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FORTALECIMIENTO DE LA EDUCACIN
INTRODUCCIN
MARCO TEORICO
PROTEINAS:
Inmunolgica (anticuerpos)
Las protenas estn formadas por aminocidos. Las protenas de todos los
seres vivos estn determinadas mayoritariamente por su gentica (con
excepcin de algunos pptidos antimicrobianos de sntesis no ribosomal), es
decir, la informacin gentica determina en gran medida qu protenas
tiene una clula, un tejido y un organismo.
ANALISIS DE PROTEINAS:
Mtodo de Kjeldahl
Fundamento
Se caracteriza por el uso de ebullicin, cido sulfrico concentrado que
efecta la destruccin oxidativa de la materia orgnica de la muestra y la
reduccin del nitrgeno orgnico a amonaco el amonio es retenido como
bisulfato de amonio y puede ser determinado in situ o por destilacin
alcalina y titulacin.
Dificultades qumicas y prcticas
Digestin prolongada.
Conversin cuantitativa de nitrgeno a amonaco.
Espumosidad excesiva.
Accin corrosiva de cido sulfrico sobre el sistema de extraccin de humos.
Consideraciones ambientales respecto a descarga de humos y
contaminacin de aguas con catalizadores metlicos.
GRASAS:
En bioqumica, grasa es un trmino genrico para designar varias clases
de lpidos, aunque generalmente se refiere a los acilglicridos, steres en
los que uno, dos o trescidos grasos se unen a una molcula de glicerina,
formando monoglicridos, diglicridos y triglicridos respectivamente. Las
grasas estn presentes en muchos organismos.
El tipo ms comn de grasa es aqul en que tres cidos grasos estn unidos
a la molcula de glicerina, recibiendo el nombre de triglicridos o
'triacilglicridos'. Los triglicridos slidos a temperatura ambiente son
denominados grasas, mientras que los que son lquidos son conocidos
como aceites. Mediante un proceso tecnolgico denominado hidrogenacin
cataltica, los aceites se tratan para obtener mantecas o grasas
hidrogenadas. Aunque actualmente se han reducido los efectos indeseables
de este proceso, dicho proceso tecnolgico an tiene como inconveniente la
ANALISIS DE GRASAS:
Esta tcnica se aplica a muestras de alimentos para obtener la grasa de un
alimento homogeneizado mediante una extraccin directa con disolventes
en frio.*las grasas se caracterizan por su solubilidad ya que se considera
nica, adems que junto con las protenas y los carbohidratos forman los
principales componentes de los alimentos.
*clasificacin:
grasas simples:
Son los esteres de cidos grasos con alcohol o steres de cidos
grasos con glicerol-triacilgliceroles.-grasas compuestas: Compuestos
que contienen grupos adems de un ster de un cido graso con un
alcohol como pueden ser los fosfolpidos.
lpidos derivados:
Substancias derivadas de los lpidos neutros o compuestos. Tienen
propiedades generales de los lpidos.
FRUTAS Y VEGETALES:
Manzanas: 0.4%
Naranjas: 0.2%
PRODUCTOS MARTIMOS:
Bacalao: 0.4%
Caviar: 15.5%
Sardina: 13.9%
CARNES CRUDAS:
Res: 11 - 28%
Tocino: 25 - 33%
Puerco: 12%
Pavo: 15%
Pan 3 6%
Harina de trigo 2.1%
ANALISIS DE PROTEINAS
DIGESTIN:
calor
NEUTRALIZACIN Y DESTILACIN:
TITULACIN
El anin borato (proporcional a la cantidad de nitrgeno) es titulado
con HCl (o H2SO4) estandarizado:
(4) H2BO3- + H+
H3BO3
MATERIAL
J.P SELECTA suministra los equipos necesarios para la realizacin del
procedimiento por el mtodo Kjeldahl.
-1 bureta electrnica Digitrate-Pro 50 resolucin 0.01 ml.
Cdigo 0182026
-1 Unidad Scrubber.
Cdigo 4001611
REACTIVOS
Reactivos preparados:
Es aconsejable la utilizacin de reactivos ya preparados, especialmente el
HCl (o H2SO4) de valoracin. Cualquier error en su preparacin puede
afectar directamente al resultado de la determinacin.
Utilizar los siguientes, o sus equivalentes en otras marcas:
PANREAC 141015
(Para determinacin de N)
PROCEDIMIENTO
REPARACIN DE LA MUESTRA
1. Triturar, homogeneizar y mezclar la muestra.
2. Pesar entre 1 y 2 gramos de muestra.
3. En muestras con contenidos de nitrgeno muy pequeo, tomar la
muestra suficiente para que contenga como mnimo 5 mg de
nitrgeno.
DIGESTIN
Aadir entre 10 y 15 ml (tubo macro) de H2SO4 96-98% y 1 tableta (8
gm) de catalizador.
(Para el tubo micro, el mximo de H2SO4 es 5ml)
Montar un sistema para la extraccin de humos o scrubber con Na2CO3.
Realizar la digestin en tres pasos:
Algunos ejemplos:
Queso o carne:
Paso1: 150C / 30
Paso 2: 270C / 30
Paso 3: 400C / 90
Paso 2: 300C / 15
Paso 3: 400C / 60
Cereales:
Paso1: 150C / 15
DILUCIN
Sacar los tubos muestra del bloque digestor y dejar enfriar a T
ambiente. (Puede forzarse
sumergiendo los tubos, cautelosamente, en un
poco de agua).
Aadir unos 25ml de agua destilada en cada tubo.
Aadir el agua despacio y moviendo el tubo sin dejar solidificar la
muestra. Si es necesario
calentar ligeramente el tubo (por ej.
introducindolo en el bloque digestor todava caliente)
Dejar enfriar de nuevo hasta T ambiente.
Para evitar prdidas de nitrgeno y reacciones violentas no introducir el
tubo todava caliente
al destilador.
DESTILACIN
Situar un Erlenmeyer de 250ml a la salida del refrigerante con 50ml de
cido Brico y unas
gotas de indicador.
Programar una dosificacin de 50 a 75 ml de NaOH.
Introducir el tubo con la muestra en el destilador.
Destilar hasta recoger 250ml en el Erlenmeyer (50ml Brico + 200ml de
destilado).
Control Visual: Una vez se ha aadido el NaOH, la muestra debe tomar una
coloracin azulada, de no ser as, aadir ms NaOH.
VALORACIN Y CLCULO
Valorar el destilado con HCl o H2SO4 hasta el cambio de color. (Punto
final: pH 4.65)
Moles de HCl = Moles de NH3 = Moles de N en la muestra
Moles de H2SO4= 2Moles de NH3 = 2Moles de N en la muestra
Realizar el clculo:
mg N = N x V x 14
Donde:
N = Normalidad del cido de valoracin
V = Volumen de cido consumido
14 = Peso atmico del nitrgeno.
Donde:
P2: Nitrgeno (mg).
P0: Peso de la muestra (mg).
F: Factor protenico.
(6.25 por defecto)
Preparar la muestra:
Contenido de nitrgeno de una muestra de Amonio sulfato:
Formula: (NH4)2 SO4
Peso molecular: 132.14
Factor: 14 * 2 / 132.14 = 0.212
mg de Nitrgeno = 0.212 * mg de Amonio sulfato
P2 = N x V x 14
Donde:
N = Normalidad del cido de valoracin (HCl 0.25)
V = Volumen de cido consumido
Calculamos la recuperacin:
R (%) = P2 / P1 *100
Normalidad
0,05
20... 40 mg
0,1
40... 90 mg
0,25
0,5
100 200 mg
200 400 mg
Preparar la muestra:
Contenido de nitrgeno de una muestra de Acetanilida:
Frmula: C8H9NO
Peso molecular: 135.17
Factor: 14 / 135.17 = 0.1035
mg de Nitrgeno = 0.1035 * mg de Acetanilida
Digestin de la muestra:
Colocar la Acetanilida en un tubo, aadir 10ml de cido sulfrico 98% y
una tableta de
catalizador Kjeldahl.
Digerir a 400C durante 1h. (El resultado debe ser un lquido
transparente con coloracin
azul.)
Dejar enfriar y aadir 25ml de agua destilada en cada tubo. Tomar
precauciones para evitar
salpicaduras. La reaccin del agua sobre el
cido sulfrico es violenta.
Destilar:
Destilar aadiendo 75ml de NaOH. Utilizar HCI 0.25N para la valoracin.
Una vez destilado y valorado, obtenemos el nitrgeno (mg) detectado: P2
Donde:
N = Normalidad del cido de valoracin (HCl 0.25).
V = Volumen de cido consumido.
14 = Peso atmico del nitrgeno.
P2 = N x V x 14
Calculamos la recuperacin:
R (%) = P2 / P1 *100
FUENTES DE ERROR
Las principales fuentes de error son:
En el proceso de digestin:
1.- La inclusin de nitrgeno no protico (aunque la cantidad de este
nitrgeno suele ser despreciable comparada con la del nitrgeno protico);
2.- La prdida de nitrgeno durante la digestin. El exceso de sulfato de
sodio o potasio que se aade al cido para elevar el punto de ebullicin,
puede producir una descomposicin por calor y por lo tanto prdida de
nitrgeno. Por otro lado, el exceso de catalizador (de cobre generalmente)
tambin puede producir prdidas de nitrgeno
3.- La digestin incompleta de la muestra. Generalmente debida a falta de
tiempo de reaccin o falta de cido sulfrico.
Durante la destilacin:
1.- Neutralizacin incompleta de la mezcla digerida. Es necesario aadir
suficiente NaOH para neutralizar el exceso de cido sulfrico resultante de
la digestin as como transformar todo el amonio formado en la digestin en
amonaco.
2.- Perdida de amonaco por fugas en el circuito de destilacin.
3.- Perdida de amoniaco por refrigeracin insuficiente en el condensador.
diferencia de pesada entre la masa del baln que contiene el residuo y lamasa
del baln vaco, previamente tarado
Materiales y Equipos
I.APLICACIN DE LA DESTILACIN A REFLUJO (EXTRACCIN SOXHLET)
Reactivos
Alcohol Etlico (solvente)
"Man (muestra)
MATERIALES
Mortero con Brazo
"
Baln de 500 mL
"
Mechero
"
Refrigerante de Bola
"
Dedal de celulosa
"
MallaSoporte Universal
"
Sifn Soxhlet
"
NuezAro de Calentamiento
"
Caja Refractaria
"
Agarraderas
II.CUANTIFICACIN DE LA GRASA EXTRADAMateriales
Sistema de Bao Maria
"
Equipo extractor Soxhlet
"
Matraz Erlenmeyer
"
Balanza semianaltica
IMAGENES
BIBLIOGRAFIA
http://www.grupo-selecta.com/notasdeaplicaciones/analisisalimentarios-y-de-aguas-nutritional-and-wateranalysis/determinacion-de-proteinas-por-el-metodo-de-kjeldahlkjeldahl-method-for-protein-determination/
https://es.wikipedia.org/wiki/Prote%C3%ADna
http://www.fao.org/docrep/010/ah833s/ah833s17.htm
https://es.wikipedia.org/wiki/Grasa