Professional Documents
Culture Documents
CETECAL
Auxiliar de Laboratorio de Industrias Alimentarias
ANLISIS MICROBIOLOGICO
PARAMETRO
VALOR OBTENIDO
Recuento
colonias
aerobias
mesfilas a 37 +/- 1C
Recuento
colonias
psicrotrficas a
22 +/- 1C
VALOR LIMITE
10 ufc/ ml
aerobias
100 ufc/ ml
Coliformes totales
< 1 ufc/ml
Coliformes fecales
< 1 ufc/ml
Estreptococos fecales
< 1 ufc/ml
Clostridium sulfito-reductores
Ausencia/20 ml
Nota: el cloro residual, olor y sabor, sern parmetros medidos in situ por la persona
encargada de la recogida de muestras.
BIBLIOGRAFA:
- M del Rosario Pascual Anderson, Vicente Caldern Pascual. Microbiologa Analtica para
alimentos y bebidas. Ediciones Daz de Santos. 2 Edicin, 2000.
- Manual Bsico de microbiologia Cultimed. Editado por Panreac Qumica S.A. 2 Edicin, 1998.
ANDALUCIA POLIVALENTES
CETECAL
Auxiliar de Laboratorio de Industrias Alimentarias
ANDALUCIA POLIVALENTES
CETECAL
Auxiliar de Laboratorio de Industrias Alimentarias
INVESTIGACION
Y
RECUENTO
DE
COLIFORMES
COLIFORMES FECALES (ESCHERICHIA COLI)
TOTALES
1 DEFINICION
Las Enterobacteriaceae lactosa positivas o grupo coli-aerogenes, pertenecen a la familia de la
enterobacterias y se caracterizan por su capacidad para fermentar la lactosa con produccin de
cido y gas, ms o menos de forma rpida, en un periodo de 48 h y con una temperatura de
incubacin comprendida entre 30-37 C.
Dentro de este grupo, son los coliformes fecales los que tienen significado sanitario y, por
consiguiente, los que ms interesan en el anlisis microbiolgico de agua y alimentos. Este
grupo es considerado como presuntos Escherichia coli.
La determinacin de E. coli en los alimentos, tiene como finalidad servir de ndice de
contaminacin fecal de los mismos.
E. coli es
Debido a
contrario,
alimentos
huesped constante del intestino del hombre y de los animales de sangre caliente.
su especificidad, es considerado un buen ndice de contaminacin fecal. Por el
vive poco tiempo en un ambiente extraentrico, por lo que su presencia en los
es indicativa de una contaminacin reciente.
ANDALUCIA POLIVALENTES
CETECAL
Auxiliar de Laboratorio de Industrias Alimentarias
ANDALUCIA POLIVALENTES
CETECAL
Auxiliar de Laboratorio de Industrias Alimentarias
4 PROCEDIMIENTO DE REFERENCIA: METODO NMP
Paso 1.- Siembra en medio BGBL
A partir de la muestra a analizar, tomar 10ml, y aadirlo en los primeros tres tubos de la serie
de nueve tubos con 10 ml de medio BGBL., a los tres segundos aadimos 1ml y a los tres
ltimos 0.1ml. Comprobar que cada uno de los tubos contiene una campana Durham.
Incubar a 30C durante 48 h.
Al cabo del tiempo de incubacin, comprobar la presencia de tubos positivos: turbidez del
medio con leve viraje a amarillo y produccin de gas en la campana. Comprobar el NMP en las
tablas y anotarlo, este sera el resultado de Coliformes totales en 100 ml de muestra.
Paso 2.- Siembra en Caldo EC
De cada tubo positivo en BGBL, tomar 1ml y aadirlo en un tubo con 10 ml de Caldo EC y
campana.
Incubar a 45 C durante 24-48 h.
Los tubos positivos presentan turbidez y gas en la campana. Hacer recuento de los mismos,
comprobar el NMP y anotarlo. Este sera el resultado de Coliformes fecales por 100 ml de
muestra.
Paso 3.- Confirmacin de los tubos positivos
Siembra en Agar de Levine: Sembrar de cada tubo positivo en Caldo EC, dos placas con Agar
de Levine. La siembra se har con asa de platino procurando evitar el acmulo de colonias que
no nos permita observar el caracterstico color verde metlico de las mismas.
Prueba del Indol: de cada 1-2 colonias se siembran tubos con agua de triptona y se incuban en
bao mara durante 24 h a 44.5 C. Transcurrido este tiempo adicionar 0.5 ml de reactivo de
Kovacs y se observa la aparicin de un anillo rojo bermelln en la superficie del medio (prueba
positiva) o amarillento (prueba negativa).
Paso 4.- Otras pruebas confirmativas:
Siembra de colonias en medio Kliger: tomar una colonia bien diferenciada de cada placa y
sembrarla en picadura sobre el medio, de manera que tambin se siembre el pico de flauta. E.
coli va a presentar las siguientes caractersticas:
Superficie inclinada: amarilla
Base: amarilla
Gas: +
H2 S: -
ANDALUCIA POLIVALENTES
CETECAL
Auxiliar de Laboratorio de Industrias Alimentarias
ANDALUCIA POLIVALENTES
CETECAL
Auxiliar de Laboratorio de Industrias Alimentarias
4 PROCEDIMIENTO DE REFERENCIA: METODO NMP
Paso 1.- Siembra en caldo KAA
A partir de la muestra, sembrar en una batera de nueve tubos con 10 ml de caldo KAA cada
uno, 10 ml en los tres primeros, 1 ml en los tres segundos y 0.1 ml en los tres ltimos.
Incubar los tubos a 37C durante 24 h.
Los tubos positivos presentarn un ennegrecimiento.
Paso 2.- Siembra en agar KAA
A partir de cada tubo positivo, sembrar con asa de siembra, 0.1 ml en dos placas con agar
KAA.
Incubar a 37C durante 24 h.
Las colonias rodeadas de un halo negro, correspondern a estreptococos fecales.
El nmero de Streptococos D de Lancefield por 100 ml de muestra se obtiene por lectura en la
tabla del NMP de tres series de tres tubos de acuerdo con los tubos positivos en caldo KAA y
confirmados en agar KAA.
Paso 3.- Pruebas confirmativas
Catalasa: se determina la presencia de catalasa aadiendo 1 ml de agua oxigenada de 10
volmenes en un cultivo reciente del microorganismo problema en caldo BHI, pero nunca en
medios que contengan azida sdica. En caso positivo, se producen burbujas por
desprendimiento de oxgeno.
El grupo Streptococos D de Lancefield es catalasa negativo.
Crecimiento en presencia de cloruro sdico al 6.5%: los enterococos, dentro del grupo
Streptococus D de Lancefield, crecen en caldo BHI con 6.5% de cloruro sdico previa
incubacin a 37 C durante 72 h.
St. Equi y St. Bovis no crecen en este medio.
Crecimiento a 45C: tomar un cultivo reciente del microorganismo a estudiar en caldo BHI e
incubar a 45 C durante 24 48 h.
Todo el grupo crece a 45 C.
ANDALUCIA POLIVALENTES
RECUENTO
DE
ESPORULADAS)
CETECAL
Auxiliar de Laboratorio de Industrias Alimentarias
CLOSTRIDIUM
SULFITO-REDUCTORES
(FORMAS
1 DEFINICIN
Este grupo de microorganismos se suele utilizar para apreciar la calidad higinica del agua y
productos animales o de origen animal. Su nmero es escaso en productos frescos. La
capacidad de esporular les confiere una gran resistencia.
El grupo bacteriano de los sulfitos-reductores est integrado por microorganismos
pertenecientes al gnero Clostridium, los cuales tienen en comn reducir los sulfitos a sulfuros.
Otra de sus caractersticas es que son anaerobios estrictos.
2 MATERIAL Y MEDIOS DE CULTIVO
-
Tubos de 25 x 150 mm
Pipetas de 10 ml estriles con divisiones de 0.1 ml.
Estufa de cultivo a 46 C
Jarra de anaerobiosis
Bao termosttico
Agar sulfito-polimixina-sulfadiazina (SPS)
ANDALUCIA POLIVALENTES
CETECAL
Auxiliar de Laboratorio de Industrias Alimentarias