Apuntes 2014

APUNTES MICROBIOLOGA 2014
40 a 54 La microbiologa se define como una disciplina, una ciencia que estudia

los microorganismos que existen en la naturaleza, pero no solo en su afn de
caracterizar estos MO sino que definir las relaciones y las interrelaciones con
los distintos nichos ecolgicos, es decir, las relaciones entre los MO y su
entorno. Esta disciplina es joven, ya que antiguamente los MO no se conocan,
se saba que existan, pero para conocerlos, se necesitaba un instrumento
especial. Este instrumento es el microscopio, y no fue hasta 1676 donde
Leeuwenhoek ide el primero de estos que no es como el que conocemos
ahora, sino que fue una mezcla de lentes (posea forma de lupa). Con ellos
empez a observar lo que no era visible para el ser humano y se le ocurri
mirar una gota de agua, y en la cual (que aparentemente no tena nada)
observcositas que se movan, a los que los llam animculos. Ni siquiera
exista el concepto de bacterias, de MO, por lo que los considera de tal forma
nombrada anteriormente.
La microbiologa, fue detenida ya que la biologa en general estaba controlada
por lo que se conoci como teora de la generacin espontnea.
Muchos investigadores intentaron echar por tierra esta teora, pero no se logr
por varios aos.
Redi:en el siglo XVII: trabaj con

trozos de alimentos en distintos
recipientes sometidos a diferentes
condiciones. Donde uno estaba
tapado y otros no tapados.
A mediados del siglo XIX: Pasteur fue un

cientfico que aport mucho a la
microbiologa, gracias a su experiencia y
experimentos que echaron por tierra la
teora de generacin espontnea dando
origen a lo que se conoce hoy en da como la
microbiologa moderna.
Este experimento consisti en que posea un
matraz de vidrio de cuello largo, donde se
introduce un lquido que no est estril, lo
que hizo Pasteur fue generar en el cuello dos
curvaturas, con el objetivo de no tener
contacto directo del exterior con el lquido
que estaba en el interior y posteriormente
(sin tapar el envase) esterilizo el lquido por
calor. La idea es que desaparecieran todos
los MO que se encontraran ah. Lo dej a
travs del tiempo y este lquido segua
estril, es decir no haba crecimiento de MO.
Ahora como explica el que los MO no
aparecan dentro del lquido, ya que no podan llegar. l estaba en el concepto
que deba existir un precursor (no que era espontaneo) y obviamente
quedaban atrapados en la curvaturas del cuello. Como poda comprobar esto,
volte el matraz y el lquido que se encontraba dentro de este para que llegase
a la curvatura y luego lo volvi a la posicin inicial y en muy corto tiempo
empezaron a crecer los MO (se supone que a la par de estos tena ms
matraces en los cuales el lquido que en un principio estaba estril, segua
estril).
En la biologa moderna existe un auge en el reconocimiento de los MO como
agente etiolgico de las enfermedades infecciosas, porque se empiezan a
conocer los MO asociados principalmente a bacterias, donde acompaados del
desarrollo de la microscopa que llevaba ya en esa poca, los investigadores
pudieron empezar a detectar, a caracterizar y a darle nombre a estas
bacterias. Y no solamente eso sino que tambin a relacionarlas con la
generacin de distintas enfermedades y esto fue bastante rpido, y as que en:
-
1876: Robert Koch aisl por primera vez y caracteriz el bacillus

anthracis, que es una bacteria que causa el ntrax o carbunco, que es
una enfermedad mortal en los animales y que tambin puede ser
traspasada al hombre donde tambin es mortal. Era una patologa
importante en esa poca, de alta prevalencia; y l logra aislar,
caracterizar y darle un nombre.
1881: Se logra por Robert Koch descubrir el MO de la tuberculosis y
no es que estos organismos hayan aparecido en esta poca, si no que
existan hace mucho tiempo pero en estos aos recin se logran
caracterizar y se reconocen estos agentes etiolgicos de enfermedades
infecciosas. (agente etiolgico: agente causal, es decir causante de la
enfermedad).
2

-
1883: Estudios sobre el clera que tambin es una enfermedad de alta

prevalencia, mortal en los seres humanos, se descubre que es una
bacteria que es transmitida por agua, particularmente por las que estn
contaminadas que es la que produce el clera y se le da el nombre de
Vibrio clera.
Y por lo tanto es una seguidilla de reconocimientos de MO y Robert Koch
en este anlisis que hace, establece en 1884 los postulados de Koch,
que son 4 premisas.
POSTULADOS DE KOCH:
1) Si yo tengo un animal enfermo y un animal sano, como se puede
comprobar esto, tomando una muestra yo distingo el MO en el animal
enfermo y no en el sano.
2) A partir de la toma de muestra donde yo puedo identificar la
presencia de MO, puedo aislar este MO en el laboratorio. Podemos
tener una placa donde cultivar y se puede caracterizar. Del animal
sano, no podemos tener nada en el laboratorio.
3) El MO del cultivo nosotros lo sacamos y lo inyectamos a un individuo
sano, por lo tanto este se enfermar.
4) Como se enferma, hacemos lo mismo que el anterior. Sacamos una
muestra, con presencia del MO, lo podemos aislar en el laboratorio y
cuando lo caracterizo encuentro la bacteria y esa es la misma que
estaba anteriormente en el animal enfermo. (punto 1)
Podemos decir que hay un concepto de que se enferm uno, distingo la

presencia, esto yo lo traspaso a otro, este se enferm, yo aslo el MO de este y
el MO que encontraremos ser el mismo del primer individuo.
Esto es la base de las enfermedades infecciosas, en este momento todo los MO
que cumplan con estas caractersticas eran agentes etiolgicos de
enfermedades infecciosas.
Dentro de los avances de la microbiologa moderna, hay una seguidilla de
caracterizaciones y descubrimientos del MO (siempre han estado estos MO,
pero durante los aos se les fue caracterizando) en la cual viene consigo el
darle un nombre a este. En el rea de la salud, todo esto est ntimamente
relacionado con las enfermedades de mayor prevalencia, los MO causantes de
estas enfermedades eran obviamente los que estaban caracterizando, y para
ello tambin era necesario encontrar algn tratamiento.
Fleming se encuentra con un metabolito que produce inhibicin del
crecimiento bacteriano, al encontrar que en una de sus placas de cultivo
(staphylococcus aureus) se contamina con un hongo, y este hongo le genera
inhibicin del crecimiento de este.
Penicilina: es el primero de muchos agentes antimicrobianos, no es el nico
que aparece en esa poca, es el que da a todo una importancia mayor. Ya que
gracias a este, durante los siguientes aos aparecen ms antimicrobianos
porque haba una bsqueda importante en el rea de encontrar agentes que

combatieran estas enfermedades que hoy en da estaban caracterizadas, pero
que no existan como tratarlas.
Previo a esta poca cuando empieza este desarrollo, est la necesidad de
poder clasificar a los MO. Esto trae complicaciones consigo porque en la poca
de 1800, a finales, cuando ocurre todo esto de desarrollo del conocimiento del
MO, primaba todava la clasificacin del mundo viviente que tena Linneo
desde 1758, donde existan solo dos grandes reinos, que era el reino animal
y el reino vegetal. Donde se ubicaban las bacterias aqu.
Entonces empieza un desarrollo en este mbito y una pequea disputa desde
el punto de vista cientfico, donde empezar a incluir estas bacterias. No fue
fcil incluirlas en el mundo viviente, porque la clasificacin de Linneo estaba
muy arraigada y cost mucho empezar a modificarla.
Recin en 1866, Ernst Haeckelestablece un tercer reino que eran los
protistas, que no fue muy bien aceptado. A pesar de este nuevo reino, se
segua considerando la opcin de solamente 2 reinos en la naturaleza.
En 1969Whittaker estableci la presencia de 5 reinos: animal, vegetal,
fungi, protista y monera (se incluan las bacterias). A partir de aqu siguen
muchos investigadores tratando de idear nuevos reinos.
Sin embargo, se utilizan otras tcnicas de biologa molecular
fundamentalmente asociados a lo que es la filogenia (observar ARN ribosomal
(en eucarionte: 18S y procarionte: 16S), sirve hacer relaciones evolutivas), lo
que llevo todo estos estudios fue a establecer dominios, ms que reinos.
Se establecen 3 dominios: Eubacteria, Archaea y Eucaria. Dentro de estos
se pueden encontrar los reinos, pero estos no estn establecidos, estn
incluidos en estos dominios. Todos estos organismos que existen, derivan de un
ancestro universal comn que es desconocido, y permite la generacin de los
arboles filogenticos, es decir establecer no solamente las clasificaciones sino
que relaciones evolutivas (se encuentran con grandes o pequeas distancias).
UNIDAD I: ESTRUCTURA, NUTRICION Y CRECIMIENTO

BACTERIANO
Relacionar la estructura y los factores abiticos con el crecimiento bacteriano
de acuerdo al nicho ecolgico en que se encuentra el MO.
Debemos entender que las bacterias tienen una estructura, tiene condiciones
para crecer, que son estos factores abiticos, por ejemplo temperatura, pH,
algunos nutrientes especficos, esto se relaciona con el crecimiento. Si una
bacteria tiene ciertas estructuras, tiene ciertas capacidades estructurales y
condiciones nutricionales, necesidades de oxgeno, etc. El nico fin de la
bacteria es crecer. Pero este crecimiento no es igual en todos estos
microorganismos si no que este crecimiento est de acuerdo con el nicho
ecolgico en el cual se encuentran.

ESTRUCTURA BACTERIANA
Clula eucarionte animal vs clula procarionte
-
La clula procarionte estructuralmente es simple.

No posee compartimientos dentro de ella (no encontramos mitocondrias,
Golgi, ncleo, retculo, no estn los organelos).
Es parecida a la clula eucarionte, a pesar de su simplicidad en que el
organismo completo es una clula.
Tiene una reproduccin asexual las eucariontes (donde una clula madre
dar a dos hijas exactamente igual)
Las clulas eucariontes tienen metabolismo que no es simple, ya que
cumple la funcin de sintetizar, degradar.
A partir de la dcada de los 50 cuando aparece la microscopia electrnica, se

genera un boom en la descripcin de la estructura celular. Ya que gracias a
esto se pudo observar los componentes celulares, y as fue como se ha divido
esta arquitectura celular:
-
Regin citoplasmtica: genoma, ribosomas e inclusiones

La envoltura celulares: exopolisacridos, pared celular y membrana
celular
Los apndices: flagelo, pili (se considera a veces, como una fimbria
especializada) y fimbria.
Una clula est compuesta por 70% agua y 30% de elementos qumicos slidos
(protenas 5%, ARN 6%, ADN 1% y un 8% compuesto necesario para el
desarrollo y la estructura de la clula).
REGION CITOPLASMATICA:
Es un gel o un sistema coloidal, posee una consistencia como arenilla porque
el citoplasma contiene ribosomas, como los ribosomas al no estar en un
compartimiento, estn distribuidas en el citoplasma en grandes cantidades lo
que le da este aspecto finamente granulada.
Que contiene este citoplasma? Contiene el genoma bacteriano, los ribosomas
y adems los grnulos de inclusin o vesculas de inclusin (son partculas de
materiales nutricionales habitualmente de reserva que pueden tener algunas
bacterias, las poseen las bacterias de caractersticas ambientales que
eventualmente se pueden ver en situaciones de falta de nutrientes). Recuerden
que la clula procarionte no tiene citoesqueleto celular, a diferencia de la
clula eucarionte.
Qu vamos a encontrar en forma adicional en este citoplasma? Encontramos a
los ribosomas.
RIBOSOMAS:estn dispersos en el citoplasma, no estn en retculos y al igual
que en las clulas eucariontes, estn encargados de la sntesis proteica. Est
constituido por una estructura que tiene un tamao de 70S, a diferencia de los
eucariontes que son 60S, constituidos por 2 subunidades: una subunidad
mayor y una subunidad menor
-
Subunidad mayor: 50S, constituidos por protenas + 2 ADN ribosomal

que son el 23S y el 5S
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-
Subunidad menor: 20S, constituido por 21 protenas ribosomales +

ADN ribosomal 16S, es la ms estable y la ms utilizable para trabajar
en el laboratorio.
GENOMA:Es todo el material gentico que la bacteria posee. Por qu todo el

material gentico? Porque este material est constituido como 2 materiales de
ADN:
-
ADN cromosomal bacteriano: constituido como una molcula nica,

circular, bicatenaria, que se encuentra en un estado de sper
enrollamiento y que se ubica en la parte central del citoplasma. Contiene
toda la informacin esencial de la bacteria, tambin llamada Informacin
Constitutiva porque constituye a este microorganismo.
ADN extracromosomal: ADN adicional, constituido en elementos
genticos mviles que aportan a la bacteria informacin extra, que le
dan una caracterstica adicional, accesoria, que no es letal y que no la
hace ser bacteria. Por ejemplo, si yo tengo una escherichia coli, para que
yo pueda decir que es una bacteria de este tipo, que tiene apariencia
como escherichia coli, que tiene metabolismo, que se reproduce, etc.,
toda esa informacin est en el ADN cromosomal.
Ejemplo pasan 10 escherichia coli a la sala y todas tienen el mismo ADN

cromosomal, pero alguna de estas puede tener ADN extracromosomal que le
puede aportar un tipo de resistencia (e. coli 1), como la ampicilina, todas las
dems no lo tienen y son susceptibles a este antibitico. Ahora puede que la e.
coli 3 tenga caractersticas de poder causarnos una diarrea si uno se la come,
si me como la e. coli 1, no me producir diarrea. La diferencia es que la e. coli 3
tiene ADN extracromosomal que las dems no tienen (producir diarrea), elcual
le aporta esta informacin para producir diarreas, para ser resistentes a la
ampicilina, etc., el ADN extracromosomal es una informacin complementaria
(o accesoria), es por eso que no es similar y no es obligacin que todas las
bacterias lo posean y adems estos ADN extracromosomal pueden estar
constituidos de muchas formas, 3 formas son las ms importantes que
hablaremos ms adelante xd.
Al comparar estos 2 tipos de ADN, existe otra caracterstica aparte, el tamao.
El ADN cromosomal es de gran tamao porque contiene toda la
informacin de la bacteria. Como el ejemplo que puso en la diapositiva
donde sale una e. coli que tiene 4.300.000 pares de bases. Por qu tantas
informacin? Porque la requiere. En cambio, esta misma puede tener un
plsmido que no va a tener ms de 5.000 pares de bases en promedio, me
puedo preguntar, Por qu tan poquito? Y es porque solo tiene una
caracterstica.
Cul sera la otra importancia? El ADN cromosomal, se pasa de manera
vertical de generacin en generacin (a la descendencia) de manera Semiconservativa, en cambio el ADN extracromosomal, son elementos mviles,
significa que se pueden pasar de manera horizontal (entre molculas pares) y
no necesita que la clula se est multiplicando, sino que una bacteria en
cualquier momento puede traspasar el gen de resistencia entre pares.
El ADN cromosomal, se divide por fisin binaria, significa que la clula da
origen a 2 clulas hijas iguales a la madre. Esto requiere por lo tanto que el
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cromosoma de la clula madre se replique (duplicacin del material
cromosomal semi- conservativamente), donde cada hebra de ADN sirve de
hebra molde para la replicacin complementaria. Me explico, el ADN de e. coli,
que es circular, bicatenaria (2 hebras) donde tenemos un Ori C que es el
origen de replicacin. Recuerden que en los procariontes tenemos un origen de
replicacin conocido con este nombre y en ese punto el ADN cromosomal se
abre (ya que esta superenrollado), y se empieza a sintetizar el ADN
complementario de las hebras (para formar la hebra contraria que se le
desprendi), al trmino del proceso, que al igual que en la clula eucarionte es
un bidireccional y continuo, se generan 2 cromosomas exactamente iguales,
por lo tanto cuando la bacteria se divida, habrn 2 clulas hijas exactamente
iguales a la clula madre. Esta es la funcin de este cromosoma y por eso est
en l la informacin constitutiva de la bacteria. Esto hace que la bacteria sea
bacteria y permite que la e. coli siga siendo la misma e. coli de siempre.
Entonces, existan 3 tipos ms comunes de ADN extracromosomal:
-
Plsmidos: Es un ADN pequeo, circular, bicatenario donde la nica

diferencia es el tamao. Incluso tiene capacidad auto replicativa donde
no depende de la clula bacteriana, tiene su propia informacin para
replicarse, por lo tanto puede tener como su estructura, informacin
para la sntesis de una toxina o una resistencia antibitica, etc. Lleva
genes conjugativos (genes que le permiten la movilizacin), porque el
fenmeno de conjugacin es el que le permite el paso horizontal del
plsmido de una bacteria a otra. Tambin tiene genes para su
autocontrol, entonces llevan lo necesario, la informacin que arrastran,
la informacin para moverse y la informacin para ser plsmidos.
Ejemplo: Un plsmido grande que tiene 31.000 pares de bases y es
grande porque lleva mucha informacin gentica adicional. Este
plsmido est constituido por un origen de replicacin (para su
replicacin independiente), genes de origen de transferencia y genes de
funcin de transferencia (genes conjugativos para su movilidad), lleva
adems resistencia a mercurio, sulfuramida, tetracilina, y otras 2
resistencias antibiticas. Entonces si otra bacteria obtiene los genes de
este plsmido, se har resistente a todo eso. Y adems, la bacteria que
traspasa estos genes (plsmido) no los pierde, porque el plsmido al ser
auto replicativo, se replica al momento de ser entregado a la otra
bacteria.
Entonces, para qu les sirven los genes accesorios a las bacterias? Para su
adaptacin. Porque si una bacteria que est en un medio con mercurio
(toxico para la clula), sino tiene estos genes de resistencia a este
elemento, el microorganismo se muere. Pero si lo tienen, la bacteria puede
usar el mercurio o simplemente desecharlo y todo esto por la adaptacin
que tiene por los genes extracromosomales que pudo recibir de otra
bacteria.
-
Transposones: es un elemento mvil, lineal y no es auto replicativo ya

que solo es un trozo de ADN, pero tiene la gracia de que puede saltar
entre un cromosoma a otro por la enzima transposasa que se los
permite. Y cmo puede entrar al cromosoma?, porque este tiene a los
extremos 2 secuencias que son repetitivas pero inversas una de la otra y
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estas son seales que le permiten al transposn buscar

complementariedad en el ADN, entrar y despus salir a otro ADN. Tiene
la caracterstica de poder saltar de un ADN cromosomal a un plsmido,
de un plsmido a un cromosoma o hasta de un cromosoma a otro, es
decir, de una bacteria a otra. Son procesos bastantes complejos el cmo
pasan, pero casi siempre pasan asociados a un plsmido (porque le es
ms fcil). A diferencia de un plsmido, cuando un tranposn sale de
una bacteria, esta bacteria pierde la caracterstica que le otorga este
elemento, porque el tranposn no es auto replicativo. Estos pueden
llevar cualquier informacin, como la resistencia a la tetraciclina por
ejemplo y siempre con la enzima transposasa (que le da la capacidad de
saltar).
Integrn: Tambin es un trozo de ADN que tampoco es auto replicativo
y es absolutamente dependiente de un elemento gentico superior, esto
significa que no puede estar solo, sino que siempre unido a un
tranposn, un plsmido o un cromosoma, es decir, puede estar integrado
a cualquiera de estos 3. Su cromosoma est constituido por extremos 5
y 3 conservados, donde en el extremo 5 tiene una integrasa (enzima
que permite integrar genes en el Integrn) y un extremo 3 conservado
que codifica para algunas cosas, tambin existen algunas zonas de no
codificacin, pero que se conservan en todos los integrones. Tiene
adems una regin central que es variable que es una zona de
adherencia de genes, los cuales estn en la forma de casset genticos
(pequeos trozos de ADN que codifican para algo, generalmente una
resistencia antibitica). Pueden unirse varios casset genticos en esta
zona que hace una especie de trencito o cadena de ADN de resistencia a
antibitico. Generalmente el Integrn se asocia a genes de resistencia
antibitica y no con otro tipo de gen. Adems tiene un promotor, que
permite que el Integrn se exprese solo. La necesidad absoluta del
Integrn, es estar en un transposn o estar en un plsmido, existen
muchos plsmidos con integrones incluidos y como pueden llevar (los
integrones) muchos genes asociados y se expresan por si solos, pueden
convertir a una bacteria en multi-resistente como lo son comnmente las
bacterias de los hospitales.
ENVOLTURA CELULAR
MEMBRANA CITOPLASMTICA:

Contiene al citoplasma, esta alrededor de la regin
citoplasmtica, es parte de la organizacin celular.
Est compuesta por una bicapa
fosfolipdica, en caso procarionte sigue
el modelo de mosaico fluido con una
diferencia, no posee esteroles (ni
colesterol ni derivados), hay elementos
que estabilizan esta membrana y le dan la
fluidez, entre ellos una serie de protenas
que son parte de la estructura, las cuales
tienen enlaces disulfuro los que ayudan a
producir la flexibilidad del mosaico fluido,
adems de las protenas encontramos otras
sustancias tales como opanol,
glicolipidos, protenas con terminales,
los que forman parte de la membrana
y le dan fluidez a esta.
Esta membrana desde un punto de
vista funcional es tremendamente
significativa, permite o reemplaza la existencia de organelos en una clula
eucarionte animal, tiene una actividad metablica asociada que es importante
junto a la funcin de toda membrana que es ser:
Barrera de permeabilidad selectiva: por su composicin qumica no deja
pasar TODO, solo pasan algunas cosas que son elementos afn a su
composicin qumica, el resto no atraviesa la membrana por difusin simple
sino que pasara a travs de canales los cuales son protenas, verdaderos hoyos
que se establecen en la membrana pero que estn mediados o controlados por
una protena que forma este canal o porina, estos canales o porinas pueden
estar a favor o en contra del gradiente de concentracin por lo tanto el ingreso
o salida de MO va asociado a un gasto energtico y en otras ocasiones no, y
puede incluso estar pasando a ser llevada o co-ayudada por otro
microorganismo ingresando o haciendo otros intercambios, mientras uno sale
el otro entra, debido a esto es que se habla de una seleccin, ya que estas
porinas o canales no estn para todas las sustancias que deseen entrar a la
clula y por lo tanto dependiendo muchas veces del tipo bacteriano que
nosotros estemos analizando puede que tengamos algunos elementos que
sean capaces de ingresar y otros no, esto lo podemos relacionar con que si
esta bacteria la tenemos en un nicho que es muy distinto de otro. Ejemplo: si lo
tenemos a nivel de la laguna, para poder crecer requiere ingresar nutrientes
que eventualmente en este lugar pueden pasar ya que encuentran afinidad,
pero si a la misma bacteria la ponemos dentro del organismo humano puede
no encontrar los nutrientes o los que hay all no pueden entrar porque
obviamente una bacteria que vive en un nicho ambiental como la laguna, tiene
una cierta caracterstica de membrana, entre ella la cantidad de protenas
existentes como porinas que van a permitir o controlar el acceso de nutrientes
hacia ella.
Las porinas son estructuras que van a generar una especie de hoyito, un tubo
que se ubica en la membrana.

Las protenas de transporte pueden ser o tener la misin de co-transportar es
decir pasar ellas junto con una sustancia, en este caso debe haber un receptor
en la membrana, algunas de estas protenas tambin pueden tener la funcin
de porina es decir lo que ellas hacen es hacer una especie de tnel a travs de
la membrana para que los elementos pasen.
Actividad Metablica:
En todas las membranas se pueden encontrar actividades metablicas, en la
de los procariontes esta actividad es fundamental para la clula, ya que
reemplaza a algunos organelos, porque aqu encontramos toda la cadena
transportadora de electrones y encontramos tambin el complejo ATPACICO
para la produccin de ATP y hallamos todo este complejo enzimtico de
sistema, cadena transportadora de electrones debido a que no hay
mitocondrias, por lo que en algn lado de la clula deben estar incluidos todos
estos elementos por que la bacteria requiere energa, requiere hacer sntesis
de ATP para todo su metabolismo, en este lugar encontramos toda la cadena
enzimtica que es necesaria para la sntesis de lpidos, sistemas enzimticos
como por ejemplo la sntesis de los elementos de la pared, distinto a las
eucariontes animales, se puede encontrar tambin una pequea sntesis de
protenas de exportacin, porinas, de transporte, o tambin se pueden
modificar las protenas a este nivel.
FLAGELO: estn presentes en algunas bacterias tienen la funcin de mover a
la clula, este movimiento de flagelo se produce gracias a un gasto energtico
y a la fuerza protn motriz generada en la cadena transportadora de
electrones, por lo tanto el motor del flagelo lo encontramos en la membrana
citoplasmtica.
Todos estos elementos excepto los grnulos de inclusin son de vital
importancia para la bacteria, estas son las sustancias ms fciles de intervenir
para hacer control bacteriano, cuando se quiere matar una bacteria se deben
atacar los puntos que son esenciales para ella entre ellos: genoma,
ribosomas, membrana plasmtica, pared celular.
PARED CELULAR:
Es un elemento que no encontramos en la clula eucarionte animal, est
constituida por un compuesto que se conoce con el nombre de peptidoglican.
PEPTIDOGLICAN:corresponde al componente fundamental de la pared, es una
especie de polmero (estos son muy estables) que se encuentra constituido por
dos compuestos, n-acetilmuranico y n-acetilglucosamida, estos dos
elementos se unen a travs de enlaces 1-4, lo cual permite cierto
movimiento entre las molculas, y se van intercalando para formar una
verdadera red o malla de alta estabilidad para la clula, esta estabilidad del
peptidoglican le otorga a la bacteria la capacidad de que tenga una forma, si
este no existiera la clula tendera a ser redondeada. El peptidoglican adems
es una estructura que da rigidez pero tambin tiene cierta flexibilidad. Esta
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caracterstica de ser estable, rgida y a la vez flexible le da la capacidad de
soportar cambios de presin osmtica, por ej; podemos poner a una
bacteria a diferentes presiones osmticas y no ocurre lo que pasa en una clula
eucarionte animal, la ltima se rompe o se empieza a achicar.
Existen algunas enzimas que son parte de nuestro organismo, por lo tanto
parte de nuestra defensa orgnica, como ocurre con la lisozima esta tiene
como funcin destruir el peptidoglican y por eso es considerada un
antimicrobiano natural, esta enzima se encuentra en grandes cantidades a
nivel de la saliva, de lagrimas. La lisozima acta rompiendo la unin 1-4 y al
romperla desestabiliza al peptidoglican y por lo tanto la bacteria queda
susceptible al medio ambiente y se destruye. Es por eso que a nosotros no nos
afectan tanto las bacterias a nivel de ojos, o de boca.
SEGN PARED CELULAR:
1er grupo: tiene un porcentaje de peptidoglican significativo importante en su
pared, prcticamente est cubierta por completo, pero adems est constituida
por otros elementos entre los que mencionamos el acido teicoico y
lipoteicoico, los cuales son elementos que se entrelazan al medio del
peptidoglican, estabilizan este sistema e incluso algunos de ellos son capaces
de anclar esta pared a la membrana citoplasmtica para que esto sea una sola
cosa.
2do grupo: aqu el peptidoglican est presente, pero no en la misma cantidad
que en el primer grupo, corresponde a un peptidoglican mucho ms delgado,
no posee tantas capas, pero tiene las suficientes para cumplir su funcin, no
tiene acido teicoico ni lipoteicoico, pero posee una segunda membrana a la
cual se denomina membrana externa, esta es parte de la pared celular,
constituida por una bicapa: no es simtrica, ya que no corresponde a una
bicapa fosfolipidica. Es una membrana que tiene hacia el lado interno de la
bacteria fosfolipidos, y hacia el lado externo mirando hacia afuera tiene una
molcula que se conoce con el nombre de LIPOPOLISACARIDO (LPS).
Este LPS es una molcula compleja, constituida de tres partes; una parte
altamente conservada que est inmersa en la membrana que es
LIPIDO A, luego tenemos una zona central o CORE que es de
composicin polisacriday luego tenemos una parte externa que es
variable que est compuesta de polisacrido, pero aqu estos
polisacridos van variando en el tipo, el largo y la estructuracin de
ellos segn la especie o el gnero bacteriano que estemos hablando.
Esta molcula completa se le conoce como endotoxina bacteriana, esto
significa que esta molcula le otorga la capacidad de causar dao de ser toxica
para las clulas eucariontes animales, ahora de esta molcula la parte que es
mas toxica, en donde est centrada esta actividad es el LIPIDO A, es el que le
da la capacidad de toxina. Se habla de endotoxina porque es una estructura de
la bacteria por lo tanto es parte natural de ella.
Tenemos estructurado tambin en la membrana una serie de protenas
estructurales que van a estabilizar la membrana y que tambin van a servir de
porinas o canales y esto pasa a ser bastante importante al punto que aqu en
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muchas ocasiones nosotros vamos a escuchar hablar de protenas de
membrana externa que estn en un nmero significativo porque esta
membrana tiene un carcter hidrofobico importante y por lo tanto el paso de
muchos elementos obligatoriamente debe ser a travs de las porinas o
protenas de mb externa. Otras protenas que existen o terminales proteicos los
vamos a encontrar asociados a la membrana citoplasmtica, la funcin de
estas protenas es estabilizar el sistema, adems de servir de porinas, existen
otras protenas que adems de dar estabilidad cumplen con la funcin de unir,
estas pueden ser la protena completa o solamente algunos residuos, algunos
terminales que interaccionan con la membrana citoplasmtica para unir.
Entre la membrana citoplasmtica y la externa nos queda una zona que se
conoce con el nombre de espacio periplasmico: este espacio (zona
intermembranosa), posee varios elementos tales como el peptidoglican,
protenas o residuos que unen a la membrana citoplasmtica y adems
encontramos otras protenas que estn como en suspensin que no son ni de la
mb citoplasmtica ni de la membrana externa y que cumplen funciones
metablicas en el espacio periplasmico, es decir que cuando nosotros
hablamos de la pared celular debemos tambin considerar este espacio, el cual
no est presente en el primer grupo de bacterias.
Si analizamos estas dos paredes de los dos grupos de bacterias encontramos
diferencias estructurales lo cual implica que cada uno de estos grupos
bacterianos interaccionan con el medio de manera distinta.
Si nos vamos a lo elemental esta bacteria expone residuos qumicos que son
absolutamente distintos a la otra, y por lo tanto en el momento de
interaccionar con el medio es diferente. Si lo pensamos de la manera que esta
es una estructura mas hidrofbica que el peptidoglican los elementos que
entran por ellos debe ser a travs de canales o porinas lo cual hace que este
tipo de bacterias sea distinto.
El LPS que se encuentra en la membrana externa tiene una actividad que es
inherentemente toxica, especficamente por el lpido A presente en su
estructura.
CRISTIAN GRAM
Ideo un procedimiento muy simple para poder distinguir las diferencias en la
estructura de la pared celular de las bacterias, esto lo hizo asociando las
diferencias de afinidad tintorial.
Si se prepara un frotis en un portaobjetos y ponemos de los dos grupos de
bacterias y la sometemos a un procedimiento con colorantes, debiera verse la
diferencia de afinidad tintorial entre ellas.
Pasos:
1.- Agrega el primer colorante CRISTAL VIOLETA (morado oscuro) al frotis, todas
las bacterias se tien sin importar la pared celular, se deja 1 minuto, se bota el
exceso, se lava con agua.
Si se mira al microscopio veo todas las bacterias de color azul.
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2.- Se agrega lugol (solucin de color pardo que no da coloracin) no es un
colorante, tiene la funcin de estabilizador, se agrega por 1 minuto, se bota el
exceso y se lava con agua.
Observacin al microscopio: se ven todas las bacterias teidas con
azul. Un grupo est ms coloreado y el otro no tanto.
3.- Se agrega una solucin decolorante que est compuesta de alcohol y
acetona, durante 30 segundos, se bota el exceso y se lava con agua.
Al mirar al microscopio aun se ven las bacterias teidas de azul
(peptidoglican grueso), pero solo un grupo, el otro queda incoloro a la
solucin (peptidoglican delgado).
4.- Se aplica un segundo colorante que es de contraste, la SAFRANINA es de
color rojo, por lo tanto las bacterias que fueron decoloradas en el proceso
anterior se tien de un rojizo o rosado, este colorante no es capaz de desplazar
al cristal violeta.
En el microscopio voy a ver bacterias teidas de azul oscuro y/o
bacterias teidas rosadas.
Las bacterias que se quedaron de color azul tienen un peptidoglican grueso.
Las bacterias que estn rosadas es un tipo de pared con un peptidoglican
delgado y una membrana externa.
GRAM POSITIVAS: color azul
GRAM NEGATIVAS: color rojo o rosado.
EXOPOLISACRIDO:
Son molculas polisacridos que son sintetizadas por la bacteria y luego son
expulsadas al medio extracelular para disponerse de dos formas:
-Cpsula
-Glicoclix o Slime
En estricto rigor esas estructuras no son iguales. Ambas se encuentran
altamente hidratadas lo cual le otorga una consistencia pegajosa a la bacteria.
CPSULA:
Es una serie de polisacridos externos (malos estimuladores del sistema
inmune), los cuales se ubican por fuera de la bacteria formando una estructura
que corresponde a una envoltura de alta densidad. Al envolver a la clula
bacteriana, la protege frente a nuestro sistema inmunolgico, particularmente
de la fagocitosis, debido a que el sistema inmune normalmente reacciona
frente a residuos, porque cuando llega un elemento extrao a nuestro
organismo este lo ataca para fagocitarlo y destruirlo el sistema reconoce muy
bien a las PROTEINAS, por lo que la capsula resulta ser una muy buena fuente
de infeccin. Ejemplo: si la bacteria ingresa a la va sangunea el sistema
inmune no va a ser capaz de captarla ya que pasa desapercibida.
Este componente no se expresa en todas las bacterias, solo lo hace
exclusivamente en las clulas bacterianas que utilizaran por ejemplo la va
sangunea para diseminarse.
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GLICOCLIX:
Son polisacridos de la misma naturaleza que los de la capsula, son
sintetizados y luego llevados al medio exterior, pero se estructuran de una
manera bastante ms laxa, no es una estructura altamente condensada como
la anterior, aqu la funcin es distinta, est asociada fundamentalmente a
capacitar a la bacteria para adherirse. Los polisacridos altamente hidratados
se transforman en una sustancia pegajosa, lo cual le da a la bacteria la
capacidad de adherirse pero de manera inespecfica, esto hace que la clula
bacteriana se pueda unir a factores abiticos. La adherencia corresponde a un
fenmeno de sobrevivencia de las bacterias, pueden vivir adheridas a sitios
orgnicos, a una clula, y a varias partes ms, para poder adherirse a las
estructuras que no son celulares, requieren de un elemento que les permita la
adherencia inespecfica, es por eso que estn presentes los polisacridos.
DIENTES
PLACA BACTERIANA
BIOPELICULA O BIOFILM (organizacin de
bacterias que se pegan entre ellas y a una superficie gracias al glicoclix,
utilizan matrices para poder adherirse)
No lo utilizan habitualmente con clulas, pero si en sitios donde no tienen un
receptor especfico, por ejemplo: dientes, sondas, catter, va, todos estos
tubos o plsticos cuando ingresan a nuestro organismo, a las 48 horas estn
colonizados por bacterias.
APNDICES:
Encontramos tres tipos: fimbrias, pili (sexual) y flagelo. Estructura filamentosa,
pueden estar dentro o fuera de la clula bacteriana.
FIMBRIAS:corresponden a pelitos que se ubican habitualmente alrededor de
la bacteria, son de naturaleza proteica, conformadas por PILINA. Puede estar
presente tanto en bacterias gram-positivas y gram-negativas. La funcin de las
fimbrias es de adherencia especfica, ya que al ser una protena esta para
poder adherirse o interactuar necesita de un receptor, por lo tanto corresponde
a una adherencia TISULAR; es decir a distintas clulas y tejidos. Esto justifica
que al tener una bacteria esta solo se una a un determinado lugar ejemplo:
neisseria meningitidis es la causante de la meningitis, cuadro fulminante
bacteremico que se disemina a travs de la sangre llega a la barrera
hematoencefalica la atraviesa y pasa al sistema nervioso central, se une a este
lugar porque aqu es donde tiene un receptor, esta bacteria no va a producir
diarrea ya que no presenta receptores en el intestino, a diferencia de la
escherichia coli, la cual es parte de la flora bacteriana normal y nos puede
producir diarrea (receptor en el intestino), una infeccin urinaria (receptor en la
vejiga).
PILI (sexual):puede aparecer como una subclase de fimbria o fimbria
especializada, ya que tiene una composicin proteica de PILINA. Est dirigido
por el plsmido. Se encuentra solo en bacterias gram-negativas, corresponde
a una estructura que se sintetiza (da la forma de un tnel) solo cuando va a
haber conjugacin (mecanismo que permite el traspaso de plsmidos de una
clula a otra). Es de un tamao mucho mayor a la fimbria a pesar de ser de la
misma estructura, ms largo. Despus que se ocupa el pili se degrada. La
bacteria puede hacer conjugacin cuantas veces quiera, pero no se ocupa el
mismo pili, ya que este es dependiente del plsmido.
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FLAGELO:
Tanto en bacterias grampostivas como gramnegativas.Constituido por
FLAGELINA, esta protena est ubicada en el ligamento que va a unir el flagelo;
este posee tres zonas, una basal donde tiene unos anillos (motor) que son los
que le dan el movimiento (el cual es helicoidal, de forma contraria a las
manecillas del reloj), habitualmente este anillo se encuentra asociado a la
membrana citoplasmtica y le otorga la movilidad gracias a la fuerza protn
motriz y energa ATP; luego tiene un gancho que es una seccin un poco curva
y a partir de aqu est el flagelo como tal (apndice que protruye). Estas
estructura son taxonmicas, es decir son caractersticas de cada una de las
bacterias, pueden estar de a 1 (vibrio clera), o de varios (salmonella) en
donde se ubican alrededor de la clula bacteriana y se denominan flagelos
peritricos. Pueden estar de forma polar, es decir en un polo de la bacteria o
tambin de forma bipolar (en dos polos), esta ltima da la caracterstica de una
pastilla. Su funcin es el movimiento (gasto energtico): esto no significa que
la bacteria se va a estar moviendo en el mismo sitio sino que este MO se va a
mover en funcin de ciertos estmulos ya sea de atraccin (cuando hay un
nutriente) o repulsin (cuando se encuentra con una sustancia toxica).
ESPORA BACTERIANA (ENDOSPORA):

Es una estructura de resistencia sintetizada solo por algunas bacterias, que
habitualmente son de carcter ambiental. Esta endospora protege al
cromosoma bacteriano, las bacterias que sintetizan esta estructura lo hacen
cuando se encuentran en una condicin adversa (ambiente toxico o falta de
nutrientes), por lo tanto si esto no es remediado la bacteria se morir. Los MO
que poseen esta capacidad protegen su ADN construyendo la espora, lo
primero que hace la bacteria es duplicar su material gentico ADN, luego de
esto comienza un proceso de invaginacin donde tenemos membrana
citoplasmtica y peptidoglican y se empiezan a sintetizar una serie de
envolturas que le dan resistencia a todas las condiciones ambientales a esta
espora (inerte metablicamente). El material por el cual estn conformadas
estas estructuras es fundamentalmente ACIDO DIPICOLINICO, este ltimo le
da resistencia, impermeabilidad. Cuando existen las condiciones adversas, la
bacteria va a desaparecer pero la espora se mantendr en el ambiente con el
cromosoma bacteriano dentro, todo el tiempo que sea necesario (1 da o 2, una
semana, meses, aos, siglos) hasta cuando la espora siente que las
condiciones ambientales cambiaron y ahora existe una condicin adecuada de
nutrientes. La espora germina y comienza el proceso de transformarse en una
bacteria metablicamente activa. La relacin que existe entre estas bacterias
ambientales y el ser humano, no es del todo activa, ya que a nosotros no nos
afectan estos MO, a excepcin de algunos. Esta espora al ser pequea, liviana,
posee una gran capacidad de diseminacin y por lo tanto constituyen fuentes
de contaminacin. Hay enfermedades graves que estn mediadas por estas
estructuras, nos infecta la espora, como por ejemplo Clostridium tetani,
productor del ttano: enfermedad grave que afecta el sistema nervioso que
puede ser mortal, la adquirimos por el contacto con la espora de esta bacteria,
la cual entra a nuestro organismo y se da cuenta de que correspondemos a un
ambiente optimo con los nutrientes requeridos para poder desarrollarse, por lo
cual esta germina, se transforma en una clula metablicamente activa y nos
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produce la infeccin. Lo mismo sucede con el bacillus anthris productor de
ntrax. Clostridium difficile agente microbiano intrahospitalario que produce las
diarreas hospitalarias, este cuadro se transmite entre pacientes a travs de las
esporas las que logran diseminarse y germinan. Para lograr hacer control de
esta espora hay que tener claro que no es fcil exterminarla; cuando el agua
est contaminada con una espora se demora mnimo 8 horas en hervir a 100C
de manera constante.
FISIOLOGIA, METABOLISMO O NUTRICION BACTERIANA:

Nos referimos a una serie de reacciones qumicas y bioqumicas que se
producen dentro de la clula, que permiten que esta se comunique o tenga
intercambio de materia y energa con el ambiente.
- CATABOLISMO: degradacin de molculas complejas en constituyentes
ms simples y almacenaje de la energa obtenida en proceso (ATP).
- ANABOLISMO: sntesis de compuestos complejos a partir de
constituyentes ms simples y energa.
La bacteria realiza esto para crecer y multiplicarse, por lo cual a partir de una
clula se generaran dos clulas exactamente iguales y as sucesivamente
(divisin celular). Para poder llevar a cabo este proceso requiere de energa y
nutrientes.
ENERGIA:
- LUZ: fototrofas
- COMPUESTOS QUIMICOS: quimiotrofas
Inorgnicos: litotrofos (oxido-reduccin)
Orgnicos:organotrofos (oxido-reduccin)
Cada bacteria tiene su forma de adquisicin de energa, esto no significa que
en un momento la obtengan a partir de la luz y en otro a partir de los
compuestos qumicos. Esta captacin de energa tiene una relacin directa con
los nichos ecolgicos en donde se pueden encontrar las bacterias, es decir: si
una bacteria obtiene su energa a partir de la luz, esta se va a encontrar en la
laguna, y si la obtiene a travs de compuestos qumicos la encontraremos en el
nicho donde estn presentes estos compuestos ya sean orgnicos o
inorgnicos.
NUTRIENTES:
- MACRONUTRIENTES:en grandes cantidades. C.H.O.N, son la base de
las molculas orgnicas y de las estructuras celulares. El carbono pasa
a ser uno de los ms importantes, y es obtenido por parte de las
bacterias de dos formas:
A partir del CO2: auttrofas
A partir de la degradacin de compuestos orgnicos: hetertrofos
- MICRONUTRIENTES:en menor cantidad (azufre, fsforo, calcio, sodio). I
- ELEMENTOS TRAZA:pizca de nutrientes. Se descubrieron cuando se
pens que en ciertos ambientes que se estaban estudiando haban unos
compuestos qumicos que por su cantidad parecan contaminantes, pero
cuando se sac este supuesto contaminante, el sistema no funciono, es
decir las reacciones qumicas no funcionaron. Luego le agregaron este
contaminante y el sistema volvi a funcionar. En ese momento se
dieron cuenta que no eran contaminantes, sino que ayudaban al sistema
a funcionar.
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-
FACTORES DE CRECIMIENTO:son molculas ms complejas

absolutamente necesarias para el crecimiento bacteriano. Pueden ser
vitaminas, aminocidos, entre otros.
SEGN NUTRIENTES Y ENERGIA:

- FOTOHETEROTROFO: fuente de energa LUZ, fuente de carbono
compuestos orgnicos
- FOTOAUTOTROFO: fuente energtica: LUZ, fuente de carbono: CO
- QUIMIOHETEROTROFO: mayor importancia clnica para el hombre ya
que son las bacterias con las cuales se relaciona directamente. Porque
este tipo de clasificacin corresponde a todos los microorganismos que
obtienen su energa y su fuente de carbono (nutrientes) a partir de
compuestos orgnicos (degradacin de estos). Atacan al ser humano
(metabolismo quimioheterotrofo) ya que este corresponde a un nicho
que cumple con todos estos requisitos para que las bacterias puedan
vivir.
- QUIMIOAUTOTROFO: las bacterias obtiene su energa a partir de
compuestos qumicos inorgnicos y su fuente de carbono corresponde al
CO.
SEGN FACTORES DE CRECIMIENTO:

- PROTOTROFOS: son las bacterias capaces de sintetizar sus propios
factores de crecimiento
- AUXOTROFOS: microorganismos que no son capaces de sintetizar sus
factores de crecimiento y por lo tanto se les debe entregar al medio.
EJEMPLO: existen bacterias que necesitan para su crecimiento vitamina K , si
este MO es prototrofo para este factor de crecimiento yo no necesito
entregrselo, pero en el medio deben estar presentes los precursores para que
esta primera pueda sintetizar la vitamina K. Si estabacteria es auxotrofa para
esta vitamina (no tiene la maquinaria enzimtica para poder sintetizarla), en el
medio debe haber vitamina K adems de otros nutrientes.
Es importante destacar que una bacteria no es auxotrofa ni prototrofa para
todos los factores de crecimiento, lo es solo para algunos como el ejemplo de
arriba. Por lo tanto un MO puede ser auxotrofo para un elemento y prototrofo
para otro. Una bacteria podra modificar su capacidad a partir de su
cromosoma. A partir de esta condicin se puede hacer control bacteriano, ya
sea alterando los nutrientes, alterando su estructura, alterar condiciones.
TRANSPORTE DE NUTRIENTES:
Mecanismos distintos para que las bacterias ingresen sus nutrientes.
- PASIVO: a favor del gradiente de concentracin por lo cual no hay gasto
energtico.
Difusin simple: HO, sustancias lipdicas. A travs de la
membrana.
Facilitada: por accin de permeasas que ayudan como
carriers. Son protenas que las bacterias exportan al exterior y
poseen gran avidez para la sustancia requerida.
- ACTIVO: en contra del gradiente de concentracin, por lo tanto existe
un gasto de energa.
CONDICIONES FISICO-QUIMICAS:
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El medio en el cual se cultiva una bacteria adems de nutrientes debe tener
ciertas condiciones ambientales que influyen en el crecimiento bacteriano.
-
TEMPERATURA:corresponde a uno de los puntos ms importantes, es

una caracterstica propia y taxonmica de las bacterias (est acentuada
en el cromosoma bacteriano), ya que esta condicin hace que la accin
se desarrolle y est asociada directamente a una velocidad de reaccin.
Esto no se realiza a cualquier temperatura, ya que cada MO tiene una t
mxima (esta es UNICA, no es un rango) y mnima de crecimiento. A
mayor temperatura (optima) mayor velocidad de reaccin y por lo tanto
mayor duplicacin bacteriana. Esta temperatura optima de la bacteria
esta en directa relacin con la estabilidad de las molculas (protenas: si
aumentamos la temperatura estas inhiben su funcin) del
microorganismo en cuestin. La temperatura ptima corresponde al
valor en donde la bacteria se multiplica de forma ms rpida y en mayor
cantidad.
Ejemplo: bacteria X: T optima: 43 C, T mxima: 50C, T mnima:
22C
Cuando la bacteria llega a la temperatura mnima a la que puede
reaccionar, esta deja de crecer, es decir que a esta t las reacciones ya
no estn funcionando. En este caso existe una disminucin gradual del
crecimiento. Ac las protenas estn inactivas, pero la bacteria no est
muerta, solo se encuentra inhibida.
En la temperatura mxima tambin llega un momento en que las
reacciones se detienen y el crecimiento bacteriano es cero. En este caso
hay disminucin totalmente brusca del crecimiento. Esto se debe a que
aqu las protenas que estn en la bacteria se desnaturalizan, lo cual
produce que el microorganismo se muera. Para lograr hacer control y
modificar el material gentico de una bacteria esto se realiza a la
temperatura mxima.
Un ejemplo clsico es la comida, cuando la guardamos en el congelador
por mucho tiempo esta no se descompone, ya que disminuimos la
temperatura de las bacterias y estn inactivas, por lo tanto se detiene el
crecimiento de estas.
Clasificac Rango
ptima
Patgenas humanas, mesfilas
in
Listeriamonocytogenes, psicrfila
Termfilo 25 - 80
50 60
s
C
C
- pH: no se relaciona directamente a si
Mesfilo
10 45 20 40
yo bajo o subo el pH de un medio
s
C
C
especfico voy a tener una velocidad de
Psicrfilo -5
10
reaccin, sino que tiene relacin con la
s
30C
20C
estabilidad. Las reacciones de las
bacterias se realizan en un pH ptimo en donde estas estn estables.
Clasificac
in
Acidfilo
s
Neutrfil
os
Alcalfilo
s
pH
extern
o
1.0
5.0
5.5
8.5
9.0
10.0
pH
interno
6.5
7.5
9.5
Lactobacillus spp, microorganismo

acidfilo que crece a pH = 4.5
Vibriocholerae, basfilo que puede vivir
a pH 9.
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pH externo: ejemplo: la bacteria funciona a 6.5 (pH interno), quiere

decir que sus iones son estables a este valor de pH, pero este
microorganismo puede vivir o soportar condiciones de 1.0 a 5.0.
Las bacterias ACIDOFILAS pueden vivir en pH diferentes a su pH interno ya que
poseen mecanismos que permiten sobrellevar los valores de pH externos,
como buffers biolgicos y otros que modifican el pH de su entorno directo lo
cual les permite vivir. Helicobacter pilori es una bacteria que afecta a nivel de
estomago causando gastritis y ulceras en el ser humano, esto es una situacin
crnica, para que esto ocurra la bacteria debe ser capaz de vivir a pH ms altos
(1 y 2 pH del estomago).
Los neutrofilos poseen un metabolismo que funciona a pH neutros.
Los alcalofilos o basofilos pueden estar en distintos pH cercanos a su rango
ptimo.
La mayora de los microorganismos que nos afectan tienen un pH cercano a la
neutralidad, sin embargo los seres humanos no somos homogneos en
nuestros valores de pH y tenemos sitios por ejemplo el estomago que tienen
pH distinto. Es por esta razn que tambin nos pueden infectar bacterias tanto
acidofilas como alcalofilas.
-
ACTVIDAD DE AGUA: es de gran importancia para las bacterias. Esto

corresponde al agua disponible. Es el agua que no est comprometida
con los nutrientes, se refiere a la cantidad que est disponible para
hacer reacciones. Los valores van entre 0 y 1, mientras ms cercano al
cero hay menos actividad de agua, es decir hay menos cantidad de agua
disponible y por lo tanto el crecimiento bacteriano tambin es menor.
PRESION OSMOTICA: existen algunos microorganismos que requieren

ambientes NO necesariamente isotnicos, sino que requieren algunos
ambientes con una carga de algunas molculas importantes.
Halfilos: microorganismos que requieren de una carga adicional
por ejemplo de sodio en el ambiente. Vibrio cholerae: parahemolitico.
Son bacterias que requieren obligatoriamente que en el medio exista
sal y a veces no porcentajes menores sino que se pueden dividir.
H. discretos: (1 6%)
H. Moderados: (6 15%)
H. Extremos: (15 30%)

Por ejemplo el vibrio parahemolitico es una bacteria patgena para el ser
humano que se encuentra en el mar, por lo cual es un microorganismo
HALOFILO (necesita del ion sodio).
Osmfilos: son microorganismos que viven en altas
concentraciones de azucares.
Xerfilos: microorganismos que viven ausencia de agua o
sequedad.
REQUERIMIENTO DE OXIGENO ATMOSFERICO:
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Este experimento se realizo para poder evidenciar las necesidades de

oxigeno que tienen las bacterias, utilizando la propiedad del oxigeno de
solubilizarse en un liquido, lo cual va a generar una disolucin en la cual
habr un gradiente de concentracin de O.
Sin inocular: en esta zona el oxigeno est solubilizado con el liquido, ya

que no hay un movimiento dentro de la columna del tubo de ensayo. El
oxigeno va a comenzar a difundir hasta que este mismo se acabe,
entonces se genera un gradiente de concentracin del elemento. Si este
tubo se agita encontraramos una concentracin homognea de oxigeno.
Aerobios obligados: microorganismos que son absolutamente

dependientes de oxigeno, es decir, su metabolismo es oxigenado (de ah
viene el concepto de aerobio). Son obligados ya que valga la
redundancia, obligatoriamente deben vivir en estas condiciones. Estas
bacterias crecern solo en la superficie del tubo ya que es donde hay
oxigeno atmosfrico suficiente para que estas puedan crecer. Su
metabolismo es dependiente del oxigeno, de la cadena transportadora
de electrones. Estas bacterias poseen todos los sistemas de
detoxificacion posibles para la clula, es por esto que para ellos el
oxigeno no es toxico.
Micro aerofilos: son microorganismos que requieren oxigeno pero en

baja concentracin, su metabolismo es oxigenado en menores
cantidades, es por eso que al colocarlos o inocularlos en el tubo, estos
crecern un poco ms abajo que los aerobios obligados. Estas bacterias
requieren de una pequea cantidad de oxigeno y NO CUENTAN con todos
los sistemas enzimticos de detoxificacion para este elemento, solo
poseen algunos. Debido a esto no pueden vivir en condiciones mayores
de presencia de oxigeno atmosfrico.
Anaerobios obligados: estas bacterias no necesitan oxigeno para vivir,

su metabolismo est adaptado para la ausencia de este elemento
qumico, utilizan metabolismo alternativo como por ejemplo: la
fermentacin para la obtencin de energa, cadena transportadora de
electrones pero no tienen al oxigeno como ultimo aceptor sino que
tienen molculas distintas derivadas del azufre y nitrgeno. El oxigeno
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mata a estos microorganismos, ya que para ellos este elemento es
toxico, aunque es una molculaesencial para la vida, cuando este
reacciona genera lo que se conocen como los radicales libres de
oxigeno, estos ltimos son txicos para las clulas, por lo tanto estas
deben hacer frente a estos radicales y poseen mecanismos de
detoxificacion de oxigeno, como las catalasas, peroxidasas, superoxido
dismutasa, entre otras. Lo que hacen es transformar todos los radicales
de oxigeno en nuevamente oxigeno y agua, por lo tanto constituyen los
antioxidantes naturales de la clula.Es por eso que son OBLIGADOS a
vivir sin la necesidad de este primero. Cabe destacar que estos
anaerobios obligados NO POSEEN ninguno de estos mecanismos, por lo
tanto no necesitan el oxigeno para poder vivir y adems este es toxico
para ellos. MUEREN RAPIDAMENTE EN PRESENCIA DE OXIGENO.
Anaerobios aerotolerantes: estos microorganismos son anaerobios,

no utilizan oxigeno para su metabolismo, pero poseen algunos sistemas
de detoxificacion para el O, que les permite tolerar el oxigeno a pesar
de que no lo ocupan, por lo tanto estas bacterias no mueren
inmediatamente en presencia de este elemento.
Anaerobios facultativos: tienen las dos grandes vas metablicas:

aerobia y anaerobia. Por probabilidades habitualmente se estn
comportando como aerobios, porque vivimos en una atmosfera
oxigenada y por lo tanto su maquinaria o mecanismo es dependiente del
oxigeno. Estas bacterias facultativamente se pueden convertir en
anaerobias, por lo que existe una posibilidad de que por ejemplo si yo
tengo a las bacterias en un medio rico de oxigeno estas se estn
comportando como aerobias, pero si las llevo a un medio que no tenga
oxigeno se comportaran como anaerobias y posiblemente no se morirn,
ya que reemplazan su maquinaria a anaerobia en donde tienen
posibilidades hacer fermentacin entre otros. Crecen a lo largo de todo
el tubo, los que estn en la base se estn comportando como anaerobios
y los de la superficie como aerobios. Corresponde a los tipos de
microorganismos ms frecuentes en el medio ambiente, en nuestro
organismo se puede encontrar un nmero importante de anaerobios
facultativos y estrictos que son los agentes etiolgicos causantes de
infecciones y tambin formando parte de nuestra flora normal. Ejemplo:
en la cavidad bucal hay un aerobio por mil anaerobios presentes, por lo
cual se denomina como un nicho preferentemente de bacterias
anaerobias. La cav. Bucal se caracteriza por tener zonas anaerobias
como los surcos interdentarios, radiculares donde va la pieza dental y los
surcos que se generan con el tejido blando la enca, en el fondo de estos
ltimos existe un potencial de oxido reduccin que es adecuado, la
cantidad de oxigeno que llega es disminuida por lo tanto es un ambiente
predominantemente anaerobio.
CRECIMIENTO BACTERIANO
21

Implica que las bacterias se comiencen a multiplicar debido a las optimas
condiciones tanto ambientales como fsico qumicas existentes. La
multiplicacin de las bacterias responde al proceso de fisin binaria donde a
partir de una clula se generan dos clulas exactamente iguales a ella.
Tenemos una clula madre y a partir de ella
lo primero que sucede cuando la bacteria
se comienza a multiplicar es la duplicacin
de su cromosoma, el cual es de
caractersticas semi conservativas por lo
tanto se generaran dos hebras de material
gentico exactamente iguales. Junto con
este proceso debe haber adems un
crecimiento celular (formacin de todos los
elementos necesarios para la creacin de
las clulas hijas) una elongacin por parte
de la clula, la cual es solamente temporal.
Luego se produce la formacin de un septo
o tabique que es producto de una
invaginacin a nivel celular gracias a la
introduccin hacia el citoplasma tanto de
la membrana citoplasmatica como del
peptidoglican. Cuando este tabique est
formado las clulas se comienzan a
separar. Este septo pas a ser las paredes
celulares respectivas de las bacterias y da
origen a dos clulas hijas idnticas a la
clula madre que las origin. Este proceso
ocurre en una generacin bacteriana, cuando las bacterias estn en
condiciones tanto nutricionales como ambientales ptimas.
El tiempo en que crecen las bacterias no est relacionado con las condiciones
fsico-qumicas ni nutricionales de estos microorganismos, sino que est en
directa relacin con una caracterstica gentica que se conoce con el nombre
de Tiempo de Generacin o Tiempo de Duplicacin, el cual indica el
tiempo en que la bacteria se va a demorar en duplicarse o en hacer una
generacin.
Cada bacteria tiene su PROPIO tiempo de generacin.
La Escherichia coli tiene un tiempo de generacin de 30 min, Mycobacterium
tuberculosis tiene un tiempo de generacin mucho ms lento
aproximadamente de 15 horas, es decir de pasar de una clula a dos se
demor 15 horas.
Cuando la bacteria se encuentra en condiciones optimas de nutricin y fsicoqumicas, este microorganismo se va a demorar en duplicarse lo que dice su
tiempo de generacin. Ejemplo: si la gentica dice que una bacteria x se
demora 30 minutos en duplicarse, se demorar ese tiempo SOLO CUANDO su
sistema se encuentre en el ptimo. Si a la bacteria se le da MAS nutrientes de
los necesarios para que esta crezca ms rpido, esto no ser as, al contrario,
el microorganismo crecer de manera ms lenta. Si una mam sobrealimenta a
su hijo para que este crezca ms rpido, no ser as, a los 10 aos habr
22

crecido lo mismo comiendo menos, pero la diferencia est en que el nio
estar ms gordo.
Es por eso que siempre se habla de nutrientes en cantidades ptimas, no en
exceso, solo los que las bacterias necesitan para que sus reacciones funcionen
al mximo.
El crecimiento bacteriano no tiene una progresinaritmtica, sino que tiene una
progresin geomtrica, que si se quiere calcular equivale:
Ejemplo: Escherichia coli, en condiciones ptimas la duplicacin celular se

realiza cada 20 minutos,
en 10 horas se habrn producido 30 generaciones, es decir mil millones de
clulas bacterianas
a partir de una clula de E. coli, se obtiene al cabo de 10 horas o sea 600
minutos, 600/20=30 generaciones.
Si este crecimiento lo graficamos generamos una hiprbole. El crecimiento de
las bacterias no es de forma continua.
CURVA DE CRECIMIENTO BACTERIANO:

Esta curva debiera ser una
hiprbole, pero ya que es muy
complicado explicarla de esa
manera, se saca el logaritmo
en base 10 del nmero de
clulas viables (que se estn
multiplicando) versus tiempo.
Y con esto se obtiene la
linealizacion de la curva.
Se va a considerar un tubo, un
matraz, un recipiente en
donde colocamos todos los
nutrientes de las bacterias y
sus respectivas condiciones
fsico-qumicas. Tericamente
si la bacteria (Escherichia coli,
tiempo de crecimiento 30 min)
est en condiciones
adecuadas, al cabo de media
hora debiera tener 2
bacterias, a la hora 4 bacterias.
23

-
FASE DE ADAPTACIN: las bacterias se deben adaptar a las

condiciones de crecimiento otorgadas, para que estas puedan comenzar
a duplicarse, y comenzar su funcionamiento enzimtico. Esta fase puede
ser variable (ms larga o ms corta), dependiendo de la capacidad de
adaptacin o de donde provenga la bacteria, en qu condiciones viene
este microorganismo al nuevo medio de cultivo. Esta fase se puede
hacer ms corta, esto ocurre cuando las bacterias se llevan a un medio
de cultivo similar al que estaban anteriormente. Si cambio el
microorganismo de un medio rico a uno pobre, este se tiene que
adaptar, y si lo cambio de un medio rico a otro medio rico, este proceso
de adaptacin puede ser muy corto o prcticamente cero. Por ejemplo:
hay bacterias que al entrar en nuestro organismo no tienen fase de
adaptacin ya que venan de un medio en condiciones similares, es por
eso que nos producen infecciones muy rpidas, lo que se conoce como
infecciones agudas o crnicas.
FASE EXPONENCIAL: las bacterias comienzan a crecer de manera

constante, se grafica como una lnea que va en ascenso, se puede
evidenciar que hay un gran nmero de clulas que estn vivas y este
nmero sigue en aumento. Luego llega un punto en que el crecimiento
se comienza a detener gradualmente, y se debe a que los nutrientes se
empiezan a acabar (escases), hay falta de espacio, hay desechos
metablicos que son txicos para algunas bacterias.
FASE ESTACIONARIA: en este periodo no hay aumento de la poblacin

bacteriana, ya que se igual la cantidad de bacterias muertas y las que
se estn multiplicando. En esta etapa hay un crecimiento neto igual a
cero, cabe destacar que hay clulas que se siguen dividiendo pero en
una condicin mucho ms lenta a la inicial (fase exponencial). En algn
momento las bacterias al no haber nutrientes disponibles comienzan a
usar su metabolismo secundario el cual genera muchos ms desechos
txicos para estas mismas y llega a ser un ambiente hostil para estos
microorganismos.
MUERTE CELULAR: se produce un desequilibrio de la fase estacionaria,

en donde las bacterias muertas aumentan y las vivas o las que aun se
estn multiplicando disminuyen gradualmente. En esta etapa las
bacterias se comienzan a morir.
Las bacterias de la cavidad oral estn recibiendo nutrientes de forma
constante, por lo tanto se encuentran en fase exponencial, es decir de
crecimiento. No se produce un crecimiento explosivo ya que la
cavidad bucal es un sistema termodinmicamente abierto, lo cual
significa que as como entran nutrientes de manera constante, salen
desechos de la misma forma, lo cual permite mantener a las bacterias en
equilibrio (de crecimiento constante). Se generan cultivos de naturaleza
continua lo que permite que la fase de crecimiento exponencial sea
permanente pero no implica que las bacterias aumenten de manera
excesiva.
24
VARIABILIDAD GENTICA
Este es un tema que va a permitir entender muchos conceptos que ms
adelante iremos analizando que tienen que ver fundamentalmente con
evidenciar cambios genticos que van a presentar las bacterias a lo largo de su
trayectoria, de su vida. Estos cambios genticos en principio es difcil
entenderlos si no sabemos esto, porque el concepto que se ha dado desde el
punto de vista de la multiplicacin es fundamentalmente la invariabilidad
gentica y cada vez que una clula se divide lo hace para generar clulas hijas
exactamente iguales, entonces no existe variabilidad gentica y por lo tanto
uno podra pensar que las bacterias no son capaces de evolucionar ni de
adaptarse genticamente a nuevas condiciones. Sin embargo no perdiendo de
vista esa premisa porque eso no cambia, el concepto de reproduccin no vara
a pesar de este tema que vamos a analizar pero si nos permite entender que a
pesar de esa premisa y de la invariabilidad gentica que se genera entre
padres e hijos o entre clulas madres y clulas hijas existe la posibilidad de
variabilidad gentica de la clula y existe desde otros mecanismos adicionales
que permiten que las bacterias se vayan adaptando en periodos cortos de
tiempo que vamos a ver en los fenmenos de adaptacin son en tiempos
relativamente cortos porque la bacteria no puede esperar mucho tiempo para
adaptarse, justamente un proceso adaptativo es eso, un cambio relativamente
rpido para hacer frente a una condicin distinta pero tambin vamos a ver
que es posible que la sumatoria de estos cambios ms otros fenmenos que
vamos a conocer da origen a evolucin. No podemos suponer que por mucho
que una bacteria que siga siendo la misma E. coli a travs de sucesivas
generaciones esta E. coli es la misma que exista mil aos atrs porque las
condiciones del planeta han cambiado por lo tanto las condiciones ambientales
a las que se enfrentan las bacterias son distintas y por lo tanto estas bacterias
tienen que de una u otra manera as como lo hace todo el resto de seres vivos
se debe ir adaptando de alguna manera.
Estos cambios evolutivos son lentos y nosotros los vamos a poder distinguir
cuando hagamos un anlisis a travs del tiempo y no en una situacin puntual,
en una situacin puntual eventualmente vamos a ver un cambio o a lo mejor el
cambio se produjo y nosotros no nos dimos cuenta, no lo pudimos evidenciar.
En este contexto es que vamos a ver estos fenmenos de variabilidad gentica
que existen y son absolutamente necesarios y que justifican muchas cosas que
vamos a ir viendo a medida que vayamos avanzando el curso y que se va a
decir cmo esa bacteria logr esas caractersticas a travs de un cambio
gentico, pero eso cambio gentico no viene asociado a un proceso de
reproduccin sino a estos fenmenos que vamos a conversar hoy.
Variabilidad gentica
Para que sea considerado un cambio gentico para que sea considerado una
variacin gentica esta variacin debe ser estable, esa es la primera premisa y
qu implica estabilidad, que yo la pueda evidenciar en una generacin y que
ese cambio se mantenga en generaciones sucesivas, es decir, que la bacteria
pueda transmitir esa informacin y la transmite muy eficientemente porque
justamente el concepto de reproduccin es que una condicin que adquiri a
una clula se va a reproducir a todas su generaciones porque se reproduce
25

completa y va a generar una clula exactamente igual a ella y ah es donde
est la gracia de estos fenmenos de tipo genticos adaptativos y evolutivos.
Cules son los fenmenos que dan origen a estos cambios estables a nivel
gentico hay dos grandes fenmenos, la mutacin y la transferencia horizontal
de genes.
Mutacin
La mutacin obviamente es un cambio en algunas zonas del ADN y este
cambio puede ser puntual, puede ser que exista un cambio de una base por
otra o eventualmente pueden ser cambios un poco mayores ya sea por la
insercin de algn elemento o por la salida de algn elemento o tambin por la
reversin o intercambio gentico, puede existir algn tipo de reordenamiento.
Cualquier cambio que sufra el ADN es considerado mutacin, estamos
hablando de ADN cromosomal.
Estos cambios son importantes porque son heredables, porque obviamente si
hay un cambio en la secuencia del ADN, este cambio va a ser mantenido a
travs del resto de las generaciones y por lo tanto eventualmente vamos a
poder ver un cambio fenotpico porque por ejemplo el cambio puede ser
suficiente como para evidenciar una alteracin en la sntesis de una protena o
se dej de sintetizar una protena o si fue producto de una insercin hubo
ahora una posibilidad de sintetizar una protena que antes no se sintetizaba.
De cualquier manera el cambio existe, se hereda porque sigue a travs del
resto de las generaciones y es relativamente estable, no es habitual que exista
una mutacin y despus que la mutacin se revierta pero eventualmente si
vuelve a mutar en la misma zona y se vuelve a lo anterior podra ser pero esto
no ocurre ni en la generacin siguiente ni en subsiguiente, sino que
eventualmente son situaciones que ocurren a muy largo plazo por lo tanto los
cambios son mantenidos a travs del tiempo.
La mutacin genera como producto siempre es un cambio gentico, porque si
yo hago la comparacin, tengo una bacteria salvaje y la secuencio y ordeno
todas sus secuencias de ADN y pongo la bacteria que est mutada y pongo la
secuencia yo voy a evidenciar, comparar cambios en la constitucin del ADN
del cromosoma. Lo que yo no necesariamente puedo observar y por eso es que
uno a veces tiende a cometer este error porque el fenotipo puede o no estar
alterado, la mutacin no tiene por que obligatoriamente llevar a un cambio de
expresin de los genes, por qu, porque eventualmente la mutacin ocurri por
ejemplo en una zona de no lectura (ADN eucarionte tiene zonas de lectura y
zonas de no lectura) si yo genero una mutacin ah y comparo las dos cadenas
de ADN, hago una secuenciacin y miro base por base hay un cambio pero
resulta que en la expresin gentica, en el fenotipo la bacteria sigue siendo la
misma, no hay una alteracin de protenas, no hay un cambio metablico, no
hay un cambio ni de color ni de forma, pero si yo analizo el genoma si est la
mutacin.
La otra posibilidad es que eventualmente ahora cuando son mutaciones
puntuales y hay solamente inversin de base, es decir, hay un cambio de una
base por otra a veces la base que ingres no necesariamente da origen a un
cambio o a una expresin de una protena distinta porque recuerden que el
cdigo gentico de los eucariontes as como de los procariontes es un cdigo
gentico degenerado esto significa que ms de un triplete da origen a un
mismo aminocido, entonces perfectamente pudo haber ocurrido este cambio
26

de base pero resulta que eso no se traduce en un fenotipo alterado, por lo
tanto cuando nosotros hablamos de mutacin lo que se obtiene siempre es un
cambio gentico en la secuencia. El nuevo rasgo puede expresarse como
puede que no se exprese, por lo tanto no necesariamente voy a poder hablar
de mutacin cuando se diga que cambi la protena.
Desde un punto de vista absolutamente natural, lo que las bacterias hacen en
la naturaleza:
a. Mutaciones espontneas:que son absolutamente naturales y que son
habitualmente producidas por errores de replicacin o por insercin de
elementos mviles. Estas mutaciones como su nombre lo indica son
espontneas, esto quiere decir que yo no s cundo van a aparecer, van
a aparecer de repente, ahora por qu yo no s cundo van a aparecer
porque si es un error en la replicacin esto es una cosa extraa porque la
replicacin habitualmente cul es nuestra premisa, se generan dos
molculas de cromosomas exactamente iguales por lo tanto para que
ocurra un error en la replicacin tiene que haber alguna de las
polimerasas que pudo haberse equivocado cuando estaban revisando la
constitucin de las hebras complementarias y de repente se les pas y
hubo un intercambio de por ejemplo alguna base por otra, entonces
hubo un error en la replicacin que pudo haber producido esto. Por lo
tanto yo no s cundo esto va a pasar adems es muy poco frecuente
que pase. Son al azar, esto significa que no s en qu parte va a ocurrir,
puede ocurrir en cualquier zona del ADN a pesar de que hay que
estudios que s tienen claro que hay zonas que son ms mutables que
otras y que incluso en los ADN eucarionte particularmente en eucarionte
animal son las zonas que se les llama como de hotpoint, los puntos que
son ms mutables, son ms susceptibles a mutar, en las bacterias
tambin hay ciertos puntos que tienden a mutar ms pero
perfectamente en una mutacin puede mutar eso como puede mutar
otro, no es necesario que siempre estn mutando esos puntos.
La otra caracterstica es que aparece en baja frecuencia porque las polimerasas
no se equivocan todo lo contrario el sistema se mantiene a travs del tiempo
justamente gracias a la posibilidad de generar dos clulas hijas exactamente
iguales porque se generaron dos cromosomas exactamente iguales por lo tanto
esto ocurre en frecuencias muy bajas, es decir, es un fenmeno muy poco
frecuente, sern frecuencias bajas pero fijas porque cada cierto tiempo s se va
a producir una mutacin, es decir, que si nosotros le echramos la culpa a las
polimerasas podramos decir que estas estn como cateadas para que de
repente se equivoquen porque esto favorece los cambios. Esta situacin no es
de una generacin a otra sino que van a pasar muchas generaciones para que
eventualmente se produzca.
Las mutaciones en general porque hay para algunas propiedades que pueden
ser un poco ms frecuentes pero en trminos generales si uno hace un
promedio las frecuencias de mutaciones estn alrededor de 10 elevado a
menos 10 por ah, qu quiere decir eso, que por cada 10 elevado a 10
bacterias existe la probabilidad que una de ellas muera, si se saca la cuenta
son bastantes generaciones de bacterias y en esas generaciones cabe la
probabilidad porque tampoco es una certeza que una de ellas se encuentre que
ha mutado, esta situacin es muy poco frecuente pero fija, es decir, se sabe
27

que cada cierto tiempo va a ocurrir alguna mutacin y eso es lgico por el
ordenamiento de los sistemas biolgicos y de la vida en general, la vida ha ido
evolucionando de esa manera, cada cierto tiempo tiene la capacidad de ir
evolucionando y una de las formas es a travs de este tipo de cambios
genticos.
b. Mutaciones inducidas:ocurren tambin en la naturaleza pero aqu
estamos hablando que hay alguna intervencin, esta intervencin es
generalmente por elementos fsicos o qumicos donde aqu lo que
sucede es que el agente se pone en contacto con la bacteria ya sea
fsico, qumico, radiacin uv por ejemplo y va a producir algn dao en el
ADN, estos son los que se conocen como agentes mutgenos, que lo
hacen es cambiar la frecuencia, es aumentar la probabilidad que la
mutacin ocurra porque tambin nosotros mismos estamos expuestos
de forma habitual a muchos agentes mutgenos pero eso no significa
que nuestro ADN mute, en algunas personas s y se evidencia y en otras
no y por qu no, porque lo que hacen los agentes mutgenos es
aumentar la probabilidad, es decir, lo que hace es que aumenta la
frecuencia de mutacin pero tampoco cambia el concepto que siguen
siendo espontneas y al azar, yo no s cundo van a ocurrir y tampoco
s dnde, ahora este dnde si yo hago en el laboratorio puedo manejar
cualquier cosa y puedo dirigir una mutacin a un sitio especfico y que es
lo que se hace mucho en la terapia gnica en los seres humanos que se
hacen cambios a nivel gentico donde se dirige un vector que vaya
dirigido especficamente a una zona del ADN y produzca un cambio
gentico que finalmente lo que est haciendo es una mutacin tipo
dirigida en el laboratorio. Pero en la naturaleza estos agentes mutgenos
no me dicen dnde va a ocurrir, no me dicen cundo pero s aceleran y
por qu pueden acelerar la frecuencia, acelerar o aumentar las
probabilidades, porque estos agentes pueden ser anlogos de bases por
lo tanto se pueden producir cambios, una base por otra, pero resulta que
estructuralmente son similares pero cuando se empieza a leer el ADN
obviamente no es reconocido como una base y por lo tanto se produce
ya sea un corte, una mala sntesis o expresin de una protena, etc.,
pueden haber agentes derechamente modificadores que hidroxilan una
zona, que le agregan o sacan alguna molcula, cambian algn enlace,
reaccionan con el ADN por lo tanto cambian estructura y van a cambiar
obviamente la funcionalidad o eventualmente hay algunos agentes
intercalantes que se introducen, se meten entre medio del ADN y van a
alterar la estructura o funcin de este.
Por lo tanto como se puede ver hay diferentes posibilidades que se produzcan
cambios, estos cambios por muy rpidos a aumentar la probabilidad que se
produzcan a travs de los agentes mutgenos no son cambios que yo vaya a
poder estar para que las bacterias se adapten, podra ocurrir casualmente que
la bacteria est en una mutacin y que yo favorezca esa mutacin por alguna
condicin y que gracias a eso la bacteria lograra adaptarse rpidamente pero si
no habitualmente muchos de estos cambios no van a contribuir con que la
bacteria se adapte en un determinado momento sino que la sucesin de estos
cambios yo las puedo evidenciar o ver que ha habido algn cambio, alguna
mejora o alguna situacin que va a favorecer la evolucin de la bacteria ms
28

que los cambios adaptativos, sin embargo los cambios adaptativos ocurren y la
bacteria rpidamente puede ir cambiando pero esos cambios genticos rpidos
son producto de la transferencia horizontal de genes.
TRANSFERENCIA HORIZONTAL DE GENES
No es otra cosa que el traspaso de genes de una bacteria a otra de manera
horizontal y que no necesitan estar emparentados sino que no necesitamos
que sean de madres a hijos, es decir, de una generacin a otra sino que incluso
por ejemplo puede ser de una E.coli a un protheus, de una E.coli a una serratia,
es decir, de bacterias distintas que incluso no tienen por qu tener una relacin
gentica muy cercana, pero si existe esta probabilidad.
Cmo transfieren estos trozos de ADN o estos genes, son transferidos a travs
de 3 fenmenos: la conjugacin, la transduccin y transformacin. Son 3
fenmenos distintos que tienen distintas caractersticas y que mueven distintos
tipos de genes o estructuras genticas distintas, pero a pesar que son
fenmenos distintos dan 3 caractersticas que son similares y que tienen en
comn.
La primera es la unidireccionalidad, por lo tanto la transferencia horizontal de
genes se caracteriza por ser unidireccional, que la informacin gentica
siempre va en una direccin, es decir, desde una clula dadora a una clula
receptora. No hay trueque, no es que la bacteria de algo y reciba algo a
cambios, eventualmente ella puede recibir algo pero esa recepcin es despus,
primero se hace un fenmeno, termina ese fenmeno y despus la bacteria
puede hacer un fenmenos que puede ser el mismo tipo pero puede ser un
evento posterior, por lo tanto siempre existe una bacteria que da que se
conoce como clula dadora o donadora de un material gentico y siempre
existe por fenmeno una bacteria que recibe por lo tanto se conoce como
bacteria receptora.
La transferencia horizontal es parcial, siempre es parcial porque una bacteria
no puede entregar todo el cromosoma sino que recuerden ustedes que cuando
la bacteria recibe cosas siempre son cosas accesorias, son caractersticas
adicionales, porque la bacteria tiene una estructura que es clsica, propia, y
que le permite ser la bacteria que es, por ejemplo E.coli, yo no puedo esperar
que la bacteria reciba algo que haga ser otra sino que va a recibir una
informacin que la a convertir en una E.coli con caractersticas distintas con
una capacidad por ejemplo para la sntesis de una toxina que no tena pero
esta toxina no la hace cambiar de E.coli, por lo tanto siempre son trozos o es
un plsmido, siempre es una parte del cromosoma no es todo.
La otra caracterstica es que la bacteria tiene que aceptar esa transferencia
gentica, la dadora no es solo la que entrega y la que recibe no solo recibe sino
que tambin hay un filtro y este filtro se da exclusivamente en lo que ella
acepta como informacin gentica, puede aceptar todo lo que a ella le
conviene porque las bacterias no reciben nada que sea contra producente
para ellas y por lo tanto no puedes recibir algo que vaya en contra de lo que
ellas son.
Tienen varios mecanismos para poder ir bloqueando esas posibilidades, por lo
tanto siempre existe un cambio o una variacin que habitualmente es
beneficiosa porque son adaptativas. Un ejemplo de esta aceptacin de este
material gentico es la posibilidad que tienen las bacterias de recombinar, es
29

decir, reciben un trozo de ADN por ejemplo y ese trozo de ADN cuando no es
un elemento gentico establecido por ejemplo un plsmido ese trozo tiene dos
posibilidades dentro de una bacteria, es degradado o se integra al cromosoma,
pero para integrarse al cromosoma tiene que encontrar un sitio de
complementariedad y si encuentra ese sitio se interna y ese fenmeno se
conoce como fenmeno de recombinacin porque entra un trozo de ADN de
otra bacteria, se inserta y pasa a ser parte de la bacteria, habitualmente al
insertarse la bacteria pierde algo, pierdo un trozo de ADN que es la zona donde
se va a insertar este nuevo, pero eso lo favorece porque eso constituye una
caracterstica adicional para la bacteria.
Teniendo en cuenta todas estas caractersticas que tienen las bacterias que son
comunes en los fenmenos de la transferencia horizontal gentica, veamos las
caractersticas de cada una de ellas en particular.
Transformacin
30
La transformacin es un fenmeno donde una bacteria adquiere, la bacteria

receptora va adquirir ADN libre del medio, el ADN no es que ande libre
caminando por el medio ambiente, los ADN no andan libres, entonces uno
puede decir de dnde vienen estos ADN libres que requiere este proceso de
transformacin. As como las bacterias se multiplican, existen algunas que por
razones naturales mueren, y cuando una bacteria muere qu es lo que le pasa,
se destruye y al destruirse obviamente libera ADN y libera todos los
componentes que tiene en el interior, no todas las bacterias que mueren van a
tener el ADN libre por la naturaleza porque ese ADN inmediatamente es
degradado por un asunto de seguridad biolgica pero resulta que esa
degradacin del cromosoma o el ADN de esta bacteria que se va a convertir en
la bacteria dadora no es instantneo porque obviamente las enzimas que son
las nucleasas tienen que empezar a degradar, tiene que haber una reaccin
asociada, es un fenmeno que se va produciendo y se demora un periodo de
tiempo corto.
Imagen: tenemos una bacteria que por alguna razn muri, se lis y liber todo
su material gentico, todo lo que tenia dentro, y eventualmente est siendo
degradado su ADN, en este momento cuando sucede eso en un determinado
ambiente va pasando una bacteria, y se encuentra con esta situacin que hay
degradacin de ADN, las bacterias se comunican, sienten y lo hace a travs de
seales qumicas, entonces detecta presencia de ADN y existen ciertas
bacterias que la deteccin de este ADN les interesa y es ms, pueden hacer
que este ADN ingrese hacia el interior de su citoplasma. Esto no es fcil porque
se tiene claro que el cromosoma no pasa por difusin simple a travs de la
membrana, ni difusin facilitada ni por una porina.
Puede que la bacteria que iba pasando y detect esta situacin que hay ADN
libre, lo quiere y ah viene el problema cmo lo entra. Por eso aqu hay una
31

limitante, no es una situacin que todas las bacterias lo pueden hacer, sino que
hay ciertas bacterias que tienen la capacidad de hacerse competente, es
hacerse permeables selectivos ADNs, es decir, esta bacteria puede pasar a
tener un estado que es absolutamente biolgico que es propio que no es
inducido ni adquirido por la bacteria de que bajo ciertas circunstancias como
estmulos como este de encontrarse con un ADN la bacteria puede hacerse
permeable selectivo ADN y que es generar un sistema proteico en la
membrana tipo una porina para que pueda ingresar el ADN, pero esta es una
situacin que es muy puntual, se realiza frente a una situacin en que la
bacteria se encuentra con ADN que es factible de ser ingresa porque este ADN
que es factible de ser ingresado debe estar dictenario es decir debe haber sido
degradado pero todava no separado de sus dos hebras, es decir, no puede ser
cualquier cosa, debe ser un trocito que sea doble y que por lo tanto pueda ser
captado por esta bacteria que est en estado de competencia o que es lo
mismo competente.
En la primera figura ha generado este estado de competencia, tiene unas
pelotitas en la membrana que es lo que se mencionada que es como un
sistema proteico tipo porina por donde puede entrar el ADN, pero asociado a
una de esas pelotitas que es una protena de unin y la otra es una nucleasa,
porque si bien es cierto en la limitante para que se produzca la transformacin
es que el ADN sea bicatenario, el que se asocia a la bacteria entra solo una
hebra, por qu si entra una no se adhiere una, no, el fenmeno es bicatenario,
trozo doble cadena se adhiere a la protena de unin pero entra una y la
nucleasa cumple la funcin de ir degradando la otra cadena.
Cuando la bacteria va ingresando se va uniendo a los puntos azules que son
protenas que protegen al ADN, porque qu es lo que un ADN dentro de un
citoplasma si no encuentra un sitio homlogo rpidamente es degradado,
entonces para darle un tiempo a la bacteria o a este trozo de ADN para
encontrar esa zona complementaria es que se une a estas protenas que lo
protege de la degradacin, si este trozo de ADN que ingres encuentra
complementariedad en el ADN, es decir, hay una zona homloga se inserta,
hace recombinacin, entra, sale un trocito y el trozo que sale obviamente es
degradado y la bacteria entonces recibe una informacin gentica.
Este proceso no siempre es exitoso, eventualmente un 30% de los procesos de
ingreso son efectivo, es decir, la bacteria acepta esta informacin, por eso se
dijo que haba una ltima condicin que la bacteria tiene que aceptar este
trozo de ADN que viene y cul es la mxima respuesta, que sea ingresado el
cromosoma y que ahora ese cromosoma se va a expresar con esta nueva
informacin gentica. Esa es considerada una bacteria transformante, es decir,
que recibi informacin gentica nueva y que ahora la est expresando.
Hay algunos ejemplos entre las bacterias Gram positivas
-
Streptococcus spp.
Bacillus spp.
Entre las bacterias Gram negativas

-
Haemophilus spp.
32

-
Neisseria spp.
Moraxella spp.
Acinetobacter spp.
Pseudomonas spp.
Son ejemplos de bacterias que transforman de manera natural.

(rol nucleasa: enzimas
degradadoras, degrada la
hebra que no entra y con eso
contribuye a la entrada de una
sola)
Conjugacin
Hasta hace algunos aos se
crea que la conjugacin era un
proceso que se daba en Gram
negativos, y
fundamentalmente estaba esta creencia
porque la conjugacin hasta ese momento
se supona que solamente se produca a la
presencia de pili o poli sexual, dijimos que
la funcin era unir a las bacterias una
dadora y otra receptora para el traspaso de
un plsmido, porque aqu en la conjugacin
lo que se traspasa no es un trozo de ADN
sino es un plsmido.
En los ltimos aos, en la ltima dcada se
ha tenido claro y se acept que existe
conjugacin en los Gram positivos. Los
sistemas conjugativos en Gram positivos
no estn estudiados pero s hay absoluta
certeza que hay bacterias que s conjugan
porque la resistencia a antibiticos por
ejemplo que nosotros podemos ver hoy en
da en algunas bacterias es responsable
exclusivamente a la presencia de
plsmidos y por lo tanto de alguna manera
tienen que llegar estos plsmidos ah
porque si no estaban de alguna manera llegan y el proceso de llegada de un
plsmido es a travs de un proceso de conjugacin.
Por lo tanto hoy en da la conjugacin se divide en conjugacin Gram positiva y
Gram negativa porque la estructura que media el traspaso no es la misma. Por
eso vamos a partir en la conjugacin en Gram negativos porque habitualmente
es la que ms se conoce, hay mucho ms informacin y es de la cual hablan
los libros.Una condicin para que se produzca la conjugacin es que aqu las
33

dos bacterias tanto la donadora como la receptora se encuentren y se unan,
esa es la funcin del pili. Entonces cmo se encuentran las bacterias, cmo se
unen, se reconocen pero este reconocimiento es a travs de seales qumicas,
quin enva las seales qumicas, son las bacterias receptoras las que se van a
transformar en receptoras, es decir que la bacteria que en un determinado
momento no tiene plsmido y quiere tener un plsmido porque la situacin
ambiental en la que se encuentra lo amerita porque son procesos adaptativos
que hacen frente a ciertas condiciones ambientales o alguna situacin en
particular, entonces esta bacteria que quiere un plsmido emite seales
qumicas a las cuales una bacteria poseedora de plsmido que se va a
convertir en la clula dadora responde y al responder se acerca a esa bacteria
y empieza a manejar el proceso de conjugacin y lo primero que se hace es
sintetizar el pili, se adhiere a la otra bacteria y se produce despus de esto una
retraccin del pili, se acorta para que la distancia entre las dos bacterias no sea
tan larga.
Este pili no solamente genera un tnel que por dentro pasa el ADN plasmidial
para que no sea degradado sino que adems este pili va a permitir que en las
dos paredes bacterianas (dadora, receptora) se produzca una especie de poro
porque cmo sale el plsmido que est en el citoplasma y cmo entra al
citoplasma de la otra bacteria, entonces se establece una especie de poro
ayudado por el pili, el pili en los dos extremos entonces genera un sistema,
induce la generacin de un sistema proteico que va a formar una especie de
poro para que pase el plsmido que en realidad no pasa como plsmido, no
pasa redondito ni tampoco pasa entero, sino que recuerden ustedes qu
conjugacin tena un plsmido, el plsmido era un elemento gentico circular
bicatenario por lo tanto fjense lo que sucede, el plsmido tena una zona que
deca origen de transferencia porque en ese punto el plsmido se abre, es
decir, una hebra se abre, se desprende como aparece aqu y empieza a pasar
una hebra pero como el plsmido tiene capacidad replicativa, empieza a
medida que va perdiendo una hebra va sintetizando la hebra complementaria,
la hebra que llega a la otra clula se empieza a circularizar y va a sintetizar
tambin su hebra complementaria.
Cuando termina de pasar toda la hebra en ambas clulas ahora hay plsmidos
bicatenarios porque cada hebra sirvi de molde para la sntesis de su
complementaria, es decir, lo mismo que ocurre con la replicacin de un
cromosoma, cada una de las hebras es molde para la sntesis de la
complementaria. Este sistema de paso que es lineal se conoce como el sistema
de crculo rodante porque se saca una hebra empieza a rodar el plsmido, se
sintetiza la complementaria y al otro lado tambin se est sintetizando la
complementaria.
Al trmino del proceso el pili se degrada y el resultado es que hay dos
bacterias con plsmido y dos bacterias que son capaces de transmitir
plsmidos, porque ahora las dos tienen plsmidos y eventualmente las dos
pueden ser dadoras.
En gram positivos no hay pili pero el proceso de conjugacin es muy similar,
aqu la clula receptora y que no tiene el plsmido tambin enva seales
qumicas a las cuales se les conoce como feromonas sexuales porque se
hace alusin a este tipo de seales qumicas de accin. Atrae a la bacteria que
34

es poseedora del plsmido y esta bacteria que se va a transformar en dadora o
donadora empieza a sintetizar una sustancia que se conoce como sustancia
de agregacin que tiene como funcin adherir a las dos bacterias, pero esta
es una agregacin muy ntima que es prcticamente un cemento que permite
que las dos bacterias prcticamente se fusionen o por lo menos fusionen sus
membranas y se genera adems en esta fusin de membranas una especie de
poro para que pase el ADN plasmidiano.
(Quien maneja el fenmeno de conjugacin es el plsmido, la clula dadora, el
plsmido tiene los genes de transferencia, tiene origen de transferencia, tiene
su capacidad de autoreplicacin)
Por lo tanto es el plsmido que es la que empieza a comandar este proceso, la
clula receptora lo nico que hace es inducirlo porque es ella quien manda la
seal para que una bacteria dadora se acerque pero en ese momento el
sistema cambia y la que pasa a comandar todo el proceso es la que contiene el
plsmido.
Esta sustancia de agregacin permite la fusin de las membranas y el traspaso
de este plsmido de una bacteria a otra y cmo traspasa el plsmido, de la
misma manera a travs del crculo rodante. La nica diferencia es que cuando
se termina el plsmido en vez de degradarse un pili se deja de sintetizar la
sustancia de agregacin y las bacterias se despegan o se destruye este par
conjugante y las bacterias quedan cada una con su plsmido.
Esto de que cada una de las bacterias quede con su plsmido es bastante
importante porque esto ayuda o contribuye a el concepto de que la
conjugacin, el proceso conjugativo independiente de que sea Gram positivo o
negativo sino que proceso gentico es el que contribuye de mejor manera a los
procesos adaptativos porque aqu no hay ninguna bacteria que pierda
informacin. Por ejemplo en la transformacin anterior hay una bacteria que
muere y que liber un trozo. Entonces para que de todo un cromosoma un
trozo que no se pierde es captado por la bacteria pero eso no es tan frecuente
porque se tiene que conjugar varias cosas, que exista una bacteria que se
muere, que exista un trozo de ADN libre, que lo logre captar una bacteria que
est justo en un estado de competencia y que se produzca la transformacin
por eso que los fenmenos de transferencia horizontal de genes de estos
fenmenos la transformacin es la menos frecuentes y la conjugacin es la
ms frecuente, porque la conjugacin es ms fcil que se realice a pesar de la
necesidad de que las dos bacterias estn unidas porque las bacterias tiendes
siempre a estar agrupadas pero no solas sino formando consorcios,
conglomerados por tanto a las bacterias se les es fcil encontrarse, y por lo
tanto es un fenmeno que contribuye de mejor manera a los cambios
adaptativos y desde un punto de vista de la resistencia antibitica que se ha
estudiado mucho todos estos fenmenos la conjugacin tanto en Gram
positivos y negativos es l fenmeno que contribuye de mejor manera a la
diseminacin de genes de resistencia.
Transduccin
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Es una transferencia de un trozo de ADN a travs de un virus, es decir, aqu
existe un vector y un intermediario y es un virus el que toma un trozo de ADN
de una bacteria que lo va hacer convertirse en la clula dadora y lo lleva otra
bacteria que lo lleva a convertirse en clula receptora.
Qu caractersticas debe tener ese virus, primero que son virus bacterianos, no
cualquier virus se puede unir a cualquier clula, tienen especificidad porque
obviamente su adherencia a una determinada clula va mediada por la
presencia de un receptor, entonces existen virus humanos, de plantas,
animales y existen virus de bacterias por lo tanto este debe ser un virus
bacteriano que tenga la capacidad de infectar una bacteria. Tiene que ser un
virus que el material gentico que contenga sea ADN al igual que la clula
bacteriana y que sea de la caracterstica bacterifago.
Los virus en general tienen dos formas de replicarse, en realidad tienen una
forma de replicarse pero a travs de dos vas: ciclo ltico y ciclo lisognico.
Antes de hablar de transduccin hay que hablar de estos dos ciclos para que
se pueda entender el fenmeno de transduccin.
1. Ciclo ltico viral: Es la forma en cmo los virus se reproducen, o se

replican. Un virus no puede vivir
fuera de una clula y siempre
tiene que vivir asociado a una
clula que lo replique porque no
tiene maquinaria celular, lo nico
que tiene es material gentico que
en este caso es ADN por lo tanto
la funcin de este bacterifago es
adherirse a una clula bacteriana
e inyecta su material gentico.
Este material gentico toma
posesin de la maquinaria celular
y hace que la bacteria en este
caso empiece a funcionar para el
virus, que sintetice todos sus
componentes de la estructura del
virus, es decir, sintetiza ADN viral,
sintetiza todos los componentes
de la cpsula, todo lo que va a
permitir que se forme dentro de su
estructura viral porque los virus
bacterifagos tienen esa forma, no
es que est dibujado como una
caricatura sino que los virus tienen distinta forma y los bacterifagos
tienen esa forma. Sintetiza o hace que la clula sintetice todos estos
componentes por separado, cuando estn todos listos se ensamblan y
en este momento los virus estn listos para salir e infectar una nueva
clula por lo tanto lo que aqu hacen es lisar la bacteria, la destruyen, se
liberan y como estn en condiciones de infectar otra clula lo hacen para
poder seguir replicndose que es la funcin de todos los virus. Como
36

destruyen inmediatamente la clula
se le conoce como ciclo ltico.
2. Ciclo lisognico: Tenemos el punto

1 el virus se adhiere e inyecta al
ADN viral, en vez de pasar
directamente a que el ADN tome
posesin de la maquinaria
enzimtica y pase al ciclo ltico lo
que pasa es hace una especie de
loop, un desvo. Este ADN viral se
inserta al cromosoma de la bacteria,
por eso la necesidad de que sea
virus ADN porque ese ADN se
inserta en el cromosoma de la
bacteria y queda ah, a la bacteria
no le pasa absolutamente nada y el
virus no le hace nada tampoco, por
eso es que se conoce como ciclo
lisognico, el ADN viral est inserto,
la bacteria se sigue duplicando sin
ningn problema, este virus cuando est en este estado se le conoce
como profago.
La naturaleza del virus no es estar ah, la naturaleza del virus siempre es
replicarse por lo tanto aun cuando puedan pasan muchas generaciones en
algn momento se sale, se activa el ADN viral y toma posesin de la
maquinaria celular, empieza la sntesis de todos sus componentes, es decir,
empieza el ciclo ltico.
El ciclo lisognico es un intermediario donde el virus est aqu pero luego
vuelve a su naturaleza, entra al ciclo ltico y se replica y puede volver a salir.
Esta capacidad no la tienen todos los virus por eso es que hay virus que se les
conoce como virus lticos, virulentos y a otros se les conoce como virus
lisognicos. Estos virus con estas caractersticas tienen capacidad de hacer
transduccin.
Los virus son los que tienen la capacidad de hacer transduccin (tenemos los
lticos y los lisogenicos).
La transduccin como tal es el traspaso de un material gentico por estos virus
(lticos y lisognicos), los cuales deben tener la caracterstica de ser virus ADN,
bacterifago y bacteriano. Este proceso se puede hacer de dos formas
distintas:
TRANSDUCCION GENERALIZADA:
Lo puede realizar un virus ltico o lisogenico, pero habitualmente lo hace este
primero (ltico), es en este ciclo en donde se produce la captacin del ADN
bacteriano por parte del virus. Supongamos que este un virus ltico donde se
adhiere a la clula bacteriana (siempre se tiene que adherir al algn punto, hay
37

cierta especificidad) y lo que hace es inyectar su material gentico, como es un
ciclo ltico este toma posesin de la maquinaria celular para sintetizar sus
propias partculas virales, es decir manda a la clula a que haga todo este
proceso y esta lo realiza sin ningn problema. Se produce un error (entre
comillas) en el momento del ensamblaje, cuando el virus se ensambla, cuando
se arma luego de haber sintetizado cada una de sus partes en la
clula bacteriana, en vez de ensamblar ADN viral, ensambla ADN bacteriano.
IMAGEN: hay dos ejemplos, se
tiene a+ y b+ que corresponden
a dos genes que estaban en la
clula dadora (que es la primera
que infecta el virus), aqu se
ensambla ADN bacteriano en vez
del viral, es por eso que se dice
que aqu se produce una especie
de error, el cual no es un error
propiamente tal, porque ya
hemos visto que en ciertas
caractersticas genticas se
producen de forma no frecuente, porque as las bacterias tienen
la posibilidad de asegurar su variacin gentica. Entonces se ensambla el ADN
bacteriano y en el momento que estn todos listos, estos virus salen de la
bacteria y su posterior accin es infectar otra clula bacteriana, pero lo que
inyecta no es ADN viral, sino que es ADN bacteriano. Qu es lo que hace un
trozo de ADN en el citoplasma de una bacteria? Tiene dos posibilidades, se
degrada o recombina, por lo tanto este trozo busca complementariedad si
existe esta complementariedad recombina y si lo hace de esta forma, este
trozo o este gen que viene asociado pasa a ser parte de la nueva bacteria. En
este proceso NO siempre va a suceder la transduccin, sino que hay ocasiones
en que esto pasa, ya que no son situaciones de alta frecuencia. Habitualmente
no van asociados este tipo de transducciones o cualquiera de estas a
elementos o genes de resistencia antibitica, sino que son genes metabolicos o
capacidad para sntesis de alguna toxina, de alguna enzima, esto se debe a
que son genes cromosomales. La mayora de los genes de resistencia a
antibiticos no estn presentes en los genes cromosomales, sino que estn en
elementos mviles como los plasmidos, transposones, integrones.
TRANSDUCCION RESTRINGIDA O ESPECIALIZADA:
En este proceso debemos tener un virus que sea lisogenico, esto es obligatorio,
el virus infecta una bacteria inyecta su material gentico y pasa a un estado de
profago (el cual es el clsico ciclo lisogenico) y aqu lo primero que
encontramos en la primera clula hija es el virus en un estado de profago es
decir inserto en el cromosoma bacteriano. Pero aqu esta destacado un gen que
del trozo de ADN viral, porque si se inserta este trozo de ADN viral en el
cromosoma bacteriano hacia un lado se van genes bacterianos y hacia el otro
lado tambin genes bacterianos. En este ejemplo estn destacados hacia un
lado en particular. En el ciclo lisogenico en algn momento el virus se activa y
por lo tanto este ADN viral se sale del cromosoma bacteriano y aqu es donde
ocurre otro error porque al salirse este ADN viral arrastra consigo un gen que
38
puede ser el que est a un lado o el

que se encuentra al otro lado de donde lest inserto. A partir de aqu se
produce el ciclo ltico tradicional que es que ese ADN viral toma posesin de la
maquinaria celular, se sintetizan todos sus componentes y llega el momento
del ensamble. Se ensamblan todos y cada uno de ellos lleva ADN viral y ADN
bacteriano porque como el molde para la sntesis era este ADN bacterial mas
este gen a, todos los virus ahora quedan con gen A. entonces cuando esta
bacteria se lise todos estos virus llevan informacin asociada a la primera
bacteria que infectaron, por lo tanto estos infectaran una nueva bacteria.
Clula receptora, este ADN viral de un virus lisogenico se inserta en el
cromosoma porque esa es la caracterstica de los ciclos lisogenicos, al
introducirse en el cromosoma lleva consigo el gen A, y como este es un gen
bacteriano en el momento en el que la bacteria se est reproduciendo har que
as como reproduce el ADN viral, se reproduce tambin el gen A, pero tiene una
cosa adicional que adems lo expresa porque como es bacteriano el ADN viral
no lo expresa, la bacteria lo nico que hace en este caso es reproducirlo porque
esa entre medio de su cromosoma, por lo tanto la bacteria gan una
informacin gentica que proviene de la primera bacteria infectada.
La transduccin independiente de si es restringida o generalizada, el segundo
proceso ms frecuente de los fenmenos de transferencia horizontal de genes.
Primero la conjugacin, segundo la transduccin y tercero la
transformacin.
39
UNIDAD II: CONTROL DEL CRECIMIENTO BACTERIANO

(2do certamen)
Para poder hacer un control del crecimiento bacteriano existen varias
metodologas, esto es importante ya que un sobrecrecimiento de estos
microorganismos puede producirnos dao.
Ejemplo: si se quiere tomar agua que no es potable, lo que se hace es hervirla,
este es el mejor mtodo que tenemos para hacer control de microorganismos
en este caso. Si se quiere tener el bao de una casa desinfectado, sanitizado,
sin microorganismos se limpia con cloro. Aqu se logra apreciar que se usan dos
mecanismos distintos para un mismo objetivo que es controlar. Hay que
aprender a discriminar, saber cual es el mejor mtodo para hacer control segn
sea la situacin a tratar.
Se debe hacer control porque los microorganismos tienen una amplia
distribucin ambiental, ellos nos rodean, viven con nosotros a diario, y puede
llegar un momento en que estos se sobreexpresan tanto fuera o dentro de
nosotros y nos puede producir dao.
Cuando se realiza control se analizan las curvas de muerte celular en vez de las
de crecimiento, y los microorganismos debieran morir de manera exponencial.
Con el control de crecimiento bacteriano se trata de conseguir la muerte de
estos microorganismos.
CONTAMINACION: es la presencia de un microorganismo en una superficie o
en un organismo. Ejemplo: si estamos en el laboratorio y no se cumplieron las
condiciones de bioseguridad y se puso un estuche en el meson de trabajo y se
dio vuelta un tubo encima, este se contamin con los microorganismos. Los
seres humanos se pueden contaminar las manos al tener contacto con los
microorganismos que pueden estar presentes en una superficie o en el
ambiente propiamente tal. Si uno de los alumnos est resfriado, este no est
contaminado, est infectado, se trata de una infeccin (enfermedad
infecciosa). Los objetos son los que se contaminan.
INFECCION: es la penetracin y multiplicacin de un microorganismo en un
ser vivo.
DESINFECCION: es la eliminacin o inhibicin de microorganismos que estn
en estado vegetativo (activa multiplicacin). Esta se considera desde una
superficie a un objeto. Cuando nosotros tomamos un antibitico no decimos
que nos estamos desinfectando. Podemos utilizar este trmino en desinfectar
una herida porque se considera como un objeto. Cabe destacar que durante
este proceso de desinfeccin las esporas bacterianas quedan vivas, si se
quieren eliminar estas y todos los microorganismos presentes se debe hablar
de esterilizacin.
ESTERILIZACION: corresponde a cualquier proceso que permita la eliminacin
de bacterias, sus formas de resistencia (esporas), cualquier otro
microorganismo (parsitos, hongos) que se est multiplicando y los virus.
40

SANITIZACIN: es cuando se quiere reducir el nmero de microorganismos a
niveles seguros o niveles inocuos para la salud de los seres humanos (es un
trmino que se utiliza mayormente en hospitales). Ejemplo: bao de un
servicentro, aparece un papel que indica que el bao est sanitizado, lo cual
significa que este lugar ha sido desinfectado y la cantidad de microorganismos
que estn presentes aqu son seguros para la salud humana. Esto no quiere
decir que haya una ausencia de bacterias en este lugar, solo que estn en una
cantidad inocua para el humano.
Cuando se quiere hacer control, hay ciertos factores, que independiente de la
metodologa que yo utilice, se deben considerar para la eficacia del control:
- Nmero de microorganismos: eliminar mil microorganismos no es
lo mismo que eliminar diez millones de estos mismos. Se tiene que
hacer una relacin con la cantidad del agente de control que se
utilizar en este caso un agente qumico.
- Tipo de microorganismo: no es lo mismo eliminar una bacteria de
un tipo especfico con otra diferente. No es lo mismo eliminar un virus
que una bacteria. Es muy importante saber el tipo de microorganismo
a eliminar.
- Estado fsico del microorganismo:El estado en el que se
encuentran (vegetativo, forma de resistencia, liquido o solido,
superficie o alimento: si estn presentes aqu se debe utilizar una
metodologa que no dae el alimento, de otra forma se pierden las
caractersticas nutricionales de este)
- Concentracin del agente de control: se debe conocer la
concentracin de la cantidad que se utilizar del agente de control.
Intensidad de la radiacin. Se deben usar las concentraciones y
graduaciones adecuadas para lo que se desea realizar, de otra
manera esto puede causar efectos txicos o nocivos para la salud del
ser humano.
- Tiempo de exposicin: es necesario saber cunto tiempo es el que
se requiere para poder hacer control del crecimiento bacteriano.
- Temperatura: tiene directa relacin con la estabilidad de los agentes
de control de tipo qumicos. Ejemplo: si tenemos un agente qumico
voltil hay que tenerlo estable a cierta temperatura para poder
utilizarlo y que logre cumplir su funcin.
- Condiciones ambientales locales: por ejemplo la presencia de
cuerpos extraos, materia orgnica asociada en grandes cantidades
para hacer un buen control, ya que existen ciertos agentes qumicos
que se inactivan en presencia de esta materia. Ejemplo: si se
encuentra un paciente que presenta un absceso, antes de dejar
terapia microbiana, se debe drenar, ya que este en su constitucin
tendr clulas, pH poco adecuado para la accin de los antibiticos,
existir mucho material purulento. Es por eso que primero se debe
drenar, limpiar las zonas y luego aplicar agentes de control para que
tengan una buena efectividad. El cloro es un muy buen desinfectante
pero se inactiva con materia orgnica.
Dependiendo de la cantidad de agente microbiano que se aplique a los
microorganismos, la muerte de estos ser ms lenta o ms rpida. Cabe
41

destacar que esta relacin no es proporcional. A mayor cantidad de agente de
control, menor tiempo de muerte.
Dentro de los mtodos de control que podemos utilizar existen dos grandes
tipos:
FISICOS: - Temperatura
- Radiaciones
- Medios mecnicos
QUIMICOS
TEMPERATURA (M. Fisico):
Es uno de los parametros mas importantes para realizar control, ya que es de
vital importancia para el crecimiento bacteriano, se traduce directamente en
velocidad de crecimiento. Si se trabaja en una bacteria y se pone a su
temperatura optima esta se va a multiplicar optimamente y esto se traduce en:
maxima velocidad de crecimiento. Es un parametro muy facil de modificar.
Gracias a estas modificaciones se puede obtener un muy buen elemento de
control. Si se tienen a las bacterias bajo la temperatura optima, se puede hacer
un control, se esta controlando la cantidad de estas que se estan multiplicando,
disminuye la velocidad de crecimiento, llevandolas a cero, aqu no se puede
lograr la muerte de estas celulas, en esta instancia aumenta la viscocidad del
citoplasma, disminuyen las reacciones de transporte, todo se hace mucho mas
lento, y termina en que la bacteria deja de crecer.
A temperaturas sobre la temperatura optima, las reacciones pueden aumentar
en un pequeo principio, pero este aumento es daino para las bacterias y
producen destruccion de las reacciones (destruccion de las enzimas,
destruccion de la estructura y finalmente lisis termica, es decir destruccion de
la bacteria por calor).
Efecto letal del calor: este calor va a ser considerado, cuando estemos
trabajando por encima de la temperatura maxima de crecimiento, es decir de
la temperatura a la cual las bacterias llegan a pique, desde ah para arriba es
considerado un efecto letal que tiene el calor. Para la aplicacin de este calor
es necesario saber dos puntos importantes: el valor de la temperatura;
graduacion de esta, si tengo una t optima de 37 si yo a este MO lo pongo en
una t de 40 o 42 grados, aun no obtendre muerte, solo habra un decaimiento
en la velocidad del crecimiento y por lo tanto se va a enlentecer el sistema, las
bacterias aun siguen vivas. Tiempo de exposicion: cuanto tiempo yo expongo a
las bacterias a una determinada temperatura. Estos dos puntos se pueden
cuantificar a traves de tres terminos:
-
TIEMPO DE REDUCCION DECIMAL (D): se define como el tiempo

que reduce el 90% de una poblacion a una determinada temperatura.
Esto es 1 logaritmo = 90%
TIEMPO TERMICO MORTAL: es el menor tiempo que elimina toda la
poblacion a una determinada temperatura.
PUNTO TERMICO MORTAL: la menor temperatura que elimina toda
la poblacion a un determinado tiempo. Referencia 10 minutos.
42

No todos los microorganismos tienen el mismo punto termico mortal, si se
tiene una mezcla de MO que yo quiero eliminar, debo saber mas o menos
cuales tengo, para asi saber a que temperatura los debo exponer y por cuanto
tiempo aproximadamente.
En esta etapa veremos este tema basado solo desde un punto de vista
microbiolgico. Esto quiere decir que podremos saber que antibitico uso y
cuando lo debo usar para una ocasin determinada. La temperatura es uno de
los puntos mas faciles de manejar, es por esto que hay muchas metodologias
asociadas a este parametro. Los objetos que se esterilizarn con calor deben
tener la caracterstica de ser TERMORRESISTENTES. Cabe destacar que este
ultimo es muy importante en el crecimiento bacteriano, se puede manejar la
velocidad de crecimiento (si la temperatura se sube de una manera exagerada,
no solo voy a detener el crecimiento bacteriano, sino que tambien voy a matar
a los microorganismos que ah se encuentran).
Cuando hablamos de calor letal, debemos distinguir entre dos tipos:
CALOR HUMEDO
Lahumedad tiene una gran importanica, ya que el agua es un excelente
conductor de la temperatura y por lo tanto cuando se tiene calor en presencia
de esta H2O la tranasferencia de temperatura es mucho mas eficiente. La
muerte de los microorganismos se produce por coagulacion proteica. Muerte
bacteriana rpida, tiempo corto y bajas temperaturas. (Autoclave,
tindalizacion, pasteurizacion, hervir). En este caso se habla de una mayor
eficiencia porque para lograr el mismo objetivo (muerte celular) se requiere
menos tiempo y bajas temperaturas (respecto al calor seco). Cabe destacar
que las celulas que se encuentran en estado vegetativo mueren a bajas
temperaturas pero no las esporas.
VENTAJAS DEL CALOR HUMEDO: rapido calentamiento y penetracion,
destruccion de bacterias y esporas en corto tiempo, no deja residuos toxicos,
hay un bajo deterior del material expuesto, es economico.
DESVENTAJAS DEL CALOR HUMEDO: todas las sustancias que yo exponga a
calor humedo, deben ser miscibles con el agua. No permite esterilizar
soluciones que formen emulsiones con el agua. Es corrosivo sobre ciertos
instrumentos metlicos. Este ultimo punto se ha ido solucionando con la
creacion de instrumentos de acero inoxidable para no tener problemas con el
agua.
CALOR SECO
Habitualmente se est calentando el aire, y este es un muy mal conductor de
temperatura y eso tiene como consecuencia que las metodologias que se van a
ultilizar en uno de los dos casos con calor humedo o seco tienen distintos
tiempos y distintas temperaturas. Conduce la oxidacion proteica y
componentes celulares, fusion de lpidos y ruptura de enlaces qumicos.
43

Destruccion de estructuras celulares. (Horno, incineracin). En terminos
generales cuando se utiliza una metodo con calor seco se requiere un mayor
tiempo de exposicion y una mayor temperatura empleada. Esto tiene un gran
implicancia ya que los objetos a los cuales estoy sometiendo a este calor
deben tener la capadidad de soportar grandes temperaturas por tiempos
prolongados.
VENTAJAS DEL CALOR SECO: permite la esterilizacion de objetos que no
requieren agua (sustancias en polvo y no acuosas y sustancias viscosas no
voltiles). No es corrosivo para metales e instrumentos.
DESVENTAJAS DEL CALOR SECO: requiere mayor tiempo de esterilizacion,
respecto al calor humedo, debido a la baja penetracin del calor, y baja
transmisividad de la temperatura.
EXPLOSIOOOOOOOOOOOOOOOOOOOO
OOOOOOOOON!!!!!!!!!!!!!!!!!!
APLICACIN DE CALOR SECO:
-
Horno Pasteur o Poupinel: lo que hace es calentar el aire

(esterilizar el aire). Es practicamente como una estufa que es
hermeticamente cerrado y tiene dispositivos de control de
temperatura, termostato (para mantener la temperatura),
homogenizadores del aire, control de tiempo. Funciona como un
horno de la cocina pero mejorado. A nivel de consultas odontologicas
muchos especialistas tienen un horno pasteur en su consulta ya que
ahora estos instrumentos son mucho mas pequeos antes, los
utilizan para esterilizar previamente sus instrumentos antes de
utilizarlos.
Incineracin: de material de desechos. Hoy en dia todos los

productos biologicos se incineran.
Flameado a la llama: lo que se realiza en el laboratorio al momento

de esterilizar el asa de cultivo. Se realiza una carbonizacion de toda la
materia organica que esta presente en las asas metalicas de siembra.
APLICACIN DE CALOR HUMEDO:

-
Autoclave: es un aparato que trabaja a presion y que eventualmente

puede explotar, est hermeticamente cerrado, es como una olla a
presin. Permite esterilizar muestras a temperaturas superiores a
100C. Los parmetros de esterilizacion son 121C por 20 minutos. Es
utilizado para esterilizar material contaminado, material quirurgico,
soluciones salinas, medios de cultivo, ropa hospitalaria, material
termorresistente. Funciona hirviendo el agua a 100 C o mas depende
de la altura a la que se encuentre, y el agua cambia de estado por lo
44

tanto lo que ingresa a este cmara es el vapor. Estas moleculas de
vapor de agua con la temperatura comienzan a moverse cada vez
mas rapido y empiezan a ejercer fuerza para poder salir y es en este
momento en que comienza a subir la presion dentro del autoclave y
con esto se logra que la temperatura suba por sobre los cien grados.
-
Ebullicin: calor humedo a 100C, ineficaz. Hay una muerte de gran

parte de los microorganismos patogenos. Son resistentes a este
metodo las esporas y los virus.
Tindalizacin: es un metodo de esterilizacion fraccionada para los

materiales que se inactivan a mas de 100 C. se realiza en fases: 1)
material se calienta 50 100 C por 1 a 2 horas. 2) se incuba a estufa
a 30 37 C por 24 horas. 3) nuevo ciclo de temperatura. Cabe
destacar que solo mata celulas en estado vegetativo. Es una
tecnologa poco usada ya que es bastante larga. A la bacteria o
espora se le engaa, supongamos que tenemos un tubo con una
suspension bacteriana y esta forma esporas, si yo la coloco por 1
hora entre 50 a 100C voy a matar a todas las celulas vegetativas
(excepto las esporas), luego sacamos el tubo y lo colocamos en una
estufa a 30 37 y engaamos a las esporas , quiere decir que estas
ultimas piensan que estaran en un lugar optimo para poder germinar
y lo hacen. Posterior a esto s elleva el cultivo a una temperatura de
100C y las bacterias mueren. Este proceso se puede repetir unas dos
o tres veces para obtener un liquido totalmente estril.
Pasteurizacin:aplicacin de temperaturas inferiores a la ebullicion

(65 70C) por tiempos cortos y diferentes ( shocks de calor
repetitivos hacen que las bacterias no se puedan volver a reponer y
por lo tanto mueren). Se utiliza mucho en alimentos ya que quedan
estables desde un punto de vista nutricional, no se altera ni el olor ni
el color, ni la textura. Se aplica a toda la industria alimenticia.
Fro: las bajas temperaturas no son utiles como esterilizacion, sirven

para la conservacion. Algunas bacterias mueren por congelamiento,
se utiliza principalmente en industria alimentaria, no destruye gran
cantidad de microorganismos, enfriamiento rapido y
descongelamiento lento son mas letales. Mantiene el nmero de
microorganismos. Algunas mueren ya que al congelar el agua esta
produce cristales y estos ultimos matan a las bacterias de una forma
mecnica.
Existen otras formas de esterilizacion para materiales que no son

termorresistentes, tales como las radiaciones o filtracion que es un metodo
mecanico, donde aqu no se matan los microorganismos sino que se separan
de los liquidos, gases o aire, pero no es facil de utilizar y se necesita realizar a
baja temperatura.
RADIACIONES
45

Tenemos un gran espectro de estas , sin embargo no todas las radiaciones son
letales para los microorganismos. Radiaciones de longitud mas largar que la luz
visible son de bajo poder energetico, por si mismas no son letales para los
microorganismos. Radiaciones de longitud mas cortas que la luz visible son
muy germicidas (radiaciones ionizantes y no ionizantes); rayos X y rayos
gamma, incluso las radiaciones UV en algunas longitudes de onda.
Las ondas de television, microondas, radio, etc no tienen un efecto daino
sobre las bacterias.
En general podemos decir que existen dos tipos de radiacion:
IONIZANTES: alto poder destructivo para las celulas bacterianas, estas ondas
van desde las ultravioletas hasta los rayos gamma.
NO IONIZANTES: tienen un bajo poder energetico, por lo tanto no son
capaces de destruir los microorganismos.
La accin de las radiaciones depende de:
- El tipo de radiacin: no se puede aplicar cualquier radiacion a los
microorganismos, solo son ciertas longitudes de onda que cumplen su
accin de matar a las celulas bacterianas.
- Tiempo de exposicin: cuanto tiempo estan expuestos a radiacion los
objetos contaminados con microorganismos para esterilizar.
- Dosis: si lo pensamos como un agente quimico tiene que ver con la
concentracin.
El efecto
depende
-
bactericida (muerte de los microorganismos) de las radiaciones

de:
Cantidad de bacterias presentes
Densidad de la suspension bacteriana
Naturaleza del fluido o solucin
Tipo y estado fisiologico de la celula: muy importante ya que
debemos saber si hay presencia de esporas o no.
Radiaciones ionizantes:es de alto costo y requiere altos niveles de

seguridad, este tipo de radiaciones son las que logran saltos electronicos de
energia, y esto va a generar iones y radicales libre que alteran el ADN de la
celula y produce entonces la muerte de las mismas. Esto mecanismo no es
especifico solamente para los microorganismos sino que tambien para todo el
resto de celulas, por lo tanto estas radiaciones tienen un alto poder destructivo
de las celulas y es por eso que son metodologias (particularmente la radiacion
gamma) de procesos industriales.
-
Radiacion Gamma:No es algo domestico. Debido a su alto poder

energetico esto se aprovecha para poder realizar una esterilizacion
sellada, por ejemplo: se realiza un procedimiento que requiere el uso
de guantes esteriles, se compran estos y lo que se hace es que
primero se envasan todos los guantes en un paquete y posterior a
esto se esterilizan, lo cual se denomina ESTERILIZACION SELLADA.
Esto se puede realizar gracias a que esta radiacion tiene un alto
poder de penetracion, por lo cual penetra en los objetos a esterilizar.
Se pueden esterilizar grandes lotes de cosas con radiacion ionizante.
En el mercado todo lo que es desechable (jeringa, guantes,
46

mascarillas, cateteres, sondas, vacunas) y que viene envasado est
esterilizado previamente por radiaciones ionizantes. Incluso hay
algunas derivaciones alimentarias que utilizan este mecanismo,
aunque es bastante controversial y no est aceptado, ya que pueden
dejar residuos en los alimentos como tal lo cual producira dao a los
seres humanos, ademas no necesitamos comer cosas estriles ya que
para eso est la existencia del sistema inmune que nos protege
contra posibles afecciones.
Radiaciones NO ionizantes:no es capaz de generar un salto electrnico y

por lo tanto tiene muy baja energa, pero que es germicida. Corresponde a
aquella onda o partcula que no es capaz de arrancar de los electrones de la
materia que ilumina, dentro de estas tenemos a:
- Radiacin UV: tambin afecta al ADN de los microorganismos, forma
dmeros de pirimidinas adyacentes que inducen errores en la
duplicacin y por lo tanto la prdida de la viabilidad de las clulas.
Posee un alto poder mutagnico, cabe destacar que NO TODO el
espectro ultravioleta participa en esta accin, ondas de alrededor de
265 nm (200 295 nm) son las que participan, ya que tienen una alta
eficacia desde un punto de vista bactericida. Al no poseer una alta
energa, esta radiacin no podr penetrar cosas, por lo tanto no tiene
capacidad de penetracin, de traspasar elementos. Su utilidad es
para la esterilizacin de ambientes y superficies, para poder
mantener el control de microorganismos en un espacio donde se
realizar un procedimiento que requiere esterilidad del aire y las
superficies presentes en ese lugar. Este tipo de radiacin es un
poco mas domestica que la anterior y se puede utilizar a nivel
hospitalario, aunque hay que tener ciertas precauciones,
particularmente con los ojos y la piel expuesta, ya que la que est
bajo la ropa no corre ningn riesgo debido a que esta radiacin UV no
posee la capacidad de traspasar la ropa.
AGENTES MECANICOS
Tambin son una alternativa, estn incluidos dentro de los mtodos fsicos. Con
estas metodologas es muy difcil provocar la muerte de los microorganismos,
pero lo que permite realizar es SEPARAR. El mtodo que se utiliza de forma ms
habitual es:
-
Filtracin: se puede utilizar en forma ms comn, no tan solo en el

laboratorio, se usa mucho a nivel industrial, hospitalario, lo que es la
filtracin de lquidos y filtracin de aire o gaseosa. La filtracin es
sencillamente pasar ya sea un liquido o un gas a travs de un filtro,
este ltimo es una membrana (fibras entrelazadas) que debe tener
un tamao de poro (hoyito que queda entre las fibras entrelazadas de
la membrana) inferior al tamao de los microorganismos, para que
estos queden atrapados en este sitio. Tambin pueden quedar
atrapados en este lugar algunos virus. La filtracin LIQUIDA se utiliza
mucho con sustancias biolgicas (sueros, soluciones de enzimas,
vitaminas, soluciones oftlmicas, soluciones venosas, drogas,
radiofrmacos, medios de cultivo del laboratorio: caldo ureasa).
47

Filtracin gaseosa o del aire: es una metodologa bastante eficiente
dependiendo de los tipos de filtros, se puede lograr filtrar aire hasta
con un 99.9% de eficacia. Este mecanismo nos sirve para mantener
ambientes controlados (gabinetes de bioseguridad: a veces estos
combinan la filtracin con la radiacin UV para obtener una mejor
esterilizacin del ambiente)
-
Centrifugacin: se utiliza a nivel de laboratorio. Dependiendo de la

velocidad de la centrifugacin se logra ir decantando los
microorganismos, por lo que el sobrenadante que sobra queda estril.
En palabras ms simples, nos permite separar los microorganismos
de los lquidos.
GENERALIDADES DE LOS AGENTES ANTIBACTERIANOS

El objetivo de este tema es lograr distinguir los principios de la terapia con
antibacterianos.
El primer antibitico que se menciona en la historia es la PENICILINA, pero cabe
destacar que NO ES el primer medicamento usado frente a microorganismos.
En 1908 Paul Ehrlich cre el primer compuesto qumico sinttico que tena una
accin sobre microorganismos y que particularmente fue usado para el
tratamiento de la sfilis porque actuaba sobre Treponema pallidum el cual es el
agente etiolgico (microorganismo causante) de esta enfermedad de
transmisin sexual. Este compuesto se conoci con el nombre de SALVARSAN
(la bala mgica) corresponde a un QUIMIOTERAPEUTICO ya que es una
sustancia producida de manera sinttica no tiene una representacin natural,
del cual se habla como un compuesto qumico sinttico ya que no tiene un
origen natural, es decir fue creado en un laboratorio donde se analizan las
molculas, los residuos qumicos y si estos tienen accin antimicrobiana se va
ideando una molcula que dar origen a este compuesto que en trminos
generales ser un antibacteriano pero no un antibitico porque el primero de
este ltimo fue la PENICILINA; la cual es una sustancia qumica que fue aislada
de un microorganismo.
En 1928 Fleming estaba realizando experimentos sobre Staphylococcus aureus,
y una de sus placas se contamin con un hongo Penicillium notatum que
impeda el crecimiento de la bacteria. Fleming estudi a este metabolito del
hongo que inhiba el crecimiento de ciertas bacterias y lo llam PENICILINA G,
sin embargo su estudio concluy en ese momento.
Posteriormente en 1939 Floray y Chain lograron aislar el compuesto de
penicilina (aislar el principio activo de esta).
En 1942 se distribuyo comercialmente este compuesto.
ANTIBIOSIS: fenmeno natural de la produccin de antibitico.
Antibitico: definicin establecida por Selman Waksman, es una sustancia
producida por el metabolismo de organismos vivos, principalmente de hongos
microscpicos y bacterias, que poseen la capacidad de inhibir el crecimiento o
destruir microorganismos. La importancia de esto es que existen
48

microorganismos que sintetizan antibiticos estos MO no mueren, los que si
mueren son los que estn alrededor de este, por lo tanto el hombre no los
puede crear, los antibiticos son parte de un fenmeno natural.
Antimicrobiano: sustancia capaz de actuar sobre los microorganismos,
inhibiendo su crecimiento o destruyndolos.
Quimioterapeutico: sustancia producida de manera sinttica que posee la
propiedad de inhibir el crecimiento o destruir microorganismos.
Los agentes antibacterianos que existen hoy en da en el mercado no son todos
naturales, aunque ya existe el fenmeno de la antibiosis es de muy alto costo
evidenciarlo y adems es lento para ponerlo en prctica. La necesidad de
medicamentos antibacterianos desde el comienzo del uso de los antibiticos ha
sido tremendamente importante en su renovacin y esto debido a que las
bacterias se han visto en la necesidad de poder ir adaptndose a estas nuevas
condiciones que les pone en este caso el ser humano. Siempre las bacterias
emplean un mecanismo que les pone un stop a los medicamentos y estos
ltimos dejan de ser tiles desde un punto de vista teraputico. Por lo que la
industria farmacutica se ve en la obligacin de ir creando o descubriendo
nuevos antibiticos o antibacterianos y por lo tanto hoy en da el gran arsenal
teraputico que existe en el mercado tiene tres orgenes:
-
Los clsicos antibiticos donde el representante ms importante es la

penicilina (pero no es el nico, gentamicina, estreptomicina) los
cuales son de origen NATURAL.
Luego el hombre tuvo que ir adaptando y modificando estos

compuestos naturales debido a que ya no tenan el mismo efecto que
antes, por lo cual adicion grupos qumicos y radicales al ncleo
activo de la molcula natural, otorgando una caracterstica
microbiolgica distinta o favorecer las caractersticas farmacolgicas
como que hoy en da existan antibacterianos que se administren 1
vez al da (modificacin de las molculas desde un punto
farmacocinetico) : estas corresponden a molculas de naturaleza
SEMI- SINTETICA. (cloxacilina)
En vista de contar con nuevos agentes antibacterianos ante la

necesidad de controlar algunas bacterias que para las cuales no hay
alternativas teraputicas, el hombre ha tenido que utilizar molculas
qumicas y comenzar a inventar nuevos compuestos en el laboratorio,
es por eso que hoy en da tenemos una serie de compuestos que
tienen una accin antibacteriana que son de origen absolutamente
SINTETICO. (sulfamida)
Cuando se habla de agentes antibacterianos hay que tener en cuenta dos

caractersticas fundamentales desde un punto de vista microbiolgico (o
dependiendo de la literatura se pueden clasificar en diferentes puntos de
vista):
49
Espectro de actividad antibacteriana: esto quiere decir sobre quien

acta el antibitico, es la capacidad terica que tiene de actuar sobre
determinados grupos de bacterias, este espectro est basado en la
afinidad tintorial de las bacterias, las cuales difieren respecto de su
estructura de pared celular. Por lo cual estn involucradas las bacterias
Gram positivas y Gram negativas.
- Reducido: quiere decir que un antibitico o un
antibacteriano tenga accin SOLO sobre gran positivos
o SOLO sobre gran negativos. Esto se debe netamente
a la estructura qumica del ATB como puede ingresar,
si llega a un sitio blanco, etc.
- Amplio: quiere decir que tiene una accin terica
sobre bacterias gram positivas y gram negativas.
Actividad antibacteriana: est asociada a la potencia

de accin, y esta ltima tiene relacin con CUANTO matan
los microorganismos.
-
Bacteriostticos:estos inhiben el crecimiento del

microorganismo, esto implica que a medida que va
pasando el tiempo las bacterias mueren. No producen
de forma inmediata la muerte. Si lo vemos en el
grfico se aplica el bacteriosttico se llega a la fase
estacionaria y luego de eso comienzan a disminuir el
nmero total de clulas bacterianas pero de forma
muy lenta.
Bactericida: son por definicin los que producen la

muerte de los microorganismos sin la necesidad de
destruirlos o lisarlos. Esta muerte NO EST asociada a UNA bacteria,
sino que a una poblacin bacteriana. Un antibitico que logra
producir la muerte es el que elimina el 99.9% de toda la poblacin lo
que es equivalente a 3 logaritmos. El 0.1% restante de
microorganismos es combatido por el sistema inmune. Todo esto est
asociado a lo que los MO pueden hacer in vivo y podemos determinar
en el laboratorio lo que los medicamentos o las sustancias qumicas
son capaces de hacer. Si lo vemos en la grafica, estos bactericidas
producen una muerte exponencial sin pasar por la fase estacionaria.
Bacteriolticos: corresponden a los mismos bactericidas, pero

difieren en que estos producen la muerte de los microorganismos por
lisis.
Que los antibiticos de tipo bactericidas maten de manera ms rpida a las

clulas bacterianas no quiere decir que los bacteriostticos sean malos, al
contrario, hoy en da en el mercado farmacutico existen muchos de estos
productos a la venta y son muy buenos. Cabe destacar que el uso de
bacteriostticos y bactericidas depende de ciertas condiciones que debe tener
el paciente con la enfermedad infecciosa en cuestin. Este comentario no se
refiere a si uno es mejor que el otro, o si uno es malo y el otro es bueno, sino
50

que habla sobre la potencia que ejercen estos sobre el crecimiento bacteriano
en un determinado periodo de tiempo.
Mecanismo de accin: se refiere a como los antibiticos matan a las

clulas bacterianas, el mecanismo que ellos emplean para hacer frente a
los microorganismos. En otras palabras es definir que hace esta
sustancia qumica cuando se encuentra con las bacterias que estn
produciendo infeccin.
Para que un agente de control tenga una buena accin sobre los
microorganismos debe actuar sobre distintas estructuras, en trminos
generales lo debe hacer en las que son de vital importancia para las
bacterias, tales como: envolturas (mecanismos de sntesis de estas)
membrana citoplasmtica, pared celular. Sntesis de protenas
ribosomas. Tambin pueden actuar sobre los cidos nucleicos. Cabe
destacar que los agentes qumicos tienen como punto de accin las
mismas estructuras que los antibiticos. El sitio blanco corresponde al
lugar en donde el antibitico se va a unir, es decir es el receptor que
encuentra, estos sitios los podemos encontrar a nivel de pared, de
membrana, ribosomas o cidos nucleicos. Por lo tanto alteran la sntesis
o estructuracin de la membrana, de pared (sntesis de peptidoglican),
sntesis de cidos nucleicos (ADN o ARN), sntesis de protenas
(unindose el ATB a determinadas zonas del ribosoma, ya sea la
subunidad de 50S o la de 30S), sntesis de acido flico (es precursor de
bases nitrogenadas por lo tanto si esta no estn no hay cidos nucleicos,
esta es una de las principales vas metablicas que se obstruyen en los
microorganismos por la accin de antibiticos).
Mecanismos de resistencia: esta resistencia de los microorganismos

est estrictamente relacionada con el mecanismo de accin de los
antibiticos, este primero quiere decir como las bacterias hacen frente a
los antibacterianos adquiriendo alguna resistencia. Esto se realiza debido
a las variaciones genticas que van haciendo las bacterias a lo largo de
su vida. Esta resistencia que emplean estos microorganismos se ve
evidenciado en la prctica comn, y se traduce a un fracaso teraputico,
es decir nosotros utilizamos un agente antibacteriano y este no tiene la
capacidad ni de matar ni inhibir sobre la poblacin bacteriana, por lo
tanto esta ultima sigue creciendo y sigue daando al hospedador al cual
est infectando. Este fenmeno de resistencia por parte de las bacterias
es absolutamente natural, ya que el antibacteriano que nosotros
utilizamos para algunas infecciones tambin es totalmente natural
debido a que este metabolito es producido por los mismos
microorganismos, por lo tanto es parte de l y este no puede morir. Cabe
destacar que los seres humanos han hecho que prevalezcan los genes
de resistencia por una difusin en el mal uso de los antibiticos, ya que
se carga un ambiente con antimicrobianos, lo que se conoce con el
nombre de presin selectiva. Debido a esto las bacterias modifican su
ADN y adquieren genes de resistencia contra los antibiticos, para as
poder sobrevivir. El objetivo de las bacterias es multiplicarse y sobrevivir
a travs del tiempo. El antibitico lo que hace es no crear resistencias,
selecciona cepas resistentes estimulando la supervivencia y la
51

propagacin de las mismas. Se eliminan las bacterias susceptibles, se
quedan las resistentes ya que es un fenmeno netamente de seleccin.
Por ejemplo: imaginemos que tenemos dos bacterias de distinto tipo, si
se aplica un antibitico no en las correctas condiciones lo que se est
realizando es una presin selectiva, es decir generar un ambiente
cargado de antibiticos en donde las bacterias que eventualmente
pueden morir lo harn, las que quedaran vivas en el ambiente son las
que tienen mecanismos de resistencia o las que recin los comienzan a
captar, lo que luego pasar es que esas dos bacterias resistentes que
quedaron en el lugar se van a comenzar a reproducir y al cabo de un
tiempo tenemos solo bacterias resistentes, esta es la seleccin que
realizan los antibiticos. Las bacterias que no estn en ambientes con
presencia de antibiticos no poseen estos genes de resistencia, ya que
no los necesita a diferencia de un ambiente cargado con antibiticos, en
este ltimo caso la bacteria se ver totalmente obligada a captar genes
de resistencia ya que de otra forma morir.
El uso indiscriminado de antibiticos ha llevado a que hoy en da exista
una gran cantidad de microorganismos resistentes y multiresistentes.
-
RESISTENCIA INTRINSECA: labacteria no tiene una molcula, una

reaccin, no posee un sitio blanco para el antibitico y por lo tanto si
se administra el antibitico la bacteria no se ve afectada. Esta
resistencia habitualmente no es importante en el sentido en que esta
no se va a diseminar porque es parte de la estructura de este
microorganismo. Otra forma de resistencia intrnseca es cuando la
bacteria si tiene un sitio blanco para el antibitico, pero este ltimo
no puede ingresar, y la bacteria no se ve afectada. Esta resistencia
intrnseca es especie especfico y genero especfico, lo cual quiere
decir que es de una bacteria, es propia, est dada por su naturaleza
gentica por lo cual no es transmisible, y por lo tanto desde un punto
de vista de la diseminacin no es significativa.
RESISTENCIA ADQUIRIDA: esto significa en palabras simples, que

un da la bacteria es susceptible y al otro da es resistente. La
bacteria puede adquirir esta resistencia de dos maneras: - por genes
que codifican esta resistencia, es decir bacteria adquiri genes de
resistencia que se han visto favorecidos por la presencia de
antibiticos. o algunos antibiticos pueden favorecer la aparicin o
la seleccin de mutantes, si bien es cierto la mutacin es un
fenmeno muy raro, y en una gran poblacin solo existe la posibilidad
de que solo una bacteria pueda mutar. Esto quiere decir que al aplicar
un antibitico este va a actuar en las clulas bacterianas mutadas, y
estas ltimas son las seleccionadas (se vuelven resistentes). Esta es
una propiedad que es especfica de cada cepa bacteriana, no es una
caracterstica de especie ni de gnero, quiere decir que por ejemplo
de cada 5 escherichia coli, una puede ser resistente y lo es porque es
la que posee los genes, y esta resistencia NO es parte de sus
caractersticas genticas, a diferencia de la resistencia intrnseca en
donde las bacterias tienen en sus genes las propiedades de
resistencia a antibiticos. Cabe destacar que estos al ser genes
52

adquiridos no todas las bacterias tienen la capacidad de poder
transformarse en presencia de estos, pero si podemos hacer que esto
ocurra haciendo mal uso de los antibiticos, por lo cual obligamos a
las bacterias a que comiencen a captar genes de resistencia.
Los antibiticos nos pueden responder a tres preguntas fundamentales: sobre
quien acta, cuanto matan y como matan. Las bacterias gram negativas como
Escherichia coli son resistentes a la penicilina, por lo tanto este antibitico
tiene un reducido espectro en gram positivos, y no tiene accin es gram
negativos porque esta molcula no es capaz de atravesar las membranas
(membrana externa) de las bacterias y por lo tanto no puede alcanzar su sitio
blanco. Esta es una caracterstica propia de todas las escherichia coli, por lo
cual corresponde a una resistencia intrnseca o natural. Cuando se da una
situacin de resistencia adquirida es en donde hay que controlar, ya que
debemos evitar que las clulas bacterianas que han mutado y se han vuelto
resistentes por adquisicin de genes, proliferen en ms bacterias resistentes.
Durante esta etapa la bacteria pasa de ser susceptible a resistente debido a la
adquisicin de genes que le otorgan esta caracterstica. Esto se da gracias a la
transferencia horizontal de genes, es por eso que es tan fcil que esto suceda y
por lo cual se debe controlar de inmediato para que la poblacin bacteriana
con genes de resistencia no siga aumentando.
Las bacterias para poder evitar la accin de los antibiticos desarrollan
estrategias, estas ltimas son las que se conocen como los mecanismos de
resistencia. Las bacterias son seres vivos que evolucionan. Por ello son capaces
de adaptarse y de resistir a los antibiticos. Un antibitico debe fijarse en un
receptor de la bacteria para poder reaccionar.
- Mutacin del receptor: si el receptor cambia despus de una
mutacin, va a impedir la transmisin del antibitico. O tambin
podemos decir que la bacteria modifica su sitio blanco en el cual se
va a unir el antibitico, pero sin que se produzca alguna alteracin
dentro de su propio metabolismo (de la clula bacteriana). El
antibitico se acerca al sitio blanco y no lo encuentra por lo cual sale
y no se une, cabe destacar que ambos componentes tienen un tipo
de unin llave cerradura.
- Modificacin del antibitico: numerosas cepas resistentes fabrican
una enzima que modifica la molcula antibitica. A esta ultima por
Impiden
ejemplo se le agregan grupos adicionales como un fosfato, hidroxilo,
la unin
amino; cuando se le agregan estos residuos al antibitico las
del
interacciones que se producen dentro de este cambian y por lo tanto
antibiti
puede tener un cambio de conformacin de su estructura, ahora si
esta molcula llega hacia el receptor estos no se van a reconocer
porque esta primera cambi. Otra forma de impedir que el atb se una
es destruyndolo, la bacteria no solo le agrega un grupo fosfato sino
que tambin puede hidrolizar la molcula, este ltimo proceso es uno
de los ms frecuentes entre las bacterias sobre todo asociados a los
antibiticos beta lactamicos (sntesis de beta lactamasa:
hidrolizan el antibitico, a travs del anillo beta lactamico el cual es
una estructura base para todos los beta lactamicos, produciendo el
acido peniciloico )
53

-
Impermeabilidad de la bacteria: la bacteria cierra los poros a

travs de los cuales el antibitico penetra en la clula. Esto se
produce cuando el sitio blanco al cual se va a unir el antibitico, no
est en el exterior de la clula bacteriana, por ejemplo puede estar a
nivel de la membrana citoplasmtica, ribosomas, membrana externa.
Con cualquiera de estas opciones el antibitico debe atravesar de
todas maneras, pero la bacteria se hace totalmente impermeable y
modifica sus porinas para que estas permanezcan cerradas.
Expulsin del antibitico: algunas bacterias son capaces de
rechazar los antibiticos por aspiracin fuera de la clula, esta
primera tiene una bomba aspirante por lo cual la clula bacteriana
expulsa los compuestos txicos, en este caso el antibitico. En esta
estrategia la bacteria deja que el antibitico ingrese a su interior,
pero esta primera produce ciertos canales a los cuales se les conoce
como bombas de eflujo (sentido contrario) o canales de expulsin,
estas ltimas lo que hacen es sacar el antibitico, esto se realiza de
la siguiente forma: el ATB ingresa a la bacteria, llega hasta el
citoplasma, se topa con la bomba de eflujo con la cual tiene MAS
afinidad que con el propio sitio blanco, por lo cual se va a unir a estay
la bomba reaccionar aspirando la molcula y expulsndola al
exterior de la clula bacteriana.
Bypass: los antibiticos pueden afectar puntos vitales para la
bacteria, como sntesis de protenas, de cidos nucleicos, de
membrana citoplasmtica, pared celular, entre otros. Tambin estos
antimicrobianos pueden intervenir en alguna vametablica esencial,
la cual debe tener caractersticas de NO poseer vas alternativas para
llegar al mismo producto. Debido a esto las bacterias generan un
bypass, y de esta manera se bloquea una va pero ellas tienen la
posibilidad de saltar ese punto y seguir con la vametablica.
TRATAMIENTO ANTIMICROBIANO
Las caractersticas del antibitico que debemos saber antes de recetarlo son:
contra quienes acta, como acta, cuanto mata y como mata. Supongamos
ampicilina para escherichia coli, es un antibitico perfecto para esta bacteria,
ya que es de amplio espectro y tiene muy buena accin sobre bacilos gram
negativos, por lo tanto desde un punto de vista terico la ampicilina es muy
buen antibitico para la escherichia coli. El problema es que hoy en da esta
bacteria y muchas otras presentan resistencias a ampicilina, por presencia de
plsmidos, genes de resistencia, etc. Entonces el doctor debe saber NO
solamente la parte terica sino que tambin debe saber si esa escherichia coli
especfica que est produciendo la infeccin en un paciente es susceptible o
resistente frente a un determinado antibitico. Esto el profesional no lo puede
adivinar y ah necesita la ayuda del laboratorio, el cual le debe informar acerca
de la bacteria, este debe hacer un estudio de este microorganismo y evidenciar
si es susceptible o resistente a algn antimicrobiano que se desea utilizar para
hacer frente. Luego de tener la informacin necesaria de la bacteria y el
antibitico, debemos considerar al hospedador, supongamos que una infeccin
urinaria se est produciendo en una mujer embarazada, a ella no le podr
administrar cualquier antibitico que diga tericamente que funcionar.
54

Entonces antes de seleccionar un tratamiento antimicrobiano correcto,
debemos tomar en cuenta el microorganismo en cuestin, el antibitico y el
hospedador o paciente que se ve afectado.
xito de la terapia:
Para que una terapia antimicrobiana tenga efecto, el antibitico debe
mantenerse en el lugar de la infeccin, es decir debe llegar al sitio en donde la
bacteria est produciendo la infeccin y su proliferacin, a una concentracin
que provoque la muerte o control del microorganismo. Esto debe ocurrir sin
daar al hospedador.
En condiciones tericas ideales antes de seleccionar una terapia
antimicrobiana, se debe saber donde est localizado el proceso infeccioso, para
esto es necesario realizar exmenes mdicos que ayuden a encontrar el lugar
en donde est el microorganismo produciendo dao. Al enviar las muestras al
laboratorio, este nos entrega la informacin del microorganismo y adems la
factibilidad antibitica de este, es decir si tal antibitico se puede o no usar ya
que la bacteria es resistente o susceptible.
-
Especificidad: se refiere al espectro de la actividad antimicrobiana,

definida por su capacidad de unin a un sitio especfico de la
bacteria.
Eficacia in vivo: debe ser bacteriosttico o bactericida in vivo, es
decir, su accin no debe ser revertida en el interior del organismo.
Toxicidad selectiva: debe ser toxico para el microorganismo, pero
inocuo para el hospedero. Esto es indispensable para la utilizacin del
antimicrobiano en clnica.
La seleccin de un antibitico se basa en:

- Penetrar al lugar de la infeccin
- Alcanzar o sobrepasar CMI y CMB (dosis)
- Va de administracin y la facilidad de ello
- Frecuencia de administracin (1 o 2 veces al da, etc)
- Toxicidad potencial para el hospedador
- Costo
Hay que tener mucho cuidado al hacer terapias antimicrobianas combinadas:
- Accin sinrgica: ambos antibiticos tienen una mejor accin sobre la
infeccin actuando de manera conjunta.
- Accin aditiva: se logra un buen efecto. Primero se administra un
antibitico A, luego uno B y el resultado es la suma de ambos.
- Accin indiferente: los antibiticos juntos no actan ni mejor ni peor,
en vez de administrarlos por si solos.
- Accin antagonista: absolutamente indeseado es cuando uno de los
antibiticos inhibe al otro y su accin sobre la infeccin bacteriana
USOS DE TERAPIAS COMBINADAS
Las terapias combinadas se usan porque de esta forma se pretende obtener
una mayor potencia por parte de los antibiticos.
55

-
Atacar eficientemente infecciones graves producidas por un

microorganismo que puede ser poco susceptible y al administrar dos
antibacterianos aumentamos la potencia de estos.
Prevencion de la aparicin de microorganismos resistentes: la
probabilidad de que un microorganismo se haga resistente al utilizar
dos antibiticos es bastante baja
Infecciones polimicrobianas: es muy raro que en la cavidad bucal
encontremos una infeccin monobacteriana, por lo cual se usan
antibiticos combinados para que uno cubra un espectro de cierta
bacteria y el otro haga lo mismo pero con un microorganismo
diferente.
Tratamientos iniciales para inmunocomprometidos
Disminucin de efectos toxicos.
El laboratorio nos puede entregar la informacin de cul es la bacteria que est

causando el cuadro clnico. Adems de entregar informacin de la
susceptibilidad del microorganismo, esto se realiza a travs de dos tcnicas
fundamentales: test de dilucin: se utiliza a nivel clnico u hospitalario en
pacientes mas graves, o test de difusin, este ultimo hoy en da es el ms
comn. Con estas tcnicas de laboratorio podemos saber o interpretar la
susceptibilidad o resistencia de los microorganismos dentro de dos cdigos:
- Concentracin mnima inhibitoria (CMI): menor concentracin de
antibitico necesaria para la inhibicin del crecimiento de las
bacterias.
- Concentracin mnima bactericida (CMB): menor concentracin de
antibitico necesaria para matar la poblacin bacteriana. Disminucin
del 99.9% de las bacterias.
Antibiograma: es una tcnica que normalmente se le denomina de difusin, lo
que se realiza es lo siguiente: en una placa de cultivo de agar se siembra una
bacteria con una tcnica especial que haga que se forme un tapiz bacteriano
(para que la bacteria crezca de forma pareja en toda la superficie de la placa
de petri) y sobre esto se colocan discos de antibiticos (los cuales son circulitos
de papel especial donde est impregnado un antibitico en una concentracin
determinada, la cual es una concentracin estndar que ya ha sido estudiada
para poder hacer la correlacion con las concentraciones que se alcanzan in
vivo), luego esto se incuba y sucede que el antibitico impregnado en el sensidisco comienza a difundir hacia los lados de manera homognea y llega un
momento en que la concentracin de antibitico que esta presente es
suficiente para inhibir el crecimiento bacteriano (CMI). Los resultados se
pueden interpretar con una tcnica cuantitativa de la siguiente manera: se
mide el dimetro del halo y por ejemplo dio 17 mm, esta medida se busca en la
tabla y en esta puede decir menor a 17 es susceptible, igual a 17 es intermedio
o mayor a 17 es resistente.
Si dice que la bacteria es susceptible: est diciendo que la concentracin que
se requiere para matar esa bacteria es suficiente. Frente a esta situacin un
medico puede recetar este antibitico para el tratamiento de alguna
enfermedad infecciosa por una bacteria determinada.
Resistente: significa que la concentracin necesaria para inhibir el crecimiento
de una bacteria no se alcanza in vivo, entonces si se hace frente a este
56

microorganismo con un antibitico determinado el resultado ser el fracaso
teraputico.
Intermedio: quiere decir que la bacteria no es ni susceptible ni resistente,
frente a esta situacin el mdico puede usar o no usar el antibitico.
Otra opcin es utilizar las diluciones las cuales permiten determinar la CMI de
forma directa y la CMB, es decir saber a qu concentracin se inhibe y a que
concentracin mueren los microorganismos. Estas tcnicas se requieren a nivel
hospitalario en cuadros clnicos ms complejos o cuando son pacientes en los
cuales se requiere hacer un ajuste de dosis. Lo que se realiza es una dilucin
en series de una concentracin de antibitico y exponer a la bacteria a esta
concentracin, se puede realizar en liquido y en solido. Ejemplo: tenemos una
dilucin de concentracin de ATB de tipo solido, exponemos a las bacterias a
esto y luego las incubamos, a las 24 horas vamos a observar los resultados y
encontramos algunos tubos con crecimiento microbiano y otros no, luego para
interpretar los resultados podemos decir que a mayor concentracin del ATB
las bacterias ya no crecen (CMI: mnima concentracin a la cual se produce
inhibicin de crecimiento bacteriano). En esta situacin puede que las
bacterias estn muertas o no, por lo cual se puede determinar la CMB de la
siguiente manera, se toma alcuota y la siembro en una placa luego se aplica el
antibitico y posteriormente se hacen los clculos. Cuando tenemos un
antibitico bactericida habitualmente la CMI y la CMB es la misma, y en un
antibitico bacteriosttico la CMI y la CMB son distintas, el valor entre ellas es
lejano. Nosotros esperamos que si hay una actividad bactericida la CMB se
alcanza perfectamente y por lo tanto el antibitico va a producir la muerte de
las clulas bacterianas. En cambio cuando tenemos una actividad
bacteriosttica va a intervenir tanto la CMI como la CMB en la inhibicin del
crecimiento bacteriano.
BACTERIOSTATICOS:
BACTERICIDAS:
- Tetraciclina
- Beta - lactmicos
- Macrlidos
- Glucopptidos
- Cloranfenicol
- Aminoglucsidos
- Sulfamidas
-Quinolonas
Bactericida
+
ATB que inhiben la sntesis de pared celular:
Dentro de estos tenemos
dos grandes grupos uno de ellos son los beta
Bacteriostti
lactamicos: estos tienen una estrucutura bsica en la que se puede observar el
anillo beta lactamico
mas un anillo tiazolidina que es la base y tomando como
co=
referencia esta molcula se han ido haciendo modificaciones para obtener los
distintos grupos o subgrupos de beta lactamicos que hoy en da existen tales
Antagonism
como: carbapenemicos o tiamicinas (inhibidores de beta lactamasa),
cefalosporinas, monobactamicos y penicilina (estos dos son los principales
derivados de los o
beta lactamicos). Todo estos antibiticos tienen asociados un
anillo beta lactamico mas un anillo tiazolidina junto con los residuos qumicos
que van a dar origen a los distintos antibiticos betalactamicos que hoy
daestn disponibles en el mercado, con excepcin de los monobactamicos que
solo poseen el beta lactamico. El mecanismo de accin para todos estos
antibiticos es el mismo y corresponde a que el ATB interviene en la sntesis
del peptidoglican unindose a unas enzimas que son encargadas de la
transpeptidacion del peptidoglican es decir se encargan de entrelazar las
2
Bactericidas
= Sinergia
57

estructuras o los componentes del peptidoglican formar este polmero,
entonces las enzimas encargadas de realizar esta accin son las que se
inhiben, estas se encuentran a nivel de membrana citoplasmtica ya que aqu
se encuentra la batera enzimtica necesaria para la sntesis del peptidoglican,
las cuales son las PBP se les denomina as porque vienen de PENICILLIN
BINDING PROTEINS que son protenas ligadoras de penicilina porque se
descubrieron en el momento que se descubri la accin de la penicilina y todas
las bacterias poseen estas PBP pueden ser en distinto numero con algunas
vacantes y los ATB betalactamicos se van a unir a ellas inhibiendo la sntesis
del peptidoglican. Con esto se produce la muerte de la bacteria y todos los ATB
betalactmaicos son de naturaleza bactericida, es decir que si yo hago los
clculos CMI y CMB son exactamente la misma producen la muerte en el
99.9% de la poblacin bacteriana. Desde un punto de vista de su espectro de
actividad depende porque no podemos englobar a todo el grupo de
betalactamicos porque existen muchos subgrupos y por lo tanto cada grupo u
subgrupo tiene eventualmente un espectro de actividad distinto, por ejemplo la
penicilina tiene un reducido espectro sobre gran-positivos pero sus derivados
como la ampicilina, amoxicilina tienen un amplio espectro. Los
momobactamicos tienen reducido espectro gramnegativos, las tinamicinas de
amplio espectro y las cefalosporinas de amplio espectro aun cuando dentro de
estas tambin hay subgrupos y cada uno de ellos tiene distinto espectro.
Otro grupo que afecta la sntesis de pared celular corresponde a los
glicopeptidicos donde tenemos solo dos representantes que son los ms
frecuentes o los ms comunes, aunque existen otros, que es la bancomicina
(pacientes con infecciones graves de bacterias multiresistentes, de
accin sobre gram positivos se usa principalmente a nivel
hospitalario) y la teicoplanina, estos son antibiticos de caractersticas
bactericidas, de reducido espectro de actividad hacia gran positivos y su
mecanismo de accin es tambin intervenir en la sntesis de la pared celular
unindose a los terminales peptidicos del peptidoglican (que son el nacetilmuranico y n-acetilglucosamida que tienen unas colitas que cuelgan que
son pentapeptidos que sirven para el entrecruzamiento de las cadenas),
entonces los glicopeptidicos se unen a estos pptidos y hace que estos no se
entrelacen con la otra cadena para que asi no se forme la red del
peptidoglican. Su unin es totalmente especifica, las bacterias se hacen
resistentes a estos antibiticos con la estrategia de transformar su sitio blanco
o su pentapeptido (cambia d-alanina d-alanina por d-alanina d-lactamato).
Estos antibiticos son de administracin parenteral, son controlados por sus
efectos colaterales.
Existen bacterias resistentes o multiresistentes en los hospitales ya que los
antibitico hacen una presin selectiva sobre estas y entonces las que estn
mejor adaptadas sobreviven ya que poseen genes de resistencia a ATB y las
que no estn adaptadas se mueren. Una persona que tiene una infeccin
urinaria no se le administrar una bancomicina ya que este antibitico se da
solo a pacientes infectados con bacterias resistentes. A nivel comunitario, es
decir pacientes que se encuentran fuera del hospital, no existe una presin
selectiva de ATB por lo cual es muy extraa la presencia de bacterias
resistentes o multiresistentes.
58
ATB que inhiben la sntesis de pared celular:

Bacitracina y fosfomicina que son antibiticos que intervienen a nivel de la
membrana citoplasmtica y son de poco uso hoy en da porque tienen algunos
efectos colaterales indeseados y esto tiene que ver justamente por el
mecanismo de accin, ya que al trabajar en la membrana citoplasmtica esto
tiene efectos adversos dentro de la clula animal eucarionte.
En algunas ocasiones cuando no hay ninguna otra alternativa de antibiticos se
ha usado la bacitracina y la fosfomicina a pesar de su toxicidad. Es importante
tener un uso muy controlado de estos ATB para que no se produzca una
resistencia de las bacterias sobre estos, ya que hay algunas clulas bacterianas
que tericamente son susceptibles, pero al momento de combatirlas con algn
ATB nos damos cuenta de que son
resistentes, es por esto que hay que
tener un uso controlado de estos
antibacterianos.
ATB que inhiben la sntesis de
protenas:
Hay algunos que se unen a la
subunidad mayor del ribosoma 50S
estos son los macrolidos, lincosamida,
estreptogramina, oxazolodina y
lincosamida. Todos estos son de
reducido espectro hacia gram
positivos y su accin es de
caractersticas bacteriostticas.
Otros antibiticos se unen a la
subunidad menor del ribosoma 30S
son los aminoglicosidos y las tetraciclinas donde en ambos casos son de amplio
espectro actividad, la nica diferencia es que los primeros son bactericidas y
los ltimos bacteriostticos.
ATB que inhiben la sntesis de cidos nucleicos:
Dentro de estos encontramos a las quinolonas (actua a nivel de la replicacin
del ADN) BACTERICIDAS que son fundamentales que intervienen en el desenrollamiento del ADN, ya que esta molcula se encuentra en un estado de
superenrollamiento y en el momento que este se va a replicar lo que se tiene
que producir es una apertura de las cadenas en una zona especifica donde se
genera el Ori C (punto de replicacin) y posteriormente las hebras se
comienzan a separar ya que aqu se comienza a sintetizar la hebra
complementaria de cada uno de los moldes, lo que hacen los antibiticos es
intervenir en este punto interfiriendo con las enzimas encargados del
enrollamiento y superenrollamiento del ADN que son las topoisomerasas,
girasas y helicasas. Las quinolonas en su gran mayora son de amplio espectro
de actividad aun cuando las originales, es decir los primeros antibiticos de
este grupo (acido nalidixico), eran de reducido espectro, todos los antibiticos
restantes que se han originado a partir de este acido nalidixico son de amplio
espectro de actividad se usan mucho, ya que tienen una muy buena actividad
antibacteriana, particularmente hoy da la ciprofloxacina (muy buen ATB, sirve
59

para infecciones graves y adems tiene accin sobre bacterias complejas de
tratar y levofloxacina se utilizan en grandes cantidades ms de lo que se
debiera y paulatinamente se est perdiendo la accin frente a las bacterias ya
que estas ltimas se comienzan a hacer resistentes. Hace varios aos atrs
cuando LA PROFE ESTABA EN LA U LE ENSEARON QUE LAS QUINOLONAS
TENIAN MUY POCA PROBABILIDAD DE GENERAR CEPAS RESISTENTES, debido a
esa razn los mdicos comenzaron a recetar y a usar este antibitico de forma
indiscriminada y hoy en da si existe una resistencia por parte de las bacterias
a estos antibacterianos. Antes la resistencia se daba de manera muy lenta ya
que las bacterias mutaban a nivel de los cromosomas, hoy en da no es as ya
que los genes saltaron desde los cromosomas y ahora los podemos encontrar
en plsmidos que se transfieren de manera horizontal entre las clulas
bacterianas.
RIFAMICINAS: el ms importante es la rifampicina que interviene a nivel de
ARN, especficamente en la sntesis de este, estos antibiticos se unen a la
polimerasa impidiendo la transcripcin. Es de amplio espectro de actividad, de
tipo bactericida, que es bastante bueno pero de poco uso porque se
seleccionan rpidamente cepas mutantes a rifampicinas, se usa
espordicamente. Se tiene resguardado cuidadosamente para el tratamiento
de la tuberculosis, algunos brotes de meningitis o erradicar estados de
portacin de algunas bacterias.
SULFAMIDAS: es uno de los primeros antibiticos combinados que est en el
mercado, y es el cotrimoxazol que corresponde a una mezcla del
sulfametoxazol que es una sulfanamida, se complementa con trimetroprim.
Estos antibiticos en conjunto tienen una accin sinrgica porque los dos
bloquean la sntesis de acido flico a nivel de las bacterias pero en puntos
distintos de la vametablica, uno lo hace ms arriba y el otro ms abajo
entonces se potencia mucho la accin de estos evitando la sntesis de acido
flico (precursor de las bases puricas y pirimidinas) lo que lleva a en forma
indirecta la inhibicin de cidos nucleicos. Esta fue la primera combinacin que
sale al mercado en la historia, se utiliz mucho en aos anteriores, hoy en da
la utilidad es relativa porque las bacterias obviamente han desarrollado
estrategias de resistencia a este antibitico y por lo tanto no est siendo usado
con mucha frecuencia. Lo positivo de que muchos antibiticos se dejen de usar
es que no se desechan porque cuando esto pasa las resistencias de las
poblaciones bacterianas comienzan a desaparecer ya que no hay presin
selectiva y las bacterias resistentes se ven en desventaja en comparacin con
las susceptibles ya que una bacteria con genes adicionales le cuesta ms
mantenerse y esto tiene un costo energtico que lo que se le conoce como
costo biolgico adicional, por lo tanto en un medio en donde yo saco la presin
selectiva bacteria que es resistente que tiene una serie de genes asociados
comienza perder estos genes, los bota (no es de un da para otro que sucede).
De esta forma se pueden recuperar los antibiticos, cabe destacar que al
comenzar a usarlos nuevamente no se pueden administrar en grandes
cantidades, hay que tener un control de ellos para que no se vuelva a perder la
actividad de estos.
Vacunas
60
Producto biolgico obtenido en forma natural por artificial desde un microorganismo

completo o componentes de este, capaz de inducir una inmunidad activa en un hospedero
susceptible
Antgenos capaces de sensibilizar el sistema inmune
Provocan una memoria inmune que determine que, cuando la persona se exponga
a la infeccin verdadera, se active rpidamente una respuesta defensiva especfica travs
de los linfocitos T y B
Caractersticas ideales:
Reproducir respuesta inmunolgica similar a la infeccin natural
Lleva los antgenos adecuados para generar una respuesta que debe ser lo mas parecido
al MO con el que nos vamos a enfrentar. (ya que si varia cuando se enfrente al antgeno
responder con respuesta primaria y no secundaria).
Efectiva: aporte un 90% de proteccin (que no me enfermar). Si tengo una enfermedad
asociada a la vacuna no va a ser las complicaciones asociadas al MO, no dejaran
secuelas y son
Tener mnimos efectos secundarios y completa seguridad, no genere respuestas
adversas: es comn a todos los frmacos, medicamentos etc. Lo que si es que no es
posible que el sist inmune haga reaccin. Lo que debemos evitar que haga procesos
malignos. Lo que no podemos evitar es que frente a la vacuna hagamos cuadro febril,
inflamatorio, o sintomatologa similar a la enfermedad. Ya que lo que hacemos es
estimular nuestro sistema inmune para que responda y muchas veces la sintomatologa
indica que nuestro organismo esta evidenciando que nuestro sistema inmune est en
actuando. (por ejemplo las algunas interleuquinas y citosinas que afectan el centro de la
termorregulacin provocando que se liberen mediadores que permiten que se liberen mas
clulas fagociticas, solo en casos de vacunas, Hay algunas personas que no responden
as, responden sin sintomatologa).
Inmunidad a largo plazo: no podemos esperar que sea permanente porque nuestro
sistema inmune se inmuniza constantemente, nuestro sistema inmune al reaccionar de
nuevo hace memoria, cada vez estamos mejorando nuestra memoria. Una inmunidad a
mas largo tiempo posible se da a travs de ms de una dosis, revacunacin etclo que
no puede tener es tiempo de un par de meses o un ao. Buena inmunidad 10 aos.
Existir en dosis nica y compatible con otras vacunas
Ser administrada en forma no invasora
Poder administrarse precozmente, en los primeros meses de la vida
Ser estable a temperatura ambiente: no lidiar de cadenas de frio.
Ser de fcil produccin y econmicamente accesible.
Las vacunas pueden ser de dos tipos:
Inactivas:
Llevan el MO Muertos, una sub unidad o un toxoide. Puede ser administrado a
cualquier tipo de paciente, porque solo estimular nuestro sistema inmune. A lo mas
sntomas y signos asociados a la respuesta inmune. Se emplean antgenos puros,
podran irse bajando los efectos secundarios.
De menor duracin: asociada a ms de una dosis y varias revacunaciones, gralmente
administracin parenteral.
Virus o bacterias muertas
Subunidad
61
Toxoide: Las vacunas toxoides contienen una toxina producida por la

o virus. Las vacunas contra la difteria y ttano son toxoides
bacteria
Vivas:
1
Atenuadas: imita muy bien la infeccin natural (por que se administra un MO

vivo pero atenuado) puede reconocer muy bien al MO y la accin que har,
imita muy bien una infeccin y puede realizar una infeccin muy bien
controlada. Puede que nos enfermemos y hay riesgo de transmisin, la ventaja
es que no es la enfermedad grave.
Mutantes: Nunca ser la infeccin natural (salvaje), ya que no podemos

someter a un paciente a una enfermedad para protegerlo. Es mutada porque
no es la enfermedad, pero es lo mas parecido y las protecciones son a mas
largo plazo favoreciendo la aplicacin de dosis nicas. Muchas veces puede
ser aplicada de la forma natural, en la puerta de entrada.
Vacunas vivas atenuadas

Ventajas
Desventajas
No revierten a su forma natural

Producen infeccin controlada
Proteccin
habitualmente
prolongada
Dosis generalmente nica
Administracin por va normal de
infeccin
Riesgo de enfermedad por el agente

Riesgo de transmisin del agente
Son ms inestables
Vacunas agentes inactivados o

muertos
No hay riesgo de infeccin
No se transmite a contactos
Empleo de antgenos puros
Posibilidad de administracin
en
individuos
inmunodeprimidos
Inmunidad de menor duracin

Menor eficacia protectora
Revacunaciones peridicas
Administracin generalmente
parenteral
los inmunodeprimidos no pueden utilizar este mtodo de vacuna y mujeres embarazadas

(ya que puede traspasar la infeccin al feto dependiendo de la vacuna) *
62
Esto depende del tipo de MO asociado y del antgeno reconocido (patognico, daino)
entonces, en algunas ocasiones, uno puede preparar solo los antgenos, sin embargo la
respuesta es mejor con el MO completo, entonces esto depende de como se estimula el
sistema inmune y produccin asociada.
Contienen substancias sintticas "hechas por el hombre" que asemejan. La vacuna
conjugada Hib (Haemophilusinfluenza tipo B) es una vacuna biosinttica.
El uso de vacunas asociados a los programas de vacunacin son elementos muy
importantes para el tratamiento de enfermedades infecciones, tengo dos OBJETIVOS
1
Disminuir el nmero de personas susceptibles : El MO necesitas un paciente

que sea potencialmente enfermable, si a un paciente le saco la caracterstica de
susceptibilidad no es buen nicho y mientras no sea nicho (no es susceptible por
estar protegido)
detener la propagacin de agentes infecciosos: el MO no vive en ningn lado y

se detiene la propagacin de agentes infecciosos RADICACION ABSOLUTA por
ejemplo la viruela
*puedo erradicar (si el MO tiene nicho SOLO en el humano) o disminuir su propagacin (si
tienen nicho en humano y otras partes)*
63

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