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DETERMINCIN DE AMINOACIDOS TERMINALES
CON GRUPO ALFA AMINO LIBRE. MTODO DE
SANGER.
INTRODUCCION.
La determinacin de la estructura primaria de una protena
suele denominarse secuenciacin Existen varias maneras de
determinar la secuencia de aminocidos, el primero en
lograr esto fue Frederick Sanger, quien diseo un mtodo
capaz de determinar la secuencia de los aminocidos en una
protena, el cual consiste en el marcaje del amino terminal a
travs del uso del 1-Fluoro-2,4-Dinitrobenceno (DNFB).
Este compuesto qumico color amarillo reacciona con los
grupos amino libres en condiciones ligeramente bsicas,
formando los dinitrofenil derivados (DNP-aa), tambin
reaccionara con los grupos imidazol, fenlicos y epsilon
amino; por lo que se dar una dinitrofenilacion en la cadena
lateral de la Tirosina, Histidina y Lisina.
Al hidrolizar el pptido o la protena ya dinitrofenilada, se
da una ruptura total de los enlaces peptdicos, lo que nos da
como resultado un hidrolizado que contendr aminocidos
libres y DNP derivados que se conservan intactos, ya que su
enlace es ms difcil de romper.
Los DNP de aminocidos terminales, a diferencia de los
dems DNP y de los aminocidos libres, son no polares por
lo que se pueden extraer muy fcilmente con un disolvente
no polar.
Estos DNP de aminos terminales son sometidos a una
cromatografa en capa fina o en papel Whatman; por lo que
se determina por comparacin con otros DNP derivados de
aminocidos, al amino terminal de la protena.
OBJETIVOS.
El alumno utilizara el mtodo de Sanger para identificar los
aminocidos que contienen el grupo alfa-amino terminal de
las cadenas de la molcula de hemoglobina.
3 con 12 gotas
nuevamente el
al enlace C-N,
romper a este
RESULTADOS.
INTERPRETACION DE CADA PASO EFECTUADO
EN LA PREPARACION DEL DERIVADO
DINITROFENILADO.
MUESTRA
DNP- Glu
DNP-Val
DNP-Asp
DNP-Ala
DNP-Phe
DNFB
PROBLEMA 1ra Mancha
PROBLEMA 2da Mancha
RFs
( 24.5) / ( 32.3) = O.75
( 23.7) / ( 32.7) = O.72
( 25.2) / ( 33.1) = 0.76
( 21.5) / ( 33.3) = 0.64
( 20.5) / ( 33.0) = 0.62
( 17.3) / ( 33.0) = 0.52
( 19.1) / ( 32.6) = 0.58
( 23.9) / ( 32.4) = 0.73