos de
anestsicos o incluso envases del plstico PVC. - El flameado El flameado
consiste en colocar el objeto dentro de una llama durante un mnimo de
20 segundos. Este procedimiento est actualmente en desuso.
Las estufas de esterilizacin En trminos sencillos, una estufa de
esterilizacin funciona como un horno elctrico: unas resistencias
calientan su interior hasta 200C y un reloj y un termostato regulan el
proceso. El aparato tiene estantes y una pared doble, aislante, para
conservar el calor y evitar quemaduras a las personas que lo manipulan.
Existen dos variantes de estas estufas: la estufa Poupinel, que es ms
pequea, y el horno Pasteur. En las estufas de calor seco pueden
esterilizarse los objetos de vidrio o de porcelana y los instrumentos
metlicos, despus de empaquetarlos en cajas metlicas o en bolsas de
papel de aluminio. Se necesita 1 hora a 170 C para los dos primeros y 2
horas a 160C para los segundos y el tiempo empieza a contar desde
que el aparato alcanza la temperatura indicada. Por eso la duracin total
del ciclo de esterilizacin, incluyendo calentamiento y enfriamiento,

puede ser de dos horas en el primer caso y de ms de dos horas y media

en el segundo.
A) La estufa de calor seco tiene varias desventajas :
Es un sistema lento (porque se esterilizan pocos instrumentos en
cada ciclo).
Algunos materiales no soportan estas temperaturas (los plsticos,
las gomas o los tejidos).
Deteriora el filo de los instrumentos metlicos delicados .
Aun as, es un mtodo sencillo y relativamente barato y su
utilizacin es frecuente en laboratorios farmacuticos y
veterinarios.

B) Procedimiento de uso de la estufa de esterilizacin

Coloca los instrumentos en el interior de la estufa, una vez

empaquetados.
Ponla en marcha.
Selecciona la temperatura en el termostato y el tiempo en el reloj,
en funcin del material que vayas a esterilizar. La temperatura se
va elevando progresivamente hasta alcanzar la seleccionada, algo
que puedes ir comprobando con el termmetro interior.
El aparato se detiene cuando se consume el tiempo programado.
Deja que vaya descendiendo la temperatura hasta que est a
menos de 30 C. Abre entonces el horno y cierra las cajas de
instrumental antes de sacarlas.

C) La esterilizacin mediante calor hmedo:

El mtodo de esterilizacin ms conocido que utiliza el calor hmedo
es el autoclave, aunque con l puede conseguirse esterilizacin o
desinfeccin, en funcin del tiempo y de la temperatura
seleccionados. El autoclave En nuestra vida cotidiana aprovechamos
dos cualidades del vapor de agua: su penetracin y su facilidad para
difundir el calor. Estas dos cualidades son la base del autoclave. La
autoclave es un recipiente de paredes gruesas con tapa hermtica,
con mandos para regular la temperatura, el tiempo y la presin. En
trminos sencillos, un autoclave funciona como una olla a presin. El
vapor de agua es mucho ms penetrante que el calor seco , lo que
permite que el autoclave pueda trabajar a temperaturas ms bajas
que la estufa Poupinel y conseguir el mismo resultado.

D) La esterilizacin en fro:
La esterilizacin en fro se consigue usando rayos gamma, una
forma de radioactividad, que son radiaciones con mucha energa,
capaces de destruir los grmenes. Estas radiaciones son tan
penetrantes que esterilizan el material aunque est envuelto en

plstico e incluso dentro de cajas de cartn o madera. La irradiacin

no deja residuos radioactivos en los objetos. Ahora bien, a causa de
esta inmensa capacidad de penetracin, es imprescindible que las
instalaciones para la irradiacin estn muy bien aisladas, para evitar
que los rayos gamma afecten a las personas o se dispersen por el
ambiente. Dado que estas instalaciones son muy complejas y caras,
las emplean las industrias especializadas que fabrican material
desechable, como catteres intravenosos, vlvulas, placas de Petri o
material plstico de un solo uso, como asas de siembra, pipetas y
puntas de pipeta.
E) Los mtodos qumicos de esterilizacin :
Algunos instrumentos no soportan temperaturas superiores a 60C,
como los que contienen fibra ptica o los plsticos termolbiles, por
lo que es necesario esterilizarlos en fro mediante sustancias
qumicas. El problema es que las sustancias qumicas, utilizadas en
concentraciones y durante perodos suficientes para ser letales para
todos los microorganismos, son txicas tambin para las personas,
de modo que hay que usarlas con unas precauciones especiales.
Existen diferentes compuestos
Utilizables como esterilizadores qumicos: el ms comn es el
glutaraldehdo.
Equipos:
INCUBADORA:

termostato
Boton de controles
Boton de encendido
y apagado

Rejilla
de
divisin
del
cuerpo interno
de
la
incubadora

Puerta del equipo

Puerta de cristal

III.

METODO EXPERIMENTAL

a) Materiales
b) Examinacin de los equipos
Anlisis de la autoclave (equipo de esterilizacin)

Anlisis de la incubadora
Anlisis de la estufa

Anlisis de la Campana

c) Observacin
bacteriano:

del cultivo

Se

coloc el haz de
siembra (forma
redonda) en el
mango para obtener la cantidad de siembra correcta , antes de ello
se pas a su esterilizacin
Pasos de la esterilizacin:

se llev al mechero de bunsen durante unos minutos , hasta

que este rojo vivo ( esto demuestra su esterilizacin)

Una vez realizado la esterilizacin , se rosa para poder

obtener un pequeo trozo de la muestra de cultivo
bacteriano

Se prepara el porta objetos primero esterilizndolo en el

mechero ,luego se procedi con agregar unas 3 gtas de
agua destilada y aadiendo la muestra sustrada del cultivo
bacteriano

Se procede a ver el microscopio: procedemos a observar y

describir lo que estamos viendo ya sea forma tamao

d) Pasos para una correcta empaquetamiento del material:

Se prepar antes tapones para los tubos de ensayo


la placa
Primero se
papel kraft en 30cm x 30cm de
manera que cierre por completo al juego de placa Petri , se
parte sobrante en zona superior luego la puntas restantes
emite un movimiento hacia atrs

Para
Petri:
corta el
tal
dobla la
se

Luego se procede a sellar con el pabilo sujetndolo en forma de

cruz doblemente

Obs: La placa Petri ms pequea debe est en la parte superior cubriendo a la

ms grande de tal manera que esto prevenga que el cultivo no se vea afectado

Para la pipeta : Se procede a realizar tiras los cortes al papel

kraft son de un ancho de 4.5cm y un largo de 30cm para en forma
diagonal proceder envolverlos empezando por la punta

Y finalmente aplastar la seccin sobrante de tal manera que

este ajustada con pabilo

IV.

RESULTADOS Y DISCUSION

EN

EL

PREPARACIN
DEL
MATERIAL DE VIDRIO DE USO
LABORATORIO

Al
realizar
la
preparacin
de
material
de vidrio debimos de asegurar
que los materiales de vidrio este correctamente limpios.
Una vez teniendo los materiales correctamente limpios procedimos
a envolverlos con papel Kraft antes de su esterilizacin.
Placa Petri .Pudimos envolverlas de 1 hasta 3 unidades en cada
paquete y al termino sujetarlo con pabilo para asegurar la
envoltura.

Pipetas: Se envuelven completamente con papel kraft, se usaron

tiras
de este papel y se las envuelve en forma diagonal y
empezando por la punta, de forma que
la pipeta quedar
ntegramente cubierta por el papel kraft. Luego se produce a
Rotular, por la parte externa del papel, la capacidad de la pipeta.

Tubos de ensayo y matraz de Erlenmeyer: Se

colocan en los dos materiales de vidrio una torunda de
algodn la cual sea consistente.

V.

CONCLUSIONES

VI.

Es necesaria la preparacin (envoltura) de los materiales de vidrio a

utilizar, teniendo en cuenta que las placas Petri siempre deben de ser
envueltas al revs, la envoltura hace posible que no entren en contacto
directo con las manos del operador las cuales podran estar
contaminadas, lo cual afectara el trabajo que se estuviera realizando.
Los equipos de laboratorio mencionados son los de mayor uso que
daremos en prctica , como por ejemplo la incubadora nos proporcionara
un ambiente adecuado , la estufa nos generara una corriente de aire
interna la cual eliminar rastros de humedad , etc. .
La placa Petri se coloca en la incubadora de forma que la tapa de la
placa este como soporte, esto debido a que si se produjeran gases, estos
no contaminen lo sembrado.

CUESTIONARIO
1. Con qu propsito se envuelve totalmente el material a
esterilizar?
El propsito de cualquier sistema de envoltorio es el de contener
estos objetos y protegerlos de la contaminacin por suciedad,
polvo y bacterias. El paquete debe preservar la esterilidad de su
contenido hasta el momento de su apertura, momento a partir del
cual sern utilizados en rea estril. Los objetos deben estar
envueltos de manera tal que el envoltorio que los contiene pueda
ser abierto y su contenido extrado sin contaminaciones.

2. En un cuadro comparativo explicar las diferentes formas y

condiciones del proceso de esterilizacin que se emplea
segn el tipo de material a esterilizar

PROCESO

EMBALAJE POSIBLE

ESTERILIZACIN POR
CALOR HUMEDO

conocido que utiliza el

calor hmedo es el
autoclave, aunque con l
puede
conseguirse
esterilizacin
o
desinfeccin, en funcin
del tiempo y de la
temperatura
seleccionados

ESTERILIZACIN POR
CALOR SECO

El calor seco oxida las

protenas
o
incluso
carboniza
la
materia
orgnica. Puede aplicarse
mediante
incineracin,
flameado o calor seco

ESTERILIZACIN POR
OXIDO DE ETILENO

ESTERILIZACIN POR
PLASMA DE PEROXIDO DE
HIDROGENO

El gas EtO se filtra en los

paquetes as como en los
propios productos para
acabar con los
microorganismos que
quedan despus del
proceso de produccin o
envasado

- Papel grado quirurgico (ideal)

-Papel Kraft norma IRAM 3106
-Cartulinas
-Tela tejida/no tejida
-Pouch polipropileno
-Vidrios (lquidos)
-Contenedor rgido perforado
con filtro

-Caja metal
-Foil aluminio
-Vidrios
-Poliamida

-Papel grado quirrgico

-Papel Kraft normas IRAM
3106
-Pouch
polietileno/polipropileno
-Polietileno baja densidad
-Tela tejida/no tejida
-Polipropileno
-Contenedor rgido perforado
con filtro

-Polipropileno
-Pouch de Tyvek

3. Informar en forma concisa el uso e importancia de los

equipos descritos en la practica
En este informe hayamos los conocimientos adquiridos en la
Unidad de esterilizacin la importancia, el cuidado, la
responsabilidad, el inters por la salud del paciente y de nosotros
mismos. Experimentamos el proceso de eliminacin de
microorganismos a utensilios reutilizables por donde ingresan
quienes reciben el material, como es el tratamiento que se le da a
este producto para que siga siendo utilizado. Y a su vez es muy
importante para tener buenos resultados.