Instituto Politcnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas

METODOS DE ANALISIS
Prctica 3: Separacin e identificacin de aminocidos
de jugo de fruta por cromatografa bidimensional en
capa fina

Grupo: 5QV1
Seccin: 2
Integrantes:
Fernndez Ramrez Emanuel
Profesores: Guillermina

Cromatografa de Intercambio Inico: La separacin se basa principalmente en la

diferente afinidad para el intercambio de iones de los componentes de la muestra.
Actualmente, cuando se lleva a cabo sobre columnas de partculas pequeas y elevada
eficiencia, y empleando habitualmente detectores conductimtricos o espectroscpicos,
se denomina cromatografa de iones (IC). La cromatografa de intercambio inico se
realiza sobre matrices que tienen una carga neta. La carga de la matriz de la columna as
como la carga de las molculas depender del pH del disolvente y de su fuerza inica
(proporcional a la concentracin de iones). En unas condiciones determinadas sern
retenidas en la columna las molculas o especies que tengan una carga complementaria
a la de la matriz del gel (las molculas cargadas negativamente sern retenidas por una
matriz cargada positivamente), siendo eluidas las restantes. Para eluir las molculas
retenidas se puede variar la carga inica del disolvente o su pH de forma que se alcance
el punto isoelctrico de la molculas o especies de inters o el de la matriz, neutralizando
de este modo la fuerza que retiene a las molculas en la columna.
Cromatografa Bidimensional Procedimiento en el que parte o todos los componentes
de la muestra se someten, una vez separados, a etapas adicionales de separacin. Esto
se puede hacer, por ejemplo, conduciendo a una fraccin en particular que eluye de la
columna hacia otra columna (o sistema) que tenga diferentes caractersticas de
separacin. Cuando se combina con etapas de separacin adicionales, se puede hablar
de cromatografa multidimensional. En la cromatografa plana, cromatografa
bidimensional se refiere al proceso cromatogrfico que hace que los componentes migren
primero en una direccin y luego en otra perpendicular a ella; las dos eluciones se llevan
a cabo con eluyentes diferentes.
APLICACIONES
Las tcnicas de aplicacin de la cromatografa en capa fina se aplican para desarrollar
las condiciones para la separacin en cromatografa en lquidos de alta resolucin.
La cromatografa en capa fina tiene amplio uso en los laboratorios clnicos y es la
estructura de apoyo de muchos estudios bioqumicos y biolgicos. Tambin tiene una gran
aplicacin en los laboratorios industriales.
Como por ejemplo determinar que aminocidos estn presentes en algn producto de
alimentos comercial y as saber si este producto cumple con las normas mexicanas
marcadas.
En la bioqumica clnica, especialmente en la separacin de lpidos. Para tal efecto, se
realiza una cromatografa en capa fina para la separacin de lpidos neutros y fosfolpidos.

OBJETIVOS:

 Separar
los aminocidosen
presentes
en jugo
de frutos por cromatografa
Tabla
2: Cromatografa
capa fina
bidimensional
(cromatograma 3)
bidimensional en capa fina.

Identificar los aminocidos separados por comparacin de sus valores de Rf con

los de soluciones tipo de aminocidos.

RESULTADOS

Fase mvil 1

Fase mvil 2
Tabla 1: Cromatografa en capa fina unidimensional utilizando las dos
Aminocid
F. soluto
solvente
F. soluto estndar
F. solvente
Rf
fases
mviles
paraF.separar
losRf aminocidos
o

Lisina

1.5

7.9

0.1898

0.9

7.7

0.1168

Arginina

1.5

7.7

0.1948

0.7

0.0875

Glicina

3.2

7.8

0.4102

2.1

7.8

0.2692

3.8

7.8

0.4871

2.2

7.7

0.2857

4.5

7.8

0.5769

2.3

7.8

0.2948

Treonina

4.8

7.7

0.6233

2.6

7.7

0.3376

Histidina

7.9

0.6329

0.8

7.8

0.1025

Tirosina

4.9

7.1

0.6901

4.7

7.7

0.6103

Metionina

6.1

7.8

0.7820

4.2

7.7

0.5454

4.5

7.7

0.5844

Prolina

Ac.
Glutmico

Fenilalanina

6.3

7.8

0.8076

Fase mvil 2

Fase mvil 1

Fase mvil 2

Mancha

F. soluto

F. solvente

Rf

F. soluto

F. solvente

Rf

Aminocido

1.3

7.8

0.1666

7.6

0.1315

Lisina

7.8

0.3846

2.4

7.6

0.3157

Arginina

3.5

7.8

0.4487

2.2

7.6

0.2894

Glicina

4.4

7.8

0.5641

2.6

7.6

0.3421

Prolina

4.7

7.8

0.6025

1.6

7.6

0.2105

Ac.

Tabla 3: Cromatografa en capa fina bidimensional para el desarrollo en

las dos fases mviles (cromatograma 4 muestra)

Glutmico
6

4.7

7.8

0.6025

4.5

7.6

0.5921

Treonina

5.1

7.8

0.6538

2.2

7.6

0.2894

Histidina

5.5

7.8

0.7051

4.3

7.6

0.5657

Tirosina

6.6

7.7

0.8571

5.2

7.7

0.6753

Metionina

10

7.2

7.7

0.9350

7.2

7.6

0.9473

Fenilalanina

Fase mvil 1

Fase mvil 2

Mancha

F. soluto

F. solvente

Rf

F. soluto

F. solvente

Rf

1.3

7.7

0.1688

7.7

0.1298

2.5

7.7

0.3246

2.1

7.7

0.2727

3.5

7.7

0.4545

2.1

7.7

0.2727

4.3

7.7

0.5584

1.8

7.7

0.2337

5.2

7.7

0.6753

7.7

0.2597

7.7

0.7792

5.2

7.7

0.6753

7.4

7.9

0.9367

7.0

7.6

0.9210

Mancha
Rf 1ra FM
Rf 2da FM
1
0.1688
0.1298
2
0.3246
0.2727
3
0.4545
0.2727
Tabla
4:
Cromatograma
bidimensional
aminocidos
4
0.5584
0.2337
5encontrados.
0.6753
0.2597
6
0.7792
0.6753
7
0.9367
0.9210

Aminocido
Lisina
Glicina
Prolina
del
de papaya
Ac. jugo
Glutmico
Tirosina
Metionina
Fenilalanina

PREGUNTAS EXTRAS:
1.- Aminocidos que contenga el jugo de papaya utilizado en la prctica

2.- Escriba la reaccin completa y con nombres de la ninhidrina con un aminocido

Reaccin de ninhidrina con glicina para formar un complejo azul violeta

3.- Es posible cambiar las fases mviles?

Si es posible manipular las fases mviles, ya que gracias a estas fases mviles
dependiendo de la proporcin de los componentes de esta fase podemos hacer que un
aminocido corra de una manera ms rpido o ms lenta segn sea nuestro inters y as
poder tener el control de la separacin de nuestra mezcla
4.- Indique las posibles fuentes de error de esta tcnica
Algunos errores que se pudieron haber cometido durante la realizacin de la practica fue
que al momento de aplicar la muestra pongamos de ms y esta se junte con la siguiente
aplicacin y entonces no se separara ninguna de las dos de forma ptima o que la placa
la toquemos con las manos sin guantes y al igual habr sustancias que no sern
propiamente de la muestra a separar.

DISCUSIN DE RESULTADOS:
Como se observa en la tabla nmero uno el aminocido que ms se desplaz a lo largo
de la placa fue la fenilalanina y la metionina esto debido a que la fase mvil 1 contena
cloroformo-metanol-amoniaco en una proporcin 2:2:1 por lo cual el cloroformo es
hidrofbico al igual que la fenilalanina y la metionina lo que hizo que las interacciones
entre estos dos aminocidos y la fase mvil se llevara de una manera mejor y por esto
fueron mayor mente separados de la silica gel mientras que los aminocidos que corrieron
menos con esta primera fase mvil fue la lisina y la arginina debido a que como estos dos
aminocidos tienen un grupo R polar positivo y en nuestra primera mezcla solamente el
amoniaco tiene carga polar pero es positiva por lo que no interacciono con ninguno de
estos debido a que ambos tienen carga positiva, sin mencionar que el amoniaco es el
componente que se encuentra en menor proporcin.
Al igual en la tabla pero ahora con la segunda fase mvil que contena Butanol-cido
actico-Agua en proporciones 3:1:1 el aminocido que ms se desplazo fue la tirosina
esto debido a que es un aminocido polar sin carga al igual que el butanol y el agua por lo
tanto hubo mayor interaccin entre la fase mvil y este aminocido por lo que se separ
ms a comparacin de los dems aminocidos, como se sabe algunos de los
aminocidos que utilizamos tambin son polares sin carga y que no hayan corrido igual
que la tirosina puede ser debido a su grupo R de estos aminocidos, y los aminocidos
que menos se desplazaron fueron la arginina, histidina y lisina aunque en nuestra fase
mvil se encuentra un componente polar con carga negativa (cido actico) este se
encuentra en muy baja proporcin por lo que no tuvo suficiente interaccin con nuestros
aminocidos polares con carga positiva.
Para el caso de nuestra muestra los aminocidos que se encontraron si coinciden con los
de la bibliografa aunque no se hayaron todos los aminocidos que contiene el jugo de
papaya y los Rf no fueron exactamente los mismos con respecto a los aminocidos
estndar que se utilizaron, esto puede ser debido a que el jugo de papaya adems de
aminocidos contiene otras sustancias que pudieron haber interferido al momento de
realizar la cromatografa bidimensional para separar los aminocidos de nuestra muestra.

CONCLUSIONES:

La cromatografa bidimensional se utiliza para separar mezcla con muchos

componentes como el jugo de papaya
El jugo de papaya contiene los aminocidos lisina, glicina, prolina, cido glutmico,
tirosina, metionina y fenilalanina.
La separacin de los componentes de una mezcla depender de que tanta
afinidad tengan por la fase mvil o por la fase estacionaria

BIBLIOGRAFIA:
http://alimentos.org.es/aminoacidos-papaya (consultado: 7 de octubre del 2015)
http://es.slideshare.net/isabelcorrao/amino1 (consultado: 7 de octubre del 2015)