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Laura Vlez
Microbiologa Ambiental
FUAC
Papel Kraft
Horno Elctrico
Cajas de petri
Pipetas
Fardy Daz
Laura Vlez
Microbiologa Ambiental
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PROCESO DE ESTERILIZACION
Con el fin de eliminar todos los microorganismos
contaminantes y obtener el crecimiento
nicamente de los organismos que nos
interesan, los medios de cultivo son sometidos a
un tratamiento trmico conocido como
esterilizacin hmeda por medio de un equipo
conocido como autoclave.
El autoclave es un equipo hermtico que
permite la entrada de vapor de agua a presin.
El uso de calor hmedo permite la muerte de los
microorganismos incluidas las endoesporas
bacterianas. Experimentalmente se ha
determinado que el tiempo requerido para matar
las endoesporas bacterianas es de 10-20
minutos y la temperatura de 1210C, razn por la
cual los autoclaves se han diseado para
alcanzar esta temperatura. El autoclave utiliza la
presin para lograr esta temperatura, siendo la
presin de 15 libras por pulgada cuadrada, la
requerida para lograr 1210C de temperatura.
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Crystal Violeta.
Lugol.
Alcohol Acetona.
Fuscina.
Microscopio.
Mechero.
7.
8.
9.
10.
2.1 Metodologa
Morfologa Bacteriana
En esta prctica se tomaron muestras del sarro
dental de un compaero de laboratorio, de
yogur natural y contaminacin ambiental
brindada por el laboratorio. Ahora esas
muestras tomadas a travs de un asa metlica y
un algodn se esparcen en una lamina de vidrio,
luego se le aplica una gota de agua y se seca
las muestras con el mechero, ya secas la
muestras se le realiz el proceso de la tincin
de gram que consiste en identificar el tipo
bacterias a travs de una serie de qumicos que
se le aplican en el siguiente orden y tiempo de
exposicin:
Tabla 1: Tincin de Gram
Compuesto
Crystal Violeta
Se lava la muestra
Lugol
Se lava la muestra
Alcohol Acetona
Se lava la muestra
Fuscina
Tiempo
de
Exposicin
1 Minuto
Se lava la muestra
1 Minuto
Se lava la muestra
15 30 Segundos
Se lava la muestra
1 Minuto
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2.2 Metodologa
Muestreo de Ambientes y Superficies
Se prepar agar para cultivar bacterias y agar
para cultivar hongos, se escogi agar plate
count para aislar las bacterias y agar saboreaud
para cultivar los hongos. El agar Plate count(1)
esta hecho de nutrientes de suplemento de
tryptone, vitaminas de extractos y glucosa que
le dan energa para el crecimiento de las
bacterias, su preparacin normal es 25g del
agar deshidratado en 1 litro de agua destilada,
hervir lentamente y agitar hasta que se disuelva,
esterilizar en el autoclave durante 15 minutos a
una temperatura de 121 C y finalmente servir
en las cajas de petri. Ahora el agar
Saboreaud(2) se utiliza para cultivar hongos y
levaduras, este agar esta hecho a partir de
muestras de alimentos, derivados de leche y
cosmticos. Algunos procedimientos sealan
bajar el pH del medio a 3.5 0.1 con cido
tartrico al 10 %, para inhibir el crecimiento
bacteriano. Su preparacin recomendada es
39g del medio en un litro de agua destilada,
calentar y hervir 1 minuto y esterilizar en el
autoclave a 121 C y dejar enfriar durante 15
minutos a una temperatura de 40 45 C y
servir en las cajas de petri estriles. Las
muestras son tomadas en manos de un
compaero, ambiente y superficies, se hizo
muestreo de superficie el en borde de la
baranda de una escalera, la de ambiente se
hizo al aire libre en un pequeo patio y la de
manos se pas el isopo entre los nudillos y las
uas de las manos de un compaero, se tomo
un tubo de ensayo con agua destilada y se
sumergi la muestra, tambin se hizo lo del tubo
de ensayo con la muestra de superficies.
Despus de hacer esto se realiz el respectivo
cultivo en el agar para bacterias dentro de las
cajas de petri y en el agar de los hongos en la
respectiva caja de petri . Se determino la
temperatura de crecimiento de las bacterias a
37 C, durante 24 48 horas y para los hongos
de 8 dias de incubacin a una temperatura de
25 28 C. En total se hizo esto en 6 cajas de
petri, 3 para hongos y 3 para bacterias. Luego
se realizo el proceso de esterilizacin en una
cmara a travs de un horno que funcionaba
con bombillos halgenos, primero se limpio el
mesn con alcohol, despus se acomodaron las
6 cajas de petri una encima de otra, finalmente
se encendi la cmara y se espero un lapso de
tiempo de 10 minutos para retirar las cajas de
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Portaobjetos
Cuabreobjetos.
Asas Micolgicas.
Tincin de Azul de Lactofenol
Cultivos fngicos.
Acido lctico.
Solucin estril de glicerina al 5%.
Caja de petri con cmara hmeda para
montaje de microcultivo.
Bisturs.
Alcohol al 70%.
Pipetas estriles.
Microscopio.
Mechero.
Montaje
Se desinfect el mesn de trabajo con alcohol
en concentracin al 70%, Luego se paso el
bistur por el mechero para eliminar
contaminacin y se hizo un corte cuadrado de 1
cm2 en el agar ya preparado de P.D.A para
hongos, el cuadrado de agar cortado se coloc
sobre una lmina de la cmara hmeda y se
paso por el mechero un cubreobjetos y se puso
por encima de la superficie del agar, despus se
aplic 2 ml de solucin estril de glicerina al 5%,
en el fondo de la cmara hmeda , se tom la
muestra de los hongos cultivados desde la
practica 2, se escogi la muestra de ambiente,
se abri la caja de petri del cultivo de hongos de
ambiente cerca del mechero para que no se
contaminara y se realiz la toma de muestra a
travs de un asa previamente flameada en el
mechero, ya con la pequea porcin de muestra
se sembraron 4 puntos en el agar y se le puso
el cubreobjetos, para finalizar la muestra se
incuba en un tiempo de 5 8 das, la caja se
invierte y se marca con los nombres de los
integrantes del grupo, se somete a temperatura
ambiente para su posterior anlisis en el
microscopio.
Observacin de microcultivo
Pasada una semana despus de someter una
muestra ambiente de hongo a la cmara
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Morfologa Microscpica
Hongo levaduriforme: no
Hongo micelial o filamentoso: si
Hifas cenocticas o aseptadas: cenociticas
Hifas septadas: no
Presenta estructuras de reproduccin:
escolespora
Presenta cuerpos fructferos: cuerpos
globosos o piriformes que en el interior
contienen conidias: no
Presenta cuerpos fructferos que en el
interior contienen ascos y ascosporas: si
Discusin de
esterilizacin.
Resultados
Prctica
de
Numer
o inicial
MO
MO
Destruido
s en 1
min. (90%
del total)
Mo
sobreviviente
s
Log
De
superviviente
s
106
9 * 105
105
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105
9 * 104
104
104
9 * 103
103
103
9 * 102
102
102
9 * 101
10
101
0.9
0.1
-1
6
7
Discusin de
Micromycetos.
Resultados
Prctica
de
CONCLUSIONES
1. La esterilizacin elimina con eficacia
los microorganismos y sus esporas
garantizando buen manejo del material
en el laboratorio.
2. Los agares son el hogar de bacterias y
hongos para su ptimo desarrollo en el
laboratorio.
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BIBLIOGRAFA
1. Medicatec, Biokar Diagnostics Rue des
Quarante Mines, consultado el 11 abril de
2012http://www.medicatec.com/arg/?
291,%28bk144ha%29-plate-count-agar%28p.c.a.%29-500-grs.
2. Mcdlab, Especificaciones agar dextrosa y
papa, Mxico, consultado el 11 de abril
de2012http://www.mcd.com.mx/pdfs/agar_
dextrosa_papa.pdf.
3. Prescott M, Microbiologa. 5ed. Madrid,
McGraw Hill, 147 -149p.
4. Surez M, Muoz J,. Manual de
fundamentos de Micologa. Universidad
Javeriana, Falcultad de ciencias. 1999. 15
19p.
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