Autores: Carol Castillo T,Alfonso Quijano

Parra,Ivan Melendez Gelvez

Ttulo de la ponencia: Determinacin de la
actividad
mutagenica
en
aguas
residuales de la curtiembre Tasajero
de la ciudad de Ccuta,Norte de
Santander,Colombia.
Escuela o facultad :Departamento de Qumica.
Facultad de Ciencias Bsicas. Universidad de
Pamplona
rea temtica: Qumica Atmosfrica
Palabras claves: Benzo(a)pyrene, PM 2.5, Test
de Ames, ensayo cometa, actividad mutagnica
y genotxica.

causan a su vez diversos problemas de

contaminacin en las zonas habitacionales
circundantes por el vertido de aguas residuales,
residuos slidos y emisiones atmosfricas. Una
de estas industrias es es la curtiembre
Tasajero, en donde no existe un adecuado
manejo

de

sustancias

utilizadas

en

los

procesos, lo que incrementa el riesgo de

contaminacin

por

En

exposicin.

las

curtiembres se emplean: el Cromo,Plomo

y sulfuros que causan severos daos
como la leucemia. Adems los cromatos

Resumen

de Zn y Ca empleados en las curtiembres

La curticin es uno de los procesos industriales

parecen ser cancergenos y se cuentan

que requiere de grandes volmenes de agua

entre los ms potentes en humanos. La

para transformar un material putrescible en uno

exposicin intensa a estos compuestos ha

imputrescible, compacto y resistente ,apto para

producido una incidencia muy elevada de

su utilizacin en productos manufacturados.Las

aguas residuales generadas por dicha industria
generalmente son vertidas a los cuerpos de
agua sin tratamiento previo, generando as
grandes cantidades de DBO Y DQO como
tambin valores elevados de pH al igual que la
presencia de sustancias qumicas toxicas que
pueden actuar como mutgenos, aumentando
as

el

riesgo

de

desarrollar

cncer

enfermedades hereditarias en la poblacin

expuesta.En la ciudad de Ccuta se encuentran
pequeas

industrias

que

no

poseen

las

herramientas bsicas, ni conocimiento alguno

sobre el adecuado tratamiento de los residuos y

cncer de pulmn. Por estas razones se

hace necesario el anlisis y la determinacin de
mutagencidad

genotoxicidad

en

aguas

residuales de la curtiembre Tasajero. Se utiliza

para la determinacin de la genotoxicidad el
ensayo

cometa

que

es

una

tcnica

altamente sensible para evaluar el dao y

la reparacin del ADN en cualquier tipo de
clula eucariota. Para la determinacin de
la mutagenicidad se emplea el test de
Ames, que determina los cambios en la
molcula

de

mutaciones. Los

ADN,

causado

por

compuestos
residuales

presentes
de

la

en

las

curtiembre

aguas

Tasajero,

ocasionan daos mutagnicos con las

diferentes cepas de S. typhimurium TA-98
y TA-100 y constituyen un verdadero
peligro para la poblacin.
Key words: Salmonella typhimurium TA-98
,

TA-100,mutagenicidad,genotoxicidad,

curtiembre.
Introduccin.
El desarrollo de la produccin industrial ha
sido un gran avance para la humanidad, ha
generado un indiscutible aumento en el nivel
y la calidad de vida de la sociedad y de la
misma manera ha generado un gran impacto
a nivel ambiental, ya que debido a la
demanda han tenido que hacerse mucho ms
complejos sus procesos, generando as,
mayores cantidades de residuos que la llevan
a ser el blanco de muchas crticas y a adquirir
una imagen de contornos no muy positivos
[1]. Reddy and Behera, 2006

La curticin es uno de los procesos industriales

que requiere de grandes volmenes de agua
(Tornqvist et al., 2011) Khwaja et al., 2001).
.para transformar un material putrescible, en
uno imputrescible, compacto y resistente
apto para su utilizacin en productos
manufacturados, mediante el desarrollo de
una serie de procesos en los que se emplean
sustancias que varan segn el tipo de
curticin aplicada (mineral, al cromo, vegetal,
entre otras), adems de ciertos cidos, grasas
y colorantes.
Aunque el hecho de que la industria del cuero
es un sector econmico importante , hay una
escalada aprehensin ecolgica relativa a las
curtiembres debido a la produccin de
grandes cantidades de aguas residuales
potencialmente txicos que contienen cromo

trivalente y hexavalente (Szpyrkowicz et al.,

2001).
Las aguas residuales generadas por dicha
industria contienen grandes concentraciones
de Cr como dicromato de potasio (K2Cr2O7) y
sulfato de cromo Cr2 (SO4) 3, que son
altamente txicos (lvarez-Bernal et al.,
2006) Este efluente de aguas residuales de la
curtiembre est dispuesto a continuacin,
hacia el medio ambiente sin ningn
procesamiento y tratamiento. Por lo tanto, el
desempeo de residuos y compuestos txicos
asociados a los sistemas acuticos representa
un dilema ambiental perdurable debido a su
potencial impacto en la poblacin en el agua
y
los efectos inminentes para la salud
humana (Abbas Alkarkhi et al., 2008).
Adems, estas sustancias txicas hacen su
entrada a los "acuferos superficiales y del
subsuelo" resultantes de la contaminacin del
agua de riego y potable (Krishna et al., 2009
y Mohan et al., 2010).
En el proceso de curtido se emplean
productos qumicos como: cloruro de sodio,
hidrxido de sodio, hipoclorito de sodio,
agentes
tensoactivos
,preparaciones
enzimticas, cidos orgnicos tamponados
(sulfrico, clorhdrico, lctico, frmico, brico
y mezclas), sales de amonio, bisulfito de
sodio, perxido de hidrgeno ; solventes
como kerosene y el clorobenceno. Tambin
se emplea cloruro de amonio, siendo las sales
de cromo las ms utilizadas (Ates et al., 1997,
Cassano et al., 2001 y Di Iaconi et al., 2002).
curtientes sintticos como los sintanos,
anilinas, polmeros acrlicos o poliuretanos,
lacas nitrocelulsicas o uretnicas .
Los
residuos
industriales
lquidos
de
curtiembres, se caracterizan por presentar
alta contaminacin orgnica y txica asociada
a sales, sulfuro y cromo, provenientes del
proceso, esto constituye un problema desde
el punto de vista ambiental.Existe el riesgo
que algunos residuos qumicos de las
curtiembres sean nocivos,como los que
contienen
cromo,que
tienen
efectos
cancergenos. [8]. (NEMEROW, N L, 197x 7)

Varios estudios se han llevado a cabo en las

aguas residuales industriales y domsticas y
se
han
encontrado
genotxicos
y
mutagnicos en diversos ensayos a corto
plazo (Houk, 1992).La va de absorcin
cutnea es la de ms fcil acceso al
organismo, frente a lo cual cabe destacar el
cuadro patolgico de la dermatitis alrgica de
contacto. En esta los compuestos de Cr6+
penetran en la piel ms rpidamente que los
compuestos de Cr3+. [9]. (Chavez Porras, A.
2008). Los diversos compuestos del cromo
hexavalente representan la mayor amenaza,
especialmente
debido
a
sus
efectos
genticos.

Los compuestos del cromo (VI) actan en casi

todos los sistemas de ensayo diseados para
determinar sus efectos mutagnicos. El hecho
comprobado de que atraviesa la placenta
significa un alto riesgo para los embriones y
fetos. [10]. (Callao, R. 2011).
El tratamiento de efluentes industriales siempre
se lleva a cabo en funcin de las exigencias y
normativas respectivas que establece la ley. La
necesidad de eliminacin de sulfuro y cromo
son la mayor singularidad que presentan los
residuos lquidos industriales de curtiembre
para su tratamiento.(Moscoso Agreda, Huscar.
2003) , La presencia de sulfuro en la operacin
de pelambre explica que esta operacin, por s
sola, sea responsable de la mayor parte de la
toxicidad total del efluente, en la forma de
sulfuro, dado que el pH en el agua de pelambre
es de 13. [11]. (Salas, Gilberto. 2005)
Se ha evaluado la mutagenicidad y
genotoxicidad del suelo agrcola bajo riego

con efluentes de curtiembre (Alam et al.,

2009).
El objetivo del presente estudio fue
determinar
efectos
mutagnicos
y
genotxicos de los efluentes de curtiembre
con dos bioensayos diferentes, a saber Ames
Salmonella /

Metodologa.
Toma de muestra
La muestra de agua residual se recogi en un
botelln de polietileno previamente lavado ,en
una cantidad aproximada de 20 litros. La
muestra

se

obtuvo

directamente

de

los

vertimientos realizados despus del proceso de

desencalado, en la curtiembre Tasajero de la
ciudad de Ccuta, norte de Santander.
Procedimiento para la pre concentracin de
la muestra de agua residual
Para la preconcentracin de la muestra de agua
residual se hizo necesario pasar 20 litros de la
misma (ya que esta presentaba un alto grado
de turbidez) por una columna que contena 100
g de resina Amberlite XAD-2 de marca Supelco;
despus de dejar pasar todos los 20 litros de
agua por la columna con un flujo de 15 ml/min,
se lavo la resina con diclorometano para
arrastrar la muestra. Consecutivamente se
concentro la muestra en un Rotaevaporador,
marca HEIDOLPH modelo Laborota 400-1 , a
una temperatura de 60 C, a 150 rpm; hasta
llevarla a sequedad. Seguidamente se diluyo el

residuo en 20 ml de Dimetilsulfoxido al 20%

Se adicion 3 ml a cada uno de los 20 tubos de

para conservarla.

ensayo; los cuales se taparon con moticas de

Esta muestra se dividi en dos alcuotas de 10

algodn y papel aluminio para su esterilizacin

ml cada una de ellas se transfiri a frascos

en autoclave por 15 min a 121C.

mbar,

Solucin glucosa 40%

se

sellaron

refrigeradas

para

su

se

mantuvieron

posterior

ensayo

Se pes 10 g de glucosa y se disolvi en 25 ml

mutagenico.

de agua destilada, se mezcl y se dej en

Deteccin de la actividad mutagnica

nevera.Preparacin

Test de Ames

glucosa,

Para llevar a cabo el Test de Ames se

composicin del agar mnimo con glucosa

prepararon las siguientes soluciones y medios

Agar mnimo con glucosa

que se necesit para poder realizar el ensayo:

Se adicion el Agar sobre el agua y se dejo

Caldo Nutritivo

hasta

Se pes 2,5 g de caldo nutritivo en 100 ml de

Posteriormente se llevo a autoclave a 121C

H2O destilada, se calent hasta ebullicin, con

por 15 min. Cuando la solucin estuvo tibia se

agitacin

se

adicion la solucin estril de sales VB 50X y la

transfirieron a 4 erlenmeyer de 100 ml, y se

solucin estril de glucosa al 40 %; una vez

aadieron 20 ml de caldo nutritivo; se autoclav

preparada la mezcla se vierte 25 ml en 20 cajas

15 min a 121 C, se llev a incubadora a 37C

de petri estriles, se dej solidificar el agar y

por unos minutos y seguidamente se inocul

seguidamente se llevo a incubadora por 16 h.

con cepas TA-98 y TA-100 por duplicado y se

Solucin madre de 2-aminofluoreno

dej un control, despus de esto se volvi a

Se pes 10 mg de 2AF y se disolvi en 7 ml de

dejar en incubadora por 16 h a 37C.

DMSO puro; de esta solucin se saco 1 ml y se

Sales de Vogel-Bonner 50X..

transfiri a otro frasco con 6 ml de H2O

Top Agar

destilada estril; la cual se utiliz como control

El Agar se disolvi junto con el NaCl en 70 ml

positivo.

de agua destilada, y se dejo hasta ebullicin

Preparacin de las dosis de trabajo

con agitacin constante, cuando el top agar se

A partir de la muestra pre concentrada se

enfri

prepararon las 3 dosis correspondientes a

constante,

se

adicion

histidina/biotina a 0.5mM.

posteriormente

la

solucin

de

en

la

de

tabla

ebullicin,

con

Agar
10

mnimo

se

agitacin

con

muestra

la

constante.

diluciones de concentraciones de 50, 100 y 150

l respectivamente.

Ensayo

Deteccin de la actividad mutagnica por la

Se marcaron 20 tubos de ensayo de la

prueba de Ames

siguiente forma: D1, D2, D3 (TA-98) y de igual

Se calcul el promedio aritmtico de las 4

manera con (TA-100) por duplicado y control

placas de cada cepa de cultivo TA-98 y TA-100

positivo (+) y negativo (-) para cada una de las

para cada una de las dosis de muestra

cepas. Seguidamente se adicion a cada uno

problema, de la siguiente manera :

de los tubos 500 l de buffer fosfato; 100 l de

X=X1 +X2 +X3 /n

bacterias TA-98 y TA-100; 100 l del extracto de

Donde: X: Media geomtrica

muestra

X1 X3: Conteo de colonias por placa

problema

del

agua

residual

de

curtiembre, de cada una de las dosis a las

n: nmero de placas

diferentes concentraciones.

En la tabla 1, se muestra el valor promedio de

A los controles positivos (+) de las cepas TA-98

colonias con la cepa TA-98

y TA-100 se adicion 100 l de 2AF; y al control

negativo (-) se adicion 100 l de H2O
destilada estril. Posteriormente todos los tubos
se

llevaron

incubadora

(Marca:

Binder

Thermo Scientific, Modelo: 3522) por 30 min a

37C Despus se tomaron los tubos que
contenan top agar y que estaban en un bao
serolgico (09 A Indulab) a 43C, se mezclaron
con los tubos que cumplieron los 30 min en

Tabla 1. Nmero de colonias y valor promedio

en las diferentes dosis y controles con la cepa
TA-98
En la tabla 2, se muestra el nmero de colonias
con la cepa TA-100

incubadora y se agit en un Vortex-Mixer

Modelo: VM-2000; donde se sirvi en 20 cajas
de petri, previamente rotuladas con las dosis y
controles respectivos; que contenan (top Agar,
sales de Vogel-Bonner, solucin de glucosa

Tabla 2. Nmero de colonias y valor promedio

estril, luego de solidificarse y estar 16 h en

en las diferentes dosis y controles con la cepa

incubadora), se agit, se dej solidificar y se

TA-100

llev a incubadora a 37C por 2 das. .

A partir de los datos registrados en las tablas 2

Resultados y Discisin

y 3, se hallo la razn de mutagencidad (RM)

RM=RI/RE

Donde;

concluir que es negativa, ya que la razn de

RM: Razn de mutagencidad

mutagencidad es menor a 2.

RI: Revertantes inducidos (Valor promedio de

A travs de los controles negativos se verific la

las respectivas dosis)

tasa de reversin espontnea en cepas de

RE: Revertantes espontneos (Valor promedio

Salmonella typhimurium TA-98 y TA-100; las

del control negativo)

cuales

En la tabla 3, se muestra la Razn de

desplazamiento en el cuadro de lectura y

Mutagencidad en las cepas TA-98 y TA-100.

sustitucin de pares de bases en el DNA

detectan

mutgenos

que

causan

respectivamente. (figuras 1 y 2)

Tabla 3. Razn de mutagencidad en cepas TA98 y TA-100

De acuerdo a las razones de mutagencidad en
cada una de las dosis, se considera que la
muestra es positiva para la cepa TA-98 ya que
existe una relacin de dosis de respuesta entre
las concentraciones probadas y el nmero de
revertantes

inducidos;

esto

se

Figura 1. Razn de mutagencidad en cepas

TA-98

puede

En el caso de la cepa TA-98 se observa que

determinar utilizando los criterios descritos en

cada una de las dosis supera entre 3-4 veces el

[12].

valor del control negativo siendo medianamente

Vargas et al., donde la muestra se

considera mutagnica cuando el nmero de

mutagnico,

colonias

desplazamiento en el cuadro de lectura.

revertientes

en

la

inducida

por

mutacin era 2, Cuando se observ slo uno

de estos criterios, la muestra se consider
como una indicacin de mutagencidad, esto
posiblemente debido a la presencia de metales
pesados tales como Cr y Hg que son muy
comunes en las aguas de residuo de las
curtiembres segn lo plantea Tagliari et al.,
mientras que en las cepas TA-100 se podra

lo

que

ocasiona

un

*La deteccin de mutagencidad en agua

residual de curtiembres indica la presencia de
compuestos

mutagnicos

como

metales

pesados que pueden causar el desplazamiento

del marco de lectura y sustitucin de pares de
F
Figura 2. Razn de mutagencidad en cepas
TA-100
En la cepa TA-100 se observa que cada una de

bases en el DNA.

las dosis supera entre 1.4 y 1.7 veces el valor

Referencias Bibliogrficas

del control negativo siendo muy baja su accin

mutagnica.

8. REFERENCIAS

Conclusines

[7]. Arango Escobar, Carlos A. (2004). Sistema

*En cuanto a la metodologa utilizada para la

de referenciacin ambiental para el sector

investigacin

curtiembre en Colombia. Medelln: Centro

de

la

actividad

mutagnica

causada por contacto o exposicin a aguas

nacional de Produccin ms Limpia.

residuales de curtiembre, se determin que la

utilizacin

de

salmonella

presenta

una

sensibilidad adecuada para estudiar pequeas

cantidades de muestra que son difciles de
obtener, lo que permite el uso de pequeas
cantidades de material analizado.

residuales de la curtiembre Tasajero de Ccuta

daos

mutagnicos

procedimientos para el manejo adecuado de los

residuos de la curtidura. Mexico: Semarnap.

[8]. Flores Hernandez, Corina. et al. (2011).

Effects on occupational factors and environment

*Los compuestos presentes en las aguas

ocasionan

[1]. Del Pont Lali, Ral. (1999). Manual de

con

las

diferentes cepas de S. typhimurium auxotrficas

TA-98 y TA-100 siendo ms notorio y mayor la

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razn de mutagencidad cuando se utiliz la

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cepa TA-98 ya que se observa con mayor

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