1.

-CONSERVACIN DE LA INFORMACIN GENTICA

BREVE HISTORIA
-En 1944, Avery demostr que el ADN constituye el material gentico. Este
hecho constituye el nacimiento de la Gentica molecular.
-En 1950, Chargaff demostr que la composicin de bases nitrogenadas en
los ADN vara segn la especie considerada, y estableci la llamada ley de
equivalencia entre las bases (A-T y C-G).
-En 1953, Watson y Crick establecieron la estructura de estas molculas
que constituyen, sin ninguna duda, el material gentico.

DOGMA CENTRAL DE LA BIOLOGA MOLECULAR

-La informacin gentica se almacena en la doble hlice del ADN, cuya
estructura es idnea para mantener la integridad de dicha informacin.
-Cuando una clula se divide, transmite su informacin gentica a las clulas
hijas; para ello, duplica previamente su ADN mediante el mecanismo de
lareplicacin.
-En 1970, Crick enunci el llamado dogma central de la Biologa molecular:

"la informacin gentica contenida en el ADN es

transcrita en forma de ARN y traducida a protenas"
(Los virus con ARN constituyen la nica excepcin a esta regla).
-Sin embargo, hay que observar que, no todos los genes se expresan a la
vez, es decir, no todas las protenas se sintetizan al mismo tiempo.
El control de la expresin gnica se puede realizar de distintas formas, pero
casi siempre tiene lugar mediante la regulacin de su transcripcin.

HIPTESIS SOBRE LA REPLICACIN

-Watson y Crick (1953), al proponer la estructura del ADN, ya sugeran uno
de los tres modelos o hiptesis de replicacin:

1) Conservativa:
La doble hlice original permanece intacta, originndose una doble
hlice completamente nueva.
2) Semiconservativa:
Cada nueva molcula de ADN est formada por una hebra original y
por otra recin sintetizada.
3) Dispersiva:
La molcula original se rompe y las dos nuevas se construyen con
precursores originales y de nueva sntesis.

-Messelson y Stahl (1958) demostraron que la hiptesis semiconservativa

era la correcta, adems de congruente con el modelo de la doble hlice de
Watson y Crick.
-La duplicacin del ADN se produce de acuerdo con las siguientes
caractersticas:
1)Es semiconservativa.
2)Bidireccional: a partir de un punto dado del cromosoma, la replicacin
progresa en dos direcciones
3)En virus y bacterias hay un nico punto de inicio de la replicacin,
mientras que en eucariotas hay varios.

4)La replicacin avanza por adicin de desoxirribonucletidos-monofosfato

(dNMP) en el sentido 5'3'.
5)Semidiscontinua: una hebra se replica de forma continua
complementaria de modo discontinuo (fragmentos de Okazaki).

la

6)La iniciacin de la sntesis de cada hebra y de cada fragmento requiere de

un cebador o primer (ARN).

ENZIMAS DE LA REPLICACIN
-Las ms importantes son las ADN polimerasas, que catalizan la formacin
de los enlaces fosfodister entre nucletidos y van aadiendo el nucletido
complementario al de la hebra molde.
Para ello, utilizan desoxirribonucletidos-trifosfato (dNTP) que, adems,
aportan la energa necesaria para la reaccin y desprenden restos de
fosfato inorgnico (P):
(Cadena polinucletida)n + dNTP (Cadena polinucletida)n+1 + P+P
-Las ADN polimerasas son diferentes en procariotas y en eucariotas, aunque
en todos los casos requieren un ADN-molde y un fragmento polinucletido
que proporcione el grupo 3' -OH libre al que ir aadiendo
desoxirribonucletidos. Este segmento es un ARN cebador llamado
tambin iniciador o primer.

-Las ADN polimerasas de procariotas son:

1) ADN pol I
-Escinde el ARN cebador.
-Repara errores de la sntesis del ADN.
-Rellena con desoxirribonucletidos el hueco resultante al eliminarse el
ARN cebador.
2) ADN pol II
-Repara pequeas roturas en las hebras del ADN (corrigiendo estos
errores).
3) ADN pol III
-Interviene directamente en la polimerizacin del ADN, (seleccionando
el dN adecuado).

-Las ADN polimerasas de eucariotas son:

1) ADN pol alfa y ADN pol delta:

-Controlan directamente la replicacin.

2) ADN pol beta
-Actividad reparadora.
3) ADN pol gamma
-Controla la replicacin mitocondrial y plastidial.

-Otras enzimas importantes son:

1) Primasas (ARN polimerasas dependientes de ADN): Sintetizan el ARN
cebador usando como molde una hebra de ADN
2) Girasas (topoisomerasas): Actan desenrollando el ADN
3) Helicasas: Separan las dos hebras del ADN, para que cada una acte de
molde.
4) Protenas SSB (single strand-binding) (estabilizadoras): Se unen a las
hebras, estabilizndolas (mantenindolas separadas) mientras tiene lugar la
replicacin. Actan conjuntamente con las helicasas.
5) Nucleasas: Rompen los enlaces fosfodister entre nucletidos, dando
lugar a un 'punto de origen' o inicio de replicacin.
6) Ligasas: Unen fragmentos adyacentes mediente enlaces fosfodister.

MECANISMO MOLECULAR DE LA REPLICACIN

-El mecanismo obedece a la hiptesis semiconservativa, y consiste en la
formacin de dos molculas de ADN idnticas a partir de una original que
acta como molde o patrn.

REPLICACIN EN PROCARIOTAS
-Distinguimos varias etapas:
1)El punto de la doble hlice de ADN donde se inicia el proceso se conoce
como 'origen de replicacin'.
A partir de l se forma una 'horquilla de replicacin' en la que el ADN
modifica su estructura espacial debido a la desespiralizacin que se
produce por rotura de los enlaces de H entre las bases
complementarias.
2)En la formacin de la horquilla intervienen:
a)las girasas: desenrollan o desespiralizan el ADN.
b)las helicasas: separan las dos hebras del ADN.
c)las protenas SSB: mantienen separadas las hebras.
3)A continuacin y por medio de una primasa se sintetiza un ARN
cebador para que pueda actuar la ADN pol III.
Esta enzima (ADN pol III), en principio, aade dNTP al cebador y,
despus, puede continuar la polimerizacin por s sola, siguiendo
el principio de complementariedad de bases.

4)Posteriormente, la ADN pol I acta como exonucleasa eliminando el

cebador y al mismo tiempo acta como polimerasa rellenando el hueco
con nuevos dNTP.
A la vez, la ADN pol II repara las roturas que pueden producirse. De
esta manera ininterrumpida (continua) se elabora una nueva hebra de
ADN, que se conoce como 'hebra conductora'.
5)Paralelamente al proceso anterior, la otra cadena del ADN sirve de
molde para la sntesis de su complementaria, que va a llamarse 'hebra
retardada' porque su elaboracin es discontinua al efectuarse de
manera fragmentada (Okazaki, 1968).
Los fragmentos de Okazaki poseen entre 1000-2000 dN.

El mecanismo es igual al descrito anteriormente para la 'hebra

continua', con las siguientes salvedades:
a)la sntesis comienza en un punto que dista unos 1000 nucletidos de
la seal de iniciacin.
b)varias primasas sintetizan diversos ARN cebadores (uno por cada
fragmento de Okazaki).
c)la ADN pol III alarga los fragmentos de cebador incorporando dNTP
en sentido 5'>3' (de modo antiparalelo a la hebra molde).
d)la ADN pol I vuelve a actuar como exonucleasa eliminando cebadores
y como polimerasa rellenando huecos, as como la ADN pol II repara
las posibles roturas.
e)al final, la ADN ligasa une los fragmentos independientes para
construir ya una cadena sin discontinuidades (la llamada 'hebra
retardada').

-As pues, el mecanismo de replicacin confirma que el ADN molde se

autoduplica exactamente, formando dos nuevas molculas con idntica
informacin gentica.
El mecanismo es esencial para que se realice correctamente la divisin
celular, en la que una clula madre origina por divisin dos clulas hijas con
idntica informacin hereditaria.

REPLICACIN EN EUCARIOTAS
-Sigue el mismo esquema bsico para el mecanismo, aunque ofrece algunas
diferencias destacables:
a)la clula eucariota contiene ms ADN y sus molculas tienen mayor
longitud (ms o menos 50 mm., frente a poco ms de 1 mm. en
bacterias).
b)debido a ello, la replicacin comienza simultneamente en varios
'puntos de origen', con lo cual se acorta el tiempo del proceso,
formndosenumeroas horquillas de replicacin.
c)el ADN de eucariotas consta de replicones (unidades de replicacin)
alineados uno tras otro (suele haber alrededor de 100 replicones por
cromosoma).
d)cada replicn tiene un punto de origen (O), donde se inicia la
replicacin, y dos puntos de terminacin (T), uno a cada lado del origen,
en los que acaba ese replicn y se encuentra el adyacente.
e)los fragmentos de Okazaki son ms pequeos (alrededor de 100-200
nucletidos) que en procariotas.

MECANISMOS DE REPARACIN DE ERRORES

-Existen mecanismos enzimticos que contribuyen a asegurar una correcta
replicacin, ya que este proceso requiere una gran precisin.
Concretamente, se sabe que algunas ADN polimerasas (I y II) poseen una
'actividad exonucleasa'. Tal actividad ...
a)reduce drsticamente la posibilidad de errores, y
b)se conoce como 'correccin de pruebas'.
La ADN pol como exonucleasa, es capaz de comprobar si el ltimo dN
colocado es el complementario de la hebra molde, antes de colocar el
siguiente; en caso de error lo retira y lo reemplaza por el correcto.
-A pesar de este sistema de 'correccin de pruebas', suele haber un
nucletido equivocado por cada 10 millones de dN aadidos.
Este valor no es considerable en procariotas, pero s en el ADN de
eucariotas ya que la cantidad es mayor y, por tanto, la probabilidad de
errores se incrementa (ello puede acarrear consecuencias no deseables).

-Para tratar de evitar este problema existe un complejo enzimtico que, por
su modo de actuar, se conoce como 'sistema de reparacin con escisin
del ADN'.
Este 'sistema de reparacin' revisa constantemente el ADN recin
elaborado y repara las posibles lesiones, rebajando el error a slo un
nucletido por cada 100 millones de dN aadidos.
A ttulo de ejemplo, este complejo enzimtico (sistema de reparacin)
funciona as:
a)una endonucleasa detecta el error y produce dos cortes a amboas lados
del mismo.
b)luego acta una exonucleasa que elimina todos los dN del segmento
cortado.
c)despus, la ADN pol sintetiza el segmento de forma correcta.
d)por ltimo, una ligasa une los extremos finales.