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Bandeo R

Conceptos bsicos
El cariotipo que es posible elaborar mediante la tcnica de tincin uniforme da una
informacin muy limitada, ya que no permite la identificacin individual de cada
cromosoma. Las tcnicas de bandas cromosmicas han colaborado notablemente en la
ampliacion de la informacin acerca, no slo de la morfologa cromosmica sino de sus
cambios en los reordenamientos estructurales. Adems de la construccin ms ajustada
de cariotipos, las tcnicas de bandas permiten la descripcin detallada de cada
cromosoma y de cambios cromosmicos, localizacin de marcadores y la comparacin
de cromosomas entre especies relacionadas o dentro de una misma especie. Las bandas
cromosmicas se corresponden con variaciones en la estructura longitudinal de la
cromtide/a, puestas en evidencia por las distintas tcnicas de tincin. Cada par de
cromosomas homlogos se diferencia de los otros pares por su contenido de secuencias
de ADN repetitivo y por la constitucin de la cromatina en trminos de secuencias de
bases. Las tcnicas de bandas cromosmicas ms utilizadas son G, Q, R, C, DAPI y
NOR.
Organizacin cromosmica
Las molculas de ADN asociadas con protenas y ARN pasan a travs de diferentes
grados de compactacin durante los diversos estados del ciclo celular y es slo en el
estadio de mxima compactacin durante la mitosis cuando pueden ser observados los
cromosomas como entidades bien definidas.
Varios tipos de estructuras pueden ser observadas de acuerdo con los tratamientos o
tinciones en la examinacin cromosmica:
Eucromatina: revelada por mtodos de tincin que producen las llamadas bandas
Q, G y R, corresponde al ADN que se transcribe. El nombre viene de Quinacrina,
Giemsa y Reverse respectivamente. Algunos de los patrones que se producen
pueden ser superpuestos:

Bandas Q+ fluorescentes = bandas G+ fuertes = bandas R- dbiles


Bandas Q- poco fluorescentes = bandas G- dbiles = bandas R+ fuertes.

Heterocromatina constitutiva: se tie con bandas C (centrmero). Es la fraccin


de cromatina que no se descondensa durante la interfase y la cual est presente en
todos los cromosomas de casi todas las especies. Contiene ADN altamente
repetitivo, rico en AT o GC y se replica tardamente en la fase S.
Regiones telomricas: son reveladas con bandas T (Terminal). Compuestas por
eucromatina ya que constituyen una subfraccin de las bandas R. Se hallan en
telmeros y contienen repeticiones en tandem ricas en GC. Estas secuencias pueden
ser detectadas por hibridacin in situ con sondas de ADN telomerico.

Centrmeros: aparecen luego de tincin con Giemsa. Pueden ser vistos por tcnicas
de inmunofluorescencia ya que estas estructuras contienen una regin cinetocrica
rica en protenas especficas y ADN, considerado como heterocromatina
constitutiva. Presentan regiones que son ricas en ADN repetitivo llamado satlite
que tambin se puede caracterizar y poner en evidencia por la accin de distintas
enzimas de restriccin (ERs)
Organizadores nucleolares: bandas NORs, se tien con plata y se exncuentran en
general asociados a regiones telomricas si bien pueden tenerv tambin ubicacin
intersticial, correspondiendo siempre a la constriccin secundaria ya que la primaria
es el centrmero donde no hay NORs.
Bandas R
Principio
Las bandas R se corresponden con regiones ricas en GC, o sea, corresponde a un
alineamiento cromosmico base especfico. Esto se sustenta por:
Tratamientos que sistemticamente producen bandas R, involucran desnaturalizacin
seguida por renaturalizacin diferencial del ADN y es sabido que un ADN enriquecido
con secuencias GC es ms resistente a la desnaturalizacin. Estos tratamientos entonces
permiten que regiones de ADN desnaturalizado (bandas R) ricas en GC pero no ricas en
AT (bandas G) se renaturalicen.
Los patrones de bandas R pueden ser obtenidos sin desnaturalizacin mediante el uso de
A3
componentes fluorescentes tales como la cromomicina
y la mitramicina, los
cuales tienen alta afinidad por regiones ricas en GC.
Las bandas R en humanos contienen secuencias ALU que se desnaturalizan ms
lentamente y se renaturalizan ms rpidamente que las secuencias KpnI debido a que las
primeras son ms ricas en GC que las ltimas, ms cortas y por lo tanto menos
complejas y a menudo, presentan tambin repeticiones invertidas.
Protocolo
1. Incubacin a 87 C por 30 90 min con una solucin Earle 1X a pH 5,3
2. Incubacin a 87 C por 30 min con una solucin Earle 1X a pH 6,5
3. Enjuagar con agua corriente
4. Tincin con solucin de Giemsa (1:10 en agua destilada)
5. Montaje y observacin en microscopio de contraste de fase con filtro naranja
Observaciones
Los cromosomas muestran una serie de bandas brillantes y opacas fluorescentes en
mayor o menor medida, que son las inversas a las bandas Q o G.

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