FACULTAD DE INGENIERIA, ARQUITECTURA, ARTES Y DISEO

PROGRAMA DE INGENIERA QUMICA

Reporte de laboratorio:
CULTIVO MICROBIANOS

Maria Camila Del Campo

Victor Iguaran
Pedro Villar
Aura Mara Zuleta Morales

Estudiantes de la asignatura de laboratorio de biotecnologa

Docente: Lersy Lopez

Cartagena, 05 de marzo de 2015

INTRODUCCION.
Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es
observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el
laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es
el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Para
determinar las caractersticas de una especie es de mucha importancia el
aislamiento.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial
debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y
presin de oxgeno adecuadas, as como un grado correcto de acidez o
alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de
crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo
contaminante; Un cultivo puro representa las condiciones artificiales para el
desarrollo de las bacterias y otros microorganismos.
La mayora de las bacterias patgenas requieren nutrientes complejos similares en
composicin a los lquidos orgnicos del cuerpo humano. Por eso, la base de
muchos medios de cultivo es una infusin de extractos de carne y Peptona a la
que se aadirn otros ingredientes.
La velocidad de crecimiento de las bacterias es directamente proporcional a la
nutricin.
El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparacin de medios
de cultivo. Se lica completamente a la temperatura del agua hirviendo y se
solidifica al enfriarse a 40 grados. Con mnimas excepciones no tiene efecto sobre
el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en l.
los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de
enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los
hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para
incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentacin
de los microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa
se aaden para promover el crecimiento de los microorganismos menos
resistentes.
Tambin se aaden colorantes que actan como indicadores para detectar, por
ejemplo, la formacin de cido o como inhibidores del crecimiento de unas

bacterias y no de otras (el Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en pH
bsico y amarillo en pH cido. La Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya
que impide el crecimiento de la mayoria de las bacterias Gram-positivas).
A continuacin ponemos en prctica el mtodo de cultivo por siembra en superficie
el cual consiste en la siembra de un volumen conocido de la dilucin de la muestra
sobre la superficie de un medio de cultivo en placa Petri. En este mtodo todas las
colonias crecen sobre la superficie del medio. Generalmente se utiliza esta tcnica
para el recuento de bacterias aerobias.

OBJETIVO GENERAL
Conocer las tcnicas de cultivo microbiano y las caractersticas macroscpicas de
las colonias que nos permiten adquirir habilidad para realizar cultivos microbianos
con todas.

OBJETIVOS ESPECIFICOS
Realizar de manera experimental el mtodo de siembra en superficie.
Observar los distintos comportamientos del cultivo microbianos en diferentes
condiciones.
Adquirir los conocimientos necesarios para el debido aprendizaje en la asignatura
Biotecnologa.

DESARROLLO

CULTIVO MICROBIANOS
MATERIALES:

Muestra de alimentos.

Caja de Petri.

Tubos de ensayos.

Asas bacteriolgicas.

Cultivos microbianos.

Pipeta automtica.

EQUIPO:

Incubadora.

PROCEDIMIENTO:
METODO DE RECUENTO EN PLACA
1. Siembra en profundidad

Realizar diluciones seriadas (10^-1, 10^-2, 10^-3) una muestra de alimento.

Adicionar 1ml de cada una de las diluciones preparadas y adicionar en

cajas de Petri estriles.

Adicionar el medio de cultivo especifico de 15-20 ml de cada caja de Petri,

mezclar en sentido contrario a las manecillas del reloj, hasta que quede
completamente homogenizada la muestra.

Dejar solidificar e incubar a la temperatura adecuada de acuerdo al

microorganismo de inters.

2. Siembre en superficie

Realizar diluciones seriadas (10^-1, 10^-2, 10^-3) una muestra de alimento.

Adicionar 0,1ml de cada dilucin y adicionar en la superficie del agar

especifico para el tipo de microorganismo a identificar o cuantificar.

Extender el inoculo con asa bacteriolgica en diferentes direcciones hasta

agotar la muestra en la superficie del agar.

Incubar en la temperatura adecuada de acuerdo al tipo de microorganismo.

I.

II.

Siembra por agotamiento

Seleccionar los medios de cultivo de acuerdo al tipo de

microorganismo.

Tomar una pequea cantidad de inoculo con el asa redonda y

sembrar por agotamiento en el agar especifico, pasando por el
mechero el asa para obtener colonias aisladas.

Crecimiento de microorganismo en medios diferentes

Describir las caractersticas del crecimiento

microorganismos en medios especficos.

Identificar gneros de bacterias a travs de interpretacin de

pruebas bioqumicas.

de

los

RESULTADOS/CONCLUSION.

Podemos ver claramente es crecimiento microbianos en las distintas muestra y

como es capaz de ir evolucionando en masa en un tiempo corto en sus
condiciones ptimas, observamos que la muestra de 10^-2 tiene un mayor
crecimiento aunque la diferencia no es notoria con las dems muestra.

Se puede concluir de manera experimental que los microorganismos son capaces

a reproducirse en gran cantidad sin inconveniente alguno y son capaces de
brindarnos grandes ayuda en la parte industrial por ejemplo: los lcteos. A la vez
son muy econmico su obtencin.

INVESTIGACION.
1. FUNDAMENTO DEL RECUENTO EN PLACA.
Consiste en el plaqueo de una muestra de volumen conocido del alimento que se
analiza. El resultado es funcin de una serie de factores como son el mtodo de
muestreo, el tipo de microorganismo, el tipo de alimento y las caractersticas del
medio de cultivo. Los cultivos pueden hacerse tanto en masa como en superficie,
aunque hay que considerar que los cultivos en masa son letales para la flora
psicotrofa. Cada bacteria viable formar una colonia, el plaqueo puede hacerse en
una placa normal o por medio de un plaqueador en espiral que va depositando
concentraciones progresivamente ms diluidas de la muestra.
Medio de cultivo recomendado para el recuento de bacterias aerbicas en aguas,
aguas residuales, productos lcteos y otros alimentos. Tambin es recomendado
como medio general para determinar poblaciones microbianas.
La productividad de este medio, est basada en el alto contenido nutricional de
sus componentes, que permite el desarrollo de las bacterias presentes en la
muestra. Cuando se analiza leche y productos lcteos algunos autores
recomiendan suplementarla con leche descremada estril de uso bacteriolgico en
una proporcin de 1 g por litro.

2. EJEMPLO DE MEDIOS DE CULTIVO MODERADAMENTE Y ALTAMENTE

SELECTIVOS.

Los Medios Selectivos generalmente el microorganismo patgeno causante del

cuadro infeccioso que se desea aislar a partir de la muestra, no se encuentra puro

sino que convive con otras especies sin inters diagnstico. As por ejemplo es
frecuente que las fecas, orina, exudados, alimentos, agua, etc. estn altamente
contaminadas con bacterias saprfitas que por su desarrollo exuberante en los
medios de cultivo corrientes, inhiben el crecimiento o enmascaran la presencia del
agente patgeno buscado.
Los medios selectivos se caracterizan por estimular el desarrollo de ciertas
especies bacterianas y a la vez inhibir el desarrollo de otras especies, lo que
permite es aislamiento y diagnstico de las bacterias con facilidad y rapidez. Estas
caractersticas se obtienen por la adicin de sustancias tales como colorantes de
anilinas, sales biliares, antibiticos, etc. Ejemplo: Agar Brucella, Caldo Selenito
Cistina, etc.
Los antibiticos, el cloruro sdico en altas concentraciones, colorantes y algunas
sustancias qumicas son ejemplos de agentes selectivos que se aaden a los
medios para inhibir el crecimiento de otros microorganismos diferentes al de
inters.El agar SPS (denominado de esta forma porque contiene sulfadiacina y
sulfato de polimixina) se utiliza para identificar Clostridium botulinum, agente
causal de una grave intoxicacin alimentaria. El medio SPS permite el crecimiento
de esta bacteria, pero inhibe el de otras especies de Clostridium.
Por ejemplo, los colorantes, que se aaden al Agar, inhiben selectivamente
determinados microorganismos, es el caso del verde brillante (Agar verde brillante)
utilizado para determinar la presencia de Salmonella en heces fecales ya que
inhibe las bacterias Gram positivas, y la mayora de las bacterias intestinales.
Para el caso de factores ambientales se manipula la temperatura, el grado de
humedad, el pH, la concentracin de oxgeno o la intensidad de la luz. As el Agar
glucosado de Sabouraud ajustado a pH 5,6, se usa para el aislamiento de hongos,
que a ese pH crecen mejor que las bacterias. Son ejemplo de este tipo de medios:
Agar Tiosulfato, Citrato, Sales de bilis, Sacarosa (TCBS) para cultivo de Vibrio y
Agar Cetrimida para cultivo de Pseudomonas.

Un ejemplo de medio altamente selectivo debido a su alta concentracin salina

serian los estafilococos coagulasa positiva que hidrolizan el manitol acidificando el
medio; las colonias aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante. Los
estafilococos coagulasa negativos, presentan colonias rodeadas de una zona roja

o prpura. Las colonias sospechosas, se repicarn en un medio sin exceso de

cloruro de sodio para efectuarles, posteriormente, la prueba de la coagulasa. En el
medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, constituyen la fuente de
carbono, nitrgeno, vitaminas y minerales, el manitol es el hidrato de carbono
fermentable, el cloruro de sodio (que se encuentra en alta concentracin) es el
agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora acompaante, y el rojo fenol es
el indicador de pH.

BIBLIOGRAFIA.
http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioMedios.htm
http://datateca.unad.edu.co/contenidos/201504/micro/3_4medios.htm
http://es.slideshare.net/roberchavez/medios-de-cultivo-y-pruebas-bioquimicapresentation