Immunoproteomics:

Anticuerpos circulantes reflejan una huella molecular de antgenos relacionados conautoinmune

enfermedades, cncer o infeccin. Lo
importante, los anticuerpos del suero son tilesmarcadores clnicos como
llevan informacin de diagnstico de todo el cuerpo humano. Por otra parte, laamplificacin
cascada, gobernado por el sistema inmune humoral produce un exceso deanticuerpos circulantes
despus de la aparicin del antgeno correspondiente (baja abundancia). Encombinacin con
el hecho de que los anticuerpos son altamente estables en comparacin
con muchasotras protenas de suero, parecen
ideal para aplicarse en los ensayos de diagnstico clnicos para la deteccin deantgeno asociado
enfermedades. Esta revisin resume los avances en immunoproteomics con respecto a tecnologas
para el descubrimiento de biomarcadores, con especial nfasis en la recientementedesarrollada lib
re de gel basado en MS
se acerca y espera que immunoproteomic aplicaciones en diagnstico
medicina.
1 Introduccin
'Immunoproteomics' es un concepto relativamente nuevo en el campo de laprotemica. Esta expre
sin fue introducida por Jungblut
en el ao 2001 [1], despus de lo cual han utilizado citas 30PubMed
esta frase hasta la fecha (julio de 2007). Sin embargo, immunoproteomics
se ha aplicado por ms tiempo y define el subconjunto de
protenas que inducen una respuesta inmune (immunoproteome).
Ni que decir tiene que la 'comprensin'
de este conjunto de antgenos identificados es altamente dependiente de la
tecnologa aplicada y que la cobertura mxima es
Cuando se combinan diferentes tcnicas para definir un
cierta immunome, como se discutir ms adelante.
1.1 el concepto de immunoproteomics
Immunoproteomics aprovecha el hecho que mayor
los organismos contienen un altamente sofisticado sistema inmune
tiene la capacidad de distinguir entre 'normal' (uno mismo)
protenas de 'anormales' (altruistas). En la mayora de los casos, las protenas de lo
originan de la invasin de hongos, parsitos, bacterias y
virus, sin embargo, tambin protenas husped aberrante que slo ocurren
durante un cierto estado de enfermedades (por ejemplo cncer) puede serreconocido
como altruistas. En este ltimo caso, la respuesta inmune es
impulsado por la expresin anormal de protenas (por ejemplo, las protenas que
normalmente slo se expresa durante el desarrollo embrionario),
o por alteraciones moleculares tales como mutacin, mal plegamiento,
aberrante degradacin o glicosilacin que hace que
Estas protenas inmunognicas. Por ltimo, bajo ciertas condiciones
el sistema inmunolgico errneamente comienza reconociendo selfproteins
como altruistas. Estas condiciones son conocidas como autoinmunes
enfermedades. En generales, protenas que se consideran
altruistas por el sistema inmune se denominan antgenos (anticuerpos
generadores) y puede definirse como las protenas que se unen a
los receptores inmunes y provocar una respuesta inmune [2]. Para
a efectos de diagnstico, es importante que los anticuerpos circulantes reflejan unahuella molecul
ar de los antgenos que son
especficamente relacionada con enfermedades autoinmunes, cncer o
patgenos invasores. La cuestin clave en immunoproteomics es
para visualizar lo que se ve por el sistema inmune (por ejemplo, definir

impresin de los anticuerpos) durante estas clases de enfermedad.

1.2 vigilancia por el sistema inmune
En principio, el sistema inmunitario protege los organismos de
la infeccin con tres capas posteriores de la defensa: (i) fsica
barreras que impiden que los patgenos entren en el cuerpo,
(ii) el sistema inmune innato que proporciona una inmediata,
pero la respuesta no especfica y (iii) el sistema inmune adaptativo
puede adaptar su respuesta durante una infeccin para mejorar
su reconocimiento del patgeno. La respuesta de este ltimo se conserva
en la forma de una memoria inmunolgica y permite la
sistema inmune adaptativo reaccionar ms rpido y ms fuerte cuando un
agente patgeno entra en el organismo por segunda vez [3].
El sistema inmune adaptativo puede ser dividido en un cellmediated T
componente celular y un B-mediada por clulas humoral
componente. Clulas T que reconocen antgenos nicamente cuando estos
se presentan en una forma procesada por el MHCof infectado (o
clulas cancerosas). Las clulas T asesinas pueden rastrear y matar directamente
infectan las clulas del husped por la secrecin de citotoxinas que forman
poros en la membrana de las clulas afectadas. Clulas T auxiliares
control de la movilizacin de otras clulas, como macrfagos,
limitar la fuente de las clulas infectadas o malignas [4].
En contraste con las clulas T pueden reconocer las clulas de B 'sobresale'
directamente con sus anticuerpos asociados a la superficie, que puede
se unen a un antgeno especfico sin necesidad de procesamiento del antgeno.
Lo importante, cada clula B es programada para hacer una
anticuerpos especficos [4]. As, el conjunto completo de antgeno de la clula de B
receptores representa el potencial completo humoral de una determinada
organismo. Despus, el complejo del antgeno/anticuerpo es
internalizada por la clula B y procesa en pptidos. Estos
pptidos antignicos se mostrar en las molculas de MHC
movilizar a emparejar las clulas T auxiliares, que liberan a cambio
citoquinas que activan esta clula especfica de B [5]. En consecuencia,
la clula de B activada comienza a dividirse y su progenie segrega
millones de copias del anticuerpo que reconoce esta particular
antgeno (Fig. 1A). Lo importante, estos anticuerpos pueden tambin
cruzar la sangre-cerebro, lquido cefalorraqudeo, sangre y el
barreras para encontrar sus correspondientes antgenos en sangre, placenta.
A continuacin, estos anticuerpos pueden unirse a patgenos expresan esta
antgeno y marcarlas para su destruccin, por ejemplo a travs de
captacin y destruccin por monocitos. Adems, estos
los anticuerpos pueden neutralizar infecciones directamente, por Unin a
las toxinas bacterianas o interfiriendo con los receptores que
usan de agentes patgenos para infectar las clulas [6].

1.3 caractersticas de la circulacin de los anticuerpos

Como se describe en la seccin anterior, anticuerpos circulantes
son la forma secretada de receptores de clulas B. Hay cinco anticuerpos
isotipos o clases y conocida como IgA, IgD, IgE, IgG y
IgM. Estas clases de Ig difieren en sus propiedades biolgicas, localizacionesfuncionales y su capac
idad para hacer frente a diferentes

antgenos. La produccin de cambios de isotipos de anticuerpos durante el

desarrollo y activacin de las clulas de B. De estos depsitos son
producido por madura B clulas y proporcionan la mayor parte de anticuerposbasado en la inmunidad contra los patgenos invasores. Desde
IgGs son soluble y secretada en grandes cantidades (hasta
15 mg/mL en suero), estas molculas son fciles de obtener y
estudio. La vida media de IgGs es cerca de 20 das, excepto IgG3,
que tiene una vida media de 7 das. La molcula de IgG est formada por
de cuatro cadenas polipeptdicas, que comprende dos luz idntica
cadenas y dos cadenas pesadas idnticas y puede ser descrito como
una forma Y estructura flexible (Fig. 1B). Cada uno de los cuatro
las cadenas tiene una regin variable (V) en su terminal amino, que
contribuye al sitio de unin a antgeno y una constante (C)
regin, que determina el isotipo. Las cadenas ligeras son
vinculados a las cadenas pesadas por interacciones no covalente y
por tres enlaces de disulfuro. Las regiones V de las fuertes y
par en cada brazo de la Y para generar dos idnticos cadenas de luz
sitios de Unin antgeno, que se encuentran en los extremos de los brazos de
la Y. La posesin de dos sitios de Unin antgeno permite
molculas de anticuerpo a los antgenos de la reticulacin y enlazarlos
mucho ms estable. El dominio Fc difiere en los anticuerpos de
diferentes isotipos, determinando sus propiedades funcionales,
sin embargo, es la organizacin total de los dominios
similar en los isotipos [2]. Lo importante, coincide con un anticuerpo
un antgeno como clave coincide con un bloqueo. Coincidir exactamente, algunos con
mientras que otros encajan como una llave esqueleto. Pero cada vez que
bloqueo de antgeno y anticuerpo, el anticuerpo marca el antgeno
para la destruccin.
Figura 1. La respuesta inmune humoral. (A) (1) la produccin
de antgenos se activan cuando su coincidencia encuentra con un
a clula de B (Bc)
antgeno (Ag). (2) la clula B tiene el antgeno a resmenes (3)
los fragmentos de antgeno antgenos y muestra en su propio MH
C
molculas de
la superficie. (4) la combinacin de la molcula de MHC y
fragmento de antgeno atrae correspondiente ayudante clulas de
T (Th), (5)
que secretan citoquinas (Cy) para permitir
que la clula de B multiplicar y
maduro en la produccin de clulas plasmticas de IgG. (B) un an
ticuerpo se hace
arriba de dos cadenas pesadas y dos cadenas ligeras, que estn i
nterconectadas
por tres puentes del disulfuro. El dominio variable (Fv)
es diferente para cada anticuerpo y define su afinidad especfica p
or un
ciertos antgenos. El dominio constante es el mismo para todos lo
s anticuerpos
y es reconocida por otras clulas como monocitos
pueden reconocer y destruir un patgeno cuando se
recubiertas con anticuerpos. En
particular, el dominio constante es importante
para las tcnicas basadas en immunoproteomics que se utiliza par
a
directa secundaria anticuerpos para fines de visualizacin con
o para capturar los anticuerpos mediante estrategias basadas en
A/G de protena (ver
Seccin 1.3).

1.4 alcance de esta revisin: Immunoproteomics

hacia aplicaciones de diagnstico
Fines clnicos, son los anticuerpos circulantes del suero
marcadores moleculares importantes ya que reflejan informacin
de todo el cuerpo humano proporcionando un molecular
impresin de antgenos que estn relacionados con agentes infecciosos,
enfermedades autoinmunes o cnceres [4, 7]. Para aplicaciones de diagnstico,
anticuerpos tienen muchas caractersticas atractivas, que
hacen atractivo biomarcadores [8, 9]. Primero, la amplificacin
cascada, gobernado por el sistema inmune humoral
provoca un exceso de anticuerpos de circulacin despus de la aparicin de
el antgeno cognado (baja abundancia) en el cuerpo humano.
En segundo lugar, aunque un antgeno puede estar presente solamente brevemente,la
respuesta inmune correspondiente es probable que sea persistente.
En tercer lugar, la vida media de los anticuerpos vara entre 7 y
20 das, tiempo suficiente para reducir al mnimo las fluctuaciones diarias. Por ltimo,
los anticuerpos son altamente estables en comparacin con muchos otros suero
protenas, que hace menos estrictos protocolos de manejo de suero
[10, 11]. Juntos, esto produce anticuerpos ideal
para diagnosticar enfermedades relacionadas con el antgeno. El objetivo de estarevisin
es dar una visin general de (i) tcnicas disponibles para immunoproteomicsdescubrimiento de biomarcadores en base, (ii) desarrollo de
ensayos clnicos y utilidad clnica (iii) de estos immunoproteomicsbasado en ensayos. Un primer paso crtico hacia la immunoproteomicsaplicaciones basadas en diagnstico es la identificacin
de los antgenos que estn fuertemente correlacionados con un cierto
de la enfermedad. Esta primera fase se conoce como biomarcador
descubrimiento y tcnicas basadas en immunoproteomics que puede
ser aplicado para este propsito se discutir en la seccin 2.
La siguiente fase consiste en traducir el descubrimiento de un biomarcador (en
este caso una pareja de antgeno/anticuerpo) en un ensayo de diagnstico
cumple con los criterios a aplicarse en clnicas
Laboratorios (seccin 3). Esta revisin ser finalizar (mirando
adelante a) la utilidad clnica de immunoproteomics
ensayos. Esto se har por ilustrar las reas de diagnstico
medicina en la que estos ensayos pueden ser de valor aadido
(Seccin 4).

2 tecnologas de Immunoproteomics
para el descubrimiento de biomarcadores
Los avances tecnolgicos en la investigacin de biomarcadores en
las ltimas dcadas han cambiado el paradigma de hypothesisdriven
ms enfoques basados en el descubrimiento. Esto ha sido
Iniciado por la disponibilidad de la secuencia del genoma humano,
tcnicas de separacin de alta resolucin de la protena, la protena/pptido
mtodos de deteccin como MS y ordenadores potentes y
software dedicado para realizar la bioinformtica. La combinacin de
de estos desarrollos permitieron el descubrimiento de previamente
cambios desconocidos en el cuerpo de fluidos o tejidos slo
mirando todas las protenas durante los Estados sanos y enfermos. Para

la identificacin de clnicamente relevantes asociados a la enfermedad

antgenos de una manera de todo el proteoma, diferentes enfoques
estn disponibles. En las siguientes secciones, 'clsicas' base de gel y
se describir el ms recientemente desarrollados enfoques libre de gel.
Cabe destacar que muchas variaciones y
combinaciones de los debajo de tecnologas discutidas pueden ser
previsto.

Figura 2. Principios de los enfoques immunoproteomics. Representacin esquemticade los pasos importantes durante tres immumoproteomics
principales:
enfoques basadosen. (A) 2-D pgina se basa en la separacin de las protenas basadoen su pI, seguido por separacin de gel basado en
peso molecular. A continuacin, las
protenas son transferidas desde el gel einmovilizadas en una membrana por borrar occidental. Protenas antignicas
(immunome) puede detectarse mediante la aplicacin de suero del paciente a lamancha, despus de que paciente limite IgGs se puede visualiz
ar por etiquetadosecundaria
anticuerpos. Antgenos son desnaturalizados y slo nonconformational epitopos(lineal) se pueden detectar en este enfoque (ver seccin 2.1 par
a
detalles). (B) la construccin de matrices de protena se basa en la separacin libre degel de protenas en las columnas de
la LC. Esto puede basarse en pI, sino tambin
hidrofobicidad, o una combinacin de caractersticas de
la protena para permitir lamxima resolucin. A continuacin, fracciones son vistas en una superficie slida enun
manera ordenada, despus de
lo cual fracciones antignicas pueden ser detectadospor anticuerpos etiquetados secundarios y suero del paciente. Si son lisados deprotena
losantgenos son obtenidos mediante un protocolo de nondenaturing, en principioen su forma nativa, permitiendo la deteccin de eptopos confor
macionales.
Enlugar de protenas fraccionadas, tambin pptidos (epitopos) o antgenospurificados pueden ser identificados para producir matrices de antge
no especficos.(C) antgeno
perfiles por Inmunocaptura MS se basan en la inmovilizacin de paciente IgGs, quedirectamente se utilizan para capturar y aislar antignica
protenas de una mezcla compleja de protenas. Los antgenos capturados sonperfilados por MS. Tambin en este caso, los antgenos con epito
posconformacionales
pueden ser detectados.

2.1 base de gel immunoproteomics: protena

separacin e immunoblotting
El caballo de batalla de protemica clsica es Pgina 2-D, la cual fue
primero descrito por O'Farrel en 1975 [12]. Esta tcnica puede ser
utiliza para separar mezclas complejas de protenas. Hasta miles
de protenas se pueden resolver en un solo experimento.
De hecho, esta alta resolucin fue el punto de partida de la mirada
en los sistemas biolgicos de una manera de todo el proteoma. Al combinar
2-D PAGE immunoblotting y MS, antignica

protenas (immunoproteome) pueden ser aisladas e identificadas.

Este enfoque tambin es conocido como anlisis del proteoma serolgica
(SERPA [13])
2.1.1 2-D PAGE
Las protenas difieren entre s en trminos de su (i) total y
(ii) que carga, siendo este ltimo dependiente en el pH del medio ambiente.
Ambas estas propiedades se pueden utilizar para separar protenas
por electroforesis del gel. La aplicacin sucesiva de
ambos en dos dimensiones proporciona mxima separacin.
El primer paso de pgina 2-D es la aplicacin de las protenas
en una matriz con un gradiente de pH. Cuando se aplica una tensin
a travs de esta matriz, las protenas se mueven hasta llegar a la
punto de (pH) en el cual su carga neta es cero (pI). Esto
tcnica de separacin se llama IEF. A continuacin, la matriz se empapa
en una solucin de desnaturalizacin que contiene el detergente SDS,
que hace que las protenas desplegar. Lo importante, SDS tiene un
fuerte negativa carga y se une a las protenas, con eficacia
hacerlos todos con carga negativa. La segunda separacin
de las protenas por tamao es en principio similar al estndar 1-D
Pgina [14], en que las protenas ms pequeas se mueven ms rpido a travs del
del gel hacia el nodo que los ms grandes. Posterior tincin los
gel revela las posiciones de protenas individuales, modificadas
protenas o fragmentos de protenas como puntos individuales (Fig. 2A).
Sin embargo, las muestras biolgicas pueden contener miles de protenas
con grandes diferencias en la abundancia, lo que hace difcil
para detectar protenas poco abundantes. Incluso es posible que los puntos
contienen varias protenas con el mismo pI y molecular
peso. Por lo tanto, dividiendo la muestra en fracciones diferentes es a
menudonecesario para reducir la complejidad de la protena
mezclas antes de 2-D pgina. Debe ser observado que la reduccin
de la complejidad de la muestra antes del anlisis es una cuestin general
en la investigacin protemica y ciertamente no se limita a 2-D
PGINA. Sin embargo, esta tcnica es particularmente de gran alcance
al comparar por ejemplo sano versus muestras enfermas.
Desventajas de 2-D PAGE son la pobre resolucin de
protenas en la regin de bajo peso molecular (LMW)
(, 10 kD) y la incompatibilidad de hidrofbica (membrana)
protenas con IEF. Por lo tanto, 1-D pgina (omisin de
IEF) es el mtodo preferido para separar los antgenos hidrofbicos
a pesar del hecho de que la resolucin es muy inferior a la del 2-D
PGINA. Avances tecnolgicos ms recientes en la pgina 2-D,
como etiquetado fluorescente cuantitativa, son revisados por
otros [15, 16].
2.1.2 Immunoblotting
Immunoblotting (tambin conocida como Western blot) fue
por Dr. Towbin et al [17] y hoy en da es una rutina
tcnica de laboratorio para el anlisis de pptidos y protenas. El
trmino 'Borrar' se
refiere a la transferencia de las protenas cargadas negativamentede un gel de SDS-poliacrilamida
a NC o PVDF
membrana en un campo elctrico. Las protenas inmovilizadas son

Posteriormente se incubaron con anticuerpos que tienen afinidad por

la protena de inters (Fig. 2A). La deteccin se produce ms a menudo
por los anticuerpos secundarios marcado con la enzima contra la constante
regin del IgG anticuerpo primario, seguido por el
adicin de un substrato apropiado. La conversin de la
sustrato se puede visualizar la membrana s mismo o por
exposicin de la membrana a una cmara de pelcula o fluorescencia
Cuando se utiliza un sustrato quimioluminiscente. El pariente
intensidad de una seal debe correlacionar con la abundancia de
el antgeno en la membrana, sin embargo, la intensidad absoluta
es fuertemente dependiente en la afinidad de los anticuerpos para
el antgeno (desnaturalizado)
2.1.3 USO DE MALDI-TOF MS(/MS)
Para identificar protenas inmunognicas de 2-D PAGE/immunoblotting
experimentos, el siguiente enfoque es generalmente
seguido. En primer lugar, dos geles se ejecutan en paralelo con uno de ellos
usan para immunoblotting mientras que la otra se tie a
protena total visual contenida. Despus de determinar la posicin de protenasantignicas en el bl
ot, el correspondiente
manchas de protena pueden ser suprimidos del gel teido. Siguiente, la
protena est 'en gel' digeridos por una proteasa, principalmente tripsina, a
generar la sntesis de la protena antignica de inters. Esto
Resumen se analiza posteriormente por MALDI-TOF MS y la
huella total del pptido se compara a todo terico
pptido trptico huellas dactilares obrantes en las bases de datos pblicas de protena[18].
Software dedicado ayudarn a determinar la identidad de la
protena de inters. Por otra parte, cuando se aplica el Resumen
a un MS/MS, la huella total se complementa con la
informacin correspondiente de la secuencia de los pptidos trpticos.
Esto se logra durante un segundo evento de MS durante el cual el
pptido seleccionado est fragmentada y las diferencias entre
las masas de los pptidos de la hija son indicativas de la
composicin de aminocidos de este pptido [19]. Puede preverse
que MS/MS generalmente resulta en protena ms confiable
identificaciones que solo se acerca a MS. Adems de ingel
digestin, se pueden realizar resmenes trpticos en las piezas
de las membranas que contienen la protena antignica blotted de
inters [20].
2.2 libre de gel immunoproteomics
Como una alternativa para pgina 2-D, varios enfoques libre de gel
puede ser considerado para identificar protenas antignicas. A continuacin dos
se discuten enfoques basados en arreglos de discos que empiezan con lainmovilizacin con
de los antgenos potenciales y una immunoproteomic 'inversa'
enfoque que comienza con inmovilizacin de la
anticuerpos del paciente.
2.2.1 matriz de protena
Base de columna de fraccionamiento de LC de protenas derivadas de
clulas o tejidos (que pueden contener ms de 10 000 protenas)
para localizacin en una matriz slida es una estrategia conveniente para la
identificacin de antgenos. Fraccionamiento libre de gel puede basarse
sobre las diferencias en el pI de las protenas de la mezcla, pero tambin

en caractersticas tales como la hidrofobicidad de la protena. Despus de la

todas las protenas a una columna, subfracciones de protenas pueden ser
eluy en pasos posteriores con la disminucin de rigor de elucin
o alterar la composicin de elucin. De esta manera, la protena
subfracciones se recogern que contienen protenas de 1000
a algunas protenas por fraccin cuando diferentes columnas
combinan en un enfoque de 2-D-LC [21]. Analizar el enlace
de anticuerpos del paciente, una variedad de tecnologas para detectar
fracciones proteicas para superficies planas en pedir arreglos, tales como
impresin mecnica sobre portaobjetos de vidrio, se han desarrollado
[22-28]. Una ventaja de este enfoque es que las protenas pueden ser
fraccionado y manchado en una (semi-) forma nativa, que puede
afectar positivamente el reconocimiento por los paciente anticuerpos contra el
antgenos de inters. Fracciones de protena que contiene antignica
las protenas se identific aplicando paciente anticuerpos frente a la
matrices de protena, despus de que los anticuerpos etiquetados sobre todo secundarios
se utilizan para visualizar los puntos que reaccionan con el paciente
IgGs (Fig. 2B). Sin embargo, debe ser que despus de
localizacin de antgenos inters, ms fraccionamiento
inmunoprecipitacin o MS estudios se requieren para aislar
e identificar el antgeno reactivo de la protena seleccionada fraccin.

2.2.2 matriz de expresin

Adems de arreglos de discos de protena phage, bacterias, levadura, mamferos
o incluso bibliotecas de cDNA en base libre expresin
representa una estrategia poderosa para identificar antgenos novela [29].
Estos enfoques tambin son conocidos como anlisis serolgico de
bibliotecas de expresin recombinante cDNA (SEREX [30]). En
hecho, no son genuinos enfoques de protemica como
Comience con un componente gentico importante. En primer lugar, el mRNA de
ciertos tipos de clulas o tejidos est aislado para la generacin de
cDNAthat puede ser clonado en un vector de expresin adecuado. Despus de la
que, una biblioteca que consta de clones individuales se construye
cubriendo el perfil de expresin del sistema biolgico de
inters. A continuacin, lisados de clones individuales son vistos en un
superficie slida, seguida de la identificacin de antgenos especficos
como se describe en la seccin anterior para matrices de antgeno.
Una desventaja potencial de este enfoque es la falta del PTMs,
como la glicosilacin de protenas eucariotas, procariotas
expresin alberga, considerando que estas modificaciones se saben que
ser determinantes importantes en eptopos antignicos de ciertos
antgenos relacionados con la enfermedad [22]. Importante ventaja es que el
identidad de un antgeno es fcil de obtener por la secuencia del
gen correspondiente de una copia reactiva.
2.3 inversa immunoproteomics: perfiles del antgeno
Novedades en Bioinformtica de MSand, en particular
sos en el campo de perfiles de protena, allan el camino para la novela
enfoques de la immunoproteomic libre de gel, tambin conocido como antgeno
generacin de perfiles. De hecho, esto puede ser denominado inverso
immunoproteomics en este concepto los anticuerpos del paciente
est inmovilizado en primer lugar, mientras que los antgenos correspondientes

se detectan por el MS en un segundo paso.

2.3.1 Inmunocaptura MS
En contraste con las tcnicas antes mencionadas, antgeno
perfiles por Inmunocaptura MS comience con la inmovilizacin
de anticuerpos del suero del paciente [31, 32]. Esto puede ser
eficientemente hecho atando suero paciente IgGs a protena
A de la protena G, que son protenas de origen bacteriano con
afinidad especfica para el dominio Fc de anticuerpos. En principio,
Esto puede lograrse en una superficie slida, en una columna,
o en granos en una fase lquida. El segundo paso involucra la
aplicacin de una mezcla de protena (clula o tejido lisado) a
los anticuerpos inmovilizados despus de que slo las protenas
son capturados para que los anticuerpos estn presentes en la
muestra de suero. As, la complejidad de la mezcla de protena
no se reduce a la derecha. En cambio, la reduccin de
complejidad (seleccin de antgenos) se obtiene directamente por
paciente captura anticuerpo-mediada. A continuacin, los antgenos son
eluyen de los anticuerpos y aplicado a una superficie slida despus de
lo cual seaplica una matriz de protena de ionizacin. Antgenos
se liberan de esta superficie por desorcin lser /
despus de que las protenas cargadas positivamente empiezan a ionizacin
se mueven en un campo elctrico fuerte hacia el detector en un
alto tubo de vaco [33, 34]. TOF se correlaciona con la
masa de los antgenos capturados, que muestran como
picos en el espectro de masas (Fig. 2). Principales ventajas de
perfiles de antgeno es su idoneidad para el alto rendimiento
aplicaciones, lo que permite el procesamiento de grandes cantidades de
muestras de pacientes en paralelo y su capacidad para manejar nativo
antgenos en solucin. Otra ventaja de esta tcnica
es su sensibilidad para LMWantigens, pero por el otro
parte tiene una baja sensibilidad para los antgenos ms grandes (20 kD).
Por ltimo, la tubera desde el descubrimiento de un pico de antgeno
en el espectro de masas para su identificacin no es tan recto
avance en comparacin con el 2-D PAGE/immunoblotting
enfoque.
2.3.2 identificacin de antgeno por Inmunocaptura MS /
MS
Mediante la combinacin de Inmunocaptura, como se describe en el anterior
seccin, con un enfoque MS/MS, captura antgenos
que son visibles en antgeno perfiles pueden ser identificado [35]. Para
este propsito, el suero de pacientes con ttulos altos contra el
antgenos de inters se selecciona y se utiliza para capturar su
antgenos correspondientes. Sin embargo, en este caso, eluida
antgenos se aplican primero a la digestin trptica en solucin
despus de que los pptidos son separados en una columna de nano-LC
y posteriormente secuenciados por MS/MS. Siguiente, la
antgenos correspondientes se identificaron mediante bsquedas en el apropiado
base de datos de la protena. Desventaja de esta 'escopeta'
enfoque es el hecho de que puede ser difcil vincular la
identificado pptidos a la peak(s) de antgeno observado que son
observado en el perfil de antgeno. Esto es evidente desde el

hecho de que, en contraste con 2-D PAGE se acerca donde solo

manchas de protena pueden ser analizados, todas las protenas en la captura
fraccin se analizan simultneamente durante la Inmunocaptura
MS/MS. Se convierte en an ms complicada cuando
antgeno observado picos son modificados o fragmentacin de las protenas
que no corresponden a sus tericos moleculares
peso en la base de datos de protenas [35]. Por lo tanto, es muy
importante y fundamental incluir positivos y negativos
control de muestras para correlacionar la presencia o ausencia de un
pico del antgeno a los datos de la MS/MS [36].
2.4 tcnicas de immunoproteomic relacionados con
Todas las tcnicas mencionadas son relevantes para immunoproteomicsbasado en enfoques para descubrir enfermedades asociadas
antgenos. Sin embargo, arrays de anticuerpos tambin pueden considerarse como
una forma de immunoproteomics. En contraste con las tcnicas
mencionado, el uso de arrays de anticuerpos se inicia con la
inmovilizacin (localizacin) de los anticuerpos especficos en orden
formato, que es valiosa para el anlisis paralelo de mltiples
objetivos de protena (conocida) en volmenes de muestra pequeos [37].
Mapeo epitopo puede considerarse tambin que pertenecen a
immunoproteomics-enfoques, sin embargo, no es
utilizado como una plataforma para el descubrimiento de biomarcadores. Por elcontrario, se
puede ser aplicado para definir, sobre todo epitopos lineales, dentro de un
antgeno conocido. Mapeo epitopo se basa en la capacidad de
anticuerpos se unen a pptidos (superpuestas) manchados cubriendo
la secuencia de la protena entera de una cierta protena. Por otra parte,
anticuerpos pueden utilizarse para el aislamiento especfico de afinidad
Mostrar la pptidos cortos de combinatoria fago pptido
bibliotecas [38]. Cuando define, estos eptopos pueden utilizarse en
ensayos de diagnstico (ver seccin 3.1). Aunque valiosa,
discusin detallada de estas tcnicas est fuera del alcance
de esta revisin.
3 Immunoproteomics: hacia
aplicacin de diagnstico
Para aplicaciones de diagnstico despus de descubrimiento de biomarcadores, un
reto es desarrollar robusto, sencillo y sensible
tcnicas que pueden implementarse en los laboratorios clnicos.
La principal limitacin en este sentido es la ausencia
de una tecnologa PCR basados en protenas para la amplificacin de
marcadores poco abundante. Lo importante, sin embargo, la amplificacin
cascada de la respuesta inmunitaria humoral
en el aspecto de un antgeno puede considerarse como una serie
Sistema de polimerizacin en cadena, que es prometedor hacia el desarrollo
de sensibles de diagnstico basados en immunoproteomics
herramientas. En los siguientes prrafos, hablaremos de las necesidades
y los requisitos previos para el desarrollo de antigenbased
ensayos de diagnstico y abordar las complejidades de la
produccin de antgeno y manejo de la muestra. Adems, nos
le dar un resumen de los pros y los contras de las disponibles
Anlisis de plataformas que pueden ser utilizadas para basado en el antgeno
ensayos.

3.1 produccin de antgeno de

Un primer requisito para el desarrollo de immunoproteomics slidasensayos de base es la produccin controlada
o aislamiento de antgenos que son diagnstico de cierta
de la enfermedad. Un aspecto muy importante es que cerca del 90% de
Clulas B producidas anticuerpos reconocen conformacional (no lineal)
epitopos [39, 40]. Distorsin de la estructura nativa
durante el antgeno puede proceso de produccin, por lo tanto,
influir en la Unin de anticuerpos y posteriormente el resultado
de la prueba. Adems, un determinado sistema de expresin puede
falta maquinaria para PTM del antgeno, que puede ser
necesaria para el reconocimiento de anticuerpos. Adems, conformacional
cambios pueden ocurrir durante la localizacin de antgenos en un
formato de matriz. En este sentido, epitopos lineales (nonmodified)
puede ser ms fcil de manejar como estos pueden ser producidos sinttico como
pptidos. Sin embargo, epitopos lineales comprenden en general
slo 10% de la cantidad total de eptopos antignicos
dentro de un immunoproteome, limitando as su
uso.
3.2 plataformas de alto rendimiento ensayo
Aunque un nmero de tcnicas tiene el potencial para ser
implementado en la clnica, varias limitaciones soporte rpido progreso
de la manera [41]. Se prev que diagnstico ensayos
resultantes de immunoproteomic estudios consisten en mltiples
en lugar de marcadores individuales. Para los paneles individuales o pequeos
de marcadores, Elisa son la plataforma de eleccin. Sin embargo,
posibles ensayos diagnstico multiplexados deben derivarse
matriz de antgeno o antgenos perfiles de tecnologas (tabla 1).
3.2.1 ELISA
En tradicional ELISA, los anticuerpos son inmovilizados de microtitulacin
placas para selectivamente reconocer y enlazar un objetivo especfico
protena de una muestra biolgica. Una segunda enzima conjugado
anticuerpos a la misma protena de destino (pero ptimo
reconoce un eptopo diferente) se utiliza para habilitar cuantitativa
medida por la conversin de una molcula de sustrato incoloro
en un producto coloreado o fluorescente [42]. Elisa para
medida del suero ttulos del anticuerpo a los antgenos especficos estn ampliamente
usados para monitorear la eficacia de la vacunacin [43, 44]. En estos
aplicaciones, sin embargo, el antgeno de inters primero es inmovilizado
en placas de microtitulacin despus que suero se aade a
permite enlazar el antgeno los anticuerpos del suero. Cuantificacin de la
los anticuerpos Unidos se logra mediante un anticuerpo secundario marcado con
que se une al dominio constante de los anticuerpos del suero.
Aunque es posible realizar mltiples URL
Elisa en el caso de un panel de antgenos de diagnstico, otros
las tecnologas son potencialmente ms conveniente y eficaz para
este propsito. Ventajas de los ensayos de ELISA son el pariente
instrumentos econmicos y los protocolos 'fcil de manejar'
realizar y analizar las muestras.
3.2.2 arreglos de discos de antgeno
Matrices de antgeno (micro) ofrecen la posibilidad de eludir

limitaciones de ELISAs permitiendo que la simultnea, multiplexado,

medicin de anticuerpos sricos contra mltiples
antgenos. Por ejemplo, en el caso de que un virus atenuado es
utilizado para la vacunacin en lugar de antgenos especficos [45]. Por
uso de sistemas de deteccin fluorescente, similares a los utilizados para
Microarrays de ADN, (semi-) cuantificacin de la cantidad de
los anticuerpos del suero se pueden lograr. Varias plataformas de ensayo
han desarrollado y demostrado eso prueba de microarray
formatos de proporcionan rendimiento equivalente a ELISA y puede
ofrece una ventaja en conveniencia y costos [46-48]. Sin embargo,
debido a su relativa complejidad alta tecnologa,
parece poco probable que estos sistemas se utilizan ampliamente en
contextos clnicos. Para eludir esta y otras limitaciones potenciales
de matrices moteadas, como la alteracin del sistema inmunitario
eptopos, sistemas de anlisis de la fase lquido basados en etiquetado
antgenos con granos direccionables han sido desarrollados [49]. Se
puede preverse que estos sistemas de fase de lquido sean mejor
adecuado para la futura implementacin del antgeno multiplexado
ensayos en laboratorios clnicos.
3.2.3 el antgeno perfilado por MS
Perfiles de protenas por MS es una tecnologa que puede ser fcilmente
transferido en aplicaciones de alto rendimiento con la ayuda de
robotizada manipulacin de muestra, atomizado MS medidas y
Anlisis de los datos [50-52]. Una ventaja general de MS
enfoques es que permite la visualizacin de distintas isoformas
de la misma protena, que son de otra manera difcil de
distinguen por los mtodos basados en ELISA [53, 54]. Una limitacin de
antgeno de perfiles es que MS ensayos cualitativos
datos, mientras que la cuantificacin an necesita mucha mejora.
Sin embargo, el uso de estndares internos puede ser un primer paso
hacia ensayos de MS cuantitativos que pueden ser implementados
en la clnica. Irnicamente, la alta sensibilidad del MSbased
Anlisis les ha asociado con mala reproducibilidad
[55]. sin embargo, este gran parte cause preanaltica
factores, considerando que las diferencias similares en muestra
manejo no ser evidente en otros enfoques. Por otra parte,
mtodos de generacin de perfiles estndar tienden a analizar los datos de MS en
una manera no supervisada, incluyendo picos de protenas de
origen desconocido [56]. En este sentido, perfiles de antgeno pueden ser
considerado como un enfoque objetivo perfilado como slo protenas
picos se derivan de la fuente de antgeno (bacterias, clulas o tejido
lisado) puede ser seleccionado como clasificadores [32]. Desventajas de la
Ensayos de MS son los instrumentos costosos relativa y
protocolos complicados para el anlisis e interpretacin de
los datos de
3.3 manejo de la muestra
Se puede esperar que basado en la immunoproteomics ensayos
son relativamente robustos mediante el uso de suero IgGs (generalmente
considerados protenas estables) y un conjunto independiente de nonpatientderived
antgenos para generar patrones discriminatorios. Esto

reduce el riesgo de que las

diferencias (pequeas) en el manejo de muestras de suerointerfieren con el patrn diagnstico de
inestable
transmitidas por el suero biomarcadores. Debe ser subray que para cualquier
aplicacin clnica, independientemente de la plataforma de ensayo, primera
protocolos de recogida de muestras y preanaltica
manejo de la muestra se requiere.
4 utilidad clnica
Hay numerosas aplicaciones potenciales de diagnstico para
ensayos de immunoproteomics para diagnosticar y controlar
enfermedades que se relacionan con las protenas antignicas. Algunos de ellos
se destacan a continuacin, pero pueden ser mucho ms aplicaciones
previsto. Por lo tanto, debe cuenta que este Resumen
pretende dar una impresin en las reas de diagnstico
lo anterior la medicina dirigida basada en immunoproteomics
metodologas pueden ser de valor agregado, sin embargo, anlisis crticos
de la exactitud de los biomarcadores est ms all de la
alcance de tecnologa esta principalmente orientada a revisin.
4.1 control de eficacia de la vacuna
Enfermedades causadas por bacterias y virus se pueden prevenir
vacunas, que generan anticuerpos neutralizantes contra
antgenos de la superficie del patgeno correspondiente. Por lo tanto, es
muy importante identificar inmungenos muy eficiente para
inmune prevencin y monitorear estrategias de vacunacin [57].
Esto fue ejemplificado por Davies et al., [58], que analiza la
respuesta inmune humoral inducida por una viruela comercial
vacuna (que contiene antgenos mltiples) con una protena viral
matriz. Esto demostr que fueron ms de 20 antgenos
inmunodominante, pero que slo la mitad de ellos era potenciales
objetivos neutralizantes en la envuelta viral. Por lo tanto, estos
enfoques podran ayudar en el seguimiento de la eficacia de la vacunacin,
y seleccin de antgenos candidatos para generar neutralizando
respuestas de antgeno. Otro estudio describi el uso de pptido
arreglos de discos (epitope) para controlar la respuesta inmune humoral
contra molculas de adhesin celular epitelial (EpCam),
que es un objetivo de la sueroterapia de anticuerpo en pacientes con cncer.
Derivados de esta protena se utilizan para inmunizar a pacientes
con cnceres epiteliales, que a menudo se asocian con
Sobreexpresin de EpCam [59]. Suero del paciente obtenidos
antes y despus de la inmunizacin, mostraron diferentes reactivos
patrones con epitopos lineales derivados EpCam avistados en la celulosa.
Los resultados sugieren que ciertos pptidos derivados de EpCam
podra ser til para controlar esta inmunizacin EpCam
estrategia, mientras que otros eran de esta clase de
tipos de cncer.
4.2 monitoreo antigenicidad de drogas teraputicas
Inmunogenicidad es un problema importante asociado con
protenas teraputicas [60, 61]. Debido a la produccin artificial
procesos, teraputica recombinante a menudo no son completamente
idnticos a sus homlogos nativos humanos. En algunos

casos, estos tratamientos provocan una respuesta inmune que interfiere con laefectividad de
la droga. En principio, immunoproteomic
enfoques podran usarse para definir al paciente
respuesta inmune frente a un grupo de medicamentos relacionados (protena)
para facilitar la aplicacin del frmaco selectivo para optimizar individualizado
tratamiento.
4.3 diagnstico y pronstico de enfermedades autoinmunes
Enfermedades autoinmunes surgen de activacin errnea de la
sistema inmune, dando como resultado el ataque de uno mismo-protenas
dentro del cuerpo humano. Ejemplos de enfermedades autoinmunes
incluyen la artritis reumatoide (ar), autoinmune diabetes, tipo
psoriasis y lupus eritematoso sistmico (les), en
que una variedad de componentes de uno mismo son blanco de IgG o
Anticuerpos IgM [62, 63]. Adems, las enfermedades autoinmunes como
puede ocurrir durante las transfusiones de sangre o embarazo
Cuando se forman anticuerpos antirhesus que el rojo
clulas sanguneas del donante o del feto, respectivamente [64]. Por otra parte,
una reaccin autoinmune hacia componentes placentarios
se ha implicado en el desarrollo de preeclampsia
[65], que es una situacin peligrosa para embarazadas
mujeres. Adems, las enfermedades alrgicas pueden caracterizarse
por anticuerpos IgE contra alergenos. En todos estos
casos, immunoproteomic diagnstico y seguimiento de la enfermedad
es factible [66]. Para el serodiagnstico de SLE, Li et al [67]
construido un microarray multiplexado con cerca de 30 conocido
antgenos asociados a la enfermedad, compuesto por colgeno, fibringeno,
heparn sulfato, miosina, proteoglicanos y las histonas.
El uso de estas matrices revel distintos grupos de IgG/IgM
autoreactivity en el suero del paciente que podran ser vinculados a la enfermedad
actividad. Esto indica que este enfoque es capaz de diagnosticar
pacientes que estn en alto riesgo de dao severo del rgano y
puede guiar el tratamiento. En un estudio antgeno microarrays
que contenan ms de 200 protenas nativas fueron desarrolladas y
pptidos lineales que representaban candidato antgenos y eptopos
en RA Tambin el uso de estas matrices en estudios clnicos
demostr que diferentes perfiles de autoanticuerpo contra eptopos
o antgenos nativos eran diagnsticos de gravedad de la enfermedad
[68]. por otra parte, el uso de estas matrices de antgeno en combinacin
con citoquinas y perfiles habilitado clasificacin molecular
de pacientes con ar temprana y podra ayudar en la enfermedad
pronstico, guiando el tratamiento y en el seguimiento de las respuestas
al tratamiento [69]. Sin embargo, la causa exacta de la AR sigue siendo
desconocido y cubre un amplio espectro de diferentes enfermedades
con la coincidencia de los sntomas, que hace que el desarrollo
y uso de una variedad de antgenos de 'RA' diagnstico bastante compleja. En
otro enfoque, empleamos nuestro recientemente desarrollado
mtodo de Inmunocaptura MS para identificar protenas placentarias
reaccionaron con los anticuerpos del suero de mujeres embarazadas
con los sntomas de la preeclampsia (Fig. 3A). Primeros datos demostrados
que ciertos antgenos podran de hecho ser capturadas, mientras que se
no reaccionaron con los anticuerpos del suero de asintomtico

controles (Fig. 3B). Sin embargo, la identidad de estos placentaria

queda determinado por antgenos y ms investigacin es
es necesario evaluar si tales antgenos son diagnsticos para el
mujeres en riesgo. En
conjunto, estos ejemplos muestran que immunoproteomics esmuy prometedor para ayudar en el d
iagnstico, pronstico
y monitoreo de enfermedades autoimmune(-like)
Figura 3. Perfiles de la respuesta inmune hu
moral contra placentariaprotenas. (A) para e
valuar si la Inmunocaptura MS puede
ayuda en la identificacin de antgenos place
ntarios que pueden ser
involucradas en el desarrollo de la
preeclampsia, IgGs de embarazadas
las
mujeres fueron aisladas de suero con perlas
de protena A.
Siguiente, placentarios extractos se aplicaron
a estos depsitos inmovilizados,
despus de que artculos de protenas elimin
ado por lavado. Capturado
antgenos placentarios se eluy y analizaron
por MS. (B) Gel
opiniones de espectros obtenidos representa
n perfiles de protena utilizando suero
de las
mujeres con sntomas de la
preeclampsia (enfermo) y
mujeres embarazadas sanas. La posicin de
un candidato diagnstico
antgeno se indica.
4.4 temprana deteccin del cncer de
Muchos pacientes con cncer producen anticuerpos contra los antgenos
se expresan especficamente por las clulas malignas, que es
indicativo que esta respuesta inmune es una valiosa fuente de
informacin diagnstica y pronstica. El uso de anticuerpos
contra varios antgenos especficos del tumor se ha descrito,
ejemplificado por p53, NY-ESO-1, Muc1 y tropomiosina [70
74]. esta respuesta inmunitaria relacionada con el cncer a uno mismo-protenas es
conducido por alteraciones moleculares inducidas por el tumor, tales como
mutacin, mal plegamiento, (sobre) produccin, aberrante degradacin
o glicosilacin que estas protenas inmunognicas.
Sin embargo, tambin las protenas de tumor normalmente slo estn
expresa durante el desarrollo embrionario, tiene antignica
propiedades. Caracterizacin de anticuerpos contra los paneles de
antgenos de tumor ha demostrado para ser ms informativos que
deteccin de anticuerpos contra las especificidades individuales. Esto
fue demostrado por Shi et al [75], que realiz multiplexados
Anlisis de ELISA de anticuerpos en pacientes con cncer de prstata
contra el tumor antgenos asociados a C-myc, IMP1, Koc,
p53, p62, p90, survivin, ciclina A, ciclina B1, ciclina D1. Estos
los datos demostraron presencia de anticuerpos contra seis de ellas
antgenos es un buen clasificador diagnstico para cncer de prstata.
Lo importante, tambin ha observado que las
respuestas del anticuerpo a p53 eran dediagnsticos para el hgado asintomtica
tumores en individuos que fueron expuestos a compuestos txicos

[76]. sorprendentemente, estas respuestas de anticuerpo podran incluso

preceden el diagnstico clnico de cncer de esfago [77]. En
otro estudio, Philip et al [36], explota un gel libre de LC-MS /
Enfoque de MS para identificar un grupo de antgenos de tumor ovarium
a que los anticuerpos estaban presentes en pacientes con etapa temprana
de la enfermedad. Juntos, esto confirma la nocin que un humoral
respuesta inmune frente a un panel de antgenos tumorales pueden
proporcionar un acercamiento de diagnstico valioso para la deteccin temprana
y seguimiento de diferentes tipos de cncer, que es fundamental
para casi todas las formas de esta enfermedad. Mientras que muchos estudiosmuestran
resultados prometedores, otros estudios muestran limitaciones significativas
el uso de antgenos tumorales para la deteccin del cncer. Para
ejemplo, Zeng et al., [78], demostr que los anticuerpos contra un
mtodo sinttico de NY-ESO-1 se produjo slo en 5 10% de la
muestras de suero de pacientes con diferentes tipos de cncer.
Esto implica que para la explotacin de las respuestas del anticuerpo
contra los antgenos del tumor para la deteccin de cncer, una gran
panel de tumor antgenos o eptopes es necesaria para cubrir un
amplia gama de pacientes con un tipo particular de cncer. En
Adems, implica que puede volverse difcil de diseo un
panel de antgeno que es especfico de cncer. Por ltimo, poco es todava
conocido acerca de la sincronizacin de los anticuerpos contra los antgenos deltumor
en la va de carcinognesis. As, el uso de tumor
antgenos para la deteccin temprana del cncer tiene que ser cuidadosamente
examinado para evitar que demasiado negativos falsos diagnsticos
puede resultar de estos enfoques.
4.5 diagnstico de infeccin
La tarea principal del sistema inmune adaptativo es reconocer
invadiendo sus correspondientes patgenos y antgenos y, posteriormente,
atacar y destruirlos. Por lo tanto, no es una sorpresa
que los anticuerpos antipathogen son buenos marcadores para la
diagnstico de infecciones parasitarias, fngicas, vricas y microbiana
[79]. por otra parte, perfiles de la intensidad y especificidad de la
antipathogen respuestas proporciona una visin integral de
la complejidad y heterogeneidad interindividual de la hostresponses,
y las variaciones en la antigenicidad de los patgenos
[80]. para supuestos usos de diagnstico, sin embargo, es necesario
que el mdico es consciente de que la infeccin la
paciente est en riesgo, seleccionar los antgenos para el diagnstico
ensayo. En este sentido, se puede encontrar una aplicacin interesante
en el diagnstico de infeccin por Borrelia burgdorferi, que puede
ocurrir despus de la picadura de una garrapata. Esta infeccin puede causar Lyme
enfermedad, que es un problema de salud grave, pero puede prevenirse
por el tratamiento antibitico cuando se diagnostica oportunamente. Nowalk
et al [81], usaron pgina 2-D y el immunoblotting para revelar un
la respuesta inmune humoral de los pacientes de la enfermedad de Lyme a un
panel de 21 protenas membrane(-associated) B. burgdorferi.
Curiosamente, la respuesta inmunitaria humoral pareca temporal
reguladas mientras que progres la enfermedad desde temprano a la tarde
etapas. Por lo tanto ensayos immunoproteomics pueden en este
caso servir para diagnosticar la enfermedad de Lyme, pero podra tambinproporcionar

valiosa informacin sobre la progresin de la enfermedad.

4.6 diagnstico de cncer por infecciones asociadas
Como se describi antes, el uso de antgenos especficos de tumor puede
ayuda en la deteccin temprana de cncer. Sin embargo, en general, esto
est relacionada con el cncer la respuesta inmunitaria a uno mismo-protenasalteradas
significativamente menor que la respuesta inmune contra infecciosas
agentes. Por lo tanto, una enfermedad infecciosa relacionados con el cncer,
sera instrumental en el inmunodiagnstico de este
de la enfermedad.
4.6.1 cncer gstrico
Un rasgo distintivo en la microbiologa fue el descubrimiento de Helicobacter
pylori como agente causal del cncer gstrico [82]. Base de gel
immunoproteomic enfoques han demostrado su eficacia en la
identificacin de antgenos de pylori H. altamente especficos que son
til para la mejora de las pruebas serolgicas para el diagnstico
y controlar la infeccin por H. pylori y as identificar a personas
que estn en riesgo de cncer gstrico [83, 84]. Adems, H.
pylori es tambin un importante factor de riesgo de la lcera duodenal.
Curiosamente, Lin et al [85] demostraron que un inmune humoral
respuesta a traduccin factor de elongacin EF-G, catalasa y
una subunidad de ureasa fue significativamente mayor en pacientes con
lceras duodenales que en pacientes con cncer gstrico. Adems
encontraron que el uso de mltiples antgenos en un antgeno
matriz de mejora la discriminacin entre estas dos clases
de los pacientes. Esto bien ilustra que adems de diagnstico
de la infeccin, el uso de paneles de antgeno puede proporcionar adicional
informacin sobre la patologa de las enfermedades.
4.6.2 las neoplasias malignas hematolgicas
Pacientes que padecen neoplasias hematolgicas son
a menudo inmunocomprometidos y propenso a las infecciones con
patgenos oportunistas, tales como Candida albicans. Pitarch et
otros [86] asignada immunoproteomic protenas de C. albicans en
Este grupo de pacientes en un intento de encontrar biomarcadores tiles
para diagnstico y seguimiento teraputico. Los resultados sugeridos
los anticuerpos contra C. albicans fosfoglicerato
quinasa y la alcohol deshidrogenasa se asociaron con una
diferenciacin de la respuesta inmune humana. Adems
el aumento de los anticuerpos del suero antienolase parece
recuperacin de candidiasis sistmica en estos
pacientes, que podran servir como marcadores para la prediccin de su
resultado. As, proporciona diagnstico immunoproteomics
informacin sobre estas infecciones por hongos y puede proporcionar
Insight en la progresin de la neoplasia subyacente.
Sin embargo, debe tenerse en cuenta que inesperado C. albicans
las infecciones tambin pueden ser un indicador para otros immunocompromising
enfermedades como el VIH.
4.6.3 cncer de Colon
Las bacterias del intestino estn constantemente en contacto con desarrollo epitelial
tumores en el colon. La infeccin de ciertos oportunistas
las bacterias del intestino, tales
como Streptococcus bovis, se ha asociado con cncerde colon durante muchos aos [87, 88]. Para

aprovechar la aparicin de S. bovis infecciones en cncer de colon

pacientes, hemos utilizado nuestro recientemente desarrollado Inmunocaptura
MSapproach que se describe en la seccin 2.3 de este informe [32]. Esto
gel libre de immunoproteomic enfoque hace uso de enriquecimiento
de protenas antignicas de bovis S. de una piscina de pared de clula
protenas extrables por paciente anticuerpos (Fig. 4A), despus de
Qu perfiles diagnstico antgeno son generados por MS
(Fig. 4B). Los datos indican S. bovis se producen infecciones
temprano durante el desarrollo de cncer de colon y puede ser clnicamente
'silenciosa'. Adems, demostr que tres diagnstico S. bovis
picos de antgeno se asocia fuertemente con cncer de colon
(Fig. 4). La identidad de estos picos de antgeno bacteriano fue
determinado por una escopeta de Inmunocaptura de LC-MS/MS
enfoque usando suero de pacientes con altos ttulos de anticuerpos a
los antgenos de inters (Fig. 4). Esto demostr que estos
picos pertenecieron a la protena histona-como HlpA y proteoltica
fragmentos de la protena ribosomal L7/L12 [35].
As, de perfiles serolgicos de anti-S. anticuerpos de bovis podra
punto para el desarrollo del cncer de colon, la deteccin temprana
de que es fundamental para el tratamiento eficaz de esta enfermedad
[89]. lo importante, este enfoque podra ayudar en la deteccin de
la poblacin anciana, que est en riesgo de desarrollar colon
tumores [32, 90]. En conclusin, estos ejemplos indican que
ensayos de immunoproteomics orientacin relacionada con el cncer
las infecciones tienen un alto potencial para ayudar en la deteccin del cncer.
5 perspectivas
En la ltima dcada, se han hecho progresos importantes hacia la
desarrollo de perfiles de tecnologas para controlar el antgeno
respuesta inmune humoral. Perfiles de antgeno que reflejan
las respuestas del anticuerpo a los paneles de los antgenos se prevn que
proporcionar un valor diagnstico y predictivo superior en comparacin con
a los antgenos individuales. Especialmente en el caso de mala
enfermedad, como cncer de colon, el desarrollo del combinado
paneles de tumor y antgenos bacterianos
puede proporcionar un enfoque prometedor para la deteccin precoz del cncer.
Pueden implementar aplicaciones de futuro immunoproteomics
en las pantallas de la poblacin de cncer de colon y puede proporcionar
Gua para la seleccin de los individuos que deben
se someten a investigacin intestinal completo. Sin embargo, en este y
otros casos, mucha investigacin queda por realizarse a
definir los objetivos de antgeno ptimo para ayudar en la diagnosis. A
reto sigue siendo en el desarrollo de anlisis robustos
plataformas y protocolos estandarizados que se requieren
antes de ensayos de immunoproteomics se pueden implementar
en la clnica. En particular, los enfoques basados en MS
requieren ms evaluacin preanaltica y analtica
antes de su aplicacin en medicina diagnstico [91]. En la actualidad,
no solo immunoproteomics la tecnologa parece ptimo
para el descubrimiento de biomarcadores y aplicacin clnica
(Tabla 1). Por lo tanto, la mayora descubiertos son antgenos de diagnstico
Actualmente transferido a ensayos de ELISA para el diagnstico

propsitos. Esto a pesar de que no son ptimos para analizar los paneles extendidosantgeno ensa
yos ELISA. En
futuro, ms especializado tecnologas de array de antgeno, tales
como sistemas de fase de lquido, puede reemplazar a ELISAs para la clnica
el uso de ensayos de antgeno multiplexada en los laboratorios clnicos.
A pesar de estos desafos, anticipamos el antgeno
perfiles de enfoques ser valiosa clnica
herramientas para la deteccin, diagnstico, pronstico y seguimiento
de la intervencin teraputica en las enfermedades autoinmunes,
infeccin y cncer.
Figura 4. Tubera de protemica para la identificacin
de cncer de colonantgenos bacterianos asociados. (A) Inmunocaptura
se realiza
por el aislamiento total suero IgG de cncer de colon
pacientes con perlas de protena A (1). A continuaci
n, son protenas de S. bovis
aplicado a los depsitos inmovilizados (2), despus d
e que las protenas
se lavan. (B) capturados antgenos son eluidos y ana
lizados
por MS. Spectra representan perfiles de este procedi
miento utilizando
suero de individuos sanos (panel superior), cncer d
e colon
pacientes (panel central) y sin
tratamiento S. bovis protena
extractos (panel inferior), en A2 de esta figura. Picos
de protenas
especficamente fueron capturados por IgGs de cnc
er de colon
pacientes estn marcados. Perfiles (C) antgeno de c
ontroles sanos,
plipo pacientes y pacientes de cncer de colon que
muestra diez S. bovis
picos de antgeno. Intensidad de pico alto se indica c
on rojo; verde
indica baja intensidad [32]. (D) identificacin de ant
geno escopeta
fue realizado por aislamiento de fracciones de prote
na de bovis de S. inmunognicas
utilizando SDS-PAGE. Este procedimiento fue SIDA
paralelo a por Inmunocaptura
experimentos con suero del paciente con el antgeno
de alta
ttulos contra los antgenos de inters. Siguiente, igu
al en el enriquecido
fracciones fueron digeridas con tripsina y alta
precisin
secuenciacin de pptidos fue realizada por LCMS/MS, despus de lo cual
las
protenas que fueron identificadas por bsquedas la
protena pblica
bases
de datos. Las
protenas identificadas en ambas fracciones eran co
nsideradas
significativa. De esta manera, HlpAwas identificado c
omo antgeno diagnstico
m/z 9563. Pptidos secuenciados por digestin trpti
ca de gelde S. bovis protenas estn indicadas en maysculas
rojas, mientras que HlpAderived
pptidos que tambin fueron encontrados por Inmun
ocaptura basado
secuenciacin de pptidos se indican en gradaciones
de color gris. Del mismo modo,
antgeno de picos de m/z 7748 y 7888 podra asigna