FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS

QUMICA ANALTICA E INTRUMENTAL

Carreras: Ingeniera Agronmica

CAPTULO I
INTRODUCCIN AL
ANLISIS
INSTRUMENTAL

Captulo I Introduccin al Anlisis Instrumental

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INTRODUCCION AL ANALISIS INSTRUMENTAL

La Qumica Analtica trata acerca de los mtodos de determinacin de la composicin
qumica de la materia. Un mtodo cualitativo proporciona informacin respecto a las especies
atmicas o moleculares o a los grupos funcionales que existen en la muestra. Un mtodo
cuantitativo, por otra parte, suministra informacin numrica como, por ejemplo, la cantidad
relativa de uno o varios de estos componentes.
CLASIFICACIN DE LOS MTODOS ANALITICOS
Los mtodos analticos se suelen clasificar en clsicos o instrumentales. Esta clasificacin
es en gran parte histrica, y los mtodos clsicos precedieron en un siglo o ms a los mtodos
instrumentales.
1. Mtodos clsicos
En los primeros aos de la qumica, la mayor parte de los anlisis se realizaban separando
los componentes de inters de una muestra (los analitos) mediante precipitacin, extraccin o
destilacin.
En los anlisis cualitativos, los componentes separados se tratan seguidamente con
reactivos originando as productos que podan identificarse por sus colores, sus puntos de
ebullicin o de fusin, sus solubilidades en una serie de disolventes, sus olores, sus actividades
pticas o sus ndices de refraccin. En los anlisis cuantitativos, la cantidad de analito se
determina por medidas gravimtricas o volumtricas. En las primeras se determina la masa del
analito o la de algn compuesto producido a partir del mismo. En los procedimientos volumtricos
se determina el volumen o el peso de un reactivo estndar que reacciona completamente con el
analito.
Estos mtodos clsicos para la separacin y determinacin de analitos se usan en muchos
laboratorios. Sin embargo, su grado de aplicacin general est disminuyendo con el paso del
tiempo.
2. Mtodos instrumentales
A mediados de los aos treinta, o algo antes, los qumicos empezaron a explotar otros
fenmenos distintos de los ya descritos, para la resolucin de los problemas analticos. As, para
el anlisis cuantitativo de una gran variedad de sustancias inorgnicas, orgnicas y bioqumicas
se empezaron a utilizar mediciones de las propiedades fsicas de los analitos -tales como
conductividad, potencial de electrodo, absorcin o emisin de la luz, razn masa a carga y
fluorescencia.
Adems, algunas tcnicas de separacin cromatogrficas muy eficaces
empezaron a reemplazar a la destilacin, extraccin y precipitacin en la separacin de mezclas
complejas como etapa previa a su determinacin cualitativa o cuantitativa. A estos mtodos ms
modernos para separar y determinar especies qumicas se les conoce, en conjunto, como
mtodos instrumentales de anlisis. .
Muchos de los fenmenos en los que se basan los mtodos instrumentales se conocen
desde hace ms de un siglo. Sin embargo su aplicacin por la mayor parte de los qumicos se
retras por falta de una instrumentacin sencilla y fiable. De hecho, el crecimiento de los mtodos
instrumentales modernos ha ido paralelo al desarrollo de las industrias electrnica e informtica.
TIPOS DE MTODOS INSTRUMENTALES
Para este estudio, es conveniente describir propiedades fsicas que puedan utilizarse como
seales analticas en el anlisis cualitativo o cuantitativo. La Tabla 1-1 enumera la mayora de las
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seales analticas que se suelen utilizar en el anlisis instrumental. Obsrvese que las seis
primeras estn relacionadas con la radiacin electromagntica. En la primera, el analito origina la
seal radiante; las cinco restantes implican cambios en el haz de radiacin producidos a su paso
por la muestra. Las cuatro siguientes son elctricas. Por ltimo, cuatro seales diversas se
agrupan conjuntamente. Estas son la razn masa a carga, la velocidad de reaccin, las seales
trmicas y la radiactividad.
La segunda columna de la Tabla 1-1 indica los nombres de los mtodos instrumentales
basados en las distintas seales analticas. Debera entenderse que excepto en la cronologa,
pocas peculiaridades distinguen a los mtodos instrumentales de sus equivalentes clsicos.
Algunas tcnicas instrumentales son ms sensibles que las tcnicas clsicas, pero otras no. Un
mtodo instrumental puede ser ms selectivo para ciertas clases de elementos o de compuestos;
para otros, un planteamiento gravimtrico o volumtrico puede suponer una menor interferencia.
Igualmente difciles de establecer son las generalizaciones basadas en la exactitud, la
conveniencia, o el tiempo empleados. Tampoco es necesariamente cierto que los procedimientos
instrumentales utilicen aparatos ms sofisticados o ms costosos; en realidad, la moderna balanza
analtica electrnica que se emplea en las determinaciones gravimtricas supone un instrumento
ms complejo y refinado que muchos de los usados en los otros mtodos mencionados en la
Tabla 1-1.
Como ya se ha comentado anteriormente, adems de los numerosos mtodos indicados
en la segunda columna de la Tabla 1-1, existe un grupo de procedimientos instrumentales que se
utilizan para separar y resolver compuestos estrechamente relacionados. La mayora de estos
procedimientos se basan en la cromatografa. Para completar el anlisis tras las separaciones
cromatogrficas se suele usar alguna de las seales de la Tabla 1-1. Con esta finalidad se han
utilizado la conductividad trmica, la absorcin infrarroja y ultravioleta, el ndice de refraccin y la
conductancia elctrica.
Tabla 1.1 Seales utilizadas en los mtodos instrumentales
SEAL

METODOS INSTRUMENTALES

Emisin de radiacin

Espectroscopia de emisin (rayos X, UV, visible, de

electrones) fluorescencia, fosforescencia y luminiscencia
(rayos X,UV y visible)

Absorcin de radiacin

Espectrofotometra y fotometra (rayos X, UV,Visible, IR;)

espectroscopia fotoacstica, resonancia magntica nuclear,
y espectroscopia de resonancia de espn electrnico

Dispersin de la radiacin

Turbidimetra, nefelometra, espectroscopia Raman

Refraccin de la radiacin

Refractometra, interferometra

Difraccin de la radiacin

Mtodos de difraccin de rayos X y de electrones.

Rotacin de la radiacin

Polarimetra, dispersin rotatoria ptica, dicroismo circular

Potencial elctrico

Potenciometra, cronopotenciometra

Carga elctrica

Coulombimetra

Corriente elctrica

Polarografa, amperometra

Resistencia elctrica

Conductimetra

Razn masa a carga

Velocidad de reaccin

Espectrometra de masas

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Mtodos cinticos

Propiedades trmicas

Conductividad trmica y mtodos de entalpa

Radiactividad

Mtodos de activacin y de dilucin isotpica

INSTRUMENTOS PARA EL ANLISIS

En un sentido muy amplio, un instrumento para el anlisis qumico convierte una seal
analtica que no suele ser detectable ni comprensible directamente por un ser humano, en una
forma que s lo es. As, un instrumento analtico puede considerarse como un dispositivo de
comunicacin entre el sistema en estudio y el cientfico.
Un instrumento para el anlisis qumico suele estar constituido como mximo por cuatro
componentes fundamentales. Como se muestra en la Figura 1-1, estos componentes son un
generador de seales, un transductor de entrada (denominado detector), un procesador de la
seal y un transductor de salida o dispositivo de lectura. A continuacin se da una descripcin
general de estos componentes.

Fig 1.1: Componentes de un instrumento tpico

1. Generadores de seales
Un generador de seales produce una seal que denota la presencia y, con frecuencia
tambin. la concentracin del analito. En muchos casos, el generador de seales es simplemente
un compuesto o un in generado a partir del propio analito. Por ejemplo un anlisis por emisin
atmica, el generador de seales son los tomos excitados o los iones del analito que emiten
fotones de radiacin. Otro ejemplo en una determinacin de pH, la seal es la actividad del in
hidrgeno de una disolucin de la muestra. Sin embargo, en muchos otros instrumentos el
generador de la seal est considerablemente ms elaborado. As, el generador de seales de un
instrumento de anlisis por absorcin infrarroja incluye, adems de la muestra, una fuente de
radiacin infrarroja, un monocromador, un divisor y un cortador (chop- per) del haz, un atenuador
de la radiacin y un recipiente de muestra.
La segunda columna de la Tabla 1-2 lista unos pocos ejemplos tpicos de generadores de
seales.

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Tabla 1.2 Algunos ejemplos de componentes de instrumentos

Instrumento

Fotmetro
Espectrofotmetro de
emisin
atmica
Coulombimetr
o
Medidor de pH
Difractmetro
de rayos X
para polvo
Comparador
de color

Generador de
seal

seal
analtica

Lmpara de
Tungsteno,
Haz de luz
filtro vidrio,
atenuado
muestra
Llama,
monocromador, Radiacin
cortador,
UV o visible
muestra.
Fuentecorriente
contnua,
Corriente de
muestra
la celda
Muestra

Transductor
de entrada

Seal
transducida

Procesador de
seal

Lectura

fotoclula

Corriente
elctrica

ninguno

Medidor de
corriente

Tubo
fotomultiplicador.

Potencial
elctrico

Amplificador
demodulador

Registrador
sobre papel

Electrodos

Corriente
elctrica

Amplificador

Registrador
sobre papel

Potencial
elctrico

Amplificador,
digitalizador

Unidad digital

Actividad del Electrodos

ion
de vidrio y
hidrgeno calomelanos

Tubo de rayos
X, muestra

Radiacin
difractada

Pelcula
fotogrfica

Imagen
latente

Revelador
qumico

Luz solar,
muestra

Color

Ojo humano

Seal del
nervioptico

Cerebro
humano

Imgenes
ennegrecidas
en pelcula
Respuesta
visual color

2. Detectores (transductores de entrada)

Un transductor es un dispositivo que convierte un tipo de energa (o seal) en otro. Como
ejemplos, pueden mencionarse el termopar, que convierte una seal de calor radiante en un
voltaje elctrico; la fotoclula, que convierte la luz en una corriente elctrica; o el brazo de una
balanza, que convierte una diferencia de masa en un desplazamiento del brazo de la balanza
respecto a la horizontal. Los transductores que actan sobre una seal qumica se denominan
detectores. La mayor parte de los detectores convierten las seales analticas en un voltaje o
corriente elctricos que se amplifican o modifican fcilmente para accionar un dispositivo de
lectura. Sin embargo, hay que tener en cuenta que los dos ltimos detectores de la Tabla 1-2
originan seales no elctricas.
Los modernos instrumentos analticos generalmente emplean uno o varios dispositivos
electrnicos sofisticados, tales como amplificadores operacionales, circuitos integrados,
convertidores analgico-digitales y digital-analgicos, contadores, microprocesadores y
ordenadores. Para poder estimar la potencia y las limitaciones de dichos instrumentos, hace falta
que el cientfico comprenda como mnimo de forma cualitativa cmo funcionan estos sistemas y
qu es lo que hacen.
3. Procesadores de seales
El procesador de seales modifica la seal transducida procedente del detector de tal
forma que se adecue al funcionamiento del dispositivo de lectura.
Una seal puede definirse como la salida de un transductor respondiendo al sistema
qumico de inters. La seal puede dividirse en dos partes, una causada por el (los) analito (s) y
la otra por los componentes de la matriz de la muestra, y por la instrumentacin analizada en la
medicin. Esta ltima parte de la seal se conoce como ruido.
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Aunque la capacidad para separar las seales - que contienen datos significativos- del
ruido sin sentido siempre ha sido una propiedad deseable en cualquier instrumento, con la
demanda creciente de mediciones ms sensibles se ha convertido en algo indispensable. La
cantidad de ruido presente en un sistema instrumental determina la concentracin de analito ms
pequea que puede medirse con exactitud, y tambin fija la precisin de la medicin a
concentraciones ms grandes.
Los dos mtodos principales de acentuacin de la seal son 1) el uso de dispositivos
electrnicos, tales como filtros para reducir el ruido; la amplificacin (un proceso en el cual la seal
se multiplica por una constante mayor que la unidad); se atenan (proceso en el cual la seal se
multiplica por una constante menor que uno); se integran, se derivan se aumentan
exponencialmente; o algoritmos de programas computacionales equivalentes para procesar
seales a partir de la medicin mientras pasan a travs del instrumento, y 2) el tratamiento
matemtico de los datos, posterior a la medicin. Entre los mtodos posteriores a la medicin ms
tiles estn las tcnicas estadsticas; a dems de la acentuacin de la seal, estas tcnicas
ayudan a identificar las fuentes de error y a determinar la precisin, a la vez que proporcionan un
mtodo de comparacin objetiva de los resultados.
4. Dispositivos de lectura
Un dispositivo de lectura es un transductor que convierte una seal procesada en una
seal que puede ser entendida por un observador humano. Por lo general, la seal transducida
toma la forma de la posicin de una aguja en un medidor de escala, de una salida de un tubo de
rayos catdicos, de un trazo en un registrador de papel, de una serie de nmeros en una pantalla
digital, o del ennegrecimiento de una placa fotogrfica. En algunas ocasiones, el dispositivo de
lectura da directamente la concentracin de analito.
LA SELECCIN DE UN MTODO ANALITICO
La segunda columna de la Tabla 1-1 pone de manifiesto que el qumico moderno dispone
de una serie enorme de herramientas para realizar los anlisis tantas, de hecho, que la eleccin
entre ellas es a menudo difcil.
1. Definicin del problema
Para poder seleccionar de modo inteligente un mtodo analtico, es esencial definir con claridad la
naturaleza del problema analtico. Dicha definicin requiere la contestacin de las siguientes
cuestiones:
1. Qu exactitud y precisin se requiere?
2. De cunta muestra se dispone?
3. Cul es el intervalo de concentracin del analito?
4. Qu componentes de la muestra interferirn?
5. Cules son las propiedades fsicas y qumicas de la matriz de la muestra?
6. Cuntas muestras deben analizarse?
La respuesta a la pregunta 1 es de vital importancia ya que determina cunto tiempo y
esmero se precisar para el anlisis. Las respuestas a las preguntas 2 y 3 determinan cun
sensible debe ser el mtodo y a qu intervalo de concentraciones debe adaptarse. La respuesta a
la pregunta 4 determina la selectividad que requiere el mtodo. Las respuestas a la 5 son
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importantes porque algunos de los mtodos analticos de la Tabla 1-1 se aplican a disoluciones
(normalmente acuosas) del analito. Otros se aplican con mayor facilidad a muestras gaseosas,
mientras que unos terceros son adecuados para el anlisis directo de slidos.
Desde un punto de vista econmico, una consideracin importante es el nmero de
muestras que se tienen que analizar (pregunta 6). Si este nmero es elevado, se puede invertir
una cantidad considerable de tiempo y dinero en la instrumentacin, en el desarrollo del mtodo y
en la calibracin. Adems, si el nmero fuera muy elevado, debera elegirse un mtodo que
precisara del mnimo tiempo de operador por muestra. Por otro lado, si slo se tienen que analizar
unas pocas muestras, la eleccin prudente suele ser la de un mtodo ms sencillo aunque sea
ms largo pero que requiera poco o ningn trabajo preliminar.
Teniendo en cuenta las respuestas a las seis cuestiones anteriores, puede escogerse un
mtodo -siempre que se conozcan las caractersticas de funcionamiento de los distintos mtodos
instrumentales indicados en la Tabla 1-1.

CARACTERSTICAS DE FUNCIONAMIENTO
PARMETROS DE CALIDAD

DE

LOS

INSTRUMENTOS;

Tabla 1.3 Criterios numricos para seleccionar mtodos analticos

Criterio

Parmetro de calidad

Desviacin estndar absoluta, desviacin estndar

A - Precisin
relativa, coeficiente de variacin, varianza.
B - Exactitud
Error absoluto sistemtico, error relativo sistemtico
C - Sensibilidad
Sensibilidad de calibracin, sensibilidad analtica
D - Lmite de deteccin
Blanco ms tres veces la desviacin estndar del blanco
E - Intervalo de concentracin Concentracin entre el lmite de cuantificacin (LOQ) y el
lmite de linealidad (LOL)
F - Selectividad
Coeficiente de selectividad

En la Tabla 1-3 se enumeran los criterios cuantitativos de funcionamiento de los

instrumentos, criterios que pueden usarse para decidir si un determinado mtodo instrumental es
o no adecuado para resolver un problema analtico. Estas caractersticas se expresan en trminos
numricos que se denominan parmetros de calidad
A. PrecisiN: La precisin de los datos analticos se define como el grado de concordancia mutua

entre los datos que se han obtenido de una misma forma. La precisin mide el error aleatorio, o
indeterminado, de un anlisis. Los parmetros de calidad de la precisin son la desviacin
estndar absoluta, la desviacin estndar relativa, la desviacin estndar relativa de la media, el
coeficiente de variacin y la varianza.
B. Exactitud: La exactitud mide el error sistemtico, o determinado, de un mtodo analtico. La

exactitud se define por la ecuacin

exactitud = u - x,

(1-1)

donde u es la media de la poblacin para la concentracin de un analito de una muestra cuya

concentracin verdadera es xt. Para determinar la exactitud hay que analizar uno o varios
materiales estndar de referencia cuyas concentraciones de analito se conozcan.

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En general, al desarrollar un mtodo analtico, todos los esfuerzos se dirigen hacia la

identificacin de la fuente de error y a su eliminacin o correccin mediante el uso de blancos y la
calibracin del instrumento.
C. Sensibilidad: La mayora de los qumicos estn de acuerdo en que la sensibilidad de un

instrumento o de un mtodo mide su capacidad de discriminar entre pequeas diferencias en la

concentracin del analito.
Las propiedades fsicas y qumicas del analito, la respuesta del transductor de entrada al
analito y los componentes de la matriz de la muestra, son algunos de los factores ms
importantes que determinan la sensibilidad.
La sensibilidad se define como la razn del cambio en la respuesta del instrumento (I , seal de
salida) al cambio correspondiente en el estmulo (C, concentracin del analito ):
S=dl0
dC
La sensibilidad tambin puede expresarse como la concentracin del analito necesaria
para causar una respuesta dada en el instrumento.
Las pendientes de las curvas de calibracin se usan para determinar los valores de
sensibilidad (fig. 1.2 y 1.3) Usualmente es deseable maximizar el valor de la sensibilidad, a
menos que se quiera extender el intervalo de la respuesta del instrumento sin diluir la muestra.

Fig. 1.2: Respuesta lineal

Fig. 1.3: Respuesta no lineal

La Fig. 2.1 muestra una respuesta lineal (sensibilidad constante) en todo el intervalo de
concentraciones medidas, para las sustancias A y B. De las pendientes de las curvas se ve que la
sensibilidad del mtodo es mucho mayor para la sustancia B que para la A. La respuesta no lineal
en la Fig. 2.2 indica un cambio en el valor de la sensibilidad como funcin de la concentracin. Las
mediciones de sustancia C, como funcin de la concentracin, se van haciendo menos sensibles.
La sensibilidad tambin puede expresarse como la concentracin del analito necesaria para
causar una respuesta dada en el instrumento.
D. Lmite de deteccin: La definicin cualitativa ms aceptada del lmite de deteccin viene dada

por la concentracin o el peso mnimos de analito que pueden detectarse para un nivel de
confianza dado. Este lmite depende de la relacin entre la magnitud de la seal analtica y el valor
de las fluctuaciones estadsticas de la seal del blanco.

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E. Intervalo de concentracin aplicable: La Figura 1.4 ilustra la definicin del intervalo til de un

mtodo analtico, que va desde la concentracin ms pequea con la que pueden realizarse
medidas cuantitativas (lmite de cuantificacin, LOQ) hasta la concentracin a la que la curva de
calibrado se desva de la linealidad (lmite de linealidad, LOL).

Figura 1.4 intervalo til de un mtodo analtico LOD = lmite de deteccin LOG = lmite de
cuantificacin LOL =lmite de respuesta lineal
F. Selectividad: La selectividad de un mtodo analtico denota el grado de ausencia de
interferencias debidas a otras especies contenidas en la matriz de la
muestra.
Desafortunadamente, ningn mtodo analtico est totalmente inafectado por otras especies y,
con frecuencia, diversas etapas se deben realizar para minimizar los efectos de estas
interferencias.
Para un problema analtico dado, los parmetros de calidad permiten al qumico reducir la
eleccin de los instrumentos a tan slo unos pocos. La seleccin entre stos puede entonces
basarse en los criterios cualitativos de funcionamiento sealados en la Tabla 1-4.
Tabla 1.4 Otras caractersticas a tener en cuenta en la eleccin del mtodo

1.
2.
3.
4.
5.

Velocidad
Facilidad y comodidad
Habilidad del operador
Coste y disponibilidad del equipo
Coste por muestra

EVALUACIN DE RESULTADOS
El control de las variables experimentales es usualmente difcil y a menudo imposible. Los
mtodos de muestreo, las tcnicas de los analistas y las respuestas instrumentales, son las
fuentes potenciales de error. Los mtodos estadsticos proporcionan un medio de evaluar,
objetivamente, la fuente y la magnitud del error en los mtodos analticos. La frase comn, dentro
del error experimental, carece de sentido si la magnitud del error no es definida mediante el uso
de tcnicas estadsticas.
TIPOS DE ERRORES
Para obtener resultados confiables a partir de un mtodo analtico, deben identificarse las
fuentes de error y cada una de ellas debe eliminarse o minimizarse. Los errores pueden ser
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clasificados en dos tipos: aleatorios (indeterminados) o sistematizados (determinados). Ya que la

fuente del error aleatorio est en la naturaleza intrnsecamente incierta de las tcnicas de
medicin, este tipo de error se presenta en cada anlisis. Los ruidos trmico, de golpeteo y de
fluctuacin, son fuentes de error aleatorio. La magnitud del error citado es pequea, generalmente
y por lo tanto puede minimizarse por mtodos de filtrado (ya sea por equipo o por programas).
El segundo tipo de error, sistemtico o de procedimiento , hace que los resultados se
desven de manera constante respecto de los valores esperados. Sus fuentes incluyen
procedimientos de calibracin inadecuados, pureza insuficiente de los reactivos y operacin
incorrecta de los instrumentos de medicin. Este tipo de error no puede reducirse por la aplicacin
de mtodos estadsticos. A menudo, los errores sistemticos pueden identificarse y minimizarse
modificando el procedimiento analtico.

PUESTA A PUNTO DE LA METODOLOGA ANALTICA

En trminos generales, se denomina calibracin al conjunto de operaciones que tienen

por objeto establecer la relacin que hay, en condiciones especificadas, entre los valores
indicados por un instrumento de medida y los valores conocidos correspondientes. En el anlisis
qumico, calibrar significa determinar la relacin entre la concentracin del analito y la respuesta
de la tcnica de medida. No hay que confundir calibracin con validacin: el ltimo trmino
implica determinar si una metodologa analtica especfica puede usarse de modo satisfactorio,
sea que la realice un solo analista o por varios laboratorios y analistas.
Una calibracin adecuada de los instrumentos es esencial para obtener anlisis exactos.
La eleccin de una tcnica de calibracin depende del mtodo instrumental, de la respuesta del
instrumento, de las interferencias presentes en la matriz de la muestra y del nmero de muestras
por analizar. El trmino matriz incluye, adems del analito, todos los dems componentes de la
muestra.
Los estndares o patrones qumicos se utilizan para determinar factores de recuperacin y
para la etapa de calibracin. Los mtodos de calibracin pueden dividirse en dos tipos:

A) los que utilizan estndares externos (calibracin externa)

B) los que utilizan estndares aadidos a la muestra:
mtodo de la adicin estndar
mtodo del estndar interno
A) ESTNDARES EXTERNOS - Curva de calibracin
En el anlisis cuantitativo es muy raro tener la certeza de que se cumple la ley de Beer, por
lo cual no es justificable utilizar un solo patrn para determinar la absortividad molar, y menos an
que los resultados se basen en los datos de absortividad molar tomados de la literatura.
En la mayora de los mtodos espectrofotomtricos se hace una calibracin con el
mtodo de los estndares externos. Un estndar externo es aquel que se analiza separadamente
de la muestra que se est ensayando. Para ello, se prepara una serie de soluciones patrn que
contienen distintas concentraciones conocidas de analito, junto a la matriz que es similar o
idntica a la de la muestra. Luego se mide su absorbancia y se construye una curva de calibracin
de absorbancia frente a concentracin.
Los estndares externos pueden usarse para calibrar un procedimiento de medida; cuando
los componentes de la matriz, incluyendo los reactivos que se requieren en el preparado, no
causan interferencias. Tambin pueden usarse para calibrar un anlisis en el cual se tiene
suficiente control sobre las condiciones como para que la contribucin producida por los
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interferentes sobre las medidas puedan mantenerse constantes; as puede realizarse la oportuna
correccin del error determinado por el interferente.
Muchas veces no se pueden eliminar todos los elementos interferentes durante la
preparacin de la muestra. A pesar de todo, los estndares, cuidadosamente preparados,
posibilitan la evaluacin de los efectos de cualquier elemento interferente y permiten corregir su
influencia sobre los resultados. De otra forma, no se podra hacer ninguna calibracin.
Si vara cualquier condicin o cualquiera de los pasos de la preparacin, los instrumentos
deben ser recalibrados y quizs se tengan que preparar nuevos estndares externos.
Ejemplo 1.
Quiere determinarse la concentracin de glucosa en una muestra que leda en el espectrofotmetro obtuvo
una Absorbancia de 0,250. Por otra parte, se prepararon una serie de soluciones patrn de glucosa cuyas
concentraciones se miden en g%mL. Las lecturas obtenidas de esta serie de estndares se presentan en la
tabla 1.
Tabla1. Lectura de soluciones estndar de glucosa de distintas concentraciones.
Concentracin Absorbancia
de glucosa (g
%mL)
250
0,56
200
0,45
150
0,33
100
0,21
75
0,15
50
0,1

0,6
0,4
Absorbancia

0,2
0
60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260
Concentracin g/100 mL

Figura 1.5. Grfica de los datos de calibracin para estndares de glucosa.

a) Resolucin en forma grfica:

Una vez obtenida la Curva de calibracin con los estndares externos puede determinarse la concentracin
de la muestra. Se busca en la grfica el valor de 0,250 de Absorbancia ledo para el analito. Al interceptar en
la curva se puede observar que corresponde a una concentracin de 125 g/100 mL de glucosa.

b) Resolucin matemtica:
Para trazar una recta son suficientes dos puntos, lo buscamos matemticamente. Estos corresponden a:
- Un patrn de concentracin exactamente conocida que llamaremos C p el cual tiene una absorbancia Ap.
- La muestra, de la cual del cual queremos saber su concentracin C x y conocemos su absorbancia Ax,
porque la hemos ledo en el espectrofotmetro.
Apliquemos la Ley de Lambert Beer para el problema:
para el patrn:
A p = a . b . Cp
para el problema: Ax = a . b . Cx
Como queremos saber la concentracin de glucosa en la muestra (C x), los dems datos son conocidos, si
los substitumos:

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Se puede observar que el resultado coincide con el obtenido de la grfica.

B) ESTNDARES AADIDOS (internos):

Hay tres supuestos en los que la estandarizacin se efecta aadiendo un estndar a la misma
muestra:
1. Cuando la matriz, slida o lquida de una muestra sea, desconocida o tan compleja que no
podra emplearse un estndar externo con suficiente garanta.
2. Cuando el proceso de preparacin de la muestra o la tcnica de ensayo sea compleja o muy
variable.
3. Cuando la medida dependa de condiciones instrumentales muy precisas y difcilmente
controlables.
En algunos casos pueden presentarse los tres problemas en un mismo anlisis. Por
ejemplo, la muestra puede ser complicada, la preparacin difcil y la medida puede implicar
introducir la muestra en una llama. Las reacciones de las tres etapas son bastante complejas y
algunas veces las condiciones de la llama son difciles de regular con la precisin deseada.
B.1- Mtodo de adiciones estndares:
Cuando es imposible suprimir interferencias fsicas o qumicas en la matriz de la muestra
puede usarse el mtodo de adiciones estndares. La respuesta del instrumento debe ser funcin
lineal de la concentracin del analito, en el intervalo de concentraciones y tambin debe tener una
ordenada en cero (seal cero para concentracin cero).
Una pequea cantidad de solucin del analito, de concentracin conocida, se aade a una
alcuota de una solucin muestra analizada previamente, y el anlisis se repite usando reactivos,
parmetros de instrumento y procedimientos idnticos.
Las lecturas pueden ser corregidas para cualquier seal de fondo. Siempre es aconsejable
revisar el resultado con al menos otra adicin estndar. Las adiciones estadsticamente ptimas
de analito son iguales al doble o a la mitad de la cantidad de analito en la muestra original. Todas
las soluciones deben ser diluidas al mismo volumen final, para que cualquier interferente en la
matriz de la muestra tenga un efecto idntico en cada solucin. Debe dejarse transcurrir suficiente
tiempo entre la adicin del estndar y el anlisis final, para que el estndar agregado alcance el
equilibrio con los interferentes de la matriz.
El mtodo de adiciones estndares es ampliamente utilizado en la qumica electroanaltica, para
obtener resultados ms exactos que los que resultan usando curvas de calibracin. La absorcin
atmica y la espectrofotomtrica de emisin de llama, usan este mtodo con matrices de
muestra complejas, en donde la viscosidad, la tensin superficial, los efectos de la llama y otras
propiedades de la solucin muestra, no pueden reproducirse con exactitud en las soluciones de
calibracin.
Ejemplo 2.
Se pipetean alcuotas de 10 mL de una muestra de agua mineral en matraces aforados de 50 mL.
Se adicionan a cada uno 0; 5;10; 15 y 20 mL de una solucin estndar 11,1 ppm de Fe +3, con
exceso de SCN- para dar Fe (SCN)63-. Despus de diluir a 50 mL las Absorbancias para las 5
diluciones fueron: 0,240; 0,437 ; 0,621 ; 0,809 y 1,009 respectivamente. Se trabaj con un
espesor de cubeta (b) de 0,982 cm.
Calcular por los distintos mtodos la concentracin de Fe+3 en la muestra de agua.

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Clculo de las concentraciones de los estndares aadidos:

Este problema aplica el mtodo de la adicin estndar que se basa en analizar la muestra
desconocida y luego adicionar a esa muestra una cantidad conocida del material que se quiere
analizar.
El aumento observado en la seal es proporcional a la cantidad conocida del material agregado, y
a partir de ste es posible calcular la cantidad de un material inicialmente presente en la
incgnita.
Tabla 2a. Absorbancias obtenidas luego de adicionar solucin estndar de hierro a la muestra de
agua.
Muestra
Volumen de
absorbancia
estndar
10 mL
0 mL
0,240
10 mL
5 mL
0,437
10 mL
10 mL
0,621
10 mL
15 mL
0,809
10 mL
20 mL
1,009
Para calcular la concentracin del estndar se procede as:
C1 V1 = C2 V2 C2 = C1 V1 C2 =11,1 ppm x 5 mL = 1,1 ppm
V2
50 mL
Dilucin de la muestra:
Teniendo en cuenta la dilucin 1 : 5 de la muestra:
1,1 ppm x 5 (dilucin) = 5,55 ppm

10 mL ------- 50 mL sol. diluda

1 mL --x = 50 mL = 5mL sol. diluda
10 mL

As se obtienen todos los valores de concentracin que figuran en la tabla 2b:

Tabla 2b. Concentraciones y lecturas obtenidas luego de adicionar solucin estndar de hierro a
la muestra de agua.
Muestra
Volumen de
Concentracin
Intensidad
estndar
10 mL
0 mL
0
ppm
0,240
10 mL
5 mL
5,55 ppm
0,437
10 mL
10 mL
11,1 ppm
0,621
10 mL
15 mL
16,65 ppm
0,809
10 mL
20 mL
22,2 ppm
1,009
a) Resolucin por frmula:
AT = K ( Cs + Cx)

Ax = K C x

Sustituyendo en la ecuacin
( 2), el valor de K despejado de la ( 1 ) y reordenando obtenemos:

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Cx = Cs Ax .
Vs
(AT - Ax ) Vx

Ax = Absorbancia de la muestra
AT = Absorbancia Total
Cx = concentracin de la muestra.
Cs = concentracin del estndar.
Vs = volmen del estndar.
Vx = volmen de la muestra.

Para el ejemplo panteado se resolvera:

Cx = 11,1 ppm x 0,240 x 10
(0, 621 - 0,240 )

6,99 ppm

mL
=
10 mL

b) Resolucin Grfica:
La resolucin grfica, usando el mtodo de las adiciones estndares, se muestra en la
figura 2. La escala de concentracin se encuentra sobre el eje de abscisas y en el eje de
ordenadas se encuentran las concentraciones de las soluciones estndar del analito
agregadas a la soluciones de muestra. La concentracin desconocida est dada por el
punto en el cul la lnea extrapolada corta el eje de concentracin. En este caso
corresponde a 7 ppm y coincide con los datos obtenidos por los otros mtodos.

Figura 2. Grfica de los valores de absorbancia vs. concentracin de Fe+3 en ppm

.2- Mtodo del estndar interno:

Se emplea un estndar interno para minimizar las diferencias en las propiedades fsicas de un
conjunto de soluciones muestra que contiene el mismo analito. En este mtodo, una cantidad fija
de una sustancia pura se aade tanto a las soluciones muestra como a las soluciones estndares,
se determinan luego las respuestas del analito y del estndar interno, cada una corregida por el
fondo y se calcula el cociente de las dos respuestas. Si se controlan los parmetros que afectan
las respuestas medidas, la respuesta de la lnea del estndar interno ser constante, puesto que
la concentracin del estndar interno es fija, sin embargo si vara uno o ms de los parmetros
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que afectan las respuestas medidas, dichas respuestas del analito y del estndar interno deben
ser afectadas por igual.
Por lo tanto, el cociente de respuestas (del analito al estndar interno) depende solamente de la
concentracin del analito. Una grfica de la relacin o cociente de respuestas como funcin de la
concentracin del analito, da una curva de calibracin. El estndar debe aadirse al comienzo de
un anlisis para permitir su disolucin, mezclado y que ocurra cualquier reaccin antes de efectuar
cualquier medicin. Todos los equilibrios deben haberse establecido (y algunos pueden ser
dependientes del tiempo). La adicin de los estndares a la muestra disuelta puede llevar a una
interpretacin deficiente de los resultados si no se consideran las posibles reacciones entre la
sustancia estndar y otros componentes.
El estndar interno debe ser una sustancia similar al analito con una seal fcilmente medible
que no interfiere con la respuesta del analito, debe responder de manera similar a l, para
cualquiera de las variables que pudieran afectar la respuesta del detector. La concentracin del
estndar interno tiene que ser del mismo orden de magnitud que la del analito a fin de minimizar el
error al calcular los cocientes de respuestas. Este mtodo se usa ampliamente en los anlisis por
cromatografia de gases y por absorcin atmica y en menor grado, en las determinaciones
espectroscpicas de infrarrojo y de emisin.
Ejemplo 3.
Se determin un compuesto Cx en una muestra por fotometra de llama. Se emple el mtodo del
estndar interno, agregando cantidades crecientes del analito C x y cantidades iguales del
estndar Cs.b Los resultados obtenidos se muestran en la tabla 3. Calcular la concentracin de C x
de la muestra cuyas Intensidades fueron 33 para Cx y 9 para Cs.
Tabla 3. Absorbancias obtenidas en distintas soluciones del analito y la muestra luego de aadir
patrn interno.
Volumen
Cantidades
Cantidad constante Intensidad Intensidad
de muestra crecientes de Cx de patrn interno Cs
de Cx
de Cs
10 mL
0 ppm
1 ppm
33
9
10 mL
1 ppm
1 ppm
9
9
10 mL
2 ppm
1 ppm
14,3
9,5
10 mL
3 ppm
1 ppm
21,2
8,5
10 mL
4 ppm
1 ppm
34,4
9
a) Resolucin por mtodo grfico:
Calcular las relaciones: Ix / Is y luego graficar como se indica a continuacin:
Volumen
de
muestra
10 mL
10 mL
10 mL
10 mL
10 mL

Cantidades Cantidad constante Intensida Intensida

crecientes de de patrn interno
d
d
Relacin
Cx
Cs
de Cx
de Cs
Ix/Is
0 ppm
1 ppm
33
9
3,67
1 ppm
1 ppm
9
9
1,00
2 ppm
1 ppm
14,3
9,5
1,51
3 ppm
1 ppm
21,2
8,5
2,49
4 ppm
1 ppm
34,4
9
3,82

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4
3
Relacin Ix/Is

2
1
0
0,5

1,5

2,5

3,5

4,5

ppm de Cx

Figura 1.6. Grfica de los valores de relacin Ix/Is vs. concentracin de en ppm

b) Mtodo de los cocientes matemticos:

Se establecen las relaciones entre la muestra y el valor de la escala ms cercano:

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GUA TERICA
INTRODUCCIN AL ANALISIS INSRTUMENTAL
1- Teniendo en cuenta las propiedades fsicas que se pueden utilizar como seales analticas en los
mtodos instrumentales, complete el siguiente cuadro:
Propiedades fsicas
Mtodo instrumental

2- Complete el siguiente cuadro teniendo en cuenta los diferentes componentes de los instrumentos.
Generador de
Seal
Transductor
Seal
Procesador
Instrumento
Lectura
seal
analtica
de entrada transducida
de seal
Fotmetro
Espectrofotmetro de
emisin
atmica
Coulombimetr
o
Medidor de pH
Difractmetro
de rayos X
para polvo
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Comparador
de color
3- Qu consideraciones debe tener en cuenta al seleccionar un mtodo analtico?
Criterio
Parmetro de calidad

4- Completar el siguiente cuadro teniendo en cuenta los diferentes mtodos de calibracin.

Mtodo de Calibracin
Fundamento
Formas de resolucin
Estndar externo

Estndar interno

Adicin estndar

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