Desafos en el desarrollo de anticuerpos contra Tn y sialil-Tn Antgenos

Resumen: Los antgenos de carbohidrato Tn y sialil-Tn (STN) se expresan en la mayora de carcinomas y

generalmente est ausente en los tejidos sanos. Estos antgenos se han correlacionado con la progresin del cncer y de
mal pronstico, y se asocia con un microambiente inmunosupresor. Actualmente se utilizan en ensayos clnicos como
la vacunacin teraputica, pero con un xito limitado debido a su baja inmunogenicidad. Alternativamente, los
anticuerpos anti-Tn y / o STN pueden usarse para aprovechar el sistema inmune contra las clulas tumorales. Mientras
que el desarrollo de anticuerpos contra estos antgenos han tenido un impulso hace dos dcadas para uso diagnstico,
hasta ahora no hay tal anticuerpo en ensayos clnicos. Limitaciones posibles son la baja especificidad y eficiencia de
los anticuerpos existentes y que los nuevos anticuerpos siguen siendo necesarias. La amplia gama de metodologas
disponibles hoy permitir el desarrollo de anticuerpos rpida y nuevos formatos. Tras la llegada de la tecnologa de
hibridoma, la inmortalizacin de clulas B humanas se convirti en una metodologa para obtener anticuerpos
monoclonales humanos con una mejor especificidad. Los avances en la biologa molecular, incluyendo la tecnologa
de presentacin en fagos para la seleccin de alto rendimiento, los ratones transgnicos y ms recientemente
anticuerpos manipulados molecularmente mejorando el campo de la produccin de anticuerpos. El desarrollo de
nuevos anticuerpos contra Tn y STN aprovechando tecnologas innovadoras y tcnicas de ingeniera puede dar lugar a
anticuerpos teraputicos innovadores para el tratamiento del cncer.
1. Introduccin
La expresin desquiciada de glicanos es una caracterstica del cncer. Los glicanos tales como los antgenos de
Thomsen-Friedenreich relacionados, Tn y sialil-Tn (STN), muestran un patrn muy especfico de tumor y, en muchos
tipos de cncer, que estn asociados con la progresin de la enfermedad y la respuesta del paciente al tratamiento. Por
tanto, estos antgenos han provocado entusiasmo entre la comunidad cientfica como biomarcadores de diagnstico y
pronstico. Se han desarrollado un nmero relevante de anticuerpos y se caracteriz para ser utilizados en protocolos
de tincin inmunohistoqumica. Sin embargo, el valor aadido de la identificacin de STn o Tn como biomarcadores
ha demostrado ser insuficiente, en comparacin con los protocolos estndar, para justificar su uso habitual en la
prctica clnica. Un segundo y ms pronunciada entusiasmo surgi con el desarrollo de inmunoterapias dirigidas a
estos antgenos para aumentar la respuesta inmune, es decir, la vacunacin. Sin embargo, el entusiasmo se abstuvo
rpidamente debido a los resultados de los ensayos clnicos sin xito. Hallazgos ms recientes han ayudado a
comprender que estos antgenos tienen potencial para amortiguar la respuesta inmune que nos obligan a revisar la
eficacia de los procedimientos de inmunizacin y la bsqueda de estrategias ms eficaces para el tratamiento de
tumores que expresan estos antgenos.
Curiosamente, los anticuerpos desarrollados contra estos antgenos se han considerado principalmente como
herramientas para el diagnstico y el pronstico. La explotacin de estos anticuerpos como herramientas
inmunoteraputicos para provocar respuestas inmunes anti-tumorales ha sido completamente ignorada. Aqu
revisamos los esfuerzos integrados para el desarrollo de anticuerpos contra antgenos de alta afinidad STN y Tn y las
metodologas implicadas. Una carpeta de corte borde de metodologa se describe aqu que se puede utilizar para
acelerar la produccin de anticuerpos ms eficaces o nuevas molculas diseadas basadas en anticuerpos como
inmunoterapias innovadoras contra STn o Tn.
2. La glicosilacin en Cncer
La glicosilacin es la modificacin postraduccional ms frecuente y bien conocida de las protenas. Los glicanos estn
presentes en todos los organismos vivos y regulan una diversidad de procesos biolgicos, incluyendo el plegamiento
de protenas y el trfico intracelular, de clula-clula y las interacciones clula-matriz, diferenciaciones celulares y la
respuesta inmune. La relevancia de glicosilacin se pone de relieve por el hecho de que aproximadamente el 1% -2%

de los genes humanos son necesarios para la biosntesis de glicanos, que es catalizada por la reaccin enzimtica de
varias enzimas que transfieren mono u oligosacridos, es decir, glicosiltransferasas, con su especificidad estricta para
donante y sustratos aceptores. En los seres humanos, las protenas pueden estar glicosilados con dos tipos principales
de glicanos: N-glicanos y O-glicanos. N-glicanos estn unidos covalentemente a travs de un enlace amida a la
asparagina en la secuencia de polipptidos, y por lo general implica la secuencia Asn-X-Ser / Thr (X? Pro). O-glicanos
son a menudo unidos covalentemente al grupo hidroxilo de una serina o treonina en el polipptido a travs de N
acetilgalactosamina (GalNAc).
conseguido por los niveles de expresin y la actividad de las diferentes enzimas que intervienen en el proceso de
glicosilacin Como la biosntesis de glicano no es un proceso basado en plantillas, tal como ADN, ARN, o sntesis de
protenas, la expresin de glicano depende del equilibrio, as como por su localizacin / organizacin, por ejemplo en
el retculo endoplsmico y aparato de Golgi, y sobre la disponibilidad de molculas precursoras de monosacridos.
A mediados de la dcada de 1990 hubo un pico de inters en la glicosilacin, porque se observ una correlacin
significativa entre ciertos tipos de glicosilacin alterado y el pronstico de cncer. De hecho, la glicosilacin aberrante
se produce con frecuencia en el cncer y juega un papel fundamental en la progresin del cncer, la angiognesis y la
metstasis, el contacto clula-clula, la motilidad y la transicin epitelial-mesenquimal (EMT) en las clulas
cancerosas. Estas alteraciones de glicosilacin comprende sub o sobre-expresin de estructuras de glicano, as como la
aparicin de estructuras nuevas o truncadas. Sin embargo, a pesar de la diversidad de glicanos en la superficie celular,
slo unas pocas estructuras distintas estn asociados con la transformacin maligna y la progresin del tumor. Esto
sugiere que los patrones de glicosilacin especficos contribuyen a mecanismos precisos como ganancia de funcin, la
aptitud y la supervivencia celular.
Uno de las glicosilaciones aberrantes ms comnes en el cncer es la neo-expresin de antgenos relacionados con
Thomsen-Friedenreich. Esta familia de O-glicanos incompletos (Figura 1) incluye: El Thomsen-nouveau antgeno
(Tn) ( GalNAc- 1-O-Ser / Thr), que consta de un residuo de GalNAc alfa-O-ligado a una serina o un residuo de
treonina en la cadena de polipptido; Thomsen-Friedenreich la (T) antgeno (Gal 1-3GalNAc- 1-O-Ser / Thr) o sin
modificar core-1 estructura, donde un residuo de galactosa (Gal) es -vinculada a GalNAc; el antgeno STn, en la que el
residuo GalNAc en el antgeno Tn es unido a un cido silico (Neu5Ac) en el carbono 6; y la sialil-T (ST), en el que el
residuo Gal en el antgeno T est unido a un Neu5Ac en el carbono 3 (Figura 1). La sialilacin de ambos antgenos Tn
y T bloquea el alargamiento adicional de ncleo-1 estructuras, con la excepcin de ST (es decir, monosialyl-T) que
todava se puede convertir en estructura disialyl-T.
Histricamente, el antgeno T se identific por primera vez en 1930 por Thomsen, en colaboracin con Friedenreich,
en una muestra de sangre contaminada por bacterias. Especficamente, la accin de la neuraminidasa bacteriana libera
el cido silico que cubra la cadena de glicano, exponiendo el antgeno T en las clulas rojas de la sangre, que luego
fueron reconocidas por anticuerpos anti T presentes en el suero, haciendo que la hemaglutinacin subsiguiente. La
expresin de los antgenos Tn y STN ms tarde fueron descubiertos en 1957 por Moreau en subpoblaciones de clulas
de la sangre que caracterizan una enfermedad hematolgica rara, el sndrome Tn.
Los antgenos de la familia Thomsen-Friedenreich han sido llamados inicialmente como antgenos oncofetales ya que
generalmente son precursores en cadenas normales-O glicanos complejos. Principalmente expresado en las clulas
epiteliales, la sobreexpresin de estos antgenos se ha reportado en varios tumores humanos diferentes, por lo general
debido a defectos en los orgnulos va secretora (Retculo endoplasmtico y aparato de Golgi) y para la expresin
glicosiltransferasa alterado.

Figura 1. Vas de Thomsen-Friedenreich biosntesis de antgenos. En primer lugar, se transfiere GalNAc a un residuo de
serina o treonina en un polipptido por peptidil-N-acetylgalactosaminyltransferasa (GalNAc-T). GalNAc? 1-Ser / Thr, es
decir, el antgeno Tn, se convierte entonces por T-sintasa a Gal? 1-3GalNAc? 1-Ser / Thr, es decir, el antgeno T-1 o
ncleo estructura. El antgeno Tn se puede tambin sialilada por ST6GalNAc-I formacin de Neu5Ac? 2-6GalNAc? 1Ser / Thr, es decir, el sialil-Tn. GalNAc? 1-Ser / Thr puede tambin ser convertido en ncleo-3 estructuras por la alfa
3GnT-6. Antgeno T se convierte en ncleo-2 estructuras por C2GnT-1, -2 y -3 o puede sialidarla por ST3Gal-I,
procedente del antgeno sialil-T. Por otra parte, sialil-T antgeno puede sialilada por ST6GalNAc-I originarios disialyl-T
antgeno.

T antgeno se sobreexpresa en cncer de mama, colon, pncreas y cncer de pulmn; pero tambin puede ser detectado
hasta en el 40% de los tejidos normales y en los tejidos inflamados. Del mismo modo, la expresin se incrementa en
gran medida ST en algunos tipos de cncer en comparacin con los tejidos normales, tales como cncer de mama y
vejiga, pero tambin se expresa en el epitelio normal, muchas protenas y leucocitos de suero. En contraste, el Tn y los

antgenos STN muestran un patrn de cncer asociado mejor, con expresin ausente o muy limitada en tejidos adultos
sanos, y por lo tanto son ms interesantes como dianas teraputicas.
2.1. Tn antgeno
Antgeno Tn es un antgeno pan-carcinoma, expresada sobre la mayora de los carcinomas, como el de mama,
pncreas, colon, pulmn y vejiga, siendo menos comn en neoplasias hematolgicas. En los tejidos normales, la Tn
slo se expresa en el cerebro embrionario y est protegido en el tejido adulto. Tn es en realidad un precursor
biosinttico normal de O-glicanos, sin embargo no un producto terminal de lo normal, observndose ocasionalmente
en las clulas normales adultas en el aparato secretor, pero no se encuentra en las protenas en la superficie celular o
secretada.
Tn normalmente est extendido por el 1,3-galactosiltransferasa C1GalT1?, Tambin denominado T-sintasa o ncleo-1
sintasa, o por el ncleo-3? 1,3-N-acetylglucosaminetransferase (C3GnT) para formar el antgeno T (ncleo-1) o la
estructura del ncleo-3, respectivamente (Figura 1). En el cncer, la prdida de T-sintasa o enzimas C3GnT puede
conducir a la sobreexpresin del antgeno Tn. La expresin alterada de GalNAc-Ts glicosiltransferasas, y relocalizacin del Golgi al retculo endoplsmico, tambin resulta en la sobreexpresin Tn. Adems, los defectos en
COSMC, una chaperona esencial para la actividad de C1GalT1, debido a silenciamiento epigentico o mutaciones
tambin pueden conducir a aumentar la expresin del antgeno Tn en el cncer.
La sobreexpresin de antgenos Tn promueve la proliferacin de clulas cancerosas y la invasividad. De hecho, en el
cncer de mama, la acumulacin de Tn-cojinete protenas de lamellipodia en la superficie celular promueve la
adhesin celular, la motilidad celular y la invasin. Sorprendentemente, tambin se detecta el antgeno Tn en las
primeras etapas del desarrollo del tumor y puede servir como un biomarcador, ya que su expresin se asocia con
tumores invasivos y altamente proliferativas, y metstasis.
2.2. Sialyl-Tn antgeno
Sialyl-Tn es tambin un antgeno carcinoma de pan que se expresa temprano en la tumorignesis. En contraste con Tn,
STn no es un precursor biosinttico de lo normal, lo que significa que su expresin es necesariamente patolgica.
Como nota aparte, en algunos tejidos normales, tales como colon, el residuo de cido silico de STn puede ser Oacetilados, enmascarando as la STn y por lo tanto su reconocimiento por los anticuerpos anti-STN. No hay otros
azcares que sean conocidos por ser aadido al antgeno STn. STn es a menudo co-expresada con Tn, y por lo tanto
los mecanismos que dan lugar a la sobreexpresin de Tn aplican probablemente a STN.. Mecanismos especficos para
sobreexpresin de STn, incluyen ST6GalNAc-I upregulation, o re-localizacin del retculo de Golgi al endoplsmico y
tambin la prdida de grupos O-acetilo STN, se han demostrado en algunos tipos de cncer. Especficamente, que la
expresin STn modulan un fenotipo maligno al inducir un comportamiento ms agresivo de clulas en clulas de
carcinoma gstrico y de mama, como la disminucin de la agregacin de clula-clula y aumento de la adhesin de la
matriz extracelular, la migracin y la invasin.
2.3. Papel Patolgica de Tn y STN en Cncer
Ambos antgenos Tn y STN se han correlacionado con la progresin del cncer y pobre supervivencia. Alta expresin
de Tn y STN en el carcinoma de ovario humano se asoci con enfermedad en estadio, el grado histolgico y el bajo
tiempo de supervivencia global. Adems, Tn se ha mostrado como un buen biomarcador de carcinoma invasivo de
cuello uterino. Por otra parte, la expresin STn se asoci con la invasividad del cncer de hgado y con una menor tasa
de supervivencia en los carcinomas gstricos avanzados. En el cncer de mama, la expresin STn se asoci con
metstasis en los ganglios linfticos y alto grado histolgico, as como con la resistencia a la quimioterapia adyuvante.

Antgeno STn tambin estaba relacionado con un alto grado de tumores, las tasas de proliferacin elevadas y un alto
riesgo de recurrencia y progresin en los tumores de vejiga.
La combinacin de ambas caractersticas: Una especificidad aceptable al tumor y casi ausencia de expresin de Tn y
STN en clulas normales; junto con su asociacin con el pronstico del tumor y una mayor malignidad, incluyendo
metastizacin, antgenos Tn y STN se volvieron como excelentes objetivos para ser utilizados en teraputica.
3. Respuesta Inmune e inmunoterapias contra Carbohidratos
La respuesta inmune es la clave no slo para provocar la proteccin contra los agentes patgenos, sino tambin para
mantener la vigilancia inmune contra el desarrollo de clulas malignas. Desde esta perspectiva, el desarrollo del cncer
puede ser visto como un fracaso de Surveillanc inmune. La mayora de los hidratos de carbono asociados a tumores no
provocan fuertes respuestas humorales y, de hecho, las evidencias han demostrado que su expresin aberrante es uno
de los mecanismos desarrollados por las clulas cancerosas para evitar respuestas inmunes eficaces contra el cncer.
Los mecanismos para proporcionar proteccin antitumoral pueden clasificarse en la respuesta inmune celular y
humoral. Si bien la respuesta inmune celular involucra principalmente linfocitos citotxicos tales como las clulas T
citotxicas que pueden eliminar potencialmente las clulas tumorales; la respuesta humoral implica clulas B y la
produccin de anticuerpos contra los antgenos tumorales especficos, que en ltima instancia conducen a la
citotoxicidad dependiente de anticuerpos, como se mencionar en ms detalle a continuacin. Ambos brazos de la
respuesta inmune implican la activacin de una variedad de otras clulas inmunes, que convergen en ltima instancia,
para ambas respuestas. Para el desencadenamiento de respuestas inmunes celulares, clulas presentadoras de antgenos
como las clulas dendrticas (DCs), macrfagos y clulas B, la captacin de antgenos y luego presente a travs del
complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) una pequea porcin de pptidos antgenos (eptopos) para activar
tanto la especificidad citotxica CD8 + Clulas T y las clulas CD4 + T helper (Th). Los receptores tanto de las clulas
citotxicos y Th, es decir, los receptores de clulas T (TCR), estn restringidos a reconocer pptidos, presentado en el
contexto de MHC de clase I o clase II, respectivamente, por la clulas presentadoras de antgeno. Por consiguiente, la
respuesta inmune celular se formatea principalmente para luchar contra antgenos peptdicos y esto puede imponer una
limitacin a desarrollar fuertes respuestas inmunes contra hidratos de carbono. Si bien se ha informado de que las
clulas T citotxicas pueden reconocer mono- y disacridos unido a pptidos con Ser o Thr, investigaciones
adicionales son necesarios para comprender mejor la relevancia de tal reconocimiento en el contexto de las respuestas
inmunitarias antitumorales.
La respuesta inmune humoral contra hidratos de carbono juega un papel clave en las respuestas antitumorales. En
contraste con TCR, los receptores de las clulas B (BCR) pueden reconocer antgenos de hidratos de carbono
directamente sin necesidad de presentacin a travs de MHC. La reticulacin del antgeno en BCR activa las clulas B,
que inician la secrecin de anticuerpos IgM. IgM es el primer isotipo de inmunoglobulina para ser secretada por las
clulas B del plasma (clulas efectoras B), caracterizado por una estructura pentamrica con afinidad relativamente
baja a los antgenos y un corto perodo de tiempo, en comparacin con los otros isotipos. Este proceso se llama
activacin de las clulas B de clulas T independiente (Figura 2 Panel superior), y es capaz de proporcionar inmunidad
sin embargo, con duracin limitada.

Figura 2. Representacin simplificada de reconocimiento del antgeno tumoral y la induccin de respuestas inmunes
humorales. Antgenos del panel-Glycan superiores pueden ser directamente reconocidos por las clulas B y el
entrecruzamiento de los receptores de las clulas B conducir a la secrecin de IgM a travs de T activacin de las clulas B de
clulas independientes. En la parte baja del panel, antgenos del tumor puede ser endocitosis por las clulas presentadoras de
antgenos, como las clulas dendrticas, o clulas B y luego ser presentados a los ayudante de clulas T clulas (Th) lo que
conduce a la activacin de clulas T y la posterior activacin de clulas B dependiente de clulas T.

A los efectos anti-tumor de larga inmunidad humoral, la produccin de otros anticuerpos isotipos IgG tales como es
deseable. Fisiolgicamente, esto por lo general implica la participacin de las clulas Th, en un proceso llamado
activacin de clulas B dependiente de clulas T (Figura 2 inferior del panel). Las clulas Th especficas para pptidos
particulares se activan inicialmente por clulas presentadoras de antgeno. Luego, las clulas B especficas de hidratos
de carbono reciben seales estimuladoras (citoquinas) de clulas Th, que permiten la conmutacin de los subtipos de
anticuerpos de IgM a IgG de alta afinidad y la diferenciacin de clulas plasmticas en las clulas B de memoria. Estos
anticuerpos IgG de alta afinidad pueden unirse a las clulas cancerosas diana, marcndolas para su destruccin ya sea
por el complemento (citotoxicidad dependiente del complemento (CDC)) o natural killer (NK) clulas (citotoxicidad
mediada por clulas dependiente de anticuerpos (ADCC)) .
El conocimiento de estos mecanismos fisiolgicos, en los ltimos aos, ha levantado los esfuerzos para provocar el
aumento de la inmunogenicidad de los antgenos de hidratos de carbono, con el objetivo de generar inmunoterapias
potentes, tales como vacunacin. Los enfoques para mejorar la inmunogenicidad de hidratos de carbono incluyen el
acoplamiento covalente de hidratos de carbono a los portadores de protena inmunolgicamente activas, tales como
hemocianina de lapa californiana (KLH) o adyuvantes o a los transportistas fisiolgicas / patolgica, tales como
mucina protena1 (MUC1), para garantizar una gama de relevantes eptopos. Curiosamente, varios estudios han
demostrado que la conjugacin de pptidos de MUC1 glicosilados con un pptido eptopo de clulas T helper, un
receptor 2 agonista Toll-like, toxoide del ttanos, o una combinacin de estos portadores de protenas activas induce
una respuesta inmune antignica y celular potente que puede matar a las clulas tumorales y reducir la carga tumoral.

Respuesta Inmune y TN / STN Antgenos

Hay un nmero importante de informes que describen la respuesta inmune contra los antgenos Tn o STN. Por
ejemplo, autoanticuerpos contra STn y Tn mucina se identificaron 1 glicopptidos en mama y pacientes con cncer
colorrectal. Estos autoanticuerpos se encuentran en los niveles ms altos en los pacientes con cncer de mama en fase
inicial y se asocian con una reduccin de tasa de metstasis [54], lo que sugiere un papel en la induccin de la
respuesta inmune antitumoral. Significativamente, estos anticuerpos reaccionan con el hidrato de carbono solamente
cuando se lleva en la protena MUC1, enfatizando el papel de la cadena principal del pptido en respuesta anticarbohidrato. Un estudio posterior con una cohorte de pacientes ms alta mostr que los autoanticuerpos frente a
pptidos de MUC1 o glicopptidos no podan utilizarse para el cribado de cncer.
Los estudios preclnicos y clnicos tambin han demostrado que la inmunizacin con vacunas que contienen STn o Tn
generalmente induce anticuerpos especficos de antgenos. La elicitacin de tales respuestas inmunes despus de la
vacunacin podra explicar el retraso observado en el crecimiento tumoral en ratones y el tiempo hasta la progresin
incrementado en los pacientes. Curiosamente, los pacientes que recibieron la vacuna Theratope, que consista en STn
anclado a la KLH, desarrollaron anticuerpos-STN anti, cuya abundancia se correlacion directamente con la
supervivencia libre de enfermedad [60]. Sin embargo, las respuestas inmunolgicas observadas contra antgenos STN
y Tn, parecen ser lo suficientemente robusta como para inducir respuestas inmunes protectoras. De hecho, a pesar del
hecho de que y ensayos STN / o vacunas contra el cncer basados en Tn ya han entrado clnicos (NCT00030823),
incluyendo el caso de Theratope que alcanz la fase III (NCT00046371) [58], ninguna vacuna ha sido aprobado para
uso clnico an. La mayora de vacunas probadas no inducir robusta T inmunidad mediada por clulas y no traer
ningn beneficio de supervivencia para los pacientes. Se aconseja una mejor comprensin de la respuesta inmune
contra estos antgenos para provocar un aumento de la inmunogenicidad para mejorar la potencia de los enfoques
inmunoteraputicos. En los ltimos aos, una mejor comprensin del papel inmunomodulacin de los antgenos Tn y
STN ha dilucidado su contribucin a la tolerancia inmune, lo que explica en parte el fracaso con los protocolos de
vacunacin. Por ejemplo, el antgeno Tn expresa en la mucina 6 protenas (MUC6) abroga respuestas de clulas Th1 y
promueve la interleucina 17 (IL-17) de respuesta, lo que podra favorecer escape inmune de las clulas tumorales.
Por otra parte, Tn es reconocido por la galactosa-lectina de tipo C tolerognico-lectina de macrfagos (MGL),
expresada por DCs y macrfagos, lo que dota a estas clulas para suprimir la inmunidad de clulas T, desempeando
as un papel en la progresin tumoral. La sobreexpresin de STn se asocia con una baja infiltracin de nido CD8 + en
el cncer de endometrio [63]. Adems, STn presente en secretadas mucinas de cncer de colon se puede interactuar
con CD22 y abajo-modular la seal de la clula B transduccin. Por otra parte, siglec-15 reconoce el antgeno STn
expresado por las clulas cancerosas y transduce una seal para una mayor factor de crecimiento transformante beta
(TGF?) Secrecin en los macrfagos asociados al tumor, lo que puede contribuir a la progresin del tumor por el TGF
modulacin mediada por -? - microambiente intratumoral. Ms recientemente, nuestro grupo demostr que STN-que
expresan las clulas cancerosas deterioran maduracin de DCs, dotando una funcin tolerognico y por lo tanto
limitando su capacidad para desencadenar anti-tumorales respuestas protectoras de clulas T. Tambin hemos
observado que el bloqueo de antgenos STN expresadas por las clulas cancerosas era capaz de reducir la induccin de
tolerancia in vitro y DCS ser ms maduro. Estos hallazgos sugieren que las terapias dirigidas basados en anticuerpos
pueden proporcionar medios eficientes para mejorar las respuestas inmunes contra las clulas tumorales STN.
4. Anticuerpos
Durante los ltimos 20 aos, el tratamiento a base de anticuerpos monoclonales ha sido una de las estrategias
teraputicas ms exitosas en diferentes campos, incluyendo el cncer. Debido a sus caractersticas nicas, tales como
una alta especificidad y el compromiso con el sistema inmunolgico, el impacto anticuerpos 'ha sido reconocido en

muchas reas teraputicas. El desarrollo incesante y optimizacin de los mtodos involucrados en anticuerpos
ingeniera, produccin y purificacin, as como el aumento del conocimiento de la interaccin entre los anticuerpos,
clulas de cncer y el sistema inmunolgico han contribuido al desarrollo de anticuerpos de prxima generacin
innovadores que son ms eficaces, ms seguros y con aplicaciones ms amplias. Hoy en da, el mercado de los
anticuerpos teraputicos ha estado creciendo de manera significativa dentro de la industria de la salud para que 40 aos
despus de la generacin del primer anticuerpo monoclonal (mAb), alrededor de 47 productos de anticuerpos
monoclonales recombinantes se han aprobado en los Estados Unidos o en Europa para el tratamiento de una amplia
variedad de enfermedades, que van desde el cncer a enfermedades infecciosas y cardiovasculares a las enfermedades
autoinmunes.
4.1. Estructura y funcin de los anticuerpos
Los anticuerpos son molculas de glicoprotena con una notable capacidad de reconocer y unirse a los antgenos con
alta afinidad y especificidad, por lo tanto promover an ms su inactivacin o eliminacin. Tpicamente, los
anticuerpos (o inmunoglobulinas (Igs)) se componen de dos fragmentos de unin a antgeno (Fab) unidos a travs de
una regin flexible (regin bisagra) a una regin constante (Fc) (Figura 3). Especificidad de antgeno es conferida por
el sitio de unin al antgeno del anticuerpo, que est formada por las regiones determinantes de complementariedad
hipervariables (CDR) en las regiones variables de cada cadena pesada y ligera, presente en las porciones Fab. Por otro
lado, la regin Fc es responsable de las funciones efectoras inmunes de los anticuerpos, promoviendo la unin a
diversas molculas efectoras y clulas del sistema inmune.
Mecanismo de accin Anticuerpos 'implica ADCC, CDC, o bloqueo de la accin de molculas especficas.
Adicionalmente, los anticuerpos tambin pueden funcionar como molculas de sealizacin. Especficamente, ADCC
es un mecanismo efector en la que los anticuerpos clulas NK directos para destruir las clulas que expresan el
antgeno. Este mecanismo se basa en el acoplamiento de receptores de Fc expresados por las clulas NK que conducen
a su activacin y la exocitosis de los grnulos citoltica complejo perforina / granzima, lo que resulta en la destruccin
de clulas diana mediante apoptosis. CDC, tambin conocida como la va clsica del sistema del complemento, es una
cascada citoltica mediada por una serie de protenas del complemento (C1-C9) que son abundantemente presente en el
suero.
Se inicia con la unin de la molcula del complemento, C1q, el dominio Fc del anticuerpo (IgG o IgM) unida en la
superficie de la clula diana. Esto desencadena la cascada del complemento posterior que conduce a la lisis de las
clulas diana. Los anticuerpos tambin pueden presentar
una actividad de bloqueo, que impide que los factores de
crecimiento, citocinas y otros mediadores solubles
lleguen a sus receptores diana. Por ltimo, los anticuerpos
pueden inducir la reticulacin de los receptores que estn
conectados a los mediadores de la apoptosis de las
clulas, tales como caspasas, que conduce a la muerte
celular [79]. Los anticuerpos que retienen estas funciones
representan una estrategia teraputica importante en
muchos campos diferentes.
Figura 3. Representacin esquemtica de
una estructura de G (IgG) mAb
inmunoglobulina. La molcula de IgG est
compuesta por constantes (C) y variables
(V) dominios para cada luz (L) o (H) de la
cadena pesada. La cadena pesada
comprende tres dominios constantes (CH) y
uno variable (VH), y la cadena ligera
contiene un constante (CL) y uno variable

4.2. Los anticuerpos teraputicos en cncer

Anticuerpos teraputicos son ahora una de las estrategias ms exitosas e importantes para el tratamiento de pacientes
con cncer. En sus primeros aos, los anticuerpos teraputicos fueron derivados de murino o basados en una secuencia
de aminocidos de anticuerpos de ratn, lo que llev a los posibles problemas relativos a la generacin de anticuerpos
humanos anti-ratn resulta en inmunogenicidad o alrgica-como reacciones. El uso de anticuerpos murinos tambin
tiene el problema de la baja funcin efectora de Fc desde regin Fc murino no estn correctamente reconocida por
receptores Fc humanos. Esto resulta en una baja eficiencia en el reclutamiento del sistema inmunolgico humano,
incluyendo ADCC y CDC, lo que impide el uso eficaz de los anticuerpos murinos en la terapia. En alternativa, la
prxima generacin de anticuerpos teraputicos implicados fusin por ingeniera gentica de variable de ratn con
dominios constantes humanos, lo que result en un perfil de seguridad ms favorable y la vida media, mientras que
conserva la especificidad de los anticuerpos murinos.
Anticuerpos teraputicos pueden funcionar a travs de la mediacin de alteraciones en las funciones de los receptores
de antgeno o, la modulacin del sistema inmune o la entrega de un medicamento especfico que se conjuga a un
anticuerpo que se dirige a un antgeno especfico. Hoy en da, existen tcnicas moleculares que pueden alterar la
funcin efectora de anticuerpos, el tamao y la inmunogenicidad de contribuir al desarrollo de terapias nuevas y ms
eficaces basados en anticuerpos.
Anticuerpos teraputicos pueden matar a las clulas tumorales mediante varios mecanismos, por la accin directa del
anticuerpo, que incluye: El bloqueo de receptores o actividad agonista; la induccin de la apoptosis o la entrega de un
agente
de
drogas
o
citotxico; o clula inmune
mediada por mecanismos
de matar, que implica CDC,
ADCC, y la induccin de la
fagocitosis (Figura 4).
Adems, la activacin de
clulas T se puede mejorar
mediante la orientacin
mediada por anticuerpos y
an ms la presentacin
cruzada de antgenos a los
DC, las clulas T dirigidas
al tumor se mejora por el
bloqueo
mediado
por
anticuerpos de T puntos de
control inhibidora de las clulas (por ejemplo, CTLA4 y PD1) son tambin entre las estrategias para la eliminacin de
clulas tumorales. Todos estos enfoques se han aplicado con xito en la clnica.

En particular, el antgeno diana de anticuerpos teraputicos debe expresarse en la superficie de las clulas cancerosas y
ser abundante y accesible a los anticuerpos. Dependiendo de los mecanismos de accin deseado, los anticuerpos
teraputicos podran ser internalizados rpidamente, en caso de entrega de toxinas en las clulas cancerosas y
regulacin a la baja de los receptores de la superficie celular. Por otro lado, en ADCC y CDC estas deberan
permanecer en la superficie de la clula ya que la regin Fc debe estar disponible para las clulas inmunes y protenas
del complemento.
5. Teraputico anticuerpos contra Tn y STN Antgenos
Debido a la asociacin de los antgenos Tn y STN con varios tipos de cnceres, as como a la progresin tumoral y la
metstasis, se han hecho esfuerzos para desarrollar anticuerpos contra estas estructuras glicosiladas. Adems, el hecho
de que los pacientes con cncer son capaces de producir autoanticuerpos, impuls su uso como biomarcadores para la
deteccin precoz del cncer [86] o la respuesta a la terapia. Curiosamente, los anticuerpos que se encuentran en
pacientes con cncer no han demostrado ser eficaz en la activacin del sistema inmune y la eliminacin de las clulas
malignas. Por lo tanto, es esencial para producir anticuerpos ms eficaces que matan especficamente a las clulas
cancerosas.
Hasta ahora, la mayora de los anticuerpos existentes se obtuvieron mediante tecnologa de hibridoma. Desde el
desarrollo de la primera mAb especfico anti-STn en 1981, llamado B72.3, se han producido ms anticuerpos contra el
antgeno STn. Durante esta bsqueda, se utilizaron diferentes inmungenos y tcnicas y stas llevan a la formacin de
anticuerpos que presentan diferentes afinidades y especificidades hacia el antgeno STn. El mAb B72.3 fue generado
despus de la inmunizacin de ratones con fraccin de membrana enriquecida de clulas de carcinoma de mama
humano y se encontr que reaccionar con TAG-72, una glicoprotena con caractersticas de tipo mucina, y con mucina
submaxilar ovina (OSM), que es rica en eptopos STN. El CC49 anticuerpo de segunda generacin se gener despus
de la inmunizacin de ratones con afinidad B72.3 purificados TAG-72 molculas [89]. Otros estudios se han
desarrollado utilizando este anticuerpo humanizado y su formato, que se encuentra actualmente en un ensayo clnico
para su uso en ciruga radioimmunoguided. Sin embargo, la especificidad fina de estos mAbs no est clara y, adems
de obligar a STN, CC49 tambin reconoce otros glicanos. TKH2 y HB-STN1 son otros dos mAbs anti-STN que se
generaron mediante la inmunizacin de ratones con OSM [88]. Ogata y sus colegas informaron que B72.3 fuertemente
se une glicoprotenas que llevan STN-trmeros, pero mal interacta con glicoprotenas monomrica-STN. Esto plantea
la cuestin de configuraciones STN para el reconocimiento de anticuerpos. Ms tarde, se inform el anticuerpo
MLS102 generada por la inmunizacin de ratones con LS 180 clulas de cncer de colon que es especfica para STn
agrupado. Ms recientemente, la novela anti-STn LLU9B4 anticuerpos y 3P9 se han producido. El primero se gener
por inmunizacin de ratones con glicoprotenas STN extrados de colon humano lnea celular de adenocarcinoma
LS174T y 3P9 se obtuvo usando clulas SW1116 adenocarcinoma colorrectal humano para inmunizar ratones. Este
ltimo anticuerpo mencionado es particularmente interesante ya que es un mAb IgM que mostr un efecto inhibidor
significativo sobre la proliferacin y la migracin de clulas que expresan STN y el crecimiento tumoral mediante la
induccin de apoptosis. Estos resultados sugieren que 3P9 mAb tiene aplicaciones potenciales, no slo en el
diagnstico y formacin de imgenes, como se inform para la mayora de los anticuerpos mencionados anteriores,
sino tambin para la terapia tumoral basada en anticuerpos.
Varios mAbs con diferentes especificidades hacia el antgeno Tn tambin se han generado utilizando diferentes
inmungenos. Algunos de estos anticuerpos son CU-1, MLS 128, BRIC 66 (IgM) y BRIC 111 (IgG1), PMH1, y ms
recientemente el mAb KM3413 [99], 2154F12A4 y GOD3-2C4. Los anticuerpos monoclonales, tales como MLS128,
KM3413 y GOD3-2C4 han demostrado tener un potencial teraputico debido a su capacidad para inhibir el

crecimiento de ciertas lneas celulares de cncer, y en particular limitar el crecimiento de una xenoinjertos de un
carcinoma de pulmn humano, en el caso del mAb GOD3-2C4.
Si bien la mayora de estos anticuerpos son prometedores, su especificidad es an discutible y el efecto teraputico
potencial en las clulas cancerosas y tejidos del paciente debe ser evaluado a fondo antes de su uso como agentes
teraputicos. Una tcnica ampliamente utilizada para caracterizar la especificidad de un anticuerpo es el ensayo de
inmunoabsorcin ligado a enzimas (ELISA) y muchas variaciones de esta metodologa en contra de glicoconjugados
que se inmoviliza en placas de revestimiento de plstico o, alternativamente, con los anticuerpos. Sin embargo, en la
mayora de los casos, los antgenos de glicanos pueden no estar disponibles y la interpretacin es difcil. Por lo tanto,
todava existe la necesidad de desarrollar ensayos que caracterizan plenamente esta especificidad de los anticuerpos
anti-carbohidrato. Los recientes esfuerzos a este respecto se han logrado con el desarrollo de las tecnologas de
microarrays de glicano, que permiten el estudio de las interacciones entre anticuerpos con hidratos de carbono de una
manera de alto rendimiento. Adicionalmente, los anticuerpos son anticuerpos reactivos existentes de hidratos de
carbono, lo que significa que reaccionan con cualquier glicoprotena que lleva los glicano. Slo unos pocos fueron
capaces de reconocer eptopos glicanos / pptidos aunque con baja afinidad. Los anticuerpos para STn prometedora o
eptopos glicopeptdicos Tn expresada por glicoprotenas de la superficie celular mejoraran especificidad y evitar la
unin a glicoprotenas extracelulares irrelevantes, como mucinas, que pueden engaar a la unin efectiva de
anticuerpos a la superficie celular.
5.1. Produccin de Anticuerpos
El impulso para la aplicacin teraputica de anticuerpos afines a los avances y la innovacin en la biologa molecular a
travs de los aos permitidos para el desarrollo de varios mtodos para la produccin de mAb. Estas tecnologas
apoyaron la generacin de anticuerpos contra virtualmente cualquier molcula diana en clulas humanas que permitan
su empleo en particular en la teraputica del cncer. Inicialmente, la produccin de mAbs fue exclusivamente a cabo
utilizando la tecnologa de hibridomas y la inmortalizacin de clulas B usando el virus de Epstein-Barr (EBV). Unos
aos ms tarde, el desarrollo de mtodos alternativos como la inmunizacin de ratones transgnicos que expresan
pantalla loci y fago Ig humana permiti seguir avanzando con la produccin de anticuerpos totalmente humanos.
5.1.1. Hibridoma Tecnologa
Tecnologa de hibridoma ha sido durante mucho tiempo una herramienta extraordinaria e imprescindible para la
generacin de anticuerpos monoclonales de alta calidad. Se permite el aislamiento y la produccin de mAb con alta
afinidad y especificidad contra antgenos solubles o unidas a la membrana utilizando el sistema inmunolgico de un
animal. Esta tecnologa fue desarrollada en 1975 por Kohler y Milstein, quien recibi el Premio Nobel por este logro,
en el que la produccin de anticuerpos por las clulas B del bazo obtenidas de ratones inmunizados fue inmortalizado
por fusin con clulas de mieloma cancerosas (Figura 5). El paso inicial en la produccin de mAbs mediante
tecnologa de hibridoma es la estimulacin del sistema inmune de un husped adecuado, normalmente un ratn, con el
antgeno deseado. Por lo general, el antgeno se mezcla con un adyuvante para potenciar la respuesta inmunitaria y, en
consecuencia aumentar la produccin de anticuerpos. Despus de la inmunizacin, las clulas B secretoras de
anticuerpos se aslan del bazo de ratn y se fusionan, mediante el uso de polietilenglicol (PEG) con un no secretor
lnea celular de mieloma inmortalizadas inmunoglobulina que carece de la hipoxantina-guanina
fosforribosiltransferasa-gen (HGPRT). Estas clulas se cultivan a continuacin en hipoxantina-aminopterina-timidina
(HAT) medio de seleccin en el que slo las clulas de hibridoma son capaces de sobrevivir y proliferar ya que han
heredado la inmortalidad de las clulas de mieloma y resistencia selectiva de las clulas B para sobrevivir en medio
con aminopterina. Por lo general, la proyeccin de las clulas productoras de anticuerpos deseados se realiza usando
tcnicas tales como ELISA, Western blot y citometra de flujo para analizar la reactividad de su sobrenadante de

cultivo. Clulas de hibridoma positivas se cultivan y se clonaron de manera an ms altas cantidades de mAbs por lo
tanto pueden ser producidos in vitro. Varias mejoras tcnicas han llevado a cabo para resolver el problemtico de esta
tcnica, a saber, la inmortalizacin de clulas de ratones B y el desarrollo de las diferentes clulas asociadas para la
fusin; uso de capas de alimentacin para aumentar la supervivencia de hibridomas y la estabilidad en la cultura y el
uso de diferentes mtodos para la fusin celular, a saber electrofusin.
El primer anticuerpo que se apruebe para el mercado, muromonab-CD3, era un anticuerpo murino sin modificar
desarrollado utilizando la tecnologa de hibridomas. Sin embargo, mAbs murinos provocan reactividad inmune cuando
se aplica a los seres humanos y tambin tienen baja funcin efectora Fc debido al reconocimiento ineficaz de su regin
Fc por los receptores Fc humanos, lo que limita sus aplicaciones en teraputica. En consecuencia, el uso y la
produccin de mAbs humanos fue impulsado de una manera que mtodos alternativos se han estudiado y desarrollado,
como la inmunizacin de ratones transgnicos que expresan loci de Ig humana, bibliotecas de presentacin de fagos, y
la
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Figura 5. Representacin esquemtica de la tecnologa de hibridoma. Esta tecnologa implica la etapa inicial de
inmunizacin de ratones con el antgeno deseado, seguido por la recuperacin de las clulas B del bazo de los ratones
y la consiguiente fusin con clulas de mieloma. Despus de eso, se seleccionan clulas de hibridoma en medio HAT
y los clones son seleccionados de acuerdo con la reactividad de sus sobrenadantes contra el antgeno. Por ltimo, los

5.1.2. B inmortalizacin celular

Poco despus de la introduccin de la tecnologa de hibridoma, un enfoque alternativo para obtener productoras de
anticuerpos lneas de clulas B humanas estables fue creado en el cual las clulas especficas de antgeno plasma B se
inmortalizan usando el virus de Epstein-Barr (EBV). Este virus pertenece a la familia de los herpes y tiene la
capacidad para inmortalizar de manera eficiente in vitro casi todas las clulas B humanas. Debido a la baja frecuencia
de clulas B especficas de antgeno entre los linfocitos de sangre perifrica de los donantes, las clulas que expresan
el anticuerpo deseado sobre su superficie deben ser seleccionados. Despus de la seleccin, las clulas B especficas de
destino estn infectadas con este virus.
Las clulas B se transforman en clulas diploides inmortalizadas que por lo general no liberan las partculas del virus y
preservan las caractersticas de las clulas B infectadas inicialmente, lo que significa que son capaces de producir de
forma continua y secretar los anticuerpos deseables. Los anticuerpos producidos por este mtodo representan el
repertorio de anticuerpos de los linfocitos del donante, as como, cuando se utilizan clulas de un paciente B, ofrece la
posibilidad de obtener anticuerpos con especificidad nica contra neoantgenos. Sin embargo, las clulas
transformadas con EBV no pueden crecer indeterminadamente ya que no tienen el fenotipo de las clulas malignas.
Adems, estas clulas son difciles de clonar y usualmente producen slo rendimientos bajos de inmunoglobulinas. De
esta manera, las mejoras a este mtodo han llevado a cabo, es decir, la fusin de la EBV-inmortalizado clulas
secretoras de anticuerpos con parejas de fusin heterohibridoma apropiadas, que promovi una mayor estabilidad y
una mayor cantidad de anticuerpos secretados. Esta tcnica se ha aplicado con xito para generar anticuerpos contra
varios antgenos, como las protenas y los hidratos de carbono, pero nunca contra STn y Tn.
5.1.3. Phage Display Technology
La principal lucha en los mtodos tradicionales es el desarrollo de mAbs totalmente humanos para aplicar en la
teraputica y, en consecuencia, varios esfuerzos han esforzado para superar este problema. El debut de la tecnologa
del ADN recombinante, junto con los avances de las tecnologas in vitro proporciona varias formas nuevas y
poderosas que conducen al desarrollo de la tecnologa de presentacin de fagos para crear anticuerpos teraputicos.
Esta tecnologa romper el suelo se introdujo en 1985 por Smith centra en la seleccin de un fenotipo particular (por
ejemplo, un ligando especfico para un antgeno diana) a partir de repertorios de molculas que aparecen en fagos. En
1990, McCafferty y colegas demostraron que la visualizacin de fragmentos de anticuerpos en fagos era concebible a
travs del uso de vectores para introducir ADN en genomas de fagos de anticuerpos, combinando as genotipo y
fenotipo en una partcula de fago. El concepto detrs de esta tecnologa de pantalla es que se crea una gran biblioteca
de anticuerpos potencialmente interesantes, a partir del cual los fragmentos de anticuerpos con especificidad y afinidad
deseables se pueden seleccionar contra un antgeno especfico. El uso de bibliotecas de fagos que llevan genes de Iganticuerpo bibliotecas de presentacin en humanos fue una de las aplicaciones ms exitosas de este enfoque.
Para la construccin de una biblioteca de anticuerpos, el repertorio de genes V que codifican los anticuerpos de las
clulas B se amplifica mediante PCR usando un conjunto de cebadores especficos que cubren todas las familias de

genes V. Posteriormente, los fragmentos de anticuerpos se generan por combinacin aleatoria de VL y VH genes de la
cadena. Basado en el origen de genes de anticuerpos, las bibliotecas se pueden clasificar en natural o sinttico.
Adems, las bibliotecas repertorio de origen natural pueden ser ingenuo o inmunolgico. Bibliotecas Naive se derivan
de donantes no inmunizados de clulas B, y las bibliotecas inmunes se derivan de diferentes tipos de animales
inmunizados, pacientes humanos con una determinada enfermedad o previamente expuesta. Adems, varios formatos
de fragmentos de anticuerpos, ms comnmente Fab y scFv se pueden clonar y se muestran en bibliotecas de fagos.
Una vez creado el repertorio de fragmentos de anticuerpos, esta mezcla heterognea de clones de fago se criban
mediante un proceso de seleccin por afinidad denominado panning, durante el cual las poblaciones de fagos se
presentan a los objetivos especficos con el fin de seleccionar fagos de unin a diana especfica (Figura 6).
El antgeno de inters se inmoviliza sobre un soporte slido y la biblioteca de fagos de anticuerpos se aplica a
promover la unin de los fagos especficos contra el antgeno seleccionado. Extensas lavados se realizan para eliminar
los fagos no unidos que no presentan especificidad contra el antgeno diana. Fagos positivos de unin se eluyen y se
amplifican a travs de la infeccin bacteriana y se cultivaron para producir fago de alto ttulo y utilizar en posteriores
rondas de seleccin. Por lo general, se llevan a cabo varias rondas de cribado (2 a 5 rondas) con el fin de enriquecer
progresivamente la piscina fago con fagos de unin especficos. Los anticuerpos especficos para el antgeno deseado
se identifican generalmente por ELISA mediante el cribado de un conjunto de clones al azar que fueron elegidos para
ser analizados.

Una vez que se aslan los fragmentos de anticuerpo de inters, debido a la relacin establecida en la presentacin en
fagos entre genotipo y fenotipo, la secuencia que codifica estas molculas puede ser determinado y se utiliza para
producir los anticuerpos deseados, as como para refinar las propiedades de los anticuerpos aislados 'con prontitud.
Actualmente, hay tres anticuerpos en el mercado creadas usando la tecnologa de presentacin en fagos Humira,
Benlysta, y ABthrax. En particular, la investigacin que utiliza esta tecnologa ha facilitado el progreso en la
produccin de anticuerpos contra los antgenos desafiantes, a saber, los hidratos de carbono asociados a tumores. En
particular, esta estrategia puede ser una alternativa a la tecnologa de hibridomas convencional, especialmente cuando
el objetivo de obtener anticuerpos contra los antgenos conformacionales simples y pequeas, con baja
inmunogenicidad. Kubota y sus colegas han utilizado con xito el anticuerpo tecnologa de presentacin de fagos para
identificar un anticuerpo scFv anti-Tn. Este ha sido formateado en una IgG humana con promesa para la terapia, ya
que se ha demostrado que se unen especficamente a las clulas tumorales Tn-positivas y para inducir la actividad
citotxica significativa en los experimentos de ADCC. Por otra parte, en comparacin con los de tipo salvaje
molculas de IgG, el formato scFv-Fc tiene beneficios potenciales para el desarrollo teraputico y uso. Estos tipos de
anticuerpos tienen peso molecular pequeo y por lo tanto se cree que tienen mejor penetracin en el tejido. Adems,
puesto que se componen de una nica cadena polipeptdica, no se requiere la asociacin heteromrica disulfuro y, por
consiguiente, la expresin de scFv funcional-FCS ha informado usando levadura.
5.1.4. Ratones Transgnicos
Entre las diversas tcnicas desarrolladas para producir mAbs humanos, recientemente una tecnologa centrado sus
esfuerzos en la generacin de mAbs inmunognicas bajos utilizando ratones transgnicos que expresan repertorios de
secuencias de genes de anticuerpos humanos. La produccin de mAbs humanos utilizando la tecnologa de hibridoma
y ratones genticamente modificados que expresan humanos repertorios de anticuerpos se inform por primera vez en
1994. Los ratones modificados fueron generados a travs de la interrupcin de la cadena de Ig endgena de ratn-Ig
pesada y? Loci de cadena -light para evitar la expresin del ratn pesado o cadenas ligeras. Al mismo tiempo, con el
fin de reemplazar las cadenas de ratn, los transgenes que codifican la cadena de Ig-pesada humana y la cadena -light
Ig? Se introdujeron. Tras la inmunizacin, estos ratones knockout / knockin fueron capaces de producir anticuerpos
humanos y usando tecnologa de hibridoma convencional, los bazos se utilizaron ms en la produccin de mAbs
humanos por las lneas celulares de hibridoma.
En los ltimos aos, el progreso se ha logrado y segmentos de genes V adicionales puede ser expresada por ratones
transgnicos ampliando el repertorio de los anticuerpos obtenidos. Actualmente, varias versiones diferentes de ratones
modificados de manera similar se han desarrollado y explotado por diferentes empresas biotecnolgicas y
farmacuticas. De hecho, ms de 50 anticuerpos monoclonales humanos desarrollados con esta tecnologa estn en
ensayos clnicos y en 2010 de seis de hecho llegaron al mercado.
5.1.5. Molecularmente Engineered Anticuerpos
La expansin de los anticuerpos teraputicos es un campo dinmico que evoluciona junto con los avances
tecnolgicos. Los avances en la ingeniera de anticuerpos les permite superar los principales problemas asociados con
la respuesta inmune contra desarrollado anticuerpos extraos introducidos en los seres humanos. Anticuerpo
quimerizacin, humanizacin y el desarrollo de anticuerpos humanos fueron las principales estrategias adoptadas para

reducir la inmunogenicidad. Adems, se han empleado esfuerzos para mejorar la afinidad, la farmacocintica y la
avidez de anticuerpos teraputicos, as como mejorar sus funciones efectoras naturales. Varios enfoques pueden ser
utilizados para manipular las regiones variables con el fin de aumentar la afinidad de unin para antgenos, o
sintonizar la especificidad de unin, es decir, la cadena de barajado, la aleatorizacin de CDR y las mutaciones
inducidas en las regiones variables. Por otra parte, las modificaciones en la glicosilacin o secuencias de aminocidos
de la regin constante puede modular las funciones efectoras Fc de los anticuerpos, ya que esta regin est implicada
en ADCC y CDC. La extensin de la vida media de IgG en suero se logra mediante el diseo de la regin Fc en
particular en la modulacin de su interaccin con el receptor Fc neonatal (FcRn) que se asocia con la proteccin de
inmunoglobulina de la degradacin intracelular. Actualmente, los conjugados anticuerpo-frmaco, la multimerizacin
de fragmentos de anticuerpos y la produccin de una variedad de formatos que no se encuentran en la naturaleza, tales
como Fab y scFv fragmentos, diacuerpos y minicuerpos estn emergiendo rpidamente como estrategias clave en el
campo de la ingeniera de anticuerpos. Como se prevea, la ingeniera de anticuerpos ha fomentado la investigacin
continua y el desarrollo en el refinamiento y la fabricacin de anticuerpos innovadores que muestran propiedades
nuevas y mejoradas para estimular la respuesta inmune antitumoral y ser aplicado en la teraputica.
6. Conclusiones
Los anticuerpos contra antgenos STN y Tn han planteado inicialmente un gran inters debido a su uso potencial como
herramientas de diagnstico. Este inters se extendi an ms a la explotacin del valor predictivo de los anticuerpos
'en pacientes vacunados. Inesperadamente, no ha habido esfuerzos (o muy limitado) que se extiende en el uso
teraputico de anticuerpos para aumentar las respuestas inmunes antitumorales o conjugado con cargas tiles txicos.
El hecho de que no hay anticuerpos teraputicos han entrado en ensayos clnicos podra explicarse por una aparente
falta de inters dada la promesa deslumbrante de la vacunacin o por un interludio mientras que los nuevos
anticuerpos estn siendo desarrollados por empresas acadmicas o biofarmacuticos. Sin lugar a dudas, existe la
necesidad de desarrollar nuevos anticuerpos con mejores caractersticas especficas dirigidas STn o Tn.
Alternativamente, los anticuerpos contra glicopptidos podra ser un enfoque adecuado para aumentar su especificidad.
La obtencin de anticuerpos con dicha especificidad para la conformacin de glicano es metodologas de vanguardia
tcnicamente exigentes, por lo tanto novedosas descritos en este documento surgen como recursos muy atractivos para
acelerar el desarrollo de anticuerpos teraputicos anti-Tn y -STn que podra ser particularmente til en la mejora de la
respuesta inmune o como sistemas de administracin de frmacos.

Chicos, para el artculo de esta semana poner enfasis en:

- El resumen
- Introduccin
- Anticuerpos, sus mtodos de produccin
- Conclusiones
Agradecimientos no ah XD