UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA JLIO DE MESQUITA FILHO

FACULDADE DE ENGENHARIA DE ILHA SOLTEIRA

CURSO DE CINCIAS BIOLGICAS

DISCIPLINA: IMUNOLOGIA
PROFESSOR RESPONSVEL: PROFa. Dra WILMA APARECIDA STARKE BUZETTI

PARTE III

I HIPERSENSIBILIDADE
II- VACINAS E VACINAO
III-TCNICAS IMUNOLGICAS

2004

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NDICE
I - HIPERSENSIBILIDADE ...............................................................................................................3
1. HIPERSENSIBILIDADE DO TIPO I (IMEDIATA E MEDIADA POR IgE)...........................3
1.1. IMUNOGLOBULINA E ..............................................................................................................3
1.2. MASTCITOS .............................................................................................................................3
1.3. EOSINFILOS.............................................................................................................................5
1.4. MANIFESTAES CLNICAS ..................................................................................................5
1.4.1.ANAFILAXIA AGUDA.............................................................................................................7
1.4.2. ALERGIAS ESPECFICAS ......................................................................................................7
1.4.2.1. POR LEITE.............................................................................................................................7
1.4.2.2.ALIMENTAR ..........................................................................................................................8
1.4.2.3.INALANTES ...........................................................................................................................8
1.4.2.4.ALERGIAS A DROGAS E VACINAS ..................................................................................8
1.4.2.5. ALERGIAS A PARASITAS ..................................................................................................8
1.4.3. DIAGNSTICO ........................................................................................................................8
1.4.4. PREVENO E TRATAMENTO............................................................................................9
1.4.5.DESENSIBILIZAO...............................................................................................................9
2.HIPERSENSIBILIDADE DO TIPO II.............................................................................................9
INTRODUO ...................................................................................................................................9
3. HIPERSENSIBILIDADE DO TIPO III (mediada por complemento) ..........................................11
3.1. MECANISMOS DE AO .......................................................................................................12
3.2. PERSISTNCIA DOS COMPLEXOS.......................................................................................12
3.2.1. DOENA SISTMICA CAUSADA POR COMPLEXOS IMUNES ....................................13
3.2.2. DOENA LOCALIZADA CAUSADA POR COMPLEXOS LMUNES ..............................14
4. HIPERSENSIBILIDADE DO TIPO IV (Celular e mediada por linfcitos Th)............................15
4.1. HIPERSENSIBILIDADE DE CONTATO.................................................................................16
4.2. REAO DE TUBERCULINA.................................................................................................17
4.3. HIPERSENSIBILIDADE GRANULOMATOSA......................................................................18
II. VACINA E VACINAO ...........................................................................................................20
1. INTRODUO: ............................................................................................................................20
2. TIPOS DE IMUNIZAO: ..........................................................................................................20
2.1. PASSIVA:...................................................................................................................................20
2.1.1. SORO IMUNE.........................................................................................................................20
2.1.2. COLOSTRO E PLACENTA ...................................................................................................21
2.2. ATIVA (VACINAS)...................................................................................................................22
2.2.1. TIPOS DE VACINAS: ............................................................................................................22
3.ADMINISTRAO DE VACINAS ..............................................................................................25
3.1. ADJUVANTES...........................................................................................................................25
3.2. VACINAS MISTAS ...................................................................................................................26
3.3. ESQUEMAS DE VACINAO................................................................................................26
3.4. AVALIAO DA VACINA .....................................................................................................26
4. FALHAS NA VACINAO ........................................................................................................27
5. REAES ADVERSAS DAS VACINAS ...................................................................................27
III-TCNICAS IMUNOLGICAS...................................................................................................29
1. IMUNODIFUSO.........................................................................................................................29
2. IMUNOELETROFORESE............................................................................................................30
3. AGLUTINAO...........................................................................................................................31
4. FIXAO DE COMPLEMENTO ................................................................................................33
5. TESTES IMUNOQUMICOS E FSICO-QUMICOS.................................................................33
5.1 ULTRACENTRIFUGAO ......................................................................................................33
5.2. CROMATOGRAFIA EM COLUNA .........................................................................................33

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5.2.1. CROMATOGRAFIA POR TROCA INICA: .......................................................................33
5.2.2. GEL FILTRAO: .................................................................................................................33
5.2.3. CROMATOGRAFIA POR AFINIDADE. ..............................................................................33
6. RADIOIMUNOENSAIO (RIE).....................................................................................................33
7. TCNICAS IMUNO-HISTOQUMICAS.....................................................................................34
7.1. IMUNOFLUORESCNCIA ......................................................................................................34
7.2. ENZIMTICOS..........................................................................................................................35
8. MTODOS QUANTITATIVOS ENZIMTICOS.......................................................................35
9. WESTERN-BLOT (IMUNOBLOT) .............................................................................................38
10. CITOMETRIA DE FLUXO ........................................................................................................38
11. BIBLIOGRAFIA CONSULTADA: ............................................................................................39

I - HIPERSENSIBILIDADE
Hipersensibilidade quando uma resposta imune adaptativa ocorre de uma forma exagerada
ou inapropriada. As reaes de hipersensibilidades so resultado de uma resposta imune benfica,
mas de uma forma inapropriada levando algumas vezes a reaes inflamatrias indesejveis e danos
para o tecido.
1. HIPERSENSIBILIDADE DO TIPO I (IMEDIATA E MEDIADA POR IgE)
Hipersensibilidade do tipo I ocorre quando uma resposta da imunoglobulina E (IgE)
direcionada a antgenos ambientais, como plen, poeira caseira, caros e outros. O resultado a
liberao de produtos farmacolgicos de mastcitos levando a asma, rinites, urticrias, diarrias e
outras manifestaes alrgicas.
As reaes caractersticas deste tipo de hipersensibilidade so dependentes principalmente
da sensibilizao de mastcitos por antgenos alergnicos ligados a IgE. No entanto, h muitas
citocinas multifuncionais que tambm so liberadas como resultado desta ativao. IL-3 e IL-4 tem
efeitos autcrinos sobre mastcitos e tambm efeitos sobre linfcito B para a produo de IgE. IL5, IL-8 e IL-9 tambm podem ter efeitos quimiotticos sobre a atrao de outras clulas para o local
da reao alrgica, como os eosinfilos e neutrfilos.
1.1. IMUNOGLOBULINA E
O contato inicial de um alergeno com a mucosa seguido por uma srie complexa de eventos
levando a produo de IgE. A resposta da IgE no local da entrada do alergeno pelo corpo (
mucosas ou linfonodos locais). A produo de IgE por linfcitos B depende da apresentao do
alergeno por APC e da cooperao entre linfcitos B e Th2. A IgE inicialmente sensibiliza
mastcitos locais, ligando-se a receptores de alta afinidade (FcRI) para IgE, em seguida a IgE se
espalha pelo corpo atravs da circulao onde se liga tambm a basfilos circulantes e a outros
mastcitos teciduais. Mastcitos podem permanecer sensibilizados por IgE (ligados a IgE) por at
3 meses aps o primeiro contato com o alergeno.
Por outro lado, linfcitos Th1 produzem citocinas que so responsveis pela regulao da
produo de IgE. As citocina IFN e IFN levam a reduo da produo de IgE.
Alm disso, linfcito Th2 produz IL-5 e induz a produo de IgA por linfcitos B e crucial
para o desenvolvimento e a sobrevivncia de eosinfilos no local inflamado. Isto pode explicar a
associao de eosinofilia e aumento de IgE nos processos alrgicos.
1.2. MASTCITOS
Mastcitos so clulas grandes (15 a 20 m de dimetro), distribudas por o todo o tecido
conjuntivo. Sua principal caracterstica o citoplasma com grandes grnulos corados em corantes
metacromticos como o azul de toluindina ou o azul astra ou alcian. O ncleo grande e em
formato de feijo. No homem, no rato e no camundongo, h dois tipos: o de tecido conjuntivo
(CTMC) e o de mucosa (MMC).
CTMC apresenta grnulos maiores e mais homogneos, ricos em histamina e heparina.
MMC tem poucos grnulos com tamanhos variveis, contem pouca histamina e sulfato de
condroitina ao invs de heparina. Alm disso, MMC produz diferentes prostaglandinas e
leucotrienos alm do fator de ativao de plaquetas (PAF). MMC prolifera em resposta a IL-3 e
IL4. MMC pode responder especificamente a antgenos de helmintos parasitas.
Quando IgE liga-se a um antgeno (alergeno) ocorre uma reao com mastcitos, uma srie
de eventos acontecem onde os grnulos de mastcitos movem-se para a periferia e liberam o
contedo para o exterior celular. Alm disso, estas clulas produzem citocinas e mediadores
inflamatrios. A resposta de mastcitos aps a sua ativao extremamente rpida, ou seja, apenas

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alguns segundos. Os mastcitos no morrem aps a degranulao, mas ficam difceis de serem
identificados (Figura 1).
Os grnulos de mastcitos contm alta concentrao de histaminas e em algumas espcies
serotoninas (roedores). Aps a liberao, a histamina liga-se rapidamente a vrias clulas
utilizando-se dos receptores H1 e H2, apresentando efeitos diferentes e distribuio tecidual
diferente. Histamina causa: contrao da musculatura lisa dos brnquios, do trato gastrointestinal,
do tero e da bexiga urinria. Histamina provoca o aumento da permeabilidade vascular e um
potente estimulador de secrees excrinas como secreo de muco bronquial, lacrimejamento e
salivao. Serotonina (5-hidroxitriptamina) um dervado do aminocido triptofano e normalmente
causa vasoconstrico que leva a aumento da presso arterial. Alm disso, serotonina em algumas
espcies animais (ratos e camundongos) causa a contrao da musculatura lisa e o aumento da
permeabilidade vascular como a histamina.
Outros componentes como: tripsina ou proteases neutras do tipo quimiotripsina, destroem
clulas e ativam as molculas C3 e C5 do complemento para formar anafilatoxinas. C3a e C5a
Cininas, que so anafilatoxinas vasoativas, tambm podem ser produzidas.
A ativao de fosfolipases sobre a membrana celular de mastcitos resulta na liberao do
cido aracdnico que um substrato para ciclooxigenase e produz prostaglandinas, prostaciclinas,
tromboxanes e para a lipooxigenase na produo de leucotrienos. Todos estes lipdeos tm ao no
tnus e na permeabilidade vascular (Figura 2).
Mastcitos liberam tetrapeptdeos, como o fator quimiottico de eosinfilos na anafilaxia
(ECF-A) e fatores de atrao e imobilizao de neutrfilos.
Mastcitos produzem tambm citocinas como IL-4, IL-5, IL-6, IL-13, e TNF-.
Proteoglicanas, como heparina e sulfato de condroitina tambm so liberados com propriedade
anticoagulantes (Figura 3).
Eosinfilos tambm apresentam receptores para IgE, que quando sensibilizados aumentam a
sua toxicidade aos parasitas, principalmente s larvas circulantes de helmintos.

Figura 1: A degranulao de mastcitos em conseqncia da ligao cruzada por antgenos de IgE

ligada aos receptores Fc de IgE (FcRI).

Figura 2: os mediadores liberdados durante a ativao de mastcitos.

1.3. EOSINFILOS
Eosinfilos, como os neutrfilos, mastcitos e basfilos, tem funo de lutar contra o
organismo invasor e promover uma resposta inflamatria aguda. Eosinfilos migram para o local
da invaso do parasita liberando enzimas que matam ou danificam severamente os parasitas.
Eosinfilos so produzidos na medula ssea sobre a influncia de IL-3 e IL-5 produzidos por Th2 e
mastcitos.
Eosinfilos so atrados para o local da degranulao de mastcitos atravs de fatores
quimiotticos para eosinfilos (ECF), leucotrienos B4, histamina, fator de atrao de plaquetas
(PAF), extratos de helmintos, C5a e cido imidiazolactico.
1.4. MANIFESTAES CLNICAS
Os sinais clnicos resultam da ao de molculas vasoativas de mastcitos e basfilos. A
severidade est relacionada com o nmero de mastcitos degranulados, do local de ao, da
quantidade de alergeno e da rota de administrao. Se a via de inoculao a venosa, as molculas
vasoativas liberadas por mastcitos estaro distribudas mais sistemicamente e o organismo no ter
tempo para responder prontamente contra esta rpida alterao vascular. Estas manifestaes podem
levar a uma hipersensibilidade aguda e morte.

Figura 3: Representao esquematizada da reao e hipersensibildadade do tipo I mediada por IgE,

mostrando alguns dos mediadores envolvidos.

Figura 4: Viso geral da induo e ds mecanismos efetores da hipersensibilidade do tipo I.

A Figura 7 mostra uma reao de hipersensibilidade imediata com reao urticariforme na
pele e sua (A) reao histolgica dessa inflamatria aguda (B).

1.4.1.ANAFILAXIA AGUDA
Os sinais clnicos diferem nas diferentes espcies.
Nos bovinos: profunda hipotenso sistmica e hipertenso pulmonar. O principal rgo
envolvido o pulmo. Pode ocorrer contrao da musculatura lisa da bexiga e do intestino.
Nos ovinos: constrio de brnquios e vasos pulmonares, contrao da musculatera lisa da
bexiga e do intestino.
Nos equinos: principais rgos de choque so os pulmes e os intestinos.
Nos sunos: hipertenso sistmica e pulmonar.
Ces: o fgado o rgo mais afetado na hipersensibilidade aguda. Ocorre ocluso das veias
hepticas devido contrao da musculatura lisa e inchao heptico. Isto causa hipertenso portal e
edema visceral.
Gatos: os pulmes e os intestinos so afetados.
Galinhas: os pulmes so afetados.
Homem: so o trato respiratrio e a pele.
1.4.2. ALERGIAS ESPECFICAS
1.4.2.1. POR LEITE
Bovinos da raa Jersey podem tornar-se alrgicos a casena de seu prprio leite. Se a
ordenha atrasada, a presso intramamria fora as protenas do leite de volta a circulao
provocando processos alrgicos, variando desde urticria at anafilaxia e morte.

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1.4.2.2.ALIMENTAR
30% das doenas de pele tem sido atribudas s dermatites alrgicas e sendo que 1% so
atribudas a alergenos ingeridos. As alergias alimentares causam sintomas clnicos no trato
digestivo e na pele. As reaes intestinais podem ser leves ou graves com vmitos, diarrias
algumas vezes hemorrgicas, que ocorre logo imediatamente aps a alimentao. As reaes de
pele nos ces ocorem de forma papular e eritematosa, ocorrendo principalmente nas patas, olhos,
orelhas, axilas e perneo. Estas reaes so associadas com prurido que podem ser contaminadas
secundariamente com bactrias, no ato de coar.
Os alimentos envolvidos geralmente so protenas, como os laticneos, carnes de peixes,
galinha, bovina, ovos, trigo. Para os sunos, a carne de peixe e a alfafa tm sido associadas com
alergias. Para equinos, aveia e alfafa.
1.4.2.3.INALANTES
Dermatites atpicas com intenso prurido em qualquer parte do corpo podem ser encontradas
em ces sensibilisados. Os alergenos podem ser fungo (bolor), plen, poeira e caro domstico, l e
outros.
Os ces e gatos podem apresentar tambm urticria nasolacrimal, bronquioconstrio, asma
e dispnia, similar ao observado no homem.
Nos bovinos, renites alrgicas com intenso prurido nasal, corrimento nasal, dispnia,
descarga nasal mucosa e lacrimejamento excessivo. Os alergenos podem ser os fungos e uma
variedade de plantas. Nos bovinos os fungos encontrados no capim brachiaria, quando ingeridos
podem levar a alteraes hepticas e leses na pele quando estes animais se expem ao sol. Esta
enfermidade chamada de fotosensibilizao e ocorre principalmente nos animais de pelagem
branca.
Nos equinos podemos observar a doena crnica obstrutiva pulmonar (COPD) ou palpitao
dos cavalos, devido provavelmente a hipersensibilidade bronquiopulmonar a alergenos inalantes. A
simples remoo dos cavalos dos estbulos contaminados permite uma rpida melhora dos animais,
no entanto, a manifestao alrgica reinicia aps o retorno dos animais para o mesmo local.
1.4.2.4.ALERGIAS A DROGAS E VACINAS
Uma resposta da IgE perigosa aps qualquer administrao de uma droga ou at mesmo
uma vacina. Severas alergias tm sido associadas com muitas vacinas, por exemplo: febre aftosa,
raiva, pleuropneumonia contagiosa bovina e outras. Alergias a antibiticos e hormnios tm sido
observadas em animais domsticos.
1.4.2.5. ALERGIAS A PARASITAS
Os benefcios da IgE foram inicialmente observados em sua ao contra os parasitas, como
um processo de auto-cura. Ex:
-Cestdeos causam urticrias e problemas pulmonares,
-Cisto hidtico de Dirofilaria immitis causa anafilaxia quando injetado em outro co,
-Picadas de insetos parasitas como moscas ou abelhas ou vespas,
-Pupa de Hypoderma bovis na pele de bovinos,
-Picadas de mosquitos como Culicoides, Simulium ,
-Sarcoptes sacabiei em ces e Otodctes cyanotis em gatos,
-Carrapato Boophilis microplus em bfalos.
1.4.3. DIAGNSTICO

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-Sintomas,
-Testes dermais com solues aquosas diludas de vrios alergenos,
-Teste de anafilaxia cutnea passiva (PCA),
-Mtodos sorolgicos para medir o nvel de IgE especfica como RAST e ELISA podem ser
usados, mas so pobres no diagnstico.
1.4.4. PREVENO E TRATAMENTO
Evitar a exposio ao alergeno e desensibilizao. A droga terapia consiste apenas em
conforto temporrio. As drogas podem ser os esterides (corticosterides) que reduzem a irritao
e a inflamao associadas com a aguda resposta alrgica. Corticosterides inibem a liberao de
fosfolipases da membrana celular, bloqueando a sntese de prostaglandinas e leucotrienos. No
entanto, os corticosterides so imunossupressivos e aumentam a susceptibilidade do animal as
infees. As drogas no esterides como cido acetilsaliclico e fenilbutazona so antagonistas de
leucotrienos e cininas. Progestinas sintticas e acetato de magestrol so potentes antiinflamatrios
em gatos, mas no em ces. Epinefrinas, isoprenalinas, salbutamol so algumas drogas tambm
usadas (estimulante de adrenoreceptor) e metoxamina e fenilefrina (inibidor de adrenoreceptor).
Estas drogas podem mimetizar a estrutura de mediadores ativos, que competitivamente bloqueam
receptores especficos. Os anti-histamnicos por outro lado, podem efetivamente inibir as atividades
das histaminas competindo com seus receptores (H1 e H2) nas clulas.
1.4.5.DESENSIBILIZAO
Na terapia da desensibilizao, o antgeno administrado na forma pura para estimular a
resposta imune, reduzindo tanto quanto possvel os riscos de choque anafiltico. A primeira injeo
contm somente muita pouca quantidade de alergeno. A dose vai aumentando gradativamente com
o tempo. Estas injees estimulam as clulas Th1 a produzirem interferons IFN que bloqueiam a
estimulao da sntese de IgE por Il-4 e aumentam a produo de IgG.
2.HIPERSENSIBILIDADE DO TIPO II
REAES CITOTXICAS
INTRODUO
Na hipersensibilidade do tipo II anticorpos so formados contra antgenos-alvo que so
determinantes normais ou alterados da membrana celular. A clula-alvo danificada ou destruda
por uma srie de mecanismos. Trs diferentes mecanismos mediados por anticorpos esto
envolvidos na hipersensibilidade do tipo II.
Reaes Mediadas pelo Complemento e Anticorpos. Nas reaes de hipersensibilidade do tipo
II mediadas pelo complemento, os anticorpos reagem com um componente da membrana celular,
levando fixao do complemento. Este processo ativa a cascata do complemento e leva lise da
clula ou opsonizao mediada por receptores para Fc ou C3b (Fig. 5A). A opsonizao culmina
na fagocitose e destruio da clula por macrfagos e neutrfilos que expressam receptores para Fc
ou C3b na superfcie. Este mecanismo afeta principalmente clulas sanguneas.

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Figura 5A: Ilustrao esquemtica de um mecanismo de dano causado por anticorpos na

hipersensibilidade do tipo II. (A) Reaes dependentes do complemento e anticorpos que levam
lise de clulas ou as tornam suscetveis fagocitose.
Outros exemplos de reaes de hipersensibilidade do tipo II com importncia clnica so
descritos a seguir.

Figura 5B e C: Ilustrao esquemtica de dois diferentes mecanismos dos danos causados por
anticorpos na hipersensibilidade do tipo II. (B) Citotoxicidade dependente de anticorpos e mediada
por clulas (ADCC). Clulas-alvo recobertas por IgG so mortas por clulas que possuem
receptores Fc especficos para IgG )p. Ex. Clulas NK, macrfagos). (C) Anticorpos especficos
para receptores causam um distrbio das funes normais do receptor. Neste exemplo, anticorpos
contra o receptor de acetilcolina impedem a transmisso neuromuscular na miastenia grave
(Benjamini et al., 2002).
Reaes Auto-imunes
Algumas pessoas produzem no decorrer de determinadas doenas infecciosas (e por outras

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razes ainda desconhecidas) anticorpos contra suas prprias clulas sangneas. Quando os
eritrcitos so o alvo, a ligao do auto-anticorpo antieritrocitrio diminui o tempo de vida dos
eritrcitos ou os destri atravs de mecanismos que envolvem hemlise ou fagocitose mediadas por
receptores para Fc e C3b. Este processo pode levar anemia progressiva quando a produo de
novos eritrcitos no consegue acompanhar a sua destruio.
Outro exemplo da destruio celular mediada por auto-anticorpos a prpura
trombocitopnica idioptica. Nesta doena, os anticorpos direcionados contra as plaquetas causam
a destruio das mesmas atravs do complemento ou de clulas fagocticas com receptores para Fc
ou C3b. A perda de plaquetas pode levar ao sangramento (prpura). De forma semelhante, autoanticorpos contra granulcitos so capazes de induzir a granulocitose, que predispe os indivduos
a vrias infeces. Por fim, anticorpos contra outros componentes teciduais podem ser gerados, tais
como o colgeno da membrana basal, causando a sndrome de Goodpasture, e contra
desmossomos, levando ao pnfigo vulgar.
Reaes Induzidas por Drogas
Algumas drogas agem como haptenos em algumas pessoas e se ligam a clulas ou a outros
componentes que circulam no sangue, induzindo a formao de anticorpos. A ligao desses
anticorpos com clulas recobertas com tal droga resulta em danos citotxicos. O tipo da patologia
depende do tipo de clula que ligou a droga. Por exemplo, a droga Serdomide (um sedativo) capaz
de se ligar a plaquetas e se tomar imunognica. Anticorpos formados ligam-se as plaquetas e
conseqente causam trombocitopenia (baixo nmero de plaquetas sanguneas). Esta alterao, por
sua vez, pode levar prpura (hemorragia na pele, nas mucosas, e em rgos internos) que
representa o principal problema da prpura trombocitopnica induzida por drogas. A retirada da
droga resulta no desaparecimento dos sintomas. Outras drogas, tais como cloranfenicol (um
antibitico), podem ligar-se a clulas brancas; fenacetina (um analgsico) e cloropromazina (um
tranqilizante) podem ligar-se a eritrcitos. A resposta imune contra estas drogas pode levar no caso
das clulas brancas agranulocitose (diminuio do nmero de granulcitos), e anemia hemoltica
no caso dos eritrcitos. A destruio das clulas-alvo nestes exemplos pode ser mediada por
qualquer um dos mecanismos anteriormente descritos: por citlise pela via do complemento, ou por
destruio das clulas por fagocitose mediada pelos receptores para Fce C3b.
3. HIPERSENSIBILIDADE DO TIPO III (mediada por complemento)
REAES DE COMPLEXO IMUNE
A formao do complexo imune pela combinao do anticorpo com o antgeno inicia uma
srie de processos biolgicos dos quais o mais importante o sistema complemento.
Em 1903, um pesquisador francs chamado Arthus imunizou coelhos com injees
intradrmicas repetidas de soro de cavalo. Aps algumas semanas ele observou que cada injeo
subseqente produzia uma reao mais grave no local do inculo. Primeiro ele notou um eritema
brando (vermelhido) e edema (acmulo de lquido) dentro de 24 horas aps a injeo. Estas
reaes desapareceram sem deixar conseqncias depois de 1 dia, mas injees subseqentes
produziam respostas edematosas mais graves, e aps a quinta ou sexta injeo, as leses se
tornaram hemorrgicas com necrose e dificilmente sararam. Este fenmeno, conhecido como
reao de Arthus, representa o prottipo das reaes de complexos imunes localizadas do tipo III,
ou reaes mediadas por agregados de anticorpos e antgeno. Ele distinto das reaes de
hipersensibilidade do tipo III causada por complexos imunes que circulam no sangue e produzem
efeitos patognicos sistmicos.
Independentemente da reao ser sistmica ou localizada, a ativao do complemento e o
acmulo de leuccitos polimorfo-nucleares representa importante componente nas leses tecidual
causadas por imunocomplexos. A formao destes imunocomplexos pode ser iniciada por antgenos

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exgenos como bactrias e vrus (ou, como no caso da reao de Arthus descrita anteriormente, por
injeo intradrmica de elevadas quantidades de protena no-prpria).
Sob condies normais, os complexos imunes na circulao so removidos por clulas
fagocticas. Alm disso, os eritrcitos que possuem receptores C3b podem ligar complexos que
fixaram o complemento e transport-los para o fgado, onde estes so removidos por clulas
Kupffer. Quando imunocomplexos de um determinado tamanho se formam em grandes
concentraes na circulao sangnea, estes podem ser depositados nos tecidos e iniciar vrios
eventos patognicos sistmicos. Por outro lado, estes complexos podem se formar em locais
extravasculares in situ, causando danos teciduais localizados. Um exemplo para este ltimo
processo se manifesta nas vrias doenas glomerulares, nas quais imunocomplexos se formam in
situ na membrana basal do glomrulo. Os mecanismos da leso observada em doenas mediadas
por imunocomplexos so os mesmos, independentemente da maneira como o depsito ocorre
(sistmico versus local). A fixao do complemento promovida pelos complexos imunes, a ativao
da cascata do complemento e a liberao de substncias biologicamente ativas (p. ex., as
anafilatoxinas C3a e C5a) representam o processo central na patognese dos danos teciduais. A
ativao do complemento leva a um aumento da permeabilidade vascular e estimula o recrutamento
de fagcitos polimorfonucleares que liberam enzimas lisossomais (p. ex., proteases neutras) capazes
de danificar a membrana basal do glomrulo.
3.1. MECANISMOS DE AO
Complexos imunes so capazes de desencadear uma variedade de processos inflamatrios:
Os complexos interagem com o sistema complemento para gerar C3a e C5a (anafilatoxinas).
Estes fragmentos do complemento estimulam a liberao de aminas vasoativas, como histaminas e
fatores quimiotticos de mastcitos e basfilos. C5a tambm quimiottica para basfilos,
eosinfilos e neutrfilos. Macrfagos so estimulados a liberar citocinas, particularmente TNF e
IL-1, que so muito importantes durante a inflamao.
Os complexos interagem diretamente com basfilos e plaquetas (via receptor Fc) para
induzir a liberao de aminas vasoativas. As aminas vasoativas liberadas de plaquetas, basfilos e
mastcitos causam retrao endotelial e desta forma aumenta a permeabilidade vascular permitindo
a deposio de complexos imunes na parede dos vasos sanguneos. Plaquetas so responsveis pela
formao de microtrombos. As plaquetas tambm podem estar envolvidas nas doenas dos
complexos imunes como glomeronefrites e artrites reumatides. Polimorfos nucleares so atrados
para o local atravs de C5a. Eles tentam fagocitar os complexos, mas so incapazes quando
localizados nas paredes dos vasos. Na grande maioria dos casos, estas clulas liberam enzimas
lizosomais, podendo causar danos nos tecidos.
3.2. PERSISTNCIA DOS COMPLEXOS
A persistncia do antgeno a uma infeco contnua ou a uma doena auto-imune leva a
doena do complexo imune. Os complexos imunes so normalmente removidos por clulas
mononucleares do sistema fagocitrio. Estes imunocomplexos so opsonizados com C3b aps a
ativao com o complemento e podem ser removidos atravs da fagocitose, particularmente no
fgado e no bao. A remoo feita atravs do receptor de complemento CR1 encontrado nas
hemceas de primatas. H cerca de 700 receptores CR1 por hemcea, o que facilita a alta avidez
destas clulas em se ligar aos imunocomplexos. Em primatas normais, as hemceas constituem um
mecanismo eficiente de eliminao de complexos do sangue. Os complexos so transportados para
o fgado e para o bao atravs das hemceas onde so removidos por macrfagos. Em situaes
onde ocorre contnua formao de complexos imunes, ocorre uma sobrecarga do sistema
dificultando a sua eficincia. Os complexos imunes podem persistir na circulao por prolongado
perodo de tempo, entretanto, a simples persitncia no nociva por si s. O problema somente
inicia quando os complexos so depositados nos tecidos. O sistema complemento rompe a ligao

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do antgeno/anticorpo e mantm o complexo solvel. Se ocorrer uma falha deste sistema, os
complexos grandes relativamente insolveis so depositados nos tecidos.
Tabela 1: Trs categorias de doenas do complexo imune
Causa
Infeo persistente
Autoimune
Antgenos inalantes

Antgeno
Microbial
Antgeno prprio
Fungo, plantas ou antgeno animal.

Local da deposio do complexo

rgos infectados
Rins, articulaes, artrias e pele.
Pulmes

3.2.1. DOENA SISTMICA CAUSADA POR COMPLEXOS IMUNES

A doena do soro representa o prottipo da doena sistmica causada por complexos
imunes. Na virada do sculo, von Piquet e Schick deram este nome aps observar as conseqncias
do tratamento de determinadas doenas, tais como difteria e ttano, com anti-soros produzidos em
cavalos. J se sabia que as patologias das infeces por Corynebacterium e Clostridium eram a
conseqncia da secreo de exotoxinas altamente nocivas para as clulas do hospedeiro. As
prprias bactrias no eram muito invasivas e no causaram efeitos graves. Portanto, a estratgia do
tratamento destas doenas consistiu na neutralizao rpida das toxinas antes que quantidades
capazes de matar o hospedeiro pudessem se fixar aos tecidos. A imunizao passiva atravs da
injeo de grandes quantidades de antitoxina pr-formada logo aps o diagnstico da doena iria
prevenir a morte causada pela toxina, uma vez que a imunizao ativa necessitaria de vrias
semanas para atingir nveis suficientes de anticorpo. Os animais de escolha para a produo da
antitoxina foram os cavalos que eram fceis de serem imunizados e produtores de grandes
quantidades de anti-soro. Hoje em dia sabemos que a administrao em grande quantidade de soro
heterlogo de uma espcie diferente leva no recipiente sntese de anticorpos contra a Ig noprpria. Esses anticorpos formam complexos de antgeno-anticorpo que causam os sintomas
clnicos observados na doena do soro. Esta forma de hipersensibilidade ganhou novamente
importncia em pacientes tratados com anticorpos monoclonais produzidos em camundongos ou
ratos contra neoplasias, rejeio de enxerto ou doenas auto-imunes.
A patognese da doena sistmica causada por complexos imunes pode ser subdividida em
trs fases. Durante a primeira fase, os complexos imunes antgeno-anticorpo se formam na
circulao. Em seguida, esses complexos so depositados em vrios tecidos, o que inicia a terceira
fase, onde ocorrem as reaes inflamatrias nos diversos tecidos (veja Fig. 6). Vrios fatores
determinam se a formao dos complexos imunes leva ao depsito no tecido e doena. Parece que
o tamanho dos complexos importante. Complexos extremamente grandes formados na presena
de excesso de anticorpos so rapidamente removidos da circulao por clulas fagocticas e,
portanto, so inofensivos. Complexos pequenos e intermedirios circulam por um perodo mais
longo e mostram uma avidez inferior para as clulas fagocticas. Portanto, complexos pequenos e
intermedirios tendem a ser mais patognicos do que os complexos grandes. Um segundo fator que
determina o desenvolvimento da doena a integridade do sistema fagocitrio mononuclear. Uma
disfuno intrnseca deste sistema aumenta a probabilidade da persistncia dos complexos imunes
na circulao. Como esperado, a sobrecarga do sistema fagocitrio com excesso de complexos
imunes tambm compromete a sua funo na eliminao de tais complexos da circulao. Por
razes no bem compreendidas, os rins, as articulaes, a pele, o corao e os pequenos vasos
representam os locais favorecidos para o depsito dos complexos. A localizao nos rins pode ser
explicada em parte pela funo de filtrao dos glomrulos.

14

Figura 6: Ilustrao esquemtica das trs fases seqenciais da induo da hipersensibilidade

sistmica do tipo III (causada por complexos imunes).
3.2.2. DOENA LOCALIZADA CAUSADA POR COMPLEXOS LMUNES
A prova experimental desta seqncia de eventos a deteco utilizando anticorpos
fluorescentes de antgeno, anticorpo e de vrios componentes do sistema complemento no local

15
dos danos parede do vaso. A necessidade da presena de ambos, complemento e granulcitos
foram mostradas em animais depletados do complemento (atravs do fator de veneno de cobra) ou
de neutrfilos (atravs de soro especfico para clulas polimorfonucleares). Estes animais formaram
os agregados de anticorpo e antgeno, mas no produziram os sinais caractersticos da reao de
Arthus. Mais recentemente, experimentos feitos com camundongos knockout para o receptor Fc de
IgG e para o gene do receptor da anafilatoxina C5a interrompido (C5aR) demonstraram que esses
dois receptores possuem um papel dominante na reao de Arthus.
Doena Causada por Complexos Imunes e Associada a Infeces
A febre reumtica uma doena que pode seguir uma infeco da garganta por
estreptococos do grupo A e envolve a inflamao e leso do corao, das articulaes e dos rins.
Anticorpos contra vrios antgenos da parede celular e das membranas dos estreptococos reagem
em humanos com antgenos presentes no msculo cardaco, na cartilagem e na membrana basal dos
glomrulos. Supe-se que os anticorpos contra os antgenos dos estreptococos se ligam a estes
componentes do tecido normal e induz a resposta inflamatria atravs de uma via semelhante quela
descrita anteriormente. Este fator um auto-anticorpo do tipo IgM que liga a poro Fc de IgG
normal, e os complexos de imunoglobulina formados causam a inflamao das articulaes e os
danos caractersticos para esta doena.
Em determinadas doenas infecciosas (malria, hansenase e algumas infeces virais)
existem momentos durante o decurso da infeco em que coexistem grandes quantidades de
antgeno e anticorpo que causam a formao de agregados que so depositados em vrios locais.
Portanto, os sintomas complexos observados nessas doenas podem incluir um componente que
resulta de uma reao de hipersensibilidade do tipo III.
4. HIPERSENSIBILIDADE DO TIPO IV (Celular e mediada por linfcitos Th)
A reao de hipersensibilidade do tipo IV (tardia) leva mais do que 12 horas para se
desenvolver e envolve reaes de imunidade celular. No entanto, esta afirmao j est um pouco
ultrapassada, porque algumas reaes do tipo I algumas vezes levam de 12-24 horas para se
manifestarem. Por exemplo, a reao mediada por IgE que apresenta um pico 12-24 horas aps o
contato com o alergeno.
Ao contrrio das outras hipersensibilidades, a do tipo IV no pode ser transferida de um
indivduo a outro pelo soro, mas pode ser transferida por linfcitos T (Th1). Entretanto nem sempre
h uma correlao entre este tipo de hipersensibilidade com proteo imune. Os linfcitos Th, neste
caso, atuam recrutando clulas para o local sensibilizado. Ver Figura 6.
H trs variantes deste tipo de hipersensibilidade:
- Hipersensibilidade de contato. Reao ocorre de 48 a 72 horas.
- Tuberculina. Reao ocorre tambm de 48 a 72 horas.
- Granulomas. Os granulomas desenvolvem dentro de 21-28 dias. Os granulomas so
formados pela agregao e proliferao de macrfagos.

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Figura 6: Reao do tipo IV. O estgio de sensibilizao pelo antgeno envolve a apresentao deste
s clulas apresentadoras de antgenos, levando secreo de citocinas e diferenciao de clulas
TH1. O desafio com o antgeno para clulas TH1 por clulas apresentadoras de antgeno, levando
ativao de TH1, secreo de citocinas e recrutamento e ativao de macrfagos.
4.1. HIPERSENSIBILIDADE DE CONTATO
A hipersensibilidade de contato caracterizada por um eczema no ponto de contato do
alergeno (Figura 8).
A poro imunologicamente ativa destes agentes o hapteno. Haptenos so pequenos
demais e com peso molecular inferior a 1kDa para serem antignicos, mas que quando penetram na
epiderme e conjuga-se, muitas vezes covalentemente, com protenas do corpo, tornam-se
antignicas.
A hipersensibilidade de contato primariamente uma reao epidermal e a clula dendrtica
de Langerhans localizada na epiderme a principal clula apresentadora de antgeno. Estas clulas
so originrias da medula ssea e expressam CD1, MHC II e receptores Fc para anticorpo. As
clulas de Langerhans so consideradas como as principais clulas apresentadoras de antgeno. No
entanto, o mecanismo de como os antgenos so processados no seu interior desconhecido.
Keratcitos so clulas que proporcionam a integridade da epiderme e tem um papel
importante na imunologia epidermal. Elas expressam MHC II e ICAM-1 na membrana celular.
Elas tambm liberam citocinas como IL-1, IL-3, IL-6, IL-8, GM-CSF, TNF, TGF e TGF. IL-3
pode ativar clulas de Langehrans, co-estimular respostas proliferativas, recrutar mastcitos e
induzir a secreo de citocinas imunossupressivas (ex: IL-10 e TGF).
A hipersensibilidade de contato apresenta duas fases:
1) Sensibilizao, que induz a produo de linfcitos T de memria (CD4+).
2) Provocao, que envolve o recrutamento de linfcitos TH (CD4+) e moncitos.

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Figura 7: (A) reao de hipersensibilidade imediata do tipo I aparncia geral mostrando a reao
de urticria com placas inchadas e vermelhas. (B) Reao de hipersensibilidade imediata aspecto
histolgico mostrando edema dermal com eosinfilos ocasionais.
4.2. REAO DE TUBERCULINA
Esta forma de hipersensibilidade foi originalmente descrita em pacientes com tuberculose
quando injetados subcutaneamente com antgenos tuberculina (antgenos derivados de bacilos
tuberculosos). Uma rea endurecida e inchada desenvolve no local da injeo.
O teste de tuberculina na pele um exemplo de resposta ao antgeno solvel previamente
encontrado durante a infeco. um teste de diagnstico da tuberculose. Aps o desafio com
tuberculina em um indivduo sensibilizado, os linfcitos T especficos so estimulados a secretarem
citocinas e atuarem sobre clulas endoteliais de vasos sanguneos dermais a expressarem molculas
com E-selctina, ICAM-1 e VCAM-1. Ocorre inicialmente o influxo de neutrfilos que substitudo
12 horas aps por moncitos e linfcitos T.
Moncitos constituem 80-90% do infiltrado celular total. Linfcitos e macrfagos
expressam MHC-II e isto aumenta a eficincia de macrfagos ativados como APC. Macrfagos so
considerados as principais clulas da reao de tuberculina, embora clulas de Langerhans podem
tambm estarem envolvidas.
A leso da tuberculina normalmente pode desaparecer ao redor do 5-7 dia, mas a
persistncia do antgeno nos tecidos pode desenvolver granulomas.

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Figura 8: (A) reao de sensibilidade por contato do tipo IV aparncia geral de reao hera
venenosa. (B) reao de hipersensibilidade por contato do tipo IV aspecto histolgico mostrando a
formao intra-epitelial de bolhas e o infiltrado mononuclear na derme.(C) reao cutnea
basoflica mostrando os basfilos e algumas clulas mononucleares 24 horas aps o teste da pele.
4.3. HIPERSENSIBILIDADE GRANULOMATOSA
Hipersensibilidade granulomatosa clinicamente a forma mais importante de
hipersensibilidade do tipo IV e causa muito dos efeitos patolgicos da doena que envolve a
imunidade mediada por linfcitos T. Isto usualmente resulta da presena persistente de
microorganismos ou outras partculas dentro de macrfagos, que so incapazes de destru-los. Isto
pode tambm ser causado por imunocomplexos persistentes.
A aparncia histolgica da reao do granuloma diferente da reao de tuberculina.
As clulas epiteliides e as clulas gigantes so tpicas de hipersensibilidade granulomatosa.
Clulas epiteliides so clulas grandes e achatadas com retculo endoplasmtico aumentado. Elas
so derivadas de macrfagos ativados sob estmulo crnico de citocinas; eles continuam a secretar
TNF e assim potenciar a inflamao. As clulas gigantes so formadas pela fuso de clulas
epiteliides para formar clulas multinucleadas. Os muitos ncleos no esto no centro da clula.
As clulas gigantes so desta forma um estgio terminal de diferenciao da linha

19
moncito/macrfago. Em algumas doenas, como a tuberculose, a rea central pode estar
necrosada e com completa destruio de toda arquitetura celular. Circundando o centro da leso
constituda de macrfago/epiteliide h linfcitos e tambm fibrose (deposio de fibras colgenas)
causada pela proliferao de fibroblasto e sntese de colgeno aumentada.
H muitas doenas crnicas no homem e nos animais que se manifestam como
hipersensitividade do tipo IV. A maioria agente infeccioso, como as micobactrias, protozorios e
fungos, mas outros como e doena de Crohn, nenhum agente infecioso foi estabelecido.
Hipersensibilidade granulomatosa encontrada em muitas doenas importantes como:
- Lepra,
- Tuberculose,
- Schisotosomose,
- Sarcoidoses,
- Doena de Crohn.

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II. VACINA E VACINAO

1. INTRODUO:
Os animais podem ser protegidos contra agentes infecciosos de duas formas: Eles podem ser
expostos s doenas ou serem imunizados artificialmente atravs de soros imunes ou de vacinas.
Com relao vacinao dois critrios devero ser atendidos:
Que a resposta imune produzida proteger os animais da doena em questo, ter a certeza de
no haver risco do animal contrair a doena induzida pela vacina.
Outro aspecto importante que a vacinao deve ser eficaz no nvel de populao e no
simplesmente a nvel individual.
2. TIPOS DE IMUNIZAO:
2.1. PASSIVA:
2.1.1. SORO IMUNE
A imunizao passiva aquela que produz resistncia temporria, atravs da transferncia
de anticorpos de um animal resistente a um susceptvel.
A imunizao passiva pode ser atravs do colostro materno ou do soro imune obtido de um
animal imunizado ativamente contra uma grande variedade de patgenos. Ex: soro imune para
bovino contra carbnculo, para ces contra cinomose, para felinos contra panleucopenia, e contra
sarampo para o homem. Soro produzido para proteo contra Clostridium tetani e C. perfringens
so produzidos en cavalos.
Anticorpos monoclonais (Mab) so outra fonte de proteo passiva aos animais. No entanto,
estes anticorpos so produzidos a partir de hibridomas anti-camundongos e desta forma so
imunoglobulinas de camundongos e iro estimular uma resposta imune a animais de outra espcie.
Hoje, uma nova tcnica foi desenvolvida para produzir Mab de clulas de animais domsticos
(xenohibridomas) e podero ser teis no controle de doenas infecciosas.

Figura 9: Concetrao srica de antitoxina tetnica IgG humana e eqina, aps a administrao em
humanos. (Benjamini et al, 2002).

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Figura 10: O destino da IgG humana e eqina aps administrao em humanos. (Benjamini et al,
2002).
2.1.2. COLOSTRO E PLACENTA
Neonatos e fetos so imunocompetentes, entretanto, a induo da imunidade ativa aps o
nascimento leva em torno de 7 a 10 dias. A aquisio de imunoglobulinas atravs da placenta ou do
colostro proporciona proteo passiva neste perodo crtico. IgG a imunoglobulina mais
importante no colostro de bovinos e equinos e IgA para sunos e humanos.
O transporte de imunoglobulinas atravs da parede intestinal limitada s 12-24 horas aps
o nascimento, na maioria das espcies. Aps este perodo, ocorre uma ocluso do epitlio intestinal
e as imunglobulinas ingeridas pelos animais so degradadas e no absorvidas.
Os anticorpos adquiridos passivamente podem interferir com a induo da imunidade ativa
adquirida por infeces subclnicas ou pela vacinao.

Figura 11: Concentrao de imunoglobulina no soro durante o desenvolvimento humano

(Benjamini et al, 2002).

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Tabela 2: Nveis de Inumoglobulinas no Colostro.

2.2. ATIVA (VACINAS)

A imunizao ativa tem vrias vantagens em relao a passiva: Um perodo de proteo
prolongado e uma resposta protetora a infeco.
Uma boa imunizao ativa aquela produzida por uma vacina com forte imunidade e com
os mnimos efeitos colaterais.
A vacina ideal aquela que deve ser barata, estvel, adaptvel a um populao, estimular o
sistema imune e proprcionar a erradicao da doena em questo.
Alm disso, a vacina para ser efetiva ela deve obedecer a quatro propriedades principais:
Estimular as clulas apresentadoras de antgenos (APC), para o processamento, a
apresentao do antgeno e a liberao de citocinas.
Estimular linfcitos T e B e gerar anticorpos e clulas de memria.
Estimular linfcitos Th e Tc para diferentes epitopos do antgeno e a sntese MHC II por
APC.
O antgeno deve persistir em locais apropriados nos tecidos linfides de forma que as clulas
produtoras de anticorpos possam ser produzidas por perodos prolongados.

Figura 12: Um diagrama esquemtico mostrando alguns dos diferentes modos no qual o virus e seus
antgenos podem ser tratados para produzir vacinas (Tizard, 1996).
2.2.1. TIPOS DE VACINAS:
A. VIVAS E ATENUADAS
Infelizmente, dois dos principais pr-requisitos de uma vacina ideal so inconpatveis: alta

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antigenicidade e ausncia de efeitos colaterais. Assim organismos vivos, especialmente vrus,
atuam como antgenos endgenos e desencadeiam principalmente uma resposta celular a nvel de
Tc, mas podem ser perigosos e apresentarem uma virulncia residual. Os organismos mortos, por
outro lado, atuam como antgenos exgenos e so processados principalmente por clulas Th CD4+.
Esta pode no ser a melhor resposta, mas a mais segura.
Uma estratgia para usar-se um patgeno vivo atravs da atenuao de sua virulncia de
forma que no possa mais causar a doena.
Os mtodos mais comuns de atenuao consistem em adaptar um organismo em condies
no usuais de forma que eles possam perder o poder de adaptao no seu hospedeiro usual.
Exemplo vacina BCG (bacilo Calmette-Gurin) do Mycobacterium bovis, mantido em bile
saturada como meio de cultura. O bacilo anthrax, da mesma forma perde sua virulncia quando
mantido em meio de cultura a base de agar e soro e uma atmosfera rica em CO2.
Os vrus tambm podem ser atenuados atravs de passagens em outras espcies animais que
no aquelas naturais para o parasitismo. Exemplo o vrus da raiva, que pode ser atenuado por
prolongada passagem em ovos de galinha, perdendo sua virulncia para ces e gatos. Outro mtodo
para atenuao de vrus mante-los em cultivo celular. Exemplo o vrus da cinomose cultiva
clulas renais ao invs de clulas linfides.
B. INATIVADAS (MORTAS)
Um organismo inativado para se usado como vacina deve reter a antigenicidade similar ao
do organismo vivo.
Muitas vacinas em uso contem bactrias mortas ou toxinas inativadas (toxoides).
Algumas vacinas contra Pausteurella haemolytica contem a bactria morta e a toxina
inativada.
Vantagens da vacinas vivas:
So necessrias apenas poucas doses.
desnecessrio o uso de adjuvantes.
Pouca chance de hipersensibilidade.
Induo de interferon.
Relativamente baratas.
Vantagens de vacinas inativadas:
Estveis.
Improvvel virulncia residual
Improvvel conter organismos contaminantes.
C. - OUTROS MTODOS.
Novas tcnicas tm sido desenvolvidas como aquelas produzidas atravs da engenharia
gentica. A novas vacinas produzidas por engenharia gentica so classificadas em 3 categorias:
-Categoria I: atravs da tcnica do DNA recombinante, onde grande quantidade de
antgeno purificada. O DNA do antgeno de interesse inicialmente isolado, em seguido
inserido em uma bactria (Echerichia coli), bacterifago, levedura ou outra clula para o antgeno
recombinante ser expresso. A vacina contra o vrus da febre aftosa j pode ser preparada desta
forma. No entanto, a vacina produzida requer uma dose 1000 vezes maior para reter a mesma
imunogenicidade. Uma vacina recombinante comercialmente disponvel no comrcio aquela
contra o vrus da leucemia felina virtica. O envelope protico deste vrus o antgeno responsvel
por imunidade dos animais. Esta protena quando clonada pode ser recombinada e purificada e
quando adicionada ao adjuvante (saponina) pode ser usada como vacina.
Esta tcnica til para sintetizar grande quantidade de protena pura de antgenos. No
entanto, infelizmente, protenas puras so antgenos pobres principalmente por no serem
apresentadas por MHC.

24
-Categoria II: Organismos geneticamente atenuados:
O objetivo desta tcnica o desenvolvimento de uma cepa de organismo em que falta a sua
abilidade em causar doena. Atravs da tcnica de engenharia gentica possvel modificar os
genes do organismo para que ele se torne irreversivelmente atenuado.
Vacinas deste tipo j esto sendo desenvolvidas contra o herpevrus que causa a pseudoraiva
suna. Deste vrus retirada a enzima timidina kinase (TK) responsvel para o seu replicamento em
clulas nervosas do hospedeiro.

Figura 13: A produo da protena viral recombinante, no caso do vrus Febre Aftosa, VP1 para uso
como vacina (Tizard, 1996).
- Categoria III: Organismos vivos recombinantes:
Genes que codificam protenas podem ser clonados diretamente em uma variedade de
organismos, e ao invs de serem purificados, os organismos recombinantes podem ser usados como
vacinas. O organismo que tem sido usado com esta finalidade o vrus vaccinia (vetor). Este
vrus fcil de ser administrado atravs da aplicao dermal ou por ingesto. Devido o grande
genoma deste vrus possvel de inserir nele um novo antgeno.
Um exemplo deste tipo de vacina o vrus vaccinia sendo utilizado como vetor do gene da
raiva (uma glicoprotena do envelope virtico ou protena G). Infeco com esta vacina resulta na
produo de anticorpos a protena G e o desenvolvimento da imunidade. Esta vacina tem sido usada
com sucesso atravs da administrao oral a carnvoros selvagens na forma de isca distribuda
atravs de avio.
A primeira vacina deste tipo aprovada pelo Departamento de Agricultura dos Estados
Unidos a de Newcastle. O vetor o vrus da varola aviria, onde os gens da doena Newcastle
so incorporados. Esta vacina produz proteo contra Newcastle e varola aviria.
D.-DNA N (NAKEDDNA)
uma tcnica de vacinao que envolve a injeo no somente do antgeno protico, mas de
um pedao de DNA purificado contendo o gene para o antgeno de interesse. Neste caso, o DNA
codificador de um antgeno viral pode estar unido a um plasmdeo, um pedao circular de DNA de
bactria, que atua como vetor, e injetado no animal. Este DNA que adquirido pela clula animal
alcana o ncleo e seus gens so expressos. Os produtos destes gens so reconhecidos e tratados
como antgenos endgenos e serem apresentados na superfcie de clulas processadoras de
antgenos. Este processo tem desencadeado uma boa resposta imune protetora. Imunizao com o
DNA purificado permite a apresentao dos antgenos virais na sua forma nativa semelhantes

25
queles sintetizados durante a infeco.

Figura 14: A maneira pelo qual a vacina de DNA pode funcionar (Tizard, 1996).
E.- PEPTDEOS SINTTICOS
Embora as protenas sejam molculas complexas, muitas vezes, apresentam um nmero
limitado de epitopos importantes na induo da imunidade protetora. Desta forma, se a estrutura do
epitopo conhecida (peptdeo), ele pode ser sintetizado quimicamente e ser utilizado como vacina.
Vacinas sintticas experimentais tm sido desenvolvidas contra hepatite B, difteria, febre aftosa e
influenza. Outra vacina em desenvolvimento da parvovirose canina. Esta vacina considerada
muito mais segura, mas tambm muito mais cara.
F. Tipos de Vacinas
VIRAIS
1) Vacinas vivas atenuadas: sarampo, caxumba, plo, rubola e varicela.
2) Vacinas inativadas (mortas): plio, influenza, raiva.
3) Vacinas de subunidades (sintticas): hepatite B, nfluenza.
BACTERIANAS
1) Vacina viva atenuada: BCG (Bacilo Calmette-Gurin).
2) Vacina inativada (morta): coqueluche, febre tifide.
3)Vacina de subunidade/toxina: ttano, influenza tipo B, meningite, difteria.
3.ADMINISTRAO DE VACINAS
3.1. ADJUVANTES
Na tentativa de se produzir vacinas usando-se organismos inativados necessrio aumentar
a sua resposta imune utilizando-se adjuvantes. Os adjuvantes promovem a imunogenicidade
mantendo o antgeno em locais onde eles possam estar acessveis aos linfcitos, induzirem clulas
APC a apresentarem antgenos e expressar outras molculas estimulatrias.
Um adjuvante muito usado o de Freund que uma emulso gua-leo. O leo estimula
uma resposta inflamatria local crnica resultando em um granuloma ao redor do inculo. A
eficcia deste adjuvante aumentada muito se adicionar bacilo da tuberculose morto (adjuvante
completo). Neste caso ele no s fornece um depsito de antgeno, mas tambm atua sobre
macrfagos para a produo de citocinas.

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Comercialmente, um adjuvante amplamente utilizado o hidrxido ou sulfato de almen
(sais insolveis). Estes adjuvantes so produzidos em forma de uma suspenso coloidal no qual o
antgeno adsorvido.

Figura 15: Adjuvantes e os meios pelos quais podem ativar macrfagos para estimular a resposta
imune reduzida pela vacina (Tizard, 1996).
3.2. VACINAS MISTAS
o emprego de uma mistura de organismos em uma simples vacina. Estas misturas podem
ser usadas quando o diagnstico exato no possvel e pode proteger os indivduos contra uma srie
de doenas. Os ces, por exemplo, podem ser vacinados contra as seguintes enfermidades:
cinomose, parvovirose, hepatite infecciosa, parainfluenza, leptospirose e raiva.
Estudos feitos com vacinas polivalentes falharam em demonstrar as desvantagens do uso
destas vacinas. No entanto, todas as vacinas polivalentes devem ser testadas para se assegurar de
sua eficcia. As vacinas devem ser licensiadas e serem provenientes de fabricantes idneos, para
proporcionar uma proteo satisfatria contra todos os componentes.
3.3. ESQUEMAS DE VACINAO
No conveniente vacinar recm-nascidos que esto sob proteo dos anticorpos maternos.
A imunizao aps o nascimento s efetiva aps o desmame. conveniente vacinar recm
nascidos pelos menos duas vezes neste perodo.
O intervalo entre as vacinaes varia com o tipo de vacina. As vacinas inativadas produzem
imunidade fraca e precisam ser frequentemente revacinadas. As vacinas vivas podem requerer
somente uma vacinao ou serem repetidas a cada 2 ou 3 anos.
3.4. AVALIAO DA VACINA
Para avaliar a eficcia de uma vacina em teste, necessrio desafiar o animal aps a
vacinao. A vacina avaliada atravs de um ndice chamado frao de preveno (PF), calculado
da seguinte forma:

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PF = (% de animais controles mortos - % de animais vacinados mortos)
% de animais controle mortos
Uma boa vacina deveria ter pelo menos um ndice superior a 80%.
4. FALHAS NA VACINAO
H muitas razes para uma vacina no conferir uma boa imunidade ao homem e aos
animais.
A. FATORES DOS HOSPEDEIROS

Anticorpos maternais;
Imunodeficincias e imunossupresso ;
Gravidez;
Idade (muito novo ou muito velho);
Febre, hipotermia;
Doena em incubao;
Drogas (citotxicas, glicocorticides);
Anestesia/antibiticos?;
Genticos.

B. FATORES DA VACINA

Estocagem imprpria;
Inativao durante o manuseio;
Desinfetantes usados nas seringas ou agulhas;
Cepa errada do patgeno usada na vacina;
Adjuvante inadequado;
Pouco ou muito antgeno;
Cepa no imunognica ou atenuada demais;
Vacina de pobre qualidade.

C. FATORES HUMANOS

Dose parcial da vacina;

Mistura errada ou imprpria;
Uso concomitante de drogas imunosupressoras;
Uso simultneo com soro imune;
Administrao muito frequente (<2 semanas) ou intervalos muito longos entre as aplicaes
(>8 semanas);
Desinfetante na pele;
Esquema de vacinao imprprio;
Rota errada de administrao;
Vacina errada.

5. REAES ADVERSAS DAS VACINAS

O uso de vacinas no desprovido de riscos. Virulncia residual, toxicidade, efeitos
alrgicos, doenas em animais imundeficientes, complicaes neurolgicas e efeitos nos fetos so

28
os mais importantes riscos associados com o uso de vacinas.

29

III-TCNICAS IMUNOLGICAS
Aglutinao
Imunodifuso
Eletroforese e imunoeletroforese
Mtodos imunoqumicos e fsico-qumicos
Radioimunoensaio
Tcnicas imunohistoqumicas
Imunofluorescncia
Imunoblot
Citometria de fluxo
Fixao de complemento
1. IMUNODIFUSO
Reao antgeno-anticorpo e precipitao em um meio semi-slido (gelificado) como o gar
ou agarose.
Antgenos solveis.
A precipitao mxima ocorre na zona de equivalncia.
Precipitao subtima ocorre com excesso de anticorpo (prozona) ou com excesso de
antgeno.
Dois tipos:
1) Simples: anticorpo fixo e o antgeno se move
2) Dupla: antgeno e anticorpo se movem (radial ou linearmente) Aplicao: quantificao
de protenas do soro (imunoglobulinas sricas), anemia infeciosa equina e outras.
Difuso dupla em gar: Tcnica de Ouchterlony

IMUNODIFUSO RADIAL

30

2. IMUNOELETROFORESE
A imunoeletroforese combina difuso por separao eletrofortica com a precipitao imune
de protenas.
Identifica e quantifica protenas individuais presentes no soro, urina ou outro fludo
biolgico.Ex: o soro ou urina ou fludo so os antgenos a serem analisados e o anticorpo o antisoro. Aplicaes: diagnstico de proteinemias

31

3. AGLUTINAO
So tcnicas semiquantitativas.
Antgenos particulados e insolveis (bactrias ou eritrcitos) ou partculas cobertas com
antgenos.
A reao detectada apenas visualmente pela aglutinao (formao de grumos).
Bom grau de sensibilidade.
Tcnicas diretas ou indiretasDireta simples: uma clula ou um antgeno aglutinado
diretamente pelo anticorpo. Eritrcitos, bactrias, fungos e outras espcies microbianas podem ser
diretamente aglutinados pelo anticorpo. Ex: eritrcito do grupo A aglutinado pelo anticorpo anti-A.
Indireta: Antgenos solveis que podem ser passivamente adsorvidos ou quimicamente acoplados a
eritrcitos ou outras partculas inertes.

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Aglutinao

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4. FIXAO DE COMPLEMENTO
A fixao de anticorpo ocorre durante a interao de antgeno com o anticorpo.A fixao de
complemento pode ser usado in vitro para detectar e medir anticorpos, antgenos ou ambos.
Duas etapas:
1) O antgeno e o anticorpo reagem na presena de uma quantidade conhecida de complemento e o
complemento fixado (consumido).
2) A atividade hemoltica do complemento detectada e avaliada para quantificar a concentrao do
antgeno ou do anticorpo presente na mistura inicial.
Eritrcitos so os marcadores da reao: hemlise.
So testes complexos e demorados.

InterpretaoQuando NO ocorrer lise das hemcias indica que o soro teste apresentava
anticorpos contra o antgeno testado.
5. TESTES IMUNOQUMICOS E FSICO-QUMICOS
Ultracentrifugao
Cromatografia em coluna
Viscosidade srica
5.1 ULTRACENTRIFUGAO
A aplicao da fora centrfuga s molculas em soluo produz uma velocidade de
sedimentao dependente de seu tamanho, massa e densidade relativa ao solvente.
Este
mtodo demonstrou a presena das diferentes classes de imunoglobulinas.
Componentes
individuais podem ser obtidos aps separao com ultracentrifugao, onde diversas fraes so
coletadas camada por camada.
5.2. CROMATOGRAFIA EM COLUNA
Fracionamento de protenas e o isolamento de imunoglobulinas. A amostra colocada em
um cilindro ou coluna de vidro cheia de um gel sinttico, e flui atravs do gel. As caractersticas
fsicas das molculas proticas resultam em reteno na matriz de gel em graus diferentes.
5.2.1. CROMATOGRAFIA POR TROCA INICA:
Separa protenas aproveitando as diferenas de suas cargas eltricas.
5.2.2. GEL FILTRAO:
Separa as molculas de acordo com seu tamanho. O gel feito de partculas porosas de
dextran. Protenas maiores no penetram nos poros do gel e so eludas primeiro.
5.2.3. CROMATOGRAFIA POR AFINIDADE. Interaes biolgicas especficas e reversveis
entre o material do gel e a substncia a ser isolada.A ligao antgeno-anticorpo uma das reaes
que podem ser aplicadas. Um antgeno acoplado a uma matriz insolvel, tal como a Sepharose e
uma mistura de anticorpos passada atravs da coluna. O anticorpo que se liga ao antgeno fica
preso na coluna.
6. RADIOIMUNOENSAIO (RIE)
Para dosagem de microquantidades de compostos clinicamente relevantes, principalmente na
endocrinologia. (drogas e outras molculas pequenas como os hormnios esterides e haptenos).

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Detecta at picogramas da molcula (10-12 ).
Tcnica:1) Produzir o anti-soro em espcie heterloga (coelho ou cobaio). Se o antgeno (X) for
hapteno este deve ser conjugado a um carreador (gama globulina bovina- BSA)
2) O antgeno radiomarcado, geralmente com I125. (X*).
3) X* reage com o anticorpo (anti-soro) em 70%.
4) A droga ou hormnio a serem testados (X) colocado juntamente com X* and anti-X em
quantidades conhecidas e variveis. Ocorre competio pelo local de ao no anticorpo.
5) Deixar em incubao.
6) A concentrao de X* ligado ao anticorpo medida em aparelho prprio para detectar
radioatividade da soluo.
7) Quando todo X* liga-se ao anticorpo anti-X e o X no, estes complexos imunes precipitam e o
sobrenadante no apresenta reatividade.
8) Quando X liga-se tambm ao anticorpo e compete com o X*, nem todos os X* se ligaro, alguns
X* ficaro solveis no meio e desta forma aparecer reatividade no sobrenadante.
9) construdo uma curva padro de concentrao conhecida que permitir o conhecimento da
concentrao de X ligada ao anticorpo.
7. TCNICAS IMUNO-HISTOQUMICAS
7.1. IMUNOFLUORESCNCIA
uma tcnica citoqumica ou imunohistoqumica para localizao ou deteco de antgenos
em tecidos ou clulas.Um anticorpo especfico (anti-soro) conjugado com compostos
fluorescentes. O anti-soro conjugado adicionado a clulas ou tecidos e fixado aos antgenos
presentes.
A reao observada em microscpio de fluorescncia. Os antgenos ligados a
anticorpos fluorescentes podem ser detectados em virtude da cor brilhante dos anticorpos.
Fluorocromos: fluorescena (isotiocianato de fluorescena - ITCF- produz cor verde no
campo de onda de 517 nm) e rodamina (tetrametilrodamina - produz cor vermelha entre 550 a 580
nm).
Tcnicas diretas, indiretas e semiquantitativas.
Aplicao:
Deteco
de
clulas,
imunoglobulinas, complemento, microrganismos, cromossomos, clulas neoplsicas, hormnios,
enzimas, parasitas, etc.

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IMUNOFLUORESCNCIA

Protena: cido glutmico descarboxilase (GAG) sobre clulas beta das ilhotas de Langerhans no
pncreas (cor verde).
CROMATOGRAFIA POR AFINIDADE

7.2. ENZIMTICOS
Localizao de antgenos nos tecidos.
Anticorpos ligados a enzimas.
Princpios semelhantes ao da fluorescncia, mas com visualizao em microscpio de luz
branca comum.Enzimas conjugadas aos anticorpos: peroxidase, fosfatase alcalina, e outras.
Substrato cromognico da enzima. Aps a incubao do tecido com o anticorpo marcado
com a enzima, adicionado o substrato.
Na reao da enzima com o substrato produz uma cor que detectada atravs do
microscpio.
Mtodo Direto: Anticorpo primrio marcado com a enzima.
Mtodo indireto: Anticorpo secundrio (anti-IgG contra o anticorpo primrio) marcado
com a enzima.
8. MTODOS QUANTITATIVOS ENZIMTICOS
IMUNOENSAIOS ENZIMTICOS (ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY ELISA)
Tcnicas quantitativas para deteco de antgenos, haptenos ou anticorpos presentes em
soluo, no sangue, fludos corpreos e outros.
Quando o anticorpo for quantificado, o antgeno deve ser adsorvido a uma fase slida (placa
de poliestireno ou placas de ELISA). O anticorpo marcado enzimaticamente (fosfatase alcalina ou
peroxidase) e adicionado para encubar com o antgeno.
Em seguida o substrato cromognico da
enzima adicionado e na reao positiva ocorre a liberao de cor que medida em aparelho de
colorimetria (leitor de ELISA).
O mtodo pode ser direto ou indireto.
Direto: descrito acima.

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Indireto: Uso de anti-IgG contra o anticorpo primrio.
Competitivo
Sandwiche
Aplicaes: Inmeras
Tcnica sensvel, estvel e segura.

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ELISA

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9. WESTERN-BLOT (IMUNOBLOT)
O mtodo permite identificar um antgeno em uma mistura complexa de protenas.
A
primeira etapa envolve uma eletroforese do extrato protico, separando as protenas (antgenos) por
massa molecular e/ou carga eltrica.
A segunda etapa a transferncia das protenas para uma membrana imobilizante. Esta etapa
realizada pela justaposio da membrana com o gel e passagem de corrente eltrica, quando as
protenas so transferidas do gel para a membrana.A terceira etapa compreende a reao das bandas
antignicas (protenas) com o anticorpo primrio especfico no marcado, o anticorpo secundrio
marcado enzimaticamente ou radioativamente. A reao visualizada por cor (enzimtica) ou em
emulso fotogrfica (radioativa).
InterpretaoA visualizao de uma "banda" permite determinar a presena de anticorpos
especficos para um antgeno do extrato protico.
10. CITOMETRIA DE FLUXO
Identifica antgenos na superfcie de clulas e estas clulas podem ser identificadas e
contadas individualmente. Clulas so identificadas por anticorpos marcados pela fluorescncia.
As clulas so colocadas em tubos e em seguida passam por uma corrente de fluxo de
radiao laser. Atravs de computador especial, os sinais e as caractersticas das clulas so
captados e registrados (tamanho, granulosidade, cor).
WESTERN BLOT

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Citometria de Risco

11. BIBLIOGRAFIA CONSULTADA:

Benjamini, E.; Coico, R.; Sunshine, G. Imunologia, 4 ed. Guanabra Koogan. 2002, 288p.
Roitt, I.; Brostoff, J.; Male, D. Immunology. Mosby, 4ed. 1996.
Tizart, I. R. Veterinary Immunology. Mosby, 4ed, 1996, 531p.