08/03/2012

Interao antgeno-anticorpo e
anticorpos monoclonais
PROF MARIANA DONATO
MARIDONATO@GMAIL.COM

Faltou ontem:

BOAS PRTICAS LABORATORIAIS

Responda:

Qual a importancia do estudo da sorologia para o diagnstico?

Como as reaes cruzadas podem interferir no resultado?

Porque feita dosagem semi-quantitativa, para saber a

titulao de anticorpos de algum material?

ANTGENO:

Qualquer substncia que pode ser especificamente conectada
por um anticorpo ou por um receptor de antgenos da clula T

Apenas alguns tem a capacidade de ativar linfcitos, apesar de

TODOS serem reconhecidos

Os que ativam: IMUNGENOS

Antgeno
Anticorpo

IMUNGENOS:

Grandes!

Pequenos: reconhecidos, mas no estimulam LT

Haptenos

1,3-Bis(4-nitrofenil)triazeno

08/03/2012

Configurao espacial faz diferena:

POLIVALNCIA

Ligao Ag-Ac  ligao no-co-valente reversvel

Sua fora depender do eptopo de ligao; chamada de

AFINIDADE

Afinidade representada por uma constante de dissociao

Determinante conformacional: se perde por desnaturao

Determinante linear: pode ou no ser perdido na desnaturao

Determinante neoantigenico: conseguido aps protelise

VALNCIA:

IgG: 2 stios de ligao

IgM: 10 stios!

Indica a facilidade que se separa a ligao Ag-Ac

constante de dissociao: fora de ligao
 Soro de individuo imunizado ter uma mistura de diferentes Acs,
com diferentes afinidades

O nome dessa fora de ligao geral AVIDEZ; muito maior

do que a ligao de um antgeno apenas um stio




VALNCIA

AVIDEZ

Monovalente

Baixa

Bivalente

Alta

Polivalente

Muito Alta

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Especifidade:

Poucas diferenas so suficientes para evitar a ligao

Ptn: uma nica diferena de AA suficiente

Evita a reao cruzada

Afinidade:

Diversidade:

Um nmero muito grande de Ac gerados

Mecanismos genticos: recombinao gentica

Anticorpos monoclonais:

Habilidade de produzir Ac em larga escala

Georges Kohler e Cesar Milstein em 1975

LB: Ac especficos
Imortalizao da linha celular: HIBRIDOMAS

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ETAPAS:

Clulas do mieloma possuem defeitos na sntese de

DNA

NORMAL: produzir purina e timidilato (por via de novo)

utilizando tetraidrofolato
Drogas antiflicas inibem essa via
Clulas tratadas com essas drogas podem ser recuperadas
usando vias alternativas; porm, em cultura, esse meio precisa
ser suplementado para que a clula se divida
Meio HAT

Compartimentos positivos so re-isolados

Aps esses procedimentos, clones so selecionados com certa

especificidade, e colocados em cultura (dependendo do caso,
tumores asctios)

Clulas de mieloma que crescem em meio normal

Fuso das clulas de mieloma com as clulas somticas do

indivduo produtor de anticorpos

Com a troca de informao dos genes apenas as clulas

completamente hibridizadas vo sobreviver

Clulas somticas:

aps imunizao do animal

Para a fuso: polietilenoglicol

Os hbridos so cultivados de forma a isolar cada clula

progenitora

Aps 2 semanas, o crescimento avaliado e so feitos testes



RIA ou ELISA, se solveis; se no, outros testes podem ser feitos

APLICAES DOS MONOCLONAIS:

Identificao de marcadores fenotpicos celulares

Imunodiagnstico

Diagnstico de tumores

Terapia

Anlise funcional de molculas de superfcie

08/03/2012

Prximas pesquisas: hibridomas humanos

Uso da gentica (cDNA) para copiar a cadeia

E os policlonais?

Derivados de vrias linhagens de LB, com Ac diversos

polipeptdica

Esse tipo de pesquisa permite costurar informaes,

formando um gene hbrido, formando anticorpos humanizados

Tambm existe pesquisa utilizando biblioteca de genes em

fagos, e esses serem testados aleatoriamente. Aps isso, esse
cDNA ser purificado e inserido em uma clula, para a
produo em massa

Responda:

Defina: afinidade, avidez, especificidade, diversidade e
valncia

Esquematize a produo de anticorpos monoclonais

Explique quais funes dos anticorpos monoclonais