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UNIVERSIDADE ESTADUAL DE GOIS

NOME: Rafael Rodrigues Gomes


CURSO: Farmcia
TURMA: 4 Perodo
PROF(A): Jaqueline Gomes
COMPONENTE CURRICULAR: BIOLOGIA MOLECULAR
DNA: MECANISMOS DE REPARO
Apesar de mutaes genticas serem de extrema importncia para a evoluo de uma espcie, a
sobrevivncia do indivduo depende da estabilidade do seu genoma. A estabilidade resulta no s de um
acurado mecanismo de replicao, mas tambm de mecanismos que reparem os danos que ocorrem
continuadamente no DNA.
Entende-se por reparo a capacidade da maquinaria celular de corrigir os erros causados por mutaes. Muitos danos sofridos pelo DNA podem ser reparados porque a informao gentica preservada
em ambas as fitas da dupla-hlice, de tal forma que a informao perdida em uma fita pode ser recuperada
a partir da fita complementar.
Os mecanismos existentes e conhecidos de reparao do DNA lesado so provavelmente
universais e uma clula pode ter vrios sistemas capazes de atuar ao mesmo tempo no DNA lesado. Como
os sistemas de reparao so mais bem compreendidos e estudados na E. coli, muitos mecanismos
discutidos faro referncia a esta bactria.
REPARO POR FOTORREATIVAO ENZIMTICA
Um dos mecanismos de reparo melhor estudados a remoo dos dmeros de pirimidina, formados pela exposio do DNA luz ultravioleta. Este dmero no se encaixa bem na estrutura de duplahlice e, assim, a replicao e a expresso gnica so bloqueadas at que a leso seja removida.
Esse tipo de leso pode ser reparado de diferentes formas. A forma mais direta envolve enzimas
que simplesmente revertem modificao qumica que originou o dano. Dmeros de pirimidina so o alvo
universal da enzima fotoliase, que se liga ao dmero e catalisa uma segunda reao fotoqumica, desfazendo o anel formado pela luz UV e refazendo as bases pirimdicas individuais. Esse processo chamado
fotorreativao e envolve as seguintes etapas:
Inicialmente, a enzima reconhece e liga-se ao dmero (mesmo na ausncia de luz visvel);
Depois a absoro de luz fornece energia para converter o dmero em monmero de
pirimidina;
Enzima dissocia-se do DNA.
A reao depende do gene que codifica a fotoliase e ocorre especificamente em
procariotos.
REPARO DE BASES ALQUILADAS
A base nitrogenada primariamente afetada pelos agentes alquilantes a guanina. Na E. coli, esta
leso removida pela enzima O6-metilguaninametiltransferase, que reconhece a alterao no DNA e
remove o grupamento metila causador da mutao. A mesma enzima tambm pode remover grupamentos
metila dos fosfatos que possivelmente interrompem a cadeia de DNA. Uma caracterstica importante

dessa reao que cada grupamento metila removido consome uma enzima O6-metilguaninametiltransferase, a qual no pode ser recuperada para nova utilizao.
REPARO POR EXCISO DE BASES
Ocorre quando a remoo da base defeituosa feita pela clivagem da ligao base nitrogenada
desoxirribose, seguida pelo preenchimento da regio com a base correta por ao da DNA-polimerase.
Um exemplo comum de reparo por exciso de base o que acontece na correo da desaminao da
citosina uracila. O sistema de reparao reconhece a uracila como uma base estranha ao DNA. Primeiramente, a uracila-DNA-glicosilase hidrolisa a ligao entre a uracila e a molcula de desoxirribose. Nesse
estgio, a cadeia de DNA est intacta, mas a base perdida. A enzima AP endonuclease reconhece, ento,
essa fenda e cliva a cadeia em regies adjacentes base perdida. A DNA-polimerase insere novamente
uma citosina, de acordo com a orientao fornecida pela fita complementar no-danificada, que contm
uma guanina. Finalmente, a integridade da fita corrigida restaurada pela DNA-ligase. Existem outras
glicosilases que reconhecem e removem hipoxantina, 3-metil-adenina e purinas com anel imidazol aberto
por radiao ionizante ou pH elevado.
REPARO POR EXCISO DE NUCLEOTDEOS (REN)
Ocorre quando a remoo da base defeituosa feita pela inciso endonucleoltica nos dois lados da
leso, com liberao dos nucleotdeos, seguida pelo preenchimento da regio por ao da DNA-polimerase. Em todos os organismos onde j foi estudado, o processo de REN consiste em cinco etapas:

Reconhecimento da leso por um complexo multienzimtico;


Inciso da fita anormal em ambos os lados da leso a alguma distncia desta;
Exciso do segmento contendo a leso;
Sntese de um novo segmento de DNA utilizando a fita no-danificada como molde, por ao da

DNA-polimerase;
Ligao/restaurao da molcula de DNA por ao da enzima DNA-ligase.
A extenso mdia do fragmento de DNA removido de 12 nucleotdeos, razo pela qual esse modelo
chamado de reparao de regies curtas ( uma funo constitutiva da clula). Em caso de grandes
quantidades de leses, em que a substituio envolve de 1500 a 9000 nucleotdeos, o modelo conhecido
como reparao de regies longas (induzido por leses no DNA pelo menos no que diz respeito clula
bacteriana).
O modelo proposto para o sistema de REN em mamferos o seguinte:
As protenas XPB, XPD e XPA esto envolvidas na deteco da leso, sendo que as duas primeiras percorrem a hlice e a segunda reconhece a leso;
Aps encontrar a leso, o DNA do local do dano desnaturado e as endonuclease XPF e XPG
fazem a dupla inciso na cadeia;
O oligonucleotdeo contendo a leso removido pelas DNAs-polimerases de e pelos seus cofatores PCNA e RF-C, que tambm so responsveis pelo passo seguinte;
Ocorre uma nova sntese do DNA utilizando a fita no danificada como molde;
Ligao da extremidade 5 da regio recm-sintetizada seqncia original, pela DNA-ligase.

Outro exemplo muito interessante de REN o sistema de reparao global X genes ativos. Foi
demonstrado em E. coli que, embora stios distintos contenham o mesmo tipo de leso, o sistema pode
diferenciar um gene ativo de uma regio no-codificadora; assim, os stios crticos do genoma so os
primeiros a ser reparados. Em mamferos, onde a quantidade de DNA presente no ncleo muito maior
do que na E. coli, a reparao preferencial de seqncias transcritas tambm ocorre.
REPARO DE BASES MALPAREADAS
Algumas bases incorretamente pareadas conseguem escapar da reviso realizada pela DNApolimerase durante o processo de replicao. Por isso, na E. coli, a etapa final que confere preciso ao
processo de replicao de responsabilidade do sistema de correo de erro, que consiste em vrias
protenas codificadas pelos genes mut. Esse sistema percorre o DNA recentemente sintetizado procura
de pares de base mal pareadas e remove os segmentos de fita simples contendo nucleotdeos incorretos.
Isso permite que a DNA-polimerase insira a base correta na lacuna formada. A dificuldade que surge,
aparentemente, a de distinguir qual das bases de um par erroneamente formado a incorreta, porque
ambas so componentes naturais do DNA. Se a remoo de uma das bases fosse ao acaso, haveria a
probabilidade de 50% de a base correta ser removida e a mutao poderia ser perpetuada, ao invs de ser
corrigida. Existe, porm, um sinal especfico que direciona o sistema de exciso do erro exclusivamente
para a fita recm-sintetizada: o reconhecimento de seqncias GATC prximas ao erro. GATC metiladas
indicam a fita parental, enquanto que ausncia de metilao nestas seqncias caracteriza a fita recmsintetizada. O sistema de correo detecta no somente pares nicos de bases mal pareadas, mas tambm
adies e delees, o que reduz a incidncia de mutaes por modificao no mdulo de leitura, alm
daquelas envolvendo substituio de bases.
REPARO POR RECOMBINAO
No processo de reparao por recombinao, a fita complementar no danificada utilizada como
molde na substituio do fragmento lesado. Algumas vezes, porm, esse molde no est disponvel, por
motivos diversos. A DNA-polimerase, ento, forada a passar pela leso sem replicar aquela regio.
Uma lacuna com um tamanho considervel deixada na fita recm-sintetizada. Toda a informao do
stio danificado perdida e somente pode ser recuperada pela utilizao de outra molcula idntica de
DNA. Como as clulas de organismos superiores so geralmente diplides, elas possuem a mesma
seqncia, ou praticamente a mesma, em cada um dos cromossomos homlogos. Uma fonte apropriada de
DNA, portanto, pode ser encontrada na clula. Assim, como esquematizado na figura abaixo, aps uma
mutao, a fita 1 do homlogo A (1A) no est disponvel; a fita 2 do homlogo A (2A) possui uma
lacuna. As fitas 1 e 2 do homlogo A (1A e 2A, respectivamente) esto ntegras. No reparo por
recombinao, a fita 1A permutada pela fita 2A, de modo que 1A sirva de molde para reconstruo de
1A; e 2A sirva de molde para 2A. Na E. coli, de fundamental importncia a protena RecA, pois s ela
capaz de parear duas molculas de DNA homlogas e catalisar as reaes de trocas de fitas, permitindo
reparao e recuperao de leses.

REPARO ATRAVS DO SISTEMA SOS


Uma vez que a clula pode regular a expresso gnica de acordo com sua necessidade, muitas
enzimas envolvidas no reparo do DNA so induzidas pelo prprio defeito da molcula de DNA. As
enzimas mais importantes desse processo so derivadas dos genes SOS, cuja expresso induzida por um
defeito severo o bastante a ponto de impedir a sntese de DNA. Estes genes do origem a protenas de
reparo como, por exemplo, endonucleases de exciso, helicases, entre outras. Os dmeros de pirimidinas
constituem um exemplo tpico desse tipo de dano. Quando a forquilha de replicao encontra um dmero,
a sntese pra e s reiniciada a alguma distncia alm do dmero, ficando uma lacuna no DNA na qual a
enzima de recombinao RecA se liga. Essa ligao ativa em RecA uma atividade enzimtica
completamente independente da recombinao: ela destri o repressor dos genes SOS (repressor LexA).
Dessa maneira, a protena RecA promove reparao do material gentico de duas formas: por
recombinao, com troca das fitas, e por induo dos genes SOS.
REPARO SUJEITO A ERRO
Existem ocasies em que o dano no DNA to extremo que no h como os mecanismos celulares
de reparo corrigirem de forma precisa a molcula. Nesses casos, a clula utiliza como ltimo recurso o
sistema de reparo sujeito a erro, no qual qualquer uma das quatro bases inserida no local lesado, a fim
de garantir a continuidade do processo de replicao. Devido ao fato de no haver a informao precisa
(molde), o prprio mecanismo de reparo acaba sendo o causador de uma mutao, pois a chance de
introduzir uma base incorreta na cadeia grande. De qualquer forma, para a clula prefervel incorporar
uma base incorreta e permitir que a replicao continue, do que no replicar mais. Na E. coli, esse sistema
de reparao envolve dois genes principais: umuC e umuD. Esses genes so tambm genes SOS e,
portanto, seus produtos esto em abundncia somente aps a clula ter o sistema SOS ativado. Devido a
isso, a protena RecA tambm necessria no sistema de reparo sujeito a erro, a fim de comandar a
induo dos genes umuC e umuD.
REPARO POR UNIO DE EXTREMIDADES NO-HOMLOGAS
Quebras nas duas fitas de uma mesma molcula de DNA ocorrem nas clulas em diversas
circunstncias e constituem uma das principais ameaas integridade do genoma. Se no forem reparadas, podem causar a morte celular e, em organismos multicelulares, podem causar o cncer. Uma grande
variedade de agentes exgenos, incluindo a radiao ionizante e um nmero considervel de
quimioterpicos (como a bleomicina), causam essas quebras, bem como agentes endgenos, a exemplo
dos radicais livres. O principal mecanismo de reparao dessas quebras duplas, que ocorre comumente
em mamferos, chamado de unio de extremidades no-homlogas. Neste mecanismo, as extremidades
de uma molcula de DNA, apesar de terem perdido alguns nucleotdeos por degradao espontnea, so
justapostas para recombinar. O mesmo complexo enzimtico realiza o processo de ligao entre as duas
extremidades. Desta forma, a seqncia original de DNA acaba sendo alterada.
REPARO POR UNIO DE EXTREMIDADES HOMLOGAS

O segundo mecanismo reparador de quebras na dupla-fita a unio de extremidades homlogas.


O processo bem mais comum em bactrias e leveduras, e tambm mais preciso. Por este mecanismo, o
cromossomo homlogo quele lesado faz uma cpia da seqncia de nucleotdeos perdida com quebra da
dupla-fita e transfere esta seqncia para o stio de quebra no cromossomo lesado; este cromossomo
lesado, ento, tem sua seqncia original restaurada.

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